REPUBLIQUE DJ SENEWL --...---1-1-- ?,flNISTERE DE...
REPUBLIQUE DJ SENEWL
--...---1-1--
?,flNISTERE DE LA REWE'RCHE
SCIEXTIFI@W?I'TE~QUE
-u---------
-fh?STIlYIWl? SFNEWLAISDERECHEXCHFZ
AGRICOLES (I.S.R-A,)
-...---------
LABORATOII7E NATIONAL DE LiEmAGE
FTDERECHERCHESVEXRINAIRES
VACCIN CONTRE LES PASTEURELLO
--I-Ly--
UTILISATION DE L'APPAREIL DE S
PREPARATION D'UN VACCIN CONTRE
HEMORRAGIQUE
Par Y.P. DOUTRE
Docteur v6t&inaire micmb
Chef du S+z-vice de Ehctér?
LNERV/ ISRA
REF. No 031/MICRCRIO
MAI 1983
ie médicale des pastewel-
loses anjmles doivent p&senter un nombre minimm
germes -dans le cas present
que si les cultures ob=m
s
z
qu"avant lïadjonctiun
densite optique épale au tube
no 10 de Ekown. Dans le passé: ce r&ultat était obt
en ajoutant 3 une culture
,decultuxes sur
fermenteurs pemet dgobtenirp
la répartition en wu-,
.,,. ,'
L'appa&i.i de Steme peut êtxe tinsidké conm un fe
nteur dépourvu de &$iLation
r&ulte de mises au point réalksées par Sm, en
ique du Sud,et J-? BAIN, en
Extr&re Orient, A 1'3XMVT, c'est essentiellement PER
qui adapta l'appareil aux
possibilités d'équipement et qui 19intmduisit au
atoire de Farcha (Tchad). Au
labomt-oke de Dakar, son utilisation date de 1965,
le a pexmk la pmductioti de
millions de doses de vaccins antipasteurelliques de
s divers, destinés aussi
bien à l'Afrique tmpicale qu'à l'Asie. Le tableau q
it appelle la &pwtitior~
des différents types de Cm de
en patImlo&ie humine et
surtout vétérinai~.
. ’
.
.
-2
CLASSIFICATIO1J SEXOLGGIQUE AcTI.Tm;LF DE PA- mTocm
(types "~psulajres")
EssentieUxment‘
--
'_
SeptiAnie ,hémmgique des bovins
et des ImXLes .g'Asie, du Proe&$rient
: Pas d'acide hy-lu-
et de i'Af$ige orientale, des'bisons *
rorliqu~'danS la
dl'&ique.
,'
capsule.. . . . . . . . . ., .
Fxclusivement
_-..
,.
,15rpe.E:',, .;
Sept-ic&ie~hémx?ra&~e des botiins
.
1,
d'Afrique occidentale et cenve,
Très ubiquiste
-w-m
-
Norrhyux ms (ou sous-,yroupes)
probableso
- Pastetillose de l'H6m-e
10 b quan-tité toujours - Pasteurellose bovine
Acide hyalurmique
irnpkante
- Pastewellose des petits rminmts
capsula* "..
- A ,, e o
- Pastewellose porc$ne
--^.
- Pasteurellos~ du lapin
- Pastewellose des oiseaux,
Ubiquiste, comk pou+ 1; gmme A
2. En quantité variableiNomb??eux eJpes (ou sous-pupës) pm-
Type D oc>0
bables.
,--
Tout vaccin pré& à partiu, de Pasteurella hemlytica peut épaleme&t faire appel
--.e.,
à l'appareil de Sterne pour l'obtention d'une culture dem&,
Bris les li,mes qui suiventY 19er@oi de l'appareil de S-ktme: dans la.prépmation
dsun vaccin contre la septic&ie hémmagique9 sera décrit en détail, mis tout
type de Pasteurella rmltocida. autre que le @pe E, pourrait être utilisé dans ia
-..d
p?%$a&tion de vaccins destbés paxq exemple, aux petits ruminants (types A et D):aux
volailles (type A)? etc...
.' ;
:
. . :.:
.
1 - DEXRIF'TION DE L'APPAREIL
., ,.
---a.
Il est essentiellement constitu6 par une colonne de verm Pyrex Wemerie génémle I
39 me des Clo~s, Paris) (lon,gueur : 89 cm ; dia&txw int&ieur : 15 cm ; épaisseur
du vexe Y 8 mn>. obtie aux deux extr&xit& pw 2 couronnes m&talliques par l'in-
tem&diaire d'un joint caoutchouté épais (1 cm>. Lpensemble est mintenu pw 5 tiges
-
filetées aux extr&&és mies dfécmus papiflons(schém A),
&ms l'eqxce libre de la couronne, le joint supkiew est percé de 3 orifices :
'- l'un Ca> par 017 est intmduit l*inoculum et le milieu, primitif puis renouvelé,
CI. / ..a
D
-.. 5
- un second (b) qui sert à la fois à l'admissicn d'
,-._
n-t&-musse et à l'évacuation
de ‘l'air,
"
:.
:*-l . . :
- un troisième cc), pem& égalemnt .la sortie de 1' .ir et le remplacemnt de (a)
encas de rupture de cedmier.
LR joint inférieur comporte également deux ouvertuz !S :
- l'une servant à l'arrivée d'air stérile cd),
- l'autre Ce) à la récolte de la culture,
:
a) +'.intmduction de l'inocu&m et du milieu slefft /tue par l'intermédia~ d'un
&:en rhodorsil (0 int&ieur 8 mn, Ytésistance
lvautoclavage> p&%rant dans
ii colonne grâce à un tubede vem de 8 mn (0 E
&iew), l'etimité distale
du tube souple porte un tube de jonction rodé Qc I-. it femelle .,,.’
(87/16) qui per-
:
,, I I
mut tous les branchements (i&cultun et milieu),
:.
b) celle de 1' antimusse (pr&lablement homgénéisé. et stérilisk à l'autoclave
en tubes à essai de 18 mn à 11OOC pendant 15
volm par tube à essai : 1Occ)
est effectuée par une allonge à plasma (f) et
tube en rhodorsil identique
au précédent, pénétrant dans la colonne de verre
.r l'intewmédiaire
d'un tir-
ceau de canne de verre (longueur environ 12 cc;
8 ml),.* .;J. i.:. ..
1. ;' :: ,',.
.I,
ci identique à (a),assum la sortie de l'air et le
nrplacement de (a) en. cas de
rupture, la culture pouvant ainsi $trc pmlongée,
Diffuseur d'air (d) et tube de récolte ce> sont
ntés suivant le schéma A.
