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INSTITUT D’ELEVAGE ET DE MÉD
r,
VÉTÉRINAIRE DES PAYS
5 i
lj: j
REVUE D’ÉLE+AGE
ET DE
l
MÉDECINE VÉ
DES PAYS
, Note sur l’action du sulfate de s dium,
du sulfate de magnésium
et du chlorure de magnésiu
sur le virus de la peste bovi e
adapté aux cultures cellulair s
par P. ROBIN et P. BOURDIN
r
Tome XIX (nouvelle serie)
$0 4 - 1966
- - VIGOl- F R È R E S ,
23, rue de l’École-de-Médecine,


Rev. Elev. Méd. V&. Pays Trop., 1965, 1 9 , 4 ( 4 5 1 - 4 5 6 ) .
Note sur l’action du sulfate de sodi,um,
du sulfate de magné 3ium
et du chlorure de mag nésium
sur le virus de la peste bovine
adapté aux cultures ce: lulaires
par P. ROBIN ef P. BOURDIN
RÉSUMÉ
Le virus de la peste bovine atténué par passages sur ( iltures cellulaires,
mis en solution et chauffé à 50 OC, est inactivé très rapiden nt en présence de
chlorure de magnésium à la concentration molaire, alors qt
I
estthermo-stable
en présence de sulfate de magnésium ou de sulfate de sodiur
à la concentration
molaire. La thermo-stabilité diminue avec l’abaissement c
la concentration
de ces deux sulfates.
Les travaux de RAPP et WALLIS (1) sur la
levure, à laque e on ajoute du sérum dans les
stabilisation thermique du virus de la rougeole
proportions var Ibles suivantes :
par les ions sulfates et les recherches de WAL-
LIS, MELNICK et RAPP (2) sur les effets du
- 10 p. 100 de sérum de veau dans la sus-
chlorure de magnésium et du sulfate de magné-
pension cellula
e de départ.
sium sur d’autres myxovirus (Influenza, Parain-
- 5 p. 100 le sérum de bœuf au premier
fluenza, Rubéole), ont fait penser que les ions
changement dc
milieu qui coïncide dans les
sulfates devaient avoir un rôle protecteur vis-
expériences a\\ :c l’ensemencement du virus.
à-vis de l’inactivation thermique du virus de la
- 2 p. 100
e sérum de bœuf aux change-
peste bovine en solution, tandis que le chlorure
ments suivants.
de magnésium devait accélérer l’inactivation
Par millilitre je milieu, on ajoute 500 UI de
thermique de ce même virus.
pénicilline, 100 gamma de streptomycine, 50 Ul
de mycostatine et 25 gamma de Kanamycine.
MATÉRIEL ET TECHNIQUE
Pour éviter s changements de milieu trop
fréquents à et% :tuer lorsque le virage de I’in-
Cultures cellulaires.
dicateur coloré ndique un pH acide, on ajoute
La méthode utilisée est celle décrite par
à partir du prer ier changement, 3,2 p, 100 d’une
PLOWRIGHT et FERRIS (3). Les cellules pro-
solution de bicc bonate de sodium à 25 p. 1.000.
viennent de reins d’embryons de bovins de
Souche de viru: bovipestique.
première explantation. La concentration est de
‘l ml de culot cellulaire pour 400 ml de milieu
Toutes les E :périences sont faites avec la
nutritif. Ce milieu est composé d’une solution
souche X< Kabe e 0 » adaptée aux cultures
saline de HANKS enrichie de 0,5 p. 100 d’hydro-
cellulaires et
tténuée
par PLOWRIGHT et
lysat de lactalbumine et 0,l p. 100 d’extrait de
FERRIS en 195
4 5 1

