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I%?lXtUTSENEGALAIS DE RECHERCHES
AGRICOLES (I.S.R.A.)
L--e----
LABORATOIRE NATIONAL DE LeELEVAGE
ET DE RECHERCHES VETERINAIRES
B.P. 2057
DAKAR-HANN
FICHE TECHNIQUE
ARBOVIRUS : MATERIEL ET REACTI :i?S
Par Dr A. NIASSE
REF. No 115/VIRO.
OCTOBRE 1982.
A - MATERIEL
_ :’ ;,: .. ..,. *
,’
”
Broyeurs stériles
. . . . ; .‘,, , .t,> : ^ !.! ,s.< ’
Tubes 8 centrifuger stéril“ ! . . . . . . ,.,, ,,,. .
Bac 3 glace
:
::
,
.,\\:.
:. :,\\, :.
,.
Pipettes gradu6es 1, 2 , 5;:10,.2s Il&, j
I.
Seringues plastique "tuberculine" graduées en 0: 01 et 0,025 ml
Ai&lles t&ercuine st$rïies "'*.' 1 * a. <. . . . .
Tubes à essais munis au fond~d'un.pen.de.co~on"1
ydrophile
',
.y: ,.. . . .
Pinces stkiles
/ .'II.,., * .,,,I, , ,
,
Ciseaux stériles
-.,*..l.," ,,,,<,
.
I
.
Portées de souriceaux, soÜris'se&es.' *I ".
,.,
Hltye .$~jl~p&y& i 0;22: sf8r.ilis6 8 1' aytocbl.av+i
Seringues de 10 ou 2C ml stkriles
,:
,:
t
Flacons de 250 ml ou plus, munis d'un bouchon à 1 trou et tube verre
Pots à centrifuger plastique (centrifugation rq ,ide)
_ I ;,
H&naties d'oie
Erlenmeyer de 60, etc...
""'*"' ""' ,
.
.
.
:1.
Flacons antibiotiques de .?c, ml .a&k '&&&te e*
.
Plaques à godets "~~CrO-titer?t en 'ir '
' ' '
' .
_, :
i
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.2'
Micropipettes de 0,025 et,.O,G5 ml
Microdiluteurs de 0,025 et 0,05 ml" '::)'*"' '.'
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Papier GO,NO, GO de 0,025 et' O,G5
"
Beckens de 100.
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IX<
B- SOLUTIC'M A
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1) A C D (Acide citrate dextrose‘) .' '.* “ .'
- acide citrique
:
- Z’ ‘:
l . ..*.*...*......*....
- Hz0 distillée ..,, q.s.p. . 1 000 ml
1
- 2
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2) D G V (dextrose gélatine v&on&)
. .-. .._"
.,..
a) - 5,5 acide diéthylbarbitinate ,...*
Q,58 43
o,68
g'
1"
.,
'.
,
- gélatine . . . . . . . . . . . . ..t.*.*......
- 5,5 diéthylbartitinate de sodium . 0,38 g
t-
- Hz0 distillée (en chauffant) . . . . . '250
ml'
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. . . . ,,
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b) Cacl, anhydre
o,a2~g0.
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MgSO,+,
H20 ';'.;..';..i~ . . . . . . *;.,...o @,12,j?
'
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Nacl .*....*...,**,.C..*.,..,..*...~
a,50 g
.'I
glucose l ..,...,*.*.,,.*...*.....*.. 10,o g
Hz0 distillée . . . q.s,p *.***.,*.*.* 75oml
'...
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Mélanger 250 &"de A et 75b ml de;B'. StériliSer $ l'autock~e
"
>
,!,II.,minutes Ii 12OOC.
.,
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:
_.,
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:
:
3) Tampon borate pX 9,0 = TB
y..
- Nacl ‘...,.....,..,...,.*..**..*...*.
7,02
.'.
- Acide borique . , . , . . . . l .,.*. . . i.,. *. .,. . . 3,09’”
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:
.:
- H20 distill6e . . . q.s.p. ..,....l.R....l 000 @-
Faire dissoudre au
boui$lant puis
- Na0H N/l
24 ml
.,..
*..*a...*
. . . .
a* . . . . . . . . l .
..
1
Agiter et vérifier le pH.,9,0.
,.
,
4) Solution albumine bovine à 4 p.100 en pH 9,n
Albumine bovine (fraction V) poudre . . . . . . 4,O 65
Tampon borate pH 9,O . . . . ‘ . . . . . . :. . . .,.. l . . . go cil..
Vérifier et
. ..I . ..._,,
Filtrer su~,milkipo~e après avoir comlété ;i 100 ml aVec du tapon
. .
borate
PH
993
<,_,:,
.,
'. ~
Conserver ;i + 4OC..
.,,
”
5) Solution tampon borate a 0,4 %"alb&&-&bov&e pH 9,O = BAE
- Albumine bovine 4 % en pH g,O . . . . . . . . . 100 ml
- Sel tamPon borate pH 9,O , * , . I> . . . . . . . . . 900 ml
Filtrer sur millipore et garder à + 4OC.