Aération : l'air est fourni py,un compress
Seur FYolabo ou jnieux
compresseur fournissant l'a* cgmrimé dans lp
du lalmmtoire). Il'est
st&ilisé par filtration (mm&ane FXS 1) m
à travers un filtre Seitz
de 100 cm3 (g) (ce fil- est +Menu wr une.p
e à 4 doigts solid&irje.dPune
noix fixée sur une des 5 tiFes qui assure 1
de verre, j&&s
,
et couronnes) et pénêtre dans le milieu sous
.de fines bulles qui se déga-
,g,ent du.diffvseur d'air ch). -(sch&a A).
l&z&z&3re~lc~~if-
$xeu.r d'air!,@ le fi.l-hze de:~~lOO cm: permet à vo
~.'&&-j&
(évitant le ~wlerfy&,deU.la c@ture
et l'htidification
delamembrsneEKSI), demême, uneautrepincec
(k) est placée sur le tube
de vidange pendant le cours de la culture, l'e
é en verre plonge alors dans
le for7ml.
..e /
e..
-6
.
:
-
Fixation de l'appareil :
.-
la colonne est fixeem un chassis-support kh&m B) er!
cornières Dixon. Ce chassis amvible permet la dis;sition vertic&.e.de lï,.appareil
,-;. .; ,: : t
.
.dans“la chainhre~ HXW et assure une bonne protektion de 19ense&le a$&urs des c~pé-
~,,
. ..< .
rations de trmwport et de st&ilisation à l'autoclaveV.
,y.
II - STEZILISATION DE L'APPAREIL‘ il
_
<’
--..
Contenant environ 15 r~+l d'eau distilf&,'-la colome e&es accessoikks ko& &?ri.-
s
lisés à lvautoclave (45 rm ci 12OOC) dans l'&.t $4 ils' sont représ<és~ti le sché-
m A,(f) est obturé par un bouchon cotoq-gaze recouvert depapier et $+é .(ap+
e&rilii'katio~~le'panier eSt re.mplac~~ Fm du papier d'a+@inium dont l'é&sseur
!.
ëst‘qu&r+pl~e & Plia.Fe),
(a)',et cc) chacun pxr un tube à essai de 22 mn et un
coton. La &Ce'(j) 'e6t'tiintenue en position ouverte.
i
Y
"
. ( :
Les tubes de jonction rodés femell&(a) et cc), l'allorige à plasma (f), le tube de
vidange (e) sont rab=&tus et imbilis& à l'aide de ficelles sur la colonne. L.ren-
semble p&lable&ent fixe'sur le chassis-su&m-t (schém B) à lIaide de fil de fer
est di&osé horiz&talem&t dans lvauto$ave (autoclave lmrizontal).
.
III - COMRXlTION ET $?l'ËkkATION DU HILIEU
-
-
a..-.
.
Le milieu utilisé offti la corqmsition suivante :
Pour aO litres d'eau portée à 60°C (dissolution des ingrédients et filtration plus
mpide) : '
:; :
- extmit de viande Liebip;
.m..Jo~*.4."O"*.O......*..........o..~.*.*~.
90 F
- Bacto peptone Difco (ou peptone Gquivaknte)
. . . . . . . . . ..00..*0.0..
100 :g-
-chlorure de sodium . .
..'*...O.ao~~o.o.................."....~....*
:.
,.- .' :
w.15
' -~~ig&tat~$$&r&u~
de &.nc&s
'
n..o~.o*...............~~~...~.~~..
,,
,,
,,
1.250'&
-,
,-,.
_ glup&e '
'
I...*.......*,.I....~~~~~~~~.~............~..~*~~~...*~.~...
)I
2W=T
> - lactate de soude ~...*.......s~ro.ar~~~*.*......*~..*..~...~~~~~.. ._-
3.5ml
Ci :L’ ph&&& mms&ique
. . . . . ..“Ys~“O.~o.......~*..*..~...~.~...~.~.
:. 3o'g
i
. :
LepI est ajusté, à 7,5 .-' 7,8 .,
.:
,.Y. I
.
:
.'.
.' ...
'La st&ilis&ion' s'effe&e JXU? filtration sur filtre Seitz de 10 l~i-tres pourvu
i
d'une m&ran& EKS 1. =Mi& de faciliter cette opkation, il y a inté&t à prcc&daj
à urkiclarification p&lable sur un'&tre filtre Seitz de 10 litres poumu d'une
-
AS*:‘
,:.
I.
'.
;.
~ ,.. / .*.
-7
a) P¶tion du dipestat papa?nique de panc&as :
,....a--.-
400 g de pan&as de ~&euf, recueilli à 1’
, d@p&& et +-&, sont
&langés à 1.500'1KL.d'eau distillée pmté
de 5 g & =L
paf.ne. En une heure, la temp&ature est é
OC (b&-pmie). b dipstion
est alms ar&%ée en augmentant la-twrq,
en quelques &U&s, h PT>-
duit de la digestion est ~Cueilli
m papier, Ce di~es-@t acide
peut être conse& à -2OOC.
Lqobtention de digest& paFïnique
L'autcdipestat originel de Sterne.,
,Y
gues, a été abandonné.
..b) Détails de.la st&ilisation p filtration .du ti ieu
---~.-.i.~-
k milieu filtré est recueilli dans des fl
tu?xlure infbieure a é-t6 &r6e (travail du ve
dans un atelier spécialis6) a
Sur cette tu~lure est adapté un tube souple e
mil, muni d'une pince
cl.arm~,, et temi..& par un tube de jonction tic
ickfit &le (schém C).
Lpe&ouchure, supékieure du flacon porte un
,/Y
femlle Sovi%el (s&&m C) (14/23) qui peut, s
..T
la flanme, se raccorder à
l'élé~nt &le"(14/23) correspondant porté par
,filtre de .10 litres (sch&ra
c&
,.. -:
LI.
.
,. I
..,
j_,..”
l
.,
Flacons de Golf vides et filtres Seitz de 10 li
~,pourvu~d'unemem&ane
EKS 1, sont stérilisés à l'autoclave (45 mn >
.,,
,>,.
,;:;
:.
,. -.. :.
:
Au lakoratoim de Dakar, la ptiparation d'un
vaccin mn- la sept-&-
mie hémrragique met en jeu deux appareils de
fonct-&~t s~-j-&&-
mnt et approvisionnés jokmelleEnt par 100 li
s (10 flacons de Woolf) de
milieu fil& et pr&alablemnt éprouv6 pendant
IV - PREPARATION DE L'INOCUMM
t
a) Choix et entretien des souches
-.
