(p dl -2.tromr04 Diagnostic expérimental (ELISA) ...
(p dl
-2.tromr04 Diagnostic expérimental (ELISA)
de la schistosomose ovine au Sénégal
O.T. Diaw l M. Seye 1 M.Mb. Seye l Th. N’Diaye l
Y. Kaboret 2 Kh. Dieng 2 Y. Sarr ’
l-
Mots-clés
Résumé
Ovin - Schistosoma bovis - Schisto-
Ce travail a eu pour objet de tester expérimentalement l’utilisation de la tech-
soma curassoni - Schistosomose - Test
nique ELISA pour le diagnostic des schistosomoses à Schistosoma bovis e t à
ELISA - Diagnostic - Sénégal.
S. curassoni chez le mouton au Sénégal. Un antigène brut à base de vers
adultes de S. bovis a été utilisé dans cette analyse immunoenzymologique.
L’ELISA a permis de détecter les premiers anticorps anti-Schistosoma dès la
6e semaine après I’infestation par S. bovis et dès la ge semaine par S. curassoni,
alors que les analyses coprologiques classiques ont été négatives jusqu’à la
F semaine après l’infestation par S. bovis et la 1 Oe semaine par S. curassoni.
:
n INTRODUCTION
adultes chez des moutons infestés expérimentalement. Ceci a per-
mis d’étudier la cinétique d’évolution des anticorps et la validité
Après la mise en service des barrages de Diama et de Manantali et
de ce test ELISA ;
la multiplication des aménagements hydro-agricoles, un dévelop-
- d’étudier les réactions croisées avec les autres trématodes.
pement de trématodoses humaines et animales a été constaté dans
la région du fleuve Sénégal (5). Les schistosomoses animales font
partie de ces affections et ont connu ces dernières années une forte
n MATERIEL ET METHODES
recrudescence avec de nombreux foyers. Schistosoma bovis et
S. curussoni sont les seules espèces de schistosomes identifiées au
Animaux d’expérience
Sénégal chez le bétail (4).
Dix moutons de race Peul-Peul, âgés de 8 mois à un an, nés à
La coprologie demeure la seule méthode de diagnostic ante-mor-
Dakar dans un élevage de case (zone indemne de trématodoses),
tem de ces schistosomoses. Différentes techniques ont été testées
ont été utilisés. L’analyse coprologique avant leur infestation par
et utilisées (13, 17, 18) mais elles sont toutes insuffisantes car
sédimentation (22) a confirmé l’absence de trématodes chez ces
basées sur la présence d’œufs qui, dans le cas de la schistosomose,
animaux. Ces moutons, gardés dans une bergerie, ont été numéro-
ne peuvent être détectés que deux à trois mois après l’infestation
tés et répartis en trois lots :
de l’animal. De plus, une excrétion fécale faible et irrégulière est
observée dans la schistosomose animale (21).
-un lot témoin composé de trois moutons non infestés (no 871,
875 et 512) ;
Pour le diagnostic de cette maladie, une technique plus sensible
s’est avérée nécessaire et de nombreux tests sérologiques ont alors
- un lot de cinq moutons infestés expérimentalement avec Schisto-
été développés (7, 15, 20). Ces derniers, très variés, utilisent diffé-
somabovis(n”874,876,511,513et516);
rentes méthodes dont la technique ELISA. Très utilisée dans la
schistosomose humaine, I’ELISA (12) est peu employée dans le
-un troisième lot de deux animaux infestés expérimentalement
diagnostic de la schistosomose animale. L’objectif de ce travail a
avec Schistosoma curussoni (no 872 et 873).
1
été :
Znfestation expérimentale
- de tester au Sénégal la technique ELISA pour le diagnostic de la
schistosomose animale en utilisant un antigène à base de vers
Sept moutons ont été infestés dont cinq avec Schistosoma bovis et
deux avec S. curussoni. L’infestation s’est faite au niveau de la
queue du mouton, après qu’elle ait été rasée, en la laissant tremper
pendant 45 min dans une solution d’eau distillée contenant les fur-
1. Service de parasitologie, Lnervhra, BP 2057, Dakar, Sénégal
cocercaires infestantes de S. bovis ou de S. curussoni. Ces furcocer-
2. Ecole inter.Etats des sciences et médecine vétéxinaire (Eismv), BP 5077, Dakar,
caires ont été obtenues à partir de bulins d’élevage (Bulinus truncu-
Sénégal
tus pour S. bovis et B. umbilicutus pour S. curussoni) infestés
321
ELISA diagnosis of sheep schistosomosis in Senegal
eqéfimentalement en laboratoire et suivis jusqu’à la maturation.
Il s’agissait de sérums d’animaux infestés naturellement par une
Chaque mouton a été infesté avec 1 500 furcocercaires issues d’un
seule espèce de trématode (F. gigantica ou Parumphistomum SI).)
lot de mollusques positifs : cinq B. truncatus pour ,s. bovis et trois
(constaté par coprologie sur l’animal vivant et confirmé après
B. umbilicatus pour S. curassoni.
l’abattage et l’autopsie). Ces animaux, fortement infestés, se ren-
fMèvement de sang et de fices pour analyse
contrent dans certaines zones au Sénégal.
- Sérums humains : sérums positifs pour S. haematobium, pour
Pendant le suivi des animaux, des prélèvements de fèces servant à
S. mmsoni et sérums négatifs (S. haematobium et S. mansoni écx-
des analyses coprologiques (24) ont été effectués avant I’infesta-
tées).
tien, puis une fois par semaine à partir de la troisième semaine
après I’infestation. Des prélèvements individuels de sang en vue de
La dilution sérique au I/l00 a été retenue après titrage pour tous
la récolte du sérum pour le test sérologique ELISA ont également
les sérums analysés. Chaque sérum a été testé sur deux cupules.
été effectués avant l’infestation, puis au rythme d’un par semaine.