..a/ . . .
-3
6) Phosphate monosodique pH 4,3
- NaHzPOl!
I
..**.**..**.........
2490 6:
/
'<
- Nacl ..**.*......*..*.......*
8,‘n’
43
;
- H20 distillée ..,. q.s.p, . . . 1 000 EII-
Autoclaver 10 mn/.l,lO'
i
Conserver 3 la tgnpéra;ty~ ambiante1
,
I
. .
7) Phosphate disodique .pH 8,8,
,,.
- NaHz PG . . . . . **...*..*,)?.y.. 28.4 g
- Nacl ..,, ** . . . . . . . . a..* ,.'.. I..., 8977. g
: .<
- H20 distîU6e .,. 4;s.p, p.r;,~P d,
Con@dter. avec Hz0 dist{~é~,q~.s.p.
1 000 ml
Stériliser à 1QO*/lO minutes.
8) Tampon phosphate,, pif 7,6 = TP
:
- Phosphate dis@ique . . . . . . . . . 3;i g
.,
,,' ',..
- Phosphate monosodique .,..... 6,39 g
'Q.,
.
- Nacl .* . . . . . . a . . . . * ,... l . . . . .
- R20 distillée .,. q.s.p. ,.,. 1 000 ml
Stériliser, autoclaver 120°/20 minqtes. -%%fier~.~-pR..7,6.
9) Solution tampon $ IP p.lOQ de sérum de lapi = TPS
.
- Tampon TP
goml
1
. . . . ** ..,.,.. l .*...
- Sérum de lapin décomplémenté 10 ml
Filtrer sur millipore 0,22. Le pH Sera 2 i',4.
l
-.
10)Solution Nacl à 0,85 p.l@c!
!
: :i ,.
I
- Mac1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8;s g
- ljI20 distillée ,..,.,.......... 1 000 mf-. j
: . .j. : :. ;z:
_.
L
11) Solution vGrona1 pour r&ction de fixatiop dti compl&nent = VG
- Comprimés OXOfD'%omplément fixation" ,..,'.... 10
.' ',
.
- Gélatine .
..**..*........................;,...
w g
- H20 ;Zistill~e chauffée . . . . . . . . ..'..~~~~.......
1. 25~1 mi
Après dissolution complète, ajoutez .*.
- H20 distillée .,. q.s.p. .d'.;'.... ;.;;;.;.;. 1 r)@Oml..
1
-4
12) Solution Hanks BSS
a) Solution concentrée
i
. .
Solution A)
I
- Chlorure de sodium ..*.,.,...........*...*
PO,O g
- Chlorure de potassium
j
'"
L
..,,~.~.,.,...~..I...
4$p
',
- Chlorure de calcium ,......~,~..l.~..~.~.~
0 t3
- Sulfate de magn6sium (3 HzO) I.... *.*...a.
2,c &
.,
- Phosphate dissodique (12 H20) ................. A,?.&?
- Phosphate monopotassique .................
CL6 g
- Glucose anhydre ..........................
lc?,O fl
- Eau di.stiIlée q.S.p. . . . . ',tr.., ,..‘.... . . . . 1 cm ml,
Solution B)
- Bicarbonate de soude ~.......,,.l.l.......
3.5 c:
,
,
- Rouge de phénol ,.*,.*....,....,e..*.....*
"'2 hr,
- Eau distillée ..,.*....,.....,....a.....*.
le? ml
.,
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b) Solution,pour l'emploi
A
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Sol. A . ..*.......**..... toc ml
Sol. B ..................
10 ml
Eau distillée ........... 8QO ml
Filtrer.
:
13) Solution Hanks & C,7'5 p.100 albumine bovine
- Hanks pour lJemploi . . ..**a*. 1 me ml
:
- Albumine bovine (faction) poudre 7,5 S
Filtrer sur millipore 0,22 '*' "."'
. . <
. 1
Ajouter entibiotiques 500 unites pénicilline et 250 microgrammes
.f
Streptdrl.
i
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‘.
,
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.,
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:
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:
.
‘
.
.
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14) Milieu de conservation de 1'ascite'"'TG i8r!‘!
- Glyc&ine
.
.
*
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o';751:ti' * . .
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:
- Sérum lapin .*...* . . . . . ..'
,,**';Y;,.; 3,25 &i"“ " :'
- Solution Ha$w
. _
,., ,.,.,..,<., ." ,' .
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. . /. ..*
- 5
15) Suspension Kaolin à 15 p.lOO en tmPon borat$ PH 9,fl
- Kaolin lavé aux acides ..,...,,..... l50,T g
- Tampon borate pH 9 ,O .~,........,...l 000 $1
Conserver à + 4O C.
16) Solution acide phGniq& 4 5 i%
- Acide phéniqué ....................
5,@ ;e
- SOL. Nacl 0~85 p.1000 .............
100
ml,.
17) VGr0na.l 5 fois concentr6
- Comprimé OXCID ..,....*......*....
1
:
,
- Eau distill6e chauff6e . . ...,.,... 20 ml i
Conserver 3 + 4OC.