Le clmix de la'souche de Pasteurella mltocida à
iser est avant tout .+xxsé
par l'affection que l'on se propose de combattre
lPespèce mhle en cause
(voir tableau en introduction T classification s
$que actuelle de P. ,ml-
tocida). C'est ainsi que le type E doit %tre obli
oiremmt ergployé dans la
.e.
/ . . .
-8
.
_.
pr$pamtion du vaccin coptpla septi&mie hémo&$gique du Centre et de 190uest
africain ; les types A et.,D pour~lutter cor~tre la pasteurellose des petits mi-
riants;,
etcl.
7.'
‘
'.
,.
.'
<.
'.
:
"
Les souches sokt'~ conserver lyo~hkées~ en évitant rigoureuse.pnt~'les passa-.
'
._i
,.:
<>
,-
,:
,’ ‘gë& .jJj&iJ+S‘ s&p fiiie$"&-+&f-&iels,
Ii &A 'pr$fÊrable de ly~phiiise~ :
s
- soit du sam virulent, r&olte st&ilerrmt sur un bouvillon mmm.nt de.la ma-
.; ., : ladie~e5p%merital~ '; "*
,:...
.:.. I '
,.. .
.'
.
'- soit une cul&'iride&ente sur p&xe tryptose-sérum récoltée en eau pep-
tonée et diluge au 1/3 dans du s&um de boeuf.
Les souches de P. mltocld&; utili&es dans la p&par&tion des va&&, doivent
t u e r la~souris. Y
b) L9uK.KIu1um i au lakopatoire de Dakar, l'inoculum est contem dans un Erl&-&yer
de,'2 litres à la basëduque a Gt& $oudée une tubulure dPen&%n 6 cm (travail
du vexe dans un atelier sp%.alisé). Comne pur les flacons de %x3f de 10 li-
:, "
tres, cette tubulure se ~mursuit @w,un tube souple de ~hxlorsil, te.r&in~ par un
tube de jonction rodé Quickfit r&ile (voir schéma E). Une pince clq est placée
.-
.,.
SUT le tube souple.. Dms le pas&, des flacons de l@kz&o ont été utilisés, mis
la tuh~l~re, nlacée près du goulot, offre un désavantage (risaue de millage
du :pton).
.'
.: ',i'.
'\\.
',.
-que Erlen-Meyer contient au mins 1 litre de milieu filtré et introduit selon
le pccédé d&rit p&c%demnent (III.b)..
./
"
-'
L"~IE&U~~ est utilisé 6'8 8 heures après son e&epeno~-t avec envimon 60 ml
.'
; . .
'dé culture en tubes (6' tubes).
,
'_
" L
V-ENS~~ETMISE~~ROUI'EDELACULTIJRE
. -1
':. :r
,., _... .,
a)‘l?réparation de l'apareil autoclavé
.--
L'apmil, sorti de l'autoclave, est placé en pkition verticale, Bahs'la cfiamtm
'
'&& 'et f&é. &,& $&v&"'&9o&+J&& les-(-. aors p&-f&ée' :
:
. .
,,t';
., '..
- rese-ge des Ekyus ppillom, ,'
. ;'
'- fixatibn d~"i~wriv6e d'qjr corrpri~@ sur le.filtre .de:.10Q.m3 (a>,'
/
. . . l . .
- (a) est déca@, cc> et (f) fixés supéri
Si-L-ion vep-&&e,
- Ce) est intnduit dans un. tube de fom
eurement en position
verticale 9
- Cj) et (k) sont fermes.
La chamJz?e &uve doit être gxxwvue d'un bec JmnS
alimenté en gaz.
c
b) Introduction de l'inoculum et début de la
L'inocülum est ver& dans la colonne grâce
hement des tubes de jonction
rodés Quickfit, tile (I&le~ Meyer de 1'
(a)- (de lgapjpareil))
effectué sous la flame. Puis: ap&s dé
milieu sont alors introduits, toujours gt%ce au
richement sous la flamne des
tubes de jonction x-cd& Quickfit tile (flacon d
If)-femelle (a> (de l'ap-
pareil). Les 2 litres écoulés, la pince clamp s
ée en mont du tube de jonc-
tion rodé Quickfit T$U~ est ferm&e (schem C>.
milieu situé au niveau du
brqchemnt des tubes de jonction Quickfit est
p&f&ence expulsé dans la co-
lonne p3r Fression sxw les tubes souples.
2 litres de milieu et 1 litre d'imculum sont a
s pfisents dans l'appareil.
Après 3 heures de culture nonaé&e, 2 à 3 ml d' timusse sont alors ~iqtroduits
sous la flar&zl par l'allonge à plasma
est mise en mute..3
heures plus tard. on laisse les 8 litres de mili
restant dans le flacon de
wocîlf s9&ouler dans l'appareil.
Cette mise en mute‘; par &apes
densité opticue rmxi-
mm3 le rapport Ynoculus~P
c) Première r&olte et r&oltes ult&iewes
-<
La marche de la culture peut être suivie en effe
des pr&èvemnts stG%.le-
ment par le tube de vidange ce). A~&S chacune d
onérations, le tube .doit
être réintroduit dans le formol.
Auboutde 6 heures, lacu
est alors effectuée.
,-.
Sur le cimuit air, la p
'~intmduit dans un ballon
10
:
tenue au voisin&+ du gm.&&y 'la.~+-~e clsm (k> est alors ouverte et la culture
. . .
'1s V&iC;ule" D1Jne ...
coloration de C%m peGmet de v&ifier que la r&olte n'est SES
F
."
,contaminée 3
lorsq.ue l'appmeil ne contient élus qu'un litre de culture, la pince (k) est fede+ :
Ce volume restant~peti&Ta 1'enscmnce~n-t de.:l'app&t nouveàü de milieu neuf.
i
,...
<'
La r6colte est forrmlée imm+Jiat,erxent (4 p~lOQO>..
,'
I,,
;
,'".,.
',
m milieu .Geuf est de ncuve& introduit dans l'appar&il. 10 ml dvant~ussë ,st&ïlë
sont amen& par l'allorige, et la serie desopérations précéderment decrites est 6
:
pétee dans le r&me ordre chronologique.