Conjugués
Les sérums humains utilisés dans cette étude ont été obtenus dans
des zones endémiques à Schistosoma haematobium et à S. mansoni
Des sérums de lapins anti-IgG couplés à de la peroxydase ont été
au Sénégal. Les analyses sérologiques ont été réalisées par la tech-
utilisés comme conjugués. Ils provenaient de préparations com-
nique ELISA.
merciales (Sigma) (anti-mouton dans l’analyse des sérums c!e
moutons et anti-humain dans celle des sérums humains). Ces
Epreuve ELISA (ELISA indirecte)
conjugués ont été titrés avant utilisation.
Antigènes utilisés
Lecture et interprétation
L’antigène de Schistosoma bovis a été obtenu à partir de vers
Les plaques ont été lues par un lecteur ELISA Multiskan Phs
adultes après broyage et centrifugation à 20 000 g pendant 2 h. Le
MKII muni d’un filtre de 450 nm de longueur d’onde. Les résulta1.s
surnageant a été filtré et aliquoté. Cet antigène titrant 13,8 mg de
des sérologies par ELISA ont été exprimés en densité optique
protéines par millilitre, a été fourni par le Cermes de Niamey. Cet
(DO). La DO moyenne de deux cupules de chaque sérum a été
antigène a été utilisé à 10,O pg/ml.
convertie en pourcentage de positivité (PP) par rapport à la
moyenne de la DO du sérum de référence. Ainsi, les auteurs ont
L’antigène de Fasciola gigantica était un antigène d’excrétion-
choisi d’exprimer les résultats en pourcentage de positivité ou taux
sécrétion obtenu à partir de vers adultes. Sa concentration en pro-
d’anticorps (p. 100 AC).
téines a été de 3,.5 mg/ml (3). Tous ces antigènes à base de schisto-
somes et de Fasciolu ont été utilisés dans les tests à 10,O pg/ml.
Le principe de fixer le seuil de positivité à la moyenne générale
des PP des sérums avant l’infestation (sérum de référence négatif)
Fixation des antigènes
additionné à deux écarts-types a été retenu au moment des
Les antigènes bruts ont été dilués dans un tampon de carbonate-
titrages (15). Ainsi cela a permis de fixer les seuils de positivité
bicarbonate 0,05 M, pH 9,6 pour obtenir la concentration de travail
avec les deux antigènes utilisés :
fixée à 10,O Fg de protéine par millilitre. Cette solution antigé-
- antigène de Schistosoma bovis (broyat de vers adultes), 45 p. 100
nique a été répartie dans la plaque à raison de 100 l.11 par cupule,
du sérum de référence positif ;
puis, après agitation douce, la plaque a été laissée à incuber pen-
dant une nuit à 4 “C. Après incubation, la plaque a été vidée, puis
- antigène de Fasciola gigantica (excrétion-sécrétion de vers
rincée avec le tampon de lavage (PBS-Tween 20), elle a ensuite
adultes), 45 p. 100.
été égouttée et séchée.
Chaque sérum testé a ainsi pu être considéré comme positif OH
Blocage
comme négatif en fonction du seuil de positivité défini ave’:
chaque antigène utilisé.
Le blocage a été fait avec le tampon PBS-Tween, additionné de
0,5 p. 100 d’albumine, distribué à raison de 150 pl par cupule sen-
Analyse des données
sibilisée. L’incubation a duré 30 min à 37 “C sans agitation.
Les données ont été présentées sous forme de graphes de disper-
Sérums de référence
sion accompagnés de courbes moyennes et de leur intervalle de
confiance. Les courbes moyennes ont été estimées par la méthode
- Sérum de référence positif pour Schistosoma bovis : pour l’étude
des B-splines (10). L’intervalle de confiance de la moyenne a éti
de la cinétique des anticorps, mélange des sérums de la dernière
estimé à partir de la variante des résidus par le test de Student (2:.
semaine de prélèvement post infestation de tous les moutons expé-
Cette technique ELISA a permis de suivre la cinétique des anti-
rimentalement infestés.
corps par l’analyse des différents prélèvements et d’étudier les
-Sérum de référence négatif : mélange des sérums des mêmes
réactions croisées avec les autres trématodes.
moutons prélevés avant l’infestation.
- Sérum de référence positif pour Fusciola gigantica : sérums de
deux moutons qui ont été infestés expérimentalement avec FUS-
n RESULTATS
7
ciola gigantica pour une étude sérologique (3). Ces sérums ont été
prélevés régulièrement chaque semaine jusqu’à la mort des ani-
Etude de la cinétique des anticorps au cours
maux (1 le semaine).
de l’infestation avec S. bovis et S. curassoni
Sérums de terrain
.
Znfestation avec S. bovis (cinq moutons)
- Sérum d’animaux atteints de paramphistomose (Parumphis-
tomum
Dans cette infestation avec S. bovis les anticorps antischistosomes
sp.) : 10 sérums.
ont été décelés dès la 6e semaine après I’infestation avec un tau:<
-Sérums d’animaux infestés naturellement par F. gigantica :
moyen d’anticorps de 54,7 p. 100 (le seuil de positivité ayant étli
5 sérums.
fixé à 45 p. 100) (figure la).
322
Diugnostic ELISA Cie la schistosomose ovine au Sénégal
Avec l’analyse copralogique, les premiers ceufs n’ont été observés
Figure 1 a : lot Schistosoma bovis (n = 5)
qu’à partir de la 7e semaine. Lors du sacrifice de ces animaux, à
100
partir de la 13e semaine, des vers adultes mâles et femelles (50 à
n
129) ont été récoltés dans les veines mésentériques.
8 80
.u
f
Infestation avec S. curassoni (deux moutons)
$
6 0
Les premiers anticorps ont été décelés à partir de la 9” semaine.
M
s
4 0
Les analyses coprologiques faites à partir de la 3e semaine n’ont
6
été positives qu’à la 10e semaine. Après le sacrifice des animaux,
L
-J
2 0
des vers adultes mâles et femelles (30 à 100) ont été récoltés à
a
l’autopsie (figure lb).
