REPUBLIQUE DU SENEGAL ----------- ...
REPUBLIQUE DU SENEGAL
-----------
KINISTEXEDELARECHF'RCHE
SCIEbJTIMOUEEW!ECHNIQUE
-1---------
INSTITUT ZXNEWIS DE RECHEXCHFS
AGRICOLES (I.S.R.A.)
-w.-------u-
LABORATOIRE: NATIONAL DE L'ELEVAGE
ET DE pEC8ERCHES VETERII'JAIRES
PREPARATION DU VACCIN ANTIPERIPNEUMONIQUE
LYOPHILISE Tl/ 44
Par M.P. DOUTFE
Chef du Service de Bactériologie
LNEfiv / ISFA
RF. No 32/MICROBIO,
MAI 1983
Le vacoin antipéripneumonicue pr$m+. au .L,akoratoim national de 1 'Elevz.~e et de
&cheFchcs v&t&tiai.~es (Pakailr) &sulte.de lez lyophilisatiori dPune cul-tw?e dense
cn bxC!lon de la souche vaccina3.c Y!./44 de i$~~~pLnsm~ ~~~oldcs.
..v., . . ^.. - w-w.- - - - - j '. ': .
Quelxjuos mdification s ont~été apportées : elles pmtent~ sti Ia sqpression ,d<;
I
l'acide palmitique, pxtiquerxnt insoluble r&t-tc dam une solution de soude C$l. :?f
et su?? la Jx%pwation et la mantit6 d'extmit frais de levure ajout&:
,
,.
<'
1Jn lot de vaccin est ~&Jx& à paH5.r de 1% li.tws de milieu Iiquide conteau dans
un ballon unique pourvu d'm lxmau aimnté IvoL--tcX en +?n de cultzc).
- VacérCation du Coeur
- 1_1_."._ --- --.~
on
d e
on
on
* Facto tqptose . . . .."~*t.".7..*..~".~.~.~‘
""or .- . 0 , * " n 100 p
0 Glucose
'<
1.0 n. "0 0.". ?.I 9.. . . . . . 0 0.. > 1 n .> n ., 0 . . ,, ,.
* ‘ a . . D . i>
20 ;;
. Phosphate disodicue . . . . . " 3 . . . . . . 0 <i <, ,. "19 . 0 I, . , * . c . . L) 1 .
25 ,y
.,,::, : .,
On chauffe 2 20% 3 .Filtration à chaud.
.
:
Addition de ;
r " Glyc&-ol P.?.. * .*..... 0.. . . ..ir. *..e ,: 4" . 0 c. 1 0 > ‘ . ., ? . " . . . ,
3 g
. Acide oléiaue 0 . l . . . , . . . I. . <: . . . ” * . 0 * .” c ? 1 cl 9, n I . . . 0 , C”V”
1
5
0
Fg
" . Extrait de levure l............,....r i % 0 0 D ? 1 F i . > 0 <. < * , *;
Il
1 S&T~ de cheval décompl6mn-té . . . . ..CSO.....drC*.C.**.
Il
. P%.cilline . . . . . . . ..-. . . . . . . . . . . . .:Y~?e.o >JO.,.
8.000.000 lJ1
Le ~$1 est atnené à 8.,1 avec une solution de soude 10 Y. L'acide o&que 5s-t r&a.n::i
2 50 ml de soude 0,l id. Le Fe1 fox-~& est dîssout ~kll? acitation rxq&tique,
ire /
..t
- Pr$wation de l'extrait de levwe uti&$.
--_ .__._---.--~_
L'extrait de levure pr+$ar6 exte~~mr$ment pAsente des qu&i-& ~$pj-~u~s .wx
produits corres~ndmts q.ue~l'on trouve drus le ccmerce, La. tecnnique de +~a-
ration retenue est la suivante (l?XV'l'5 Service de Plicrobjmologie) :
v
flettre en sus?c-nsion hom&e I k$ de levure .fmiche de boulangerie dans un ii-.,,,.
We d'eau distill6e en p&sence de 8 TCL de chlomfom ;
v.
. laisser au bati-m~ie 24 heures a 50°C en &tant de temps en tews ; ce?-~&ifu--
,CEY? et recueillir un memim surnageant que l'on conserve au froid, ;
,
. reprenti les culots dans un lilme d'eau distill6e et les soumetk%+ à quatre
cycles ~el~~d&el r
1 centrifuger de nouveau et recueillir le deuxième surnageant ;
.
. mélanger les deux surna~etits ;
filtrer sm filtre Seitz EKS 1 (une ctiification préalable sur rm&rmte AS.
e
peut faciliter la filtration finale) ;
. col?server à -2OOC.
II - STERILISATIO~~ NJ FILIEXJ
"
-------.-,
La st&ilisation de l.O 1iWes de milieu est pratiq~uée T>ar filtration sur filtre Seit?