D’un stock de départ constitué en juin 1965
l’influence des sels, est appréciée en fonction
et conservé à l’état lyophilisé, il a été fait deux
de leur concentration, la durée de chauffage
lots de virus, mélangés à parties égales avec
étant de 2 heures pour les diverses solutions.
du Mist Dessicans additionné de lactose et d’hy-
drolysat de lactalbumine d’après JOHNSON (4)
Dilution et inoculation.
et lyophilisé. Le titre de chacun de ces lots a
A l’issue des temps de chauffage à 50 OC,
été déterminé et figure au chapitre « résultats ».
chaque tube contenant la suspension au l/lOe du
virus dans les solutions de sels ou d’eau, est
Sels minéraux.
retiré du bain-marie et placé dans la glace
Des solutions molaires de sulfate de magné-
fondante pour être soumis au titrage.
sium, de chlorure de magnésium et de sulfate
Des dilutions en séries décimales sont effec-
de sodium sont préparées par dissolution sur
tuées en solution de HANKS refroidie.
agitateur d’une molécule-gramme de chacun
Dans la première série d’expériences, les
des sels dans un litre d’eau bidistillée.
dilutions et ensemencements sur tubes de cul-
tures cellulaires sont effectués immédiatement
Sont également préparées, à partir des solu-
dans la demi-heure suivant le retrait du tube du
tions molaires de sulfate de magnésium et de
bain-marie.
sulfate de sodium, des solutions diluées de ces
Dans la deuxième série d’expériences et à
sels contenant 0,5 mole, 0,l mole, 0,OS mole,
l’issue de la période de chauffage de deux heures,
0,Ol mole, 0,005 mole, 0,001 mole par litre.
il est procédé tout d’abord à la dilution du
Les diverses solutions sont ensuite ajustées
contenu des tubes chauffés. Dans les deux
à pH 7 par addition de soude normale, puis
séries d’expériences, les suspensions au l/lOe du
stérilisées par chauffage à l’autoclave à 1200C.
virus chauffé ainsi que leurs dilutions décima-
les en solution saline de HANKS sont ensemen-
Technique de chauffage des suspensions de virus.
cées chacune sur 5 tubes de cultures cellulaires
âgées de 3 à 5 jours, à raison de 0,2 ml par
Dans une première série d’expériences,
tube de chacune des dilutions.
l’influence des sels est appréciée par rapport à
Les tubes de cultures cellulaires sont ensuite
l’eau. L’abaissement du titre du virus est contrôlé
placés sur un tambour roulant pendant 2 heures
à l’issue d’intervalles réguliers de temps de
à 370C. A l’issue de ce délai, tous les tubes
chauffage.
Le contenu lyophilisé de deux flacons de 1 ml
reçoivent 2 ml du milieu nutritif à 5 p. 100 de
du mélange à parties égales du virus et de Mist
sérum de bœuf.
Dessicans est dissous dans 10 ml de la solution
molaire saline dont on veut apprécier le pouvoir
OBSERVATIONS
de conservation du vi rus à l’égard de la chaleur.
Les tubes de cultures cellulaires sont observés
La même opération est réalisée avec deux
au microscope inversé chaque jour à partir
autres flacons du même lot à l’aide d’eau bidis-
du 5e jour après l’ensemencement. Au 12e jour,
tillée dont le pH a été ajusté à 7.
les tubes sur lesquels la présence de l’effet
La suspension au l/lOe du virus ainsi obtenue
cytopathogène n’est pas constaté sont considérés
est répartie, à raison de 2 ml par tube, en cinq
comme négatifs. Le titre final est déterminé
tubes de 12 mm ; le premier tube, placé en
selon la méthode de Reed et Munch.
glace fondante, servira à déterminer le titre
du virus au temps 0. Les 4 autres tubes, placés
sur un portoir, sont plongés dans un bain-marie
RÉSULTATS
à 50 OC. Chacun d’eux est successivement retiré
10 Première expérience.
après une durée de chauffage de 30’, 60’, 90’
et 120’. Un thermomètre est placé dans un sixiè-
Variations du titre du virus de la peste bovine,
me tube du portoir contenant 2 ml d’eau bidis-
souche « Kabete 0 » atténuée par passages sur
tillée, pour le contrôle de la température.
cultures cellulaires, en solution dans l’eau et
Dans une deuxième série d’expériences,
dans les différents sels à concentration molaire
452