0 i,,
, ,,
,,,
,,, , ,,, ,,
.4nimaux témoins non infestés (trois moutons)
0 1 2
3 4 5 6 7
8 9 1011 1 2 1 3 1 4 1 5 1 6
Semaines post-infection
Ces moutons ont été suivis jusqu’à la fin de l’expérience. Les ana-
lyses sérologiques par I’ELISA n’ont révélé aucune valeur au-des-
Figure 1 b : lot Schistosoma curassoni (n = 2)
sus de 45 p. 100 (seuil de positivité) (figure lc). L’analyse copro-
logique faite à partir de la 3e semaine est restée négative.
Comparativement aux témoins, la cinétique des anticorps était bien
nette avec S. bovis et S. curassoni. Cette technique a permis de
séparer sérologiquement les animaux infestés par des schistosomes
(Schistosoma bovis ou S. curassoni) de ceux non infestés.
Réactions croisées de l’antigène de S. bovis avec
les sérums d’ovins atteints par d’autres helminthoses
et les sérums humains atteints de schistosomose
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1314 15 16
Antigène de S. bovis et anticorps dirigés contre Fasciola gigantica
Semaines post-infection
L’antigène de S. bovis a été testé avec les sérums de deux moutons
Figure 1 c : lot témoin (n = 3)
infestés expérimentalement par Fasciola gigantica et récoltés à
1 0 0
intervalle d’une semaine jusqu’à la 1 le semaine (3).
L’évolution des anticorps anti-Fasciola a été suivie dans cette
infestation expérimentale chez le mouton avec la technique
ELISA. Avec l’antigène de S. bovis, aucune réaction positive n’a
été observée avec les sérums de la première jusqu’à la 1 le semaine
(les taux d’anticorps ont varié de 7 à 18 p. 100 et le seuil de positi-
vité a été fixé à 45 p. 100). De même cinq sérums de moutons
naturellement infestés par F. gigantica ont été testés avec l’anti-
gène S. bovis et n’ont pas réagi (les taux d’anticorps ont varié de
6 à 18 p. 100). L’antigène de S. bovis n’a pas croisé avec celui de
0
1 2
3 4
5
6
7
8 9 101112 13 14 1516
F. gigantica.
Semaines post-infection
Antigène de S. bovis sur les sérums de Paramphistomum sp.
Moyenne (lissage B-spline)
Dix sérums de moutons infestés par Paramphistomum sp. ont été
Intervalle de confiance 95 %
testés avec l’antigène de S. bovis. Aucune réaction positive n’a été
observée. Les taux d’anticorps ont varié de 8 à 35 p. 100, le seuil
F i g u r e 1 : cinétique des anticorps dirigés contre Schistosoma
de positivité a été fixé à 45 p. 100.
bovis et Schistosoma curassoni.
Antigène de S. bovis sur les sérums de Schistosoma haematobium
et de S. mansoni
Huit sérums humains positifs à S. haematobium et dix autres posi-
W DISCUSSION
tifs à S. mansoni ont été testés avec l’antigène de S. bovis. Aucune
réaction positive n’a été observée avec ces deux parasites. Le seuil
Dans cette étude comportant une infestation expérimentale d’ovins
de positivité a été fixé à 45 p. 100, les taux d’anticorps ont varié de
indemnes de trématodes par des schistosomes (Schistosoma bovis
9 à 38 p. 100 avec S. haematobium, et de 5 à 40 p. 100 avec
et S. curassoni), le test ELISA utilisant pour antigène des schisto-
S. mansoni.
somes adultes (S. bovis) a permis de déceler précocement, dès la
7e semaine pour S. bovis et à la ge semaine pour S. curassoni, la
Avec cet antigène de S. bovis à base de vers adultes aucune réac-
présence d’anticorps anti-schistosomes. Ces mêmes résultats
tion croisée n’a été enregistrée ni avec F. gigantica ni avec les
sérologiques en ce qui concerne la précocité du diagnostic (de
sérums humains dirigés contre S. haematobium et S. mansoni. De
la 6” à la Ile semaine) ont été obtenus chez la souris avec
même aucune réaction positive n’a été observée avec les sérums
Schistosoma mansoni en utilisant un antigène soluble issu d’œufs
d’animaux atteints par Parumphistomum sp.
de S. mansoni (11).
3 2 3
ELISA diagnosis of sheep schistosomosis in Senegal
Ainsi, il a été observé que les anticorps avec S. bovis étaient plus
donné les sérums humains (sérums de référence négatifs et positifs
précoces que ceux avec S. curassoni. Parallèlement, il a été
à S. haematobium et à S. mansoni), le docteur R. Lancelot (Cira’%
observé que l’émission des œufs était plus précoce dans l’infesta-
emvt/Isra/Lnerv, Dakar) pour l’analyse statistique des données et
tion avec S. bovis que dans celle avec S. curussoni. Ces mêmes
également le docteur C. Boulard (Inra, Tours) pour ses remarques
observations concernant la précocité du diagnostic avaient été
et suggestions sur le manuscrit.
faites dans le cas de la fasciolose entre Fasciolu hepatica et
Fasciola gigantica (8,9).
Dans le cas des schistosomoses du bétail, de nombreux et diffé-
rents tests sérologiques pour la détection des anticorps de l’hôte
BIBLIOGRAPHIE
dirigés contre le parasite ont été bien développés (7, 14, 19) mais
n’ont pas été utilisés sur le terrain.
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Chapman & Hall, 608 p.
polyparasités pose le problème des communautés d’antigènes et
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des réactions croisées avec d’autres parasites. Dans les zones endé-
L’immunodiagnostic de la fasciolose à Fasciola gigantica par la
miques de trématodoses de cette étude, on observe le plus souvent
technique ELISA au Sénégal. Observations préliminaires chez deux
la coexistence de Fasciola gigantica avec Schistosoma bovis et/ou
agneaux. Revue Flev. Méd. vét. Pays trop., 47: 291-294.