EKS L de 10 litres, a& une clarification préalable SUT me&mane A.S.
Le branchement filtre-ballon est effectué gr&e à l'emploi, sous la flv, des tub
bes de jomtion nomlisés rrtrfile-%relle SOVIREL (14/23) (voir utilisation de l'ai-
pareil de Sterne dans la J-wépazation des vaccins cor&& les*pasteurelloses).
a> Récipient :
-.
Un Erlen-Meyer de ? litres 8 la base duquel a ét& soud$e une tubulure de 6 m
(travail du veme dans un atelier spécialisé),
Sur la tx&.Wre est emboîti, un tube souple en rhodorsil (0 8 mn: &sistance ?J 1~:
tezr&xhxe d'autoclavape) termin6 pr un tube en verre obti par une effilure,
Une pince clé 3 lames parallèles de 6 cm est plac& au niveau du tube souple0
-3
b) Milieu :
C'est le milieu.d&rit ci-dessus, sous un volume de 1 litre.
C> St&ilisation
:
--.A--i ,'
Fiitration dz& les &mes conditions que celles d+rites ci-dessus.
'.
dl
f
Ehserrmiciment
"
-_L---
La souche vaccinale T1/44 'de I+&oplasma myc&des est conserv6e SOUS forme dc
- - -
-uI
banque lyo@ïLisée cl/3 de culture en bouillon, 2/3 de sérum de cheval d6compl&.
mer& ou tout autre milieu de lyophilisation : lait 6cr6m6, mist-dessicans, e-!x:~~-)
A partir d'une ampoule de.la banoue, une série de 5 tubes sont ensemencés et mis
à incuber à-:37OC. A~&S '4 jours de culture, les culturesen tubes' servent $ ense
mencer l'&lerGeyer contenant le miiieu de l'inwulum, Ce dernier 'est.mis 2 -in-,
cuber 3 jours à 37OC avant df&&e utilisé pour ensemencer 'le.ballon de 12 litres
.
de milieu.
. . .
Pour la pr$prxtion du vaccin, on utilise une culture de 72 heures à 37OC. Pu cours
des derni&xs 24 heures, les ballons sont portés sur agitateur mapétiq,ue (a&rwtki~~
par vortex) l
r
- LYOFKILISATION lx EWLOI
- -,-
-- 520 ?0 de la~cr&$ sec sont ajout& st&ilement à la culture (environ 13 litres :
12 litres de milieu + 1 litre dginoculum) :
a- la &partition se fait sous un volume de 5 ml par flacon type pénicilline'de 20 ml.
à l'aide d'une serinpue au-kxwtique Cornwall ;
- lyophilisateur : USIRROID S%IR @ro&d6 .RIFXTCRD) s temps de lyophilisation 26 hap-
a ES. :' ,:.". '.<; ,.
2 Cassape du vide sous azote,
Bouchage, :
.'
. . .
.
, '.
CapsulaFe,
~
._
,.
"
Epression des flacons.
:
- ',.
c
Au n-oment'de l'emploi3 le contenu de chaque rlacon est reconstitué avec 40 ml d'eau
distillge froide (40 doses vaccinales).
-4
a) Irmmité-
La valeur de 19imunité con,férGe psr le vaccin antip&ipnewrnn^ique lyophilisé.pré-,
paré à l'aide de la souche Tl a été,d&ont&e dans différents laboratoires,, A
Dakar, au cours des ann&s 1968 et 1969, la méthode dite de contact, mise au
point par les chercheurs australiensj a pwmis d'&ablir que 3 mis et 7 mis et
demi après la vaccination? l'innxmit~ est totale : 14 mis aprGs l~immnisation,
'
elle est encore de 90 p.100. Dans ces conditions, une période de protection mi-
nimle de 1 an peut être garantie (KUTRE, M.P. ; CBWBRON J, t Rev. Elev. I%d.
'
vét. Pays trop., 1970, 23 (2) : 163 .= 1791,
-
Il est évident qu'il est absolu&& impksible d'effectuer une exp&ience contact
pour chaciue lot de vaccin produit. La valeur de lsimmnit-é de la souche T1!44
ayant été prouvée une fois pour toutes pour un vaccin titrant au minim.m 107 rgi-
:
cmrgani&s viables pm dose vaccinale (1 ml), pour chaque lot, le contrôle
<'
se ra&neVdonc à un titrage du non-km de micrcorganismes viables par nil. Ce nom-
k'doit être égal (au minimm) ou supérieur à 107 (valeur retenue par les.Experts
Péripneumonie bovine FAO/OIE/CAU).
Titmge *
v-m-- -
Au laboratoire de T)akar, on utilise :La méthode~de MCCRADY (CALBEWE‘, POQUEI &
IIE& : 1948).