'-
',
V I i
RPSULTATS
II
Par cette mithode. une culture offrant une opacité su&&m.re,~ 20 est couramnent
.
obtenue, 10 litres de culture nemettent donc de fatiiquer 20 litres de vaccin. Le
vaccin fomol6'est adjuvé par l'alun de pctassium, A cette fi+: une solution-d!alun
de potassium st&ile Gwtoclavage) est ajout&e de telle sorte cye le titre final en
alun,sott de 10 p.1000,
., Le conditionnement est effectué soit en aq-oules de 20 ml U&kar),soit en flacons
de 250'& O?mk>'. La dose iaxinale est de 2 ml.
;.
'
.,
.'.
VII =.. CXWTROLES
-
A effectuer sur la suspension vaccinale finale avant lvadjonction dgalun. :
.'
a) StGrilité
:,
~1 ensemencer en bouillon ordinaire7 en bouillon viande-foie ana&mbie, sur @ose
tryptose. Observation pendant 3 c' 4 jours.
_.
. .'
.:.,
..<
<:
. .
.
.j-~) :-mit- . .,:
. ;<.
:
..
Inoculer 2 cc sous la peau d'un lapin qui sera-mis en ohse&atio~ p&n&&tLUne
Semaine o
,
*
.m+&.+.id.-
. 0 ../“. D D
-..- _-_- i.l-,.- -..- ‘ .-II -L.-w. -- ^---
--
jt Remrques
. . .
: Les pr&5pales causes de contamination de 1'appareilde~Steme sont~les sui-:
vantes : %xculurs! souillé., milieu neuf souillf!, manque d7anti&usse, la cultuw a refmïi~
par les orifices sup&ieurs,
contamination au niveau du branchement tubes de;.jonction rw
dé &Q.e-femelle, Pour C%iter ce derni&cas, il est &cotind6 d*une &TX& d'essuyer 2
l'aide dlune gaze l'élément @.e avant tout,branchment.nouveau et de la passer~ensuite
iM@diatm-Gnt à la flamme, d'autre xrt'de remplacer i.m&diatement tout fiaccn F;roolf vide
par un autre plein de milieu, mis dont bien s&r la pince clamp est maintenue en position
fe&e. Ainsi la zone de bmnchemnt pr&ente une absence tctale de milieu5 une yi.Ïxe clamp
placée en aval peut dvailleurs accmDxe la sGcurit6.
“- 11
c> IlIlmmité
- Si l'on souhaite effectuer des tests d'imnmiti pour pouvoir contrôler le pou-
voir sellement protecteur du vaccin, il est ir &-pensable d'utiliser des FG-,
vins. A signaler me le cobaye est un animl à !mxcrire absolument de toute
expérimntation en matière de septicémie h&-mm pgique, même pour procéder 2
de s.in@es passaces de souches.
- Les bovins utilisés doivent @me tri& s&mlogi s uen-ent pur éliminer les anirraw
immns naturellement, ce qui évitera de voir SCu ivre un certain nombre de -t-g'>
mins non vaccin&. Les tests les plus
dépistage sont le titra-
ge du pouvoir protecteur pour la
tion du complément et l'agglu-
.
tination de cultures sur pélose
r 195S, III : 511.
5181, enfin il convient
rouFes hmi,ns
du groupe 0 (CARTER, G.R. : 1955 ;
nécessitent UT!
personnel qualifié, un mt&iel suffisant, un 1 boratoire adapté.
f
-.. La souche d'épreuve doit &re choisie une fois
r toutes et sera seule utili-
sée, on lui C%itera au mximm les passapes s
lieux artificiels. Le titrage
du pouvoir pathogène doit être également éta
IBI-&E définitive et
pour cela, on peut partir de la base su
d'une dilution au l/îOOO
d'une h&multure de 15 à 18 heures de la S~UC
d'épreuve peut être considés
com la dose s&emnt mortelle pour un
sible de 70 à 100 kg. Il
est possible :ue l'on enregistre des diff&ence
tenant aux mces lxwines cm--n
sidérées, Cette dose sûrement mortelle
imée assez largement, il
est pmsible (et il est bon de le vérifier) que la IX34 réelle varie selon les
régions.,
Le liquide utilisé corrme diluant pr6sen-k une prande iqortance. Le S&~UT phy-
siologique est ml supmrté par les Pasteurella et mieux vaut utiliser de lFeau
^I--
peptor& stérile.
- Ie protocole d'exp&ience est tr&~ sirrgle. Il est identique B celui appliqué
pour le charbon symptorratiq.ue,
tis &sultats des tests d'immnit6 ne deviennent très nets qu'au moment CG l'on
dispse d'un lot &rolnr;iquement homgene d'animuc. de sensibilité uniforme, ce
qui est souvent très difficile à obtenir, Les résdtats favorables fournis par
- 12
l'utilisation du vaccin dans les tr0upe.au.x
l'utilisation du vaccin dans les troupe.aux 06
06 sévissaitpdans
le pass&la
le
septic6mi.e
hgnmm?ag&e constituent sans doute le meilleur cri&re
constituent sans doute le meilleur
dont on diT+e
dont on
diT+e pour
pour juge-
de la qualit
de la
du vaccin (exemle
du vaccin
de la PAS'I'ORAE
de la
dans
1'Adar~cua~~camemun).
3'
;
;
.,
*.
.c.I / 0..
- 13
A N N E X E
LISTE DU MM'ERIEL UTILI E
- Canne de verre de 8 m-n de 0?
*
- Tubes à essais de 0 18:
-. Tubes à essais de 0 22,
- Erlen-&yer de 2 litres (pourvu d'un tube soudé à 2 3. base, atelier spécialisé
dans travail du verre),
- Flacons de Wxlf de 10 litres (dont l'ouverture inl srieure est éttie, atelier
spécialisé dans travail du 7erre> 3
- flacons de 10 litres,
- Filtres Seitz de 10 litres, membranes EKS f et AS c xrespondantes,
- Pinces claq de 6 cm,,
- Filtres Seitz de 100 cm3> membranes EKS 1 ccrrqxx hntes ,
- Diffuseur d'air (SOVIREL)5
- Tubes de jonction rodés mSles et femelles QUICKFIT (87/?6),
-. Tubes de jonction Y&& tiles et femelles SOVIREL (14/23),
- Tubes souples rhodorsil résistant aux conditions de stérilisation (0 int5rieur Bmm~ 3
- Filtre pqier?
- Antimxssc (Silicone, rhodorsil) (PROLARO),
- Pinces à 4 doigts4 noix de fixation,
- Gxni&esDIXON,
- Fil de fer. ficelle, coton car&, Eaze, papier kZra1 t, etc...