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de mollusques et incidence sur les trématodoses dans la région du de ta
abondamment documentée. Les dernières études au Nigeria par
et du lac de Guiers après la construction du barrage de Diama sur le
Fagbemi et Obarisiagbon (9) ont montré la communauté antigé-
fleuve Sénégal. Revue Flev. Méd. vét. Pays trop., 43 : 499-502.
nique existant entre F. gigantica, S. bovis et Dicrocoelium hospes.
6. DOENHOFF M.J., BUTTERWORTH A.E,, STURROCK R.F., OUhlA
J.H., KOECH D., PRENTICE M., BAIN J., 1993. Seroepidemiology and
Dans cette étude, l’antigène à base de vers adultes de S. bovis a été
serodiagnosis of schistosomiasis
in Kenya using crude and purified
testé sur des sérums de référence de moutons positifs à F. gigan-
antigens of Schistosoma mansoni in ELISA. Trans. R. Soc. trop. Med.
tica (infestation naturelle et infestation expérimentale) et des
Hyg., 87: 42-48.
sérums de moutons positifs à paramphistomes (infestation natu-
7. DU PLESSIS J.L., VAN WYK J.A., 1972. Studies on schistosomiasis.
relle). Aucune réaction croisée n’a été enregistrée entre l’antigène
3. Detection of antibodies against Schistosoma mattheei by the indirect
de S. bovis et ceux de F. gigantica et de Paramphistomum sp. Par
immuno-fluorescent method. OnderstepoortJ. vet. Rex, 39: 179-l 80.
contre, l’utilisation d’un antigène homologue à base d’excrétion-
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response by EITB and ELISA before and after chemotherapy in sheep
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corps anti-Fusciola dès la 3e semaine chez ces mêmes sérums de
moutons infestés expérimentalement par Fasciola gigantica (3).
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Fasciola gigantica, Dicrocoelium hospes and Schistosoma bovis and
Concernant l’antigène de S. bovis à base de vers adultes aucune
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réaction humorale n’a été observée avec les sérums humains posi-
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tifs à 5’. mansoni et S. haematobium, alors que ces derniers ont été
London, UK, Chapman & Hall, 335 p.
décrits (1,6) comme réagissant avec l’antigène de S. bovis utilisant
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des broyats d’œufs. Des études ont montré que l’antigène de schis-
immunosorbent assay (ELSA) for the immunodiagnosis of schisto-
tosome à base d’œufs permet une détection des anticorps plus pré-
somiasis. Am. J. trop. Med. Hyg., 28: 237-241.
coce et à des niveaux plus élevés que l’antigène à base de vers
12. HULDT C., LAGERQUIST B., PHILLIPS T., DRAPER C.C., VOLLER
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Les résultats obtenus dans cette étude expérimentale du diagnostic
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de la schistosomose animale par la technique ELISA avec un anti-
GOEDBLOED E., LIGTHART C.S., TEESDALE C.H., AMIN M.A., OMER
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gène de S. bovis sont encourageants. Les études doivent se pour-
immunosorbent assay (ELISA) test for Schistosoma mansoni infections.
suivre et envisager :
Ann. trop, Med. Hyg., 75: 243-253.
- d’améliorer ce test sérologique par l’utilisation d’un antigène à
16. McLAREN M.L., LILLYWHITE J.E., DUNE D.W., DOENHOFF M.J.,
base d’œufs de Schistosoma bovis ou de S. curassoni ;
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sensitivity and specificity in ELISA using a fraction containing S. mansoni
- de tester ce type de diagnostic plus précoce dans les conditions
egg antigens GI and -1. Trans. R. Soc. trop. Med. Hyg., 75: 72-79.
naturelles pour sa validation.
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A comparison
of filtration, concentration, and thick smear techniques in
Remerciements
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Nous remercions le docteur Boulanger (Cermes-Orstom de Nia-
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324
Diagnostic ELIS,4 de la schistosomose ovine au Sénégal
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Reçu le 6.598, accepté le 11.1.99
Summary
Resumen
Diaw O.T., Seye M., Seye M.Mb., N’Diaye Th., Kaboret Y.,
Diaw O.T., Seye M., Seye M.Mb., N’Diaye Th., Kaboret Y.,
Dieng Kh., Sarr Y. Experimental diagnosis (ELISA) of sheep
Dieng Kh., Sarr Y. Diagnostico experimental (ELISA) de la
schistosomosis in Senegal
esquistosomosis en el ovin0 en Senegal
The purpose of this work was to investigate experimentally
El presente trabajo tiene por objetivo el de examinar experi-
the use of ELISA for the diagnosis of Schistosoma bovis and
mentalmente la utilizacion de la técnica ELISA para el dia-
S. curassoni schistosomoses in sheep in Senegal. A crude anti-
gnostico de la esquistosomosis por Schistosoma bovis y por
gen from S. bovis adult worms was used with this test. The
S. curassoni en el ovino de Senegal. En este analisis inmu-
first anti-Schistosoma antibodies were detected by ELISA as
noenzimatologico, se utilizo un antigeno bruto, a base de
early as the 6th and 9th weeks following S. bovis and S.
vermes adultos de S. bovis. El ELISA permitio la deteccion de
curassoni infections, respectively, * whereas fecal analysis
10s primeros anticuerpos anti Schistosoma a partir de la
results were negative up to the 8th and 10th weeks after S.
6ta semana post infestacion por S. bovis y a partir de la
bovis and S. curassoni infections, respectively.
9ena semana para S. curassoni, mientras que 10s analisis
coprologicos cl&icos fueron negativos hasta la 8ava semana
Key words: Sheep - Schistosoma bovis - Schistosoma curas-
para S. bovis y la 10a semana post infestacion para S. curas-
soni - Schistosomosis - ELISA - Diagnosis - Senegal.
soni.
Palabras clave: Ovino - Schistosoma bovis - Schistosoma
curassoni - Esquistosomosis - ELISA - Diagnostico - Senegal.