- 1 dose vaccinale est mise en culture dans un tube à essais contenant 9 fi de
milieu liquide (dilution 10- 3, w? la méthode des dilutions successives, on
pr+$are ces dernières de 10" a lCY1* (ler portou?),
- Avec chacune des dilutions 10cx7, lO"-'.; lO-', on ensemence 5 tubes de bouillon
de 9 fi;L avec 1,ml de dilution (2ème portoir). IlEste donc dans chacun des tu-
bes ori&taux 10wi, iOw8, lO-', 4 ml de milieu (3,er portoir).
L"ensemble des tubes est porté 2 lVétuve à 37*C et le développemnt des cultu-
res observe et noté tous les jours jusqulau 1Oème jour3 alors s'effectue la
*
lecture finale.
k développement des cultures sur le second portoir on déduit le rmr&re carac-
tkistique (utilisation de la table):i lequel permet de déterminer la quant$tê
::.
de microor@nismes viables contenus dans une dose vaccinale.
0.. Y..
/.
.;-..
1
', ,.<.
.-. 5
bi Irmcxmit~
u _--..
C'est celle de la smche T3/44,
Cm sait que de5 r&ctions yxk-vaccinales sont toujours 2 crain&e 9-w des mi-
mux (tmrins surtcxt) vivant dzns des zones C?CL la vacc~~i~ri riva pas M priz..~~
ticpée r&emet n kms ce cas. il est bien Lsûr cmseillé de vacciner ex&im;5tz.~
lement un petit ncmbre d'animux et d'obsemw (10 jmxf5 à 3 semines) l'amf3~5~~~
tien yxsible d'un oedème 2 tendance envahissante de w I~iZemsien.. twte ex
tension ju$e dangereuse cuvant être jum&e r?m le reccws à un antibictiaue
antimycoplasmiq~ue (lJ7losine. Spirmyctie, Terframycine~ etc,,,). La mn nbsema'-
tion du lieu d'inoculation ('i/3 sup&iew de la côte) est Xen souvmt une causé
fbm?isant l?xyxwitim dîme r6actinn pst-vaccinale &tenduc,
Si sw certains trmpeaux, la scuche TU44 s'mke par trm &n~z~u~e, &XS
s'iqme la vaccination à l'aide de la Xxlche KH.9 beaucoqi reins virulente, m5is
dont la qualit& de l'immnit6 con,f&$e est nettement j,,&riem $ celle de ~1~,/44~
c) St&ilitG
-1-v
Le contr6le de stérilitk est classique, il s ‘effectue sur milieu liquide ~~~~~~~i:~
Lui Sd. 2.
et ana6mhie.
-----------
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Il est évident qu'il est absolu&& impksible d'effectuer une exp&ience contact
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Péripneumonie bovine FAO/OIE/CAU).
Titmge *
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Au laboratoire de T)akar, on utilise :La méthode~de MCCRADY (CALBEWE‘, POQUEI &
IIE& : 1948).
- 1 dose vaccinale est mise en culture dans un tube à essais contenant 9 fi de
milieu liquide (dilution 10- 3, w? la méthode des dilutions successives, on
pr+$are ces dernières de 10" a lCY1* (ler portou?),
- Avec chacune des dilutions 10cx7, lO"-'.; lO-', on ensemence 5 tubes de bouillon
de 9 fi;L avec 1,ml de dilution (2ème portoir). IlEste donc dans chacun des tu-
bes ori&taux 10wi, iOw8, lO-', 4 ml de milieu (3,er portoir).
L"ensemble des tubes est porté 2 lVétuve à 37*C et le développemnt des cultu-
res observe et noté tous les jours jusqulau 1Oème jour3 alors s'effectue la
*
lecture finale.
k développement des cultures sur le second portoir on déduit le rmr&re carac-
tkistique (utilisation de la table):i lequel permet de déterminer la quant$tê
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C'est celle de la smche T3/44,
Cm sait que de5 r&ctions yxk-vaccinales sont toujours 2 crain&e 9-w des mi-
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ticpée r&emet n kms ce cas. il est bien Lsûr cmseillé de vacciner ex&im;5tz.~
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tien yxsible d'un oedème 2 tendance envahissante de w I~iZemsien.. twte ex
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tion du lieu d'inoculation ('i/3 sup&iew de la côte) est Xen souvmt une causé
fbm?isant l?xyxwitim dîme r6actinn pst-vaccinale &tenduc,
Si sw certains trmpeaux, la scuche TU44 s'mke par trm &n~z~u~e, &XS
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c) St&ilitG
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Le contr6le de stérilitk est classique, il s ‘effectue sur milieu liquide ~~~~~~~i:~
Lui Sd. 2.
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