- Bact&iolo~iste en état de marche-
--...---1-1--
?,flNISTERE DE LA REWE'RCHE
SCIEXTIFI@W?I'TE~QUE
-u---------
-fh?STIlYIWl? SFNEWLAISDERECHEXCHFZ
AGRICOLES (I.S.R-A,)
-...---------
LABORATOII7E NATIONAL DE LiEmAGE
FTDERECHERCHESVEXRINAIRES
VACCIN CONTRE LES PASTEURELLO
--I-Ly--
UTILISATION DE L'APPAREIL DE S
PREPARATION D'UN VACCIN CONTRE
HEMORRAGIQUE
Par Y.P. DOUTRE
Docteur v6t&inaire micmb
Chef du S+z-vice de Ehctér?
LNERV/ ISRA
REF. No 031/MICRCRIO
MAI 1983
ie médicale des pastewel-
loses anjmles doivent p&senter un nombre minimm
germes -dans le cas present
que si les cultures ob=m
s
z
qu"avant lïadjonctiun
densite optique épale au tube
no 10 de Ekown. Dans le passé: ce r&ultat était obt
en ajoutant 3 une culture
,decultuxes sur
fermenteurs pemet dgobtenirp
la répartition en wu-,
.,,. ,'
L'appa&i.i de Steme peut êtxe tinsidké conm un fe
nteur dépourvu de &$iLation
r&ulte de mises au point réalksées par Sm, en
ique du Sud,et J-? BAIN, en
Extr&re Orient, A 1'3XMVT, c'est essentiellement PER
qui adapta l'appareil aux
possibilités d'équipement et qui 19intmduisit au
atoire de Farcha (Tchad). Au
labomt-oke de Dakar, son utilisation date de 1965,
le a pexmk la pmductioti de
millions de doses de vaccins antipasteurelliques de
s divers, destinés aussi
bien à l'Afrique tmpicale qu'à l'Asie. Le tableau q
it appelle la &pwtitior~
des différents types de Cm de
en patImlo&ie humine et
surtout vétérinai~.
. ’
.
.
-2
CLASSIFICATIO1J SEXOLGGIQUE AcTI.Tm;LF DE PA- mTocm
(types "~psulajres")
EssentieUxment‘
--
'_
SeptiAnie ,hémmgique des bovins
et des ImXLes .g'Asie, du Proe&$rient
: Pas d'acide hy-lu-
et de i'Af$ige orientale, des'bisons *
rorliqu~'danS la
dl'&ique.
,'
capsule.. . . . . . . . . ., .
Fxclusivement
_-..
,.
,15rpe.E:',, .;
Sept-ic&ie~hémx?ra&~e des botiins
.
1,
d'Afrique occidentale et cenve,
Très ubiquiste
-w-m
-
Norrhyux ms (ou sous-,yroupes)
probableso
- Pastetillose de l'H6m-e
10 b quan-tité toujours - Pasteurellose bovine
Acide hyalurmique
irnpkante
- Pastewellose des petits rminmts
capsula* "..
- A ,, e o
- Pastewellose porc$ne
--^.
- Pasteurellos~ du lapin
- Pastewellose des oiseaux,
Ubiquiste, comk pou+ 1; gmme A
2. En quantité variableiNomb??eux eJpes (ou sous-pupës) pm-
Type D oc>0
bables.
,--
Tout vaccin pré& à partiu, de Pasteurella hemlytica peut épaleme&t faire appel
--.e.,
à l'appareil de Sterne pour l'obtention d'une culture dem&,
Bris les li,mes qui suiventY 19er@oi de l'appareil de S-ktme: dans la.prépmation
dsun vaccin contre la septic&ie hémmagique9 sera décrit en détail, mis tout
type de Pasteurella rmltocida. autre que le @pe E, pourrait être utilisé dans ia
-..d
p?%$a&tion de vaccins destbés paxq exemple, aux petits ruminants (types A et D):aux
volailles (type A)? etc...
.' ;
:
. . :.:
.
1 - DEXRIF'TION DE L'APPAREIL
., ,.
---a.
Il est essentiellement constitu6 par une colonne de verm Pyrex Wemerie génémle I
39 me des Clo~s, Paris) (lon,gueur : 89 cm ; dia&txw int&ieur : 15 cm ; épaisseur
du vexe Y 8 mn>. obtie aux deux extr&xit& pw 2 couronnes m&talliques par l'in-
tem&diaire d'un joint caoutchouté épais (1 cm>. Lpensemble est mintenu pw 5 tiges
-
filetées aux extr&&és mies dfécmus papiflons(schém A),
&ms l'eqxce libre de la couronne, le joint supkiew est percé de 3 orifices :
'- l'un Ca> par 017 est intmduit l*inoculum et le milieu, primitif puis renouvelé,
CI. / ..a
D
-.. 5
- un second (b) qui sert à la fois à l'admissicn d'
,-._
n-t&-musse et à l'évacuation
de ‘l'air,
"
:.
:*-l . . :
- un troisième cc), pem& égalemnt .la sortie de 1' .ir et le remplacemnt de (a)
encas de rupture de cedmier.
LR joint inférieur comporte également deux ouvertuz !S :
- l'une servant à l'arrivée d'air stérile cd),
- l'autre Ce) à la récolte de la culture,
:
a) +'.intmduction de l'inocu&m et du milieu slefft /tue par l'intermédia~ d'un
&:en rhodorsil (0 int&ieur 8 mn, Ytésistance
lvautoclavage> p&%rant dans
ii colonne grâce à un tubede vem de 8 mn (0 E
&iew), l'etimité distale
du tube souple porte un tube de jonction rodé Qc I-. it femelle .,,.’
(87/16) qui per-
:
,, I I
mut tous les branchements (i&cultun et milieu),
:.
b) celle de 1' antimusse (pr&lablement homgénéisé. et stérilisk à l'autoclave
en tubes à essai de 18 mn à 11OOC pendant 15
volm par tube à essai : 1Occ)
est effectuée par une allonge à plasma (f) et
tube en rhodorsil identique
au précédent, pénétrant dans la colonne de verre
.r l'intewmédiaire
d'un tir-
ceau de canne de verre (longueur environ 12 cc;
8 ml),.* .;J. i.:. ..
1. ;' :: ,',.
.I,
ci identique à (a),assum la sortie de l'air et le
nrplacement de (a) en. cas de
rupture, la culture pouvant ainsi $trc pmlongée,
Diffuseur d'air (d) et tube de récolte ce> sont
ntés suivant le schéma A.