-2.tromr04 Diagnostic expérimental (ELISA)
de la schistosomose ovine au Sénégal
O.T. Diaw l M. Seye 1 M.Mb. Seye l Th. N’Diaye l
Y. Kaboret 2 Kh. Dieng 2 Y. Sarr ’
l-
Mots-clés
Résumé
Ovin - Schistosoma bovis - Schisto-
Ce travail a eu pour objet de tester expérimentalement l’utilisation de la tech-
soma curassoni - Schistosomose - Test
nique ELISA pour le diagnostic des schistosomoses à Schistosoma bovis e t à
ELISA - Diagnostic - Sénégal.
S. curassoni chez le mouton au Sénégal. Un antigène brut à base de vers
adultes de S. bovis a été utilisé dans cette analyse immunoenzymologique.
L’ELISA a permis de détecter les premiers anticorps anti-Schistosoma dès la
6e semaine après I’infestation par S. bovis et dès la ge semaine par S. curassoni,
alors que les analyses coprologiques classiques ont été négatives jusqu’à la
F semaine après l’infestation par S. bovis et la 1 Oe semaine par S. curassoni.
:
n INTRODUCTION
adultes chez des moutons infestés expérimentalement. Ceci a per-
mis d’étudier la cinétique d’évolution des anticorps et la validité
Après la mise en service des barrages de Diama et de Manantali et
de ce test ELISA ;
la multiplication des aménagements hydro-agricoles, un dévelop-
- d’étudier les réactions croisées avec les autres trématodes.
pement de trématodoses humaines et animales a été constaté dans
la région du fleuve Sénégal (5). Les schistosomoses animales font
partie de ces affections et ont connu ces dernières années une forte
n MATERIEL ET METHODES
recrudescence avec de nombreux foyers. Schistosoma bovis et
S. curussoni sont les seules espèces de schistosomes identifiées au
Animaux d’expérience
Sénégal chez le bétail (4).
Dix moutons de race Peul-Peul, âgés de 8 mois à un an, nés à
La coprologie demeure la seule méthode de diagnostic ante-mor-
Dakar dans un élevage de case (zone indemne de trématodoses),
tem de ces schistosomoses. Différentes techniques ont été testées
ont été utilisés. L’analyse coprologique avant leur infestation par
et utilisées (13, 17, 18) mais elles sont toutes insuffisantes car
sédimentation (22) a confirmé l’absence de trématodes chez ces
basées sur la présence d’œufs qui, dans le cas de la schistosomose,
animaux. Ces moutons, gardés dans une bergerie, ont été numéro-
ne peuvent être détectés que deux à trois mois après l’infestation
tés et répartis en trois lots :
de l’animal. De plus, une excrétion fécale faible et irrégulière est
observée dans la schistosomose animale (21).
-un lot témoin composé de trois moutons non infestés (no 871,
875 et 512) ;
Pour le diagnostic de cette maladie, une technique plus sensible
s’est avérée nécessaire et de nombreux tests sérologiques ont alors
- un lot de cinq moutons infestés expérimentalement avec Schisto-
été développés (7, 15, 20). Ces derniers, très variés, utilisent diffé-
somabovis(n”874,876,511,513et516);
rentes méthodes dont la technique ELISA. Très utilisée dans la
schistosomose humaine, I’ELISA (12) est peu employée dans le
-un troisième lot de deux animaux infestés expérimentalement
diagnostic de la schistosomose animale. L’objectif de ce travail a
avec Schistosoma curussoni (no 872 et 873).
1
été :
Znfestation expérimentale
- de tester au Sénégal la technique ELISA pour le diagnostic de la
schistosomose animale en utilisant un antigène à base de vers
Sept moutons ont été infestés dont cinq avec Schistosoma bovis et
deux avec S. curussoni. L’infestation s’est faite au niveau de la
queue du mouton, après qu’elle ait été rasée, en la laissant tremper
pendant 45 min dans une solution d’eau distillée contenant les fur-
1. Service de parasitologie, Lnervhra, BP 2057, Dakar, Sénégal
cocercaires infestantes de S. bovis ou de S. curussoni. Ces furcocer-
2. Ecole inter.Etats des sciences et médecine vétéxinaire (Eismv), BP 5077, Dakar,
caires ont été obtenues à partir de bulins d’élevage (Bulinus truncu-
Sénégal
tus pour S. bovis et B. umbilicutus pour S. curussoni) infestés
321
ELISA diagnosis of sheep schistosomosis in Senegal
eqéfimentalement en laboratoire et suivis jusqu’à la maturation.
Il s’agissait de sérums d’animaux infestés naturellement par une
Chaque mouton a été infesté avec 1 500 furcocercaires issues d’un
seule espèce de trématode (F. gigantica ou Parumphistomum SI).)
lot de mollusques positifs : cinq B. truncatus pour ,s. bovis et trois
(constaté par coprologie sur l’animal vivant et confirmé après
B. umbilicatus pour S. curassoni.
l’abattage et l’autopsie). Ces animaux, fortement infestés, se ren-
fMèvement de sang et de fices pour analyse
contrent dans certaines zones au Sénégal.
- Sérums humains : sérums positifs pour S. haematobium, pour
Pendant le suivi des animaux, des prélèvements de fèces servant à
S. mmsoni et sérums négatifs (S. haematobium et S. mansoni écx-
des analyses coprologiques (24) ont été effectués avant I’infesta-
tées).
tien, puis une fois par semaine à partir de la troisième semaine
après I’infestation. Des prélèvements individuels de sang en vue de
La dilution sérique au I/l00 a été retenue après titrage pour tous
la récolte du sérum pour le test sérologique ELISA ont également
les sérums analysés. Chaque sérum a été testé sur deux cupules.
été effectués avant l’infestation, puis au rythme d’un par semaine.