18) préparation de 2% kl. de diluant des hématips en fonction du pH t
Tampon
T&Pon
PH
hosPhate disodi- >ho+hate mnoso-
we
1 dique
i
5,75
6ml
i
I
194 ml
690
25 EI.J-
175 ml.
692
44 ml
156 ml
634
64 ml
136 ml
66
90 ml
110 m l
i
6,s
110 ml
9r! ?Xl
I
750
128 IDI
/
72 ml
742
144 l3.l
,
56 nl
794
158 mi.
42 ml
19) Immun-sérum (voir fiche no
)
20) Imun-ascite (voir fiche no f
21) Sérum de lapin nomal (voir fiche no ). :
AGRICOLES (I.S.R.A.)
L--e----
LABORATOIRE NATIONAL DE LeELEVAGE
ET DE RECHERCHES VETERINAIRES
B.P. 2057
DAKAR-HANN
FICHE TECHNIQUE
ARBOVIRUS : MATERIEL ET REACTI :i?S
Par Dr A. NIASSE
REF. No 115/VIRO.
OCTOBRE 1982.
A - MATERIEL
_ :’ ;,: .. ..,. *
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”
Broyeurs stériles
. . . . ; .‘,, , .t,> : ^ !.! ,s.< ’
Tubes 8 centrifuger stéril“ ! . . . . . . ,.,, ,,,. .
Bac 3 glace
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Pipettes gradu6es 1, 2 , 5;:10,.2s Il&, j
I.
Seringues plastique "tuberculine" graduées en 0: 01 et 0,025 ml
Ai&lles t&ercuine st$rïies "'*.' 1 * a. <. . . . .
Tubes à essais munis au fond~d'un.pen.de.co~on"1
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Seringues de 10 ou 2C ml stkriles
,:
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Flacons de 250 ml ou plus, munis d'un bouchon à 1 trou et tube verre
Pots à centrifuger plastique (centrifugation rq ,ide)
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H&naties d'oie
Erlenmeyer de 60, etc...
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1) A C D (Acide citrate dextrose‘) .' '.* “ .'
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6) Phosphate monosodique pH 4,3
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7) Phosphate disodique .pH 8,8,
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Stériliser à 1QO*/lO minutes.
8) Tampon phosphate,, pif 7,6 = TP
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9) Solution tampon $ IP p.lOQ de sérum de lapi = TPS
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11) Solution vGrona1 pour r&ction de fixatiop dti compl&nent = VG
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1. 25~1 mi
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- H20 distillée .,. q.s.p. .d'.;'.... ;.;;;.;.;. 1 r)@Oml..
1
-4
12) Solution Hanks BSS
a) Solution concentrée
i
. .
Solution A)
I
- Chlorure de sodium ..*.,.,...........*...*
PO,O g
- Chlorure de potassium
j
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- Chlorure de calcium ,......~,~..l.~..~.~.~
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- Sulfate de magn6sium (3 HzO) I.... *.*...a.
2,c &
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- Phosphate dissodique (12 H20) ................. A,?.&?
- Phosphate monopotassique .................
CL6 g
- Glucose anhydre ..........................
lc?,O fl
- Eau di.stiIlée q.S.p. . . . . ',tr.., ,..‘.... . . . . 1 cm ml,
Solution B)
- Bicarbonate de soude ~.......,,.l.l.......
3.5 c:
,
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- Rouge de phénol ,.*,.*....,....,e..*.....*
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- Eau distillée ..,.*....,.....,....a.....*.
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b) Solution,pour l'emploi
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Sol. A . ..*.......**..... toc ml
Sol. B ..................
10 ml
Eau distillée ........... 8QO ml
Filtrer.
:
13) Solution Hanks & C,7'5 p.100 albumine bovine
- Hanks pour lJemploi . . ..**a*. 1 me ml
:
- Albumine bovine (faction) poudre 7,5 S
Filtrer sur millipore 0,22 '*' "."'
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Ajouter entibiotiques 500 unites pénicilline et 250 microgrammes
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15) Suspension Kaolin à 15 p.lOO en tmPon borat$ PH 9,fl
- Kaolin lavé aux acides ..,...,,..... l50,T g
- Tampon borate pH 9 ,O .~,........,...l 000 $1
Conserver à + 4O C.
16) Solution acide phGniq& 4 5 i%
- Acide phéniqué ....................
5,@ ;e
- SOL. Nacl 0~85 p.1000 .............
100
ml,.
17) VGr0na.l 5 fois concentr6
- Comprimé OXCID ..,....*......*....
1
:
,
- Eau distill6e chauff6e . . ...,.,... 20 ml i
Conserver 3 + 4OC.
18) préparation de 2% kl. de diluant des hématips en fonction du pH t
Tampon
T&Pon
PH
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5,75
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90 ml
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72 ml
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794
158 mi.
42 ml
19) Immun-sérum (voir fiche no
)
20) Imun-ascite (voir fiche no f
21) Sérum de lapin nomal (voir fiche no ). :