Aération : l'air est fourni py,un compress
Seur FYolabo ou jnieux
compresseur fournissant l'a* cgmrimé dans lp
du lalmmtoire). Il'est
st&ilisé par filtration (mm&ane FXS 1) m
à travers un filtre Seitz
de 100 cm3 (g) (ce fil- est +Menu wr une.p
e à 4 doigts solid&irje.dPune
noix fixée sur une des 5 tiFes qui assure 1
de verre, j&&s
,
et couronnes) et pénêtre dans le milieu sous
.de fines bulles qui se déga-
,g,ent du.diffvseur d'air ch). -(sch&a A).
l&z&z&3re~lc~~if-
$xeu.r d'air!,@ le fi.l-hze de:~~lOO cm: permet à vo
~.'&&-j&
(évitant le ~wlerfy&,deU.la c@ture
et l'htidification
delamembrsneEKSI), demême, uneautrepincec
(k) est placée sur le tube
de vidange pendant le cours de la culture, l'e
é en verre plonge alors dans
le for7ml.
..e /
e..
-6
.
:
-
Fixation de l'appareil :
.-
la colonne est fixeem un chassis-support kh&m B) er!
cornières Dixon. Ce chassis amvible permet la dis;sition vertic&.e.de lï,.appareil
,-;. .; ,: : t
.
.dans“la chainhre~ HXW et assure une bonne protektion de 19ense&le a$&urs des c~pé-
~,,
. ..< .
rations de trmwport et de st&ilisation à l'autoclaveV.
,y.
II - STEZILISATION DE L'APPAREIL‘ il
_
<’
--..
Contenant environ 15 r~+l d'eau distilf&,'-la colome e&es accessoikks ko& &?ri.-
s
lisés à lvautoclave (45 rm ci 12OOC) dans l'&.t $4 ils' sont représ<és~ti le sché-
m A,(f) est obturé par un bouchon cotoq-gaze recouvert depapier et $+é .(ap+
e&rilii'katio~~le'panier eSt re.mplac~~ Fm du papier d'a+@inium dont l'é&sseur
!.
ëst‘qu&r+pl~e & Plia.Fe),
(a)',et cc) chacun pxr un tube à essai de 22 mn et un
coton. La &Ce'(j) 'e6t'tiintenue en position ouverte.
i
Y
"
. ( :
Les tubes de jonction rodés femell&(a) et cc), l'allorige à plasma (f), le tube de
vidange (e) sont rab=&tus et imbilis& à l'aide de ficelles sur la colonne. L.ren-
semble p&lable&ent fixe'sur le chassis-su&m-t (schém B) à lIaide de fil de fer
est di&osé horiz&talem&t dans lvauto$ave (autoclave lmrizontal).
.
III - COMRXlTION ET $?l'ËkkATION DU HILIEU
-
-
a..-.
.
Le milieu utilisé offti la corqmsition suivante :
Pour aO litres d'eau portée à 60°C (dissolution des ingrédients et filtration plus
mpide) : '
:; :
- extmit de viande Liebip;
.m..Jo~*.4."O"*.O......*..........o..~.*.*~.
90 F
- Bacto peptone Difco (ou peptone Gquivaknte)
. . . . . . . . . ..00..*0.0..
100 :g-
-chlorure de sodium . .
..'*...O.ao~~o.o.................."....~....*
:.
,.- .' :
w.15
' -~~ig&tat~$$&r&u~
de &.nc&s
'
n..o~.o*...............~~~...~.~~..
,,
,,
,,
1.250'&
-,
,-,.
_ glup&e '
'
I...*.......*,.I....~~~~~~~~.~............~..~*~~~...*~.~...
)I
2W=T
> - lactate de soude ~...*.......s~ro.ar~~~*.*......*~..*..~...~~~~~.. ._-
3.5ml
Ci :L’ ph&&& mms&ique
. . . . . ..“Ys~“O.~o.......~*..*..~...~.~...~.~.
:. 3o'g
i
. :
LepI est ajusté, à 7,5 .-' 7,8 .,
.:
,.Y. I
.
:
.'.
.' ...
'La st&ilis&ion' s'effe&e JXU? filtration sur filtre Seitz de 10 l~i-tres pourvu
i
d'une m&ran& EKS 1. =Mi& de faciliter cette opkation, il y a inté&t à prcc&daj
à urkiclarification p&lable sur un'&tre filtre Seitz de 10 litres poumu d'une
-
AS*:‘
,:.
I.
'.
;.
~ ,.. / .*.
-7
a) P¶tion du dipestat papa?nique de panc&as :
,....a--.-
400 g de pan&as de ~&euf, recueilli à 1’
, d@p&& et +-&, sont
&langés à 1.500'1KL.d'eau distillée pmté
de 5 g & =L
paf.ne. En une heure, la temp&ature est é
OC (b&-pmie). b dipstion
est alms ar&%ée en augmentant la-twrq,
en quelques &U&s, h PT>-
duit de la digestion est ~Cueilli
m papier, Ce di~es-@t acide
peut être conse& à -2OOC.
Lqobtention de digest& paFïnique
L'autcdipestat originel de Sterne.,
,Y
gues, a été abandonné.
..b) Détails de.la st&ilisation p filtration .du ti ieu
---~.-.i.~-
k milieu filtré est recueilli dans des fl
tu?xlure infbieure a é-t6 &r6e (travail du ve
dans un atelier spécialis6) a
Sur cette tu~lure est adapté un tube souple e
mil, muni d'une pince
cl.arm~,, et temi..& par un tube de jonction tic
ickfit &le (schém C).
Lpe&ouchure, supékieure du flacon porte un
,/Y
femlle Sovi%el (s&&m C) (14/23) qui peut, s
..T
la flanme, se raccorder à
l'élé~nt &le"(14/23) correspondant porté par
,filtre de .10 litres (sch&ra
c&
,.. -:
LI.
.
,. I
..,
j_,..”
l
.,
Flacons de Golf vides et filtres Seitz de 10 li
~,pourvu~d'unemem&ane
EKS 1, sont stérilisés à l'autoclave (45 mn >
.,,
,>,.
,;:;
:.
,. -.. :.
:
Au lakoratoim de Dakar, la ptiparation d'un
vaccin mn- la sept-&-
mie hémrragique met en jeu deux appareils de
fonct-&~t s~-j-&&-
mnt et approvisionnés jokmelleEnt par 100 li
s (10 flacons de Woolf) de
milieu fil& et pr&alablemnt éprouv6 pendant
IV - PREPARATION DE L'INOCUMM
t
a) Choix et entretien des souches
-.