Conjugués
Les sérums humains utilisés dans cette étude ont été obtenus dans
des zones endémiques à Schistosoma haematobium et à S. mansoni
Des sérums de lapins anti-IgG couplés à de la peroxydase ont été
au Sénégal. Les analyses sérologiques ont été réalisées par la tech-
utilisés comme conjugués. Ils provenaient de préparations com-
nique ELISA.
merciales (Sigma) (anti-mouton dans l’analyse des sérums c!e
moutons et anti-humain dans celle des sérums humains). Ces
Epreuve ELISA (ELISA indirecte)
conjugués ont été titrés avant utilisation.
Antigènes utilisés
Lecture et interprétation
L’antigène de Schistosoma bovis a été obtenu à partir de vers
Les plaques ont été lues par un lecteur ELISA Multiskan Phs
adultes après broyage et centrifugation à 20 000 g pendant 2 h. Le
MKII muni d’un filtre de 450 nm de longueur d’onde. Les résulta1.s
surnageant a été filtré et aliquoté. Cet antigène titrant 13,8 mg de
des sérologies par ELISA ont été exprimés en densité optique
protéines par millilitre, a été fourni par le Cermes de Niamey. Cet
(DO). La DO moyenne de deux cupules de chaque sérum a été
antigène a été utilisé à 10,O pg/ml.
convertie en pourcentage de positivité (PP) par rapport à la
moyenne de la DO du sérum de référence. Ainsi, les auteurs ont
L’antigène de Fasciola gigantica était un antigène d’excrétion-
choisi d’exprimer les résultats en pourcentage de positivité ou taux
sécrétion obtenu à partir de vers adultes. Sa concentration en pro-
d’anticorps (p. 100 AC).
téines a été de 3,.5 mg/ml (3). Tous ces antigènes à base de schisto-
somes et de Fasciolu ont été utilisés dans les tests à 10,O pg/ml.
Le principe de fixer le seuil de positivité à la moyenne générale
des PP des sérums avant l’infestation (sérum de référence négatif)
Fixation des antigènes
additionné à deux écarts-types a été retenu au moment des
Les antigènes bruts ont été dilués dans un tampon de carbonate-
titrages (15). Ainsi cela a permis de fixer les seuils de positivité
bicarbonate 0,05 M, pH 9,6 pour obtenir la concentration de travail
avec les deux antigènes utilisés :
fixée à 10,O Fg de protéine par millilitre. Cette solution antigé-
- antigène de Schistosoma bovis (broyat de vers adultes), 45 p. 100
nique a été répartie dans la plaque à raison de 100 l.11 par cupule,
du sérum de référence positif ;
puis, après agitation douce, la plaque a été laissée à incuber pen-
dant une nuit à 4 “C. Après incubation, la plaque a été vidée, puis
- antigène de Fasciola gigantica (excrétion-sécrétion de vers
rincée avec le tampon de lavage (PBS-Tween 20), elle a ensuite
adultes), 45 p. 100.
été égouttée et séchée.
Chaque sérum testé a ainsi pu être considéré comme positif OH
Blocage
comme négatif en fonction du seuil de positivité défini ave’:
chaque antigène utilisé.
Le blocage a été fait avec le tampon PBS-Tween, additionné de
0,5 p. 100 d’albumine, distribué à raison de 150 pl par cupule sen-
Analyse des données
sibilisée. L’incubation a duré 30 min à 37 “C sans agitation.
Les données ont été présentées sous forme de graphes de disper-
Sérums de référence
sion accompagnés de courbes moyennes et de leur intervalle de
confiance. Les courbes moyennes ont été estimées par la méthode
- Sérum de référence positif pour Schistosoma bovis : pour l’étude
des B-splines (10). L’intervalle de confiance de la moyenne a éti
de la cinétique des anticorps, mélange des sérums de la dernière
estimé à partir de la variante des résidus par le test de Student (2:.
semaine de prélèvement post infestation de tous les moutons expé-
Cette technique ELISA a permis de suivre la cinétique des anti-
rimentalement infestés.
corps par l’analyse des différents prélèvements et d’étudier les
-Sérum de référence négatif : mélange des sérums des mêmes
réactions croisées avec les autres trématodes.
moutons prélevés avant l’infestation.
- Sérum de référence positif pour Fusciola gigantica : sérums de
deux moutons qui ont été infestés expérimentalement avec FUS-
n RESULTATS
7
ciola gigantica pour une étude sérologique (3). Ces sérums ont été
prélevés régulièrement chaque semaine jusqu’à la mort des ani-
Etude de la cinétique des anticorps au cours
maux (1 le semaine).
de l’infestation avec S. bovis et S. curassoni
Sérums de terrain
.
Znfestation avec S. bovis (cinq moutons)
- Sérum d’animaux atteints de paramphistomose (Parumphis-
tomum
Dans cette infestation avec S. bovis les anticorps antischistosomes
sp.) : 10 sérums.
ont été décelés dès la 6e semaine après I’infestation avec un tau:<
-Sérums d’animaux infestés naturellement par F. gigantica :
moyen d’anticorps de 54,7 p. 100 (le seuil de positivité ayant étli
5 sérums.
fixé à 45 p. 100) (figure la).
322
Diugnostic ELISA Cie la schistosomose ovine au Sénégal
Avec l’analyse copralogique, les premiers ceufs n’ont été observés
Figure 1 a : lot Schistosoma bovis (n = 5)
qu’à partir de la 7e semaine. Lors du sacrifice de ces animaux, à
100
partir de la 13e semaine, des vers adultes mâles et femelles (50 à
n
129) ont été récoltés dans les veines mésentériques.
8 80
.u
f
Infestation avec S. curassoni (deux moutons)
$
6 0
Les premiers anticorps ont été décelés à partir de la 9” semaine.
M
s
4 0
Les analyses coprologiques faites à partir de la 3e semaine n’ont
6
été positives qu’à la 10e semaine. Après le sacrifice des animaux,
L
-J
2 0
des vers adultes mâles et femelles (30 à 100) ont été récoltés à
a
l’autopsie (figure lb).