en fonction de la durée de chauffage à 50 OC.
DISCUSSION
Les résultats sont résumés dans le graphique
n01.
II apparaît
mme cela a été observé par
Les titres du virus non chauffé mis en suspen-
WALLIS, MEL
ZK et RAPP (2) et par RAPP,
sion dans des solutions molaires de sulfate de
BUTEL et WA
IS (1) pour le virus de la rou-
magnésium, de sulfate de sodium ou dans l’eau
geole, de l’in
snza, du parainfluenza et de
distillée sont comparables entre eux : 10-59s
la rubéole que
: virus de la peste bovine a un
DICT,, à 10-“>3 DICT .
comportement
entique aux autres myxovirus
Sont également crmparables,
les titres du
vis-à-vis du ct
rure de magnésium,du sulfate
virus placé en solutions molaires de sulfate de
de magnésium
du sulfate de sodium. Comme
magnésium et de sulfate de sodium et chauffé
ces auteurs on
u le démontrer pour les myxo-
120 minutes au bain-marie à 50 OC. La baisse
virus étudiés
I cours de leurs recherches,
du titre du virus placé en solution de chlorure
le virus de I(
peste bovine est inactivé très
de magnésium dans la même expérience, est
rapidement à
1 OC en présence de chlorure
très forte puisque 30 minutes de chauffage suffi-
de magnésiun-
concentration molaire, tandis
sent pour le détruire et le rendre non titrable.
que le sulfate
e magnésium et le sulfate de
sodium <t con
Itration molaire lui confèrent
20 Deuxième expérience.
une therrno-stc
lité appréciable. Cette thermo-
stabilité dimir
: avec l’abaissement de la
Variation du titre du virus de la peste bovine,
concentration ~ Ilaire.
souche « Kabete 0 » atténuée par passages sur
II conviendr
, et cela sera le but de notre
cultures cellulaires, en fonction de la concentra-
prochaine exl
!mentation, de vérifier si le
tion du sulfate de magnésium et du sulfate de
vaccin vivant
ntre la peste bovine, stabilisé
sodium, après un chauffage de 2 heures au
par le sulfate
3 magnésium ou le sulfate de
bain-marie à 500C. Les résultats sont résumés
sodium, donn
sur les bovins des résultats
dans le graphique no 2.
comparables
vaccin vivant non stabilisé.
Les titres du virus « Kabete O» chauffé pen-
dant 2 heures à 50 OC au bain-marie, décrois-
Institut d’Ele
7e et de Médecine Vétérinaire
sent régulièrement avec l’abaissement de la
j Pays Tropicaux.
concentration molaire du sulfate de magnésium
Labora
?e National de /‘Elevage
et du sulfate de sodium. Les deux courbes sont
et de Rech
:hes vétérinaires du Sénégal,
sensiblement comparables.
Dakar-Hann,
SUMMARY
Note on the action of sodium sulphate, magnesi
sulphate
and magnesium chloride on Rinderpest virus adapte
0 cell culture
Rinderpest virus which had been attenuated by passag
in cell cultures in
solution and heating at 50°C, was very quickly inactivate
In the presence of magnesium chloride at molar concentre
n, but it is thermo-
stable in the presence of magnesium sulphate and sodium
ulphate at molar
concentration. The thermostability was decreasing in relat
to the concentra-
tion of both sulphates.
4 5 3

.
c
\\
\\ \\\\\\\\\\.‘\\\\
60’
Temps d'inactivation
Bain-marie 50°C
Nol- Courba d'inactivation du virus "Kabete 0" en solution
de sels et dans l'eau QYI fonction de la durée de
chauffage à 50°C
454

‘l
1
Concen trat
I molaire
N”Z- Stabilité du virus “Kabete 0“
I Conctian de la concen-
tration du Sulfate de magn&si
et du sulfate de
sodixm.
REVUE D’ÉLEVAGE

Nota sobre la acci6n del sulfato de sodio, del sulfato de magnesio
y del cloruro de magnesio sobre el virus de la peste bovina adaptado
con 10s cultivas celulares
El virus de la peste bovina atenuado por pasajes sobre cultivas celulares,
en soluciôn y calentado a 5O’JC, se inactiva muy rapidamente con la presencia
del cloruro de magnesio de concentracih molar, mientras que es termoestable
con la presencia del sulfato de magnesio o del sulfato de sodio de concentracih
molar. La termoestabilidad
va disminuyendo con el descenso de la concentra-
cihn de estos dos sulfatas.
BIBLIOGRAPHIE
1. RAPP (F.), BUTEL (J. S.) et WALLIS. -
3. PLOWRIGHT et FERRIS. - Studies with Rin-
Protection of measles virus by sulfate ions
derpest virus in tissue culture. A technic for
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Imv?id en France. - hD. JOUVE. 12. Rue de Tournon. Paris 03’)