Le clmix de la'souche de Pasteurella mltocida à
iser est avant tout .+xxsé
par l'affection que l'on se propose de combattre
lPespèce mhle en cause
(voir tableau en introduction T classification s
$que actuelle de P. ,ml-
tocida). C'est ainsi que le type E doit %tre obli
oiremmt ergployé dans la
.e.
/ . . .
-8
.
_.
pr$pamtion du vaccin coptpla septi&mie hémo&$gique du Centre et de 190uest
africain ; les types A et.,D pour~lutter cor~tre la pasteurellose des petits mi-
riants;,
etcl.
7.'
‘
'.
,.
.'
<.
'.
:
"
Les souches sokt'~ conserver lyo~hkées~ en évitant rigoureuse.pnt~'les passa-.
'
._i
,.:
<>
,-
,:
,’ ‘gë& .jJj&iJ+S‘ s&p fiiie$"&-+&f-&iels,
Ii &A 'pr$fÊrable de ly~phiiise~ :
s
- soit du sam virulent, r&olte st&ilerrmt sur un bouvillon mmm.nt de.la ma-
.; ., : ladie~e5p%merital~ '; "*
,:...
.:.. I '
,.. .
.'
.
'- soit une cul&'iride&ente sur p&xe tryptose-sérum récoltée en eau pep-
tonée et diluge au 1/3 dans du s&um de boeuf.
Les souches de P. mltocld&; utili&es dans la p&par&tion des va&&, doivent
t u e r la~souris. Y
b) L9uK.KIu1um i au lakopatoire de Dakar, l'inoculum est contem dans un Erl&-&yer
de,'2 litres à la basëduque a Gt& $oudée une tubulure dPen&%n 6 cm (travail
du vexe dans un atelier sp%.alisé). Comne pur les flacons de %x3f de 10 li-
:, "
tres, cette tubulure se ~mursuit @w,un tube souple de ~hxlorsil, te.r&in~ par un
tube de jonction rodé Quickfit r&ile (voir schéma E). Une pince clq est placée
.-
.,.
SUT le tube souple.. Dms le pas&, des flacons de l@kz&o ont été utilisés, mis
la tuh~l~re, nlacée près du goulot, offre un désavantage (risaue de millage
du :pton).
.'
.: ',i'.
'\\.
',.
-que Erlen-Meyer contient au mins 1 litre de milieu filtré et introduit selon
le pccédé d&rit p&c%demnent (III.b)..
./
"
-'
L"~IE&U~~ est utilisé 6'8 8 heures après son e&epeno~-t avec envimon 60 ml
.'
; . .
'dé culture en tubes (6' tubes).
,
'_
" L
V-ENS~~ETMISE~~ROUI'EDELACULTIJRE
. -1
':. :r
,., _... .,
a)‘l?réparation de l'apareil autoclavé
.--
L'apmil, sorti de l'autoclave, est placé en pkition verticale, Bahs'la cfiamtm
'
'&& 'et f&é. &,& $&v&"'&9o&+J&& les-(-. aors p&-f&ée' :
:
. .
,,t';
., '..
- rese-ge des Ekyus ppillom, ,'
. ;'
'- fixatibn d~"i~wriv6e d'qjr corrpri~@ sur le.filtre .de:.10Q.m3 (a>,'
/
. . . l . .
- (a) est déca@, cc> et (f) fixés supéri
Si-L-ion vep-&&e,
- Ce) est intnduit dans un. tube de fom
eurement en position
verticale 9
- Cj) et (k) sont fermes.
La chamJz?e &uve doit être gxxwvue d'un bec JmnS
alimenté en gaz.
c
b) Introduction de l'inoculum et début de la
L'inocülum est ver& dans la colonne grâce
hement des tubes de jonction
rodés Quickfit, tile (I&le~ Meyer de 1'
(a)- (de lgapjpareil))
effectué sous la flame. Puis: ap&s dé
milieu sont alors introduits, toujours gt%ce au
richement sous la flamne des
tubes de jonction x-cd& Quickfit tile (flacon d
If)-femelle (a> (de l'ap-
pareil). Les 2 litres écoulés, la pince clamp s
ée en mont du tube de jonc-
tion rodé Quickfit T$U~ est ferm&e (schem C>.
milieu situé au niveau du
brqchemnt des tubes de jonction Quickfit est
p&f&ence expulsé dans la co-
lonne p3r Fression sxw les tubes souples.
2 litres de milieu et 1 litre d'imculum sont a
s pfisents dans l'appareil.
Après 3 heures de culture nonaé&e, 2 à 3 ml d' timusse sont alors ~iqtroduits
sous la flar&zl par l'allonge à plasma
est mise en mute..3
heures plus tard. on laisse les 8 litres de mili
restant dans le flacon de
wocîlf s9&ouler dans l'appareil.
Cette mise en mute‘; par &apes
densité opticue rmxi-
mm3 le rapport Ynoculus~P
c) Première r&olte et r&oltes ult&iewes
-<
La marche de la culture peut être suivie en effe
des pr&èvemnts stG%.le-
ment par le tube de vidange ce). A~&S chacune d
onérations, le tube .doit
être réintroduit dans le formol.
Auboutde 6 heures, lacu
est alors effectuée.
,-.
Sur le cimuit air, la p
'~intmduit dans un ballon
10
:
tenue au voisin&+ du gm.&&y 'la.~+-~e clsm (k> est alors ouverte et la culture
. . .
'1s V&iC;ule" D1Jne ...
coloration de C%m peGmet de v&ifier que la r&olte n'est SES
F
."
,contaminée 3
lorsq.ue l'appmeil ne contient élus qu'un litre de culture, la pince (k) est fede+ :
Ce volume restant~peti&Ta 1'enscmnce~n-t de.:l'app&t nouveàü de milieu neuf.
i
,...
<'
La r6colte est forrmlée imm+Jiat,erxent (4 p~lOQO>..
,'
I,,
;
,'".,.
',
m milieu .Geuf est de ncuve& introduit dans l'appar&il. 10 ml dvant~ussë ,st&ïlë
sont amen& par l'allorige, et la serie desopérations précéderment decrites est 6
:
pétee dans le r&me ordre chronologique.