0 i,,
, ,,
,,,
,,, , ,,, ,,
.4nimaux témoins non infestés (trois moutons)
0 1 2
3 4 5 6 7
8 9 1011 1 2 1 3 1 4 1 5 1 6
Semaines post-infection
Ces moutons ont été suivis jusqu’à la fin de l’expérience. Les ana-
lyses sérologiques par I’ELISA n’ont révélé aucune valeur au-des-
Figure 1 b : lot Schistosoma curassoni (n = 2)
sus de 45 p. 100 (seuil de positivité) (figure lc). L’analyse copro-
logique faite à partir de la 3e semaine est restée négative.
Comparativement aux témoins, la cinétique des anticorps était bien
nette avec S. bovis et S. curassoni. Cette technique a permis de
séparer sérologiquement les animaux infestés par des schistosomes
(Schistosoma bovis ou S. curassoni) de ceux non infestés.
Réactions croisées de l’antigène de S. bovis avec
les sérums d’ovins atteints par d’autres helminthoses
et les sérums humains atteints de schistosomose
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1314 15 16
Antigène de S. bovis et anticorps dirigés contre Fasciola gigantica
Semaines post-infection
L’antigène de S. bovis a été testé avec les sérums de deux moutons
Figure 1 c : lot témoin (n = 3)
infestés expérimentalement par Fasciola gigantica et récoltés à
1 0 0
intervalle d’une semaine jusqu’à la 1 le semaine (3).
L’évolution des anticorps anti-Fasciola a été suivie dans cette
infestation expérimentale chez le mouton avec la technique
ELISA. Avec l’antigène de S. bovis, aucune réaction positive n’a
été observée avec les sérums de la première jusqu’à la 1 le semaine
(les taux d’anticorps ont varié de 7 à 18 p. 100 et le seuil de positi-
vité a été fixé à 45 p. 100). De même cinq sérums de moutons
naturellement infestés par F. gigantica ont été testés avec l’anti-
gène S. bovis et n’ont pas réagi (les taux d’anticorps ont varié de
6 à 18 p. 100). L’antigène de S. bovis n’a pas croisé avec celui de
0
1 2
3 4
5
6
7
8 9 101112 13 14 1516
F. gigantica.
Semaines post-infection
Antigène de S. bovis sur les sérums de Paramphistomum sp.
Moyenne (lissage B-spline)
Dix sérums de moutons infestés par Paramphistomum sp. ont été
Intervalle de confiance 95 %
testés avec l’antigène de S. bovis. Aucune réaction positive n’a été
observée. Les taux d’anticorps ont varié de 8 à 35 p. 100, le seuil
F i g u r e 1 : cinétique des anticorps dirigés contre Schistosoma
de positivité a été fixé à 45 p. 100.
bovis et Schistosoma curassoni.
Antigène de S. bovis sur les sérums de Schistosoma haematobium
et de S. mansoni
Huit sérums humains positifs à S. haematobium et dix autres posi-
W DISCUSSION
tifs à S. mansoni ont été testés avec l’antigène de S. bovis. Aucune
réaction positive n’a été observée avec ces deux parasites. Le seuil
Dans cette étude comportant une infestation expérimentale d’ovins
de positivité a été fixé à 45 p. 100, les taux d’anticorps ont varié de
indemnes de trématodes par des schistosomes (Schistosoma bovis
9 à 38 p. 100 avec S. haematobium, et de 5 à 40 p. 100 avec
et S. curassoni), le test ELISA utilisant pour antigène des schisto-
S. mansoni.
somes adultes (S. bovis) a permis de déceler précocement, dès la
7e semaine pour S. bovis et à la ge semaine pour S. curassoni, la
Avec cet antigène de S. bovis à base de vers adultes aucune réac-
présence d’anticorps anti-schistosomes. Ces mêmes résultats
tion croisée n’a été enregistrée ni avec F. gigantica ni avec les
sérologiques en ce qui concerne la précocité du diagnostic (de
sérums humains dirigés contre S. haematobium et S. mansoni. De
la 6” à la Ile semaine) ont été obtenus chez la souris avec
même aucune réaction positive n’a été observée avec les sérums
Schistosoma mansoni en utilisant un antigène soluble issu d’œufs
d’animaux atteints par Parumphistomum sp.
de S. mansoni (11).
3 2 3
ELISA diagnosis of sheep schistosomosis in Senegal
Ainsi, il a été observé que les anticorps avec S. bovis étaient plus
donné les sérums humains (sérums de référence négatifs et positifs
précoces que ceux avec S. curassoni. Parallèlement, il a été
à S. haematobium et à S. mansoni), le docteur R. Lancelot (Cira’%
observé que l’émission des œufs était plus précoce dans l’infesta-
emvt/Isra/Lnerv, Dakar) pour l’analyse statistique des données et
tion avec S. bovis que dans celle avec S. curussoni. Ces mêmes
également le docteur C. Boulard (Inra, Tours) pour ses remarques
observations concernant la précocité du diagnostic avaient été
et suggestions sur le manuscrit.
faites dans le cas de la fasciolose entre Fasciolu hepatica et
Fasciola gigantica (8,9).
Dans le cas des schistosomoses du bétail, de nombreux et diffé-
rents tests sérologiques pour la détection des anticorps de l’hôte
BIBLIOGRAPHIE
dirigés contre le parasite ont été bien développés (7, 14, 19) mais
n’ont pas été utilisés sur le terrain.
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Chapman & Hall, 608 p.
polyparasités pose le problème des communautés d’antigènes et
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des réactions croisées avec d’autres parasites. Dans les zones endé-
L’immunodiagnostic de la fasciolose à Fasciola gigantica par la
miques de trématodoses de cette étude, on observe le plus souvent
technique ELISA au Sénégal. Observations préliminaires chez deux
la coexistence de Fasciola gigantica avec Schistosoma bovis et/ou
agneaux. Revue Flev. Méd. vét. Pays trop., 47: 291-294.
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de mollusques et incidence sur les trématodoses dans la région du de ta
abondamment documentée. Les dernières études au Nigeria par
et du lac de Guiers après la construction du barrage de Diama sur le
Fagbemi et Obarisiagbon (9) ont montré la communauté antigé-
fleuve Sénégal. Revue Flev. Méd. vét. Pays trop., 43 : 499-502.
nique existant entre F. gigantica, S. bovis et Dicrocoelium hospes.
6. DOENHOFF M.J., BUTTERWORTH A.E,, STURROCK R.F., OUhlA
J.H., KOECH D., PRENTICE M., BAIN J., 1993. Seroepidemiology and
Dans cette étude, l’antigène à base de vers adultes de S. bovis a été
serodiagnosis of schistosomiasis
in Kenya using crude and purified
testé sur des sérums de référence de moutons positifs à F. gigan-
antigens of Schistosoma mansoni in ELISA. Trans. R. Soc. trop. Med.
tica (infestation naturelle et infestation expérimentale) et des
Hyg., 87: 42-48.
sérums de moutons positifs à paramphistomes (infestation natu-
7. DU PLESSIS J.L., VAN WYK J.A., 1972. Studies on schistosomiasis.
relle). Aucune réaction croisée n’a été enregistrée entre l’antigène
3. Detection of antibodies against Schistosoma mattheei by the indirect
de S. bovis et ceux de F. gigantica et de Paramphistomum sp. Par
immuno-fluorescent method. OnderstepoortJ. vet. Rex, 39: 179-l 80.
contre, l’utilisation d’un antigène homologue à base d’excrétion-
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response by EITB and ELISA before and after chemotherapy in sheep
infected with Fasciola gigantica. Vet. Parasita/.,
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corps anti-Fusciola dès la 3e semaine chez ces mêmes sérums de
moutons infestés expérimentalement par Fasciola gigantica (3).
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Fasciola gigantica, Dicrocoelium hospes and Schistosoma bovis and
Concernant l’antigène de S. bovis à base de vers adultes aucune
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réaction humorale n’a été observée avec les sérums humains posi-
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tifs à 5’. mansoni et S. haematobium, alors que ces derniers ont été
London, UK, Chapman & Hall, 335 p.
décrits (1,6) comme réagissant avec l’antigène de S. bovis utilisant
11. HILLYER G.V., GOMEZ DE RIOS I., 1979. The enzyme-linked
des broyats d’œufs. Des études ont montré que l’antigène de schis-
immunosorbent assay (ELSA) for the immunodiagnosis of schisto-
tosome à base d’œufs permet une détection des anticorps plus pré-
somiasis. Am. J. trop. Med. Hyg., 28: 237-241.
coce et à des niveaux plus élevés que l’antigène à base de vers
12. HULDT C., LAGERQUIST B., PHILLIPS T., DRAPER C.C., VOLLER
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Les résultats obtenus dans cette étude expérimentale du diagnostic
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de la schistosomose animale par la technique ELISA avec un anti-
GOEDBLOED E., LIGTHART C.S., TEESDALE C.H., AMIN M.A., OMER
A.H.S., BARTLETT A., VOLLER A., 1978. Studies on the enzyme-linked
gène de S. bovis sont encourageants. Les études doivent se pour-
immunosorbent assay (ELISA) test for Schistosoma mansoni infections.
suivre et envisager :
Ann. trop, Med. Hyg., 75: 243-253.
- d’améliorer ce test sérologique par l’utilisation d’un antigène à
16. McLAREN M.L., LILLYWHITE J.E., DUNE D.W., DOENHOFF M.J.,
base d’œufs de Schistosoma bovis ou de S. curassoni ;
1981. Serodiagnosis of human Schistosoma mansoni enhanced
sensitivity and specificity in ELISA using a fraction containing S. mansoni
- de tester ce type de diagnostic plus précoce dans les conditions
egg antigens GI and -1. Trans. R. Soc. trop. Med. Hyg., 75: 72-79.
naturelles pour sa validation.
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Nous remercions le docteur Boulanger (Cermes-Orstom de Nia-
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324
Diagnostic ELIS,4 de la schistosomose ovine au Sénégal
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Reçu le 6.598, accepté le 11.1.99
Summary
Resumen
Diaw O.T., Seye M., Seye M.Mb., N’Diaye Th., Kaboret Y.,
Diaw O.T., Seye M., Seye M.Mb., N’Diaye Th., Kaboret Y.,
Dieng Kh., Sarr Y. Experimental diagnosis (ELISA) of sheep
Dieng Kh., Sarr Y. Diagnostico experimental (ELISA) de la
schistosomosis in Senegal
esquistosomosis en el ovin0 en Senegal
The purpose of this work was to investigate experimentally
El presente trabajo tiene por objetivo el de examinar experi-
the use of ELISA for the diagnosis of Schistosoma bovis and
mentalmente la utilizacion de la técnica ELISA para el dia-
S. curassoni schistosomoses in sheep in Senegal. A crude anti-
gnostico de la esquistosomosis por Schistosoma bovis y por
gen from S. bovis adult worms was used with this test. The
S. curassoni en el ovino de Senegal. En este analisis inmu-
first anti-Schistosoma antibodies were detected by ELISA as
noenzimatologico, se utilizo un antigeno bruto, a base de
early as the 6th and 9th weeks following S. bovis and S.
vermes adultos de S. bovis. El ELISA permitio la deteccion de
curassoni infections, respectively, * whereas fecal analysis
10s primeros anticuerpos anti Schistosoma a partir de la
results were negative up to the 8th and 10th weeks after S.
6ta semana post infestacion por S. bovis y a partir de la
bovis and S. curassoni infections, respectively.
9ena semana para S. curassoni, mientras que 10s analisis
coprologicos cl&icos fueron negativos hasta la 8ava semana
Key words: Sheep - Schistosoma bovis - Schistosoma curas-
para S. bovis y la 10a semana post infestacion para S. curas-
soni - Schistosomosis - ELISA - Diagnosis - Senegal.
soni.
Palabras clave: Ovino - Schistosoma bovis - Schistosoma
curassoni - Esquistosomosis - ELISA - Diagnostico - Senegal.