'-
',
V I i
RPSULTATS
II
Par cette mithode. une culture offrant une opacité su&&m.re,~ 20 est couramnent
.
obtenue, 10 litres de culture nemettent donc de fatiiquer 20 litres de vaccin. Le
vaccin fomol6'est adjuvé par l'alun de pctassium, A cette fi+: une solution-d!alun
de potassium st&ile Gwtoclavage) est ajout&e de telle sorte cye le titre final en
alun,sott de 10 p.1000,
., Le conditionnement est effectué soit en aq-oules de 20 ml U&kar),soit en flacons
de 250'& O?mk>'. La dose iaxinale est de 2 ml.
;.
'
.,
.'.
VII =.. CXWTROLES
-
A effectuer sur la suspension vaccinale finale avant lvadjonction dgalun. :
.'
a) StGrilité
:,
~1 ensemencer en bouillon ordinaire7 en bouillon viande-foie ana&mbie, sur @ose
tryptose. Observation pendant 3 c' 4 jours.
_.
. .'
.:.,
..<
<:
. .
.
.j-~) :-mit- . .,:
. ;<.
:
..
Inoculer 2 cc sous la peau d'un lapin qui sera-mis en ohse&atio~ p&n&&tLUne
Semaine o
,
*
.m+&.+.id.-
. 0 ../“. D D
-..- _-_- i.l-,.- -..- ‘ .-II -L.-w. -- ^---
--
jt Remrques
. . .
: Les pr&5pales causes de contamination de 1'appareilde~Steme sont~les sui-:
vantes : %xculurs! souillé., milieu neuf souillf!, manque d7anti&usse, la cultuw a refmïi~
par les orifices sup&ieurs,
contamination au niveau du branchement tubes de;.jonction rw
dé &Q.e-femelle, Pour C%iter ce derni&cas, il est &cotind6 d*une &TX& d'essuyer 2
l'aide dlune gaze l'élément @.e avant tout,branchment.nouveau et de la passer~ensuite
iM@diatm-Gnt à la flamme, d'autre xrt'de remplacer i.m&diatement tout fiaccn F;roolf vide
par un autre plein de milieu, mis dont bien s&r la pince clamp est maintenue en position
fe&e. Ainsi la zone de bmnchemnt pr&ente une absence tctale de milieu5 une yi.Ïxe clamp
placée en aval peut dvailleurs accmDxe la sGcurit6.
“- 11
c> IlIlmmité
- Si l'on souhaite effectuer des tests d'imnmiti pour pouvoir contrôler le pou-
voir sellement protecteur du vaccin, il est ir &-pensable d'utiliser des FG-,
vins. A signaler me le cobaye est un animl à !mxcrire absolument de toute
expérimntation en matière de septicémie h&-mm pgique, même pour procéder 2
de s.in@es passaces de souches.
- Les bovins utilisés doivent @me tri& s&mlogi s uen-ent pur éliminer les anirraw
immns naturellement, ce qui évitera de voir SCu ivre un certain nombre de -t-g'>
mins non vaccin&. Les tests les plus
dépistage sont le titra-
ge du pouvoir protecteur pour la
tion du complément et l'agglu-
.
tination de cultures sur pélose
r 195S, III : 511.
5181, enfin il convient
rouFes hmi,ns
du groupe 0 (CARTER, G.R. : 1955 ;
nécessitent UT!
personnel qualifié, un mt&iel suffisant, un 1 boratoire adapté.
f
-.. La souche d'épreuve doit &re choisie une fois
r toutes et sera seule utili-
sée, on lui C%itera au mximm les passapes s
lieux artificiels. Le titrage
du pouvoir pathogène doit être également éta
IBI-&E définitive et
pour cela, on peut partir de la base su
d'une dilution au l/îOOO
d'une h&multure de 15 à 18 heures de la S~UC
d'épreuve peut être considés
com la dose s&emnt mortelle pour un
sible de 70 à 100 kg. Il
est possible :ue l'on enregistre des diff&ence
tenant aux mces lxwines cm--n
sidérées, Cette dose sûrement mortelle
imée assez largement, il
est pmsible (et il est bon de le vérifier) que la IX34 réelle varie selon les
régions.,
Le liquide utilisé corrme diluant pr6sen-k une prande iqortance. Le S&~UT phy-
siologique est ml supmrté par les Pasteurella et mieux vaut utiliser de lFeau
^I--
peptor& stérile.
- Ie protocole d'exp&ience est tr&~ sirrgle. Il est identique B celui appliqué
pour le charbon symptorratiq.ue,
tis &sultats des tests d'immnit6 ne deviennent très nets qu'au moment CG l'on
dispse d'un lot &rolnr;iquement homgene d'animuc. de sensibilité uniforme, ce
qui est souvent très difficile à obtenir, Les résdtats favorables fournis par
- 12
l'utilisation du vaccin dans les tr0upe.au.x
l'utilisation du vaccin dans les troupe.aux 06
06 sévissaitpdans
le pass&la
le
septic6mi.e
hgnmm?ag&e constituent sans doute le meilleur cri&re
constituent sans doute le meilleur
dont on diT+e
dont on
diT+e pour
pour juge-
de la qualit
de la
du vaccin (exemle
du vaccin
de la PAS'I'ORAE
de la
dans
1'Adar~cua~~camemun).
3'
;
;
.,
*.
.c.I / 0..
- 13
A N N E X E
LISTE DU MM'ERIEL UTILI E
- Canne de verre de 8 m-n de 0?
*
- Tubes à essais de 0 18:
-. Tubes à essais de 0 22,
- Erlen-&yer de 2 litres (pourvu d'un tube soudé à 2 3. base, atelier spécialisé
dans travail du verre),
- Flacons de Wxlf de 10 litres (dont l'ouverture inl srieure est éttie, atelier
spécialisé dans travail du 7erre> 3
- flacons de 10 litres,
- Filtres Seitz de 10 litres, membranes EKS f et AS c xrespondantes,
- Pinces claq de 6 cm,,
- Filtres Seitz de 100 cm3> membranes EKS 1 ccrrqxx hntes ,
- Diffuseur d'air (SOVIREL)5
- Tubes de jonction rodés mSles et femelles QUICKFIT (87/?6),
-. Tubes de jonction Y&& tiles et femelles SOVIREL (14/23),
- Tubes souples rhodorsil résistant aux conditions de stérilisation (0 int5rieur Bmm~ 3
- Filtre pqier?
- Antimxssc (Silicone, rhodorsil) (PROLARO),
- Pinces à 4 doigts4 noix de fixation,
- Gxni&esDIXON,
- Fil de fer. ficelle, coton car&, Eaze, papier kZra1 t, etc...
- Bact&iolo~iste en état de marche-