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Matkriel et réactifs (Voir fiche no 3, ).
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A - H6magglutination
1 - Diluer l'antig$ne,,(voir fi,+? no ,,) ay%l!!
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dans BAB et laisse:.r 8 + 4%
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jusqu'au lendemain.
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2- Le lendemain, préparer les hématies d'oie C ns les divers pH (5,7 et 7,2)
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'3 - Marque+? la.plaque de A à,E.(voir croquis) E
de 1 8 12.
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4 - Distribuer le diluant BAES à raison de 0,05
Cl dans toutes les cupules de
2 à 12.
5 - Distribuer 0,1 ILL d'antigène dans chacune I 8s cupules de la rangge 1 de A à H.
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6 - Procéder aux dillutions de raison 2 ?le 10 à f 28~~
7- Distribuer chaque suspension d’hématie de pH défini dans les ran&es A, f3,
. . . . . . . . !.
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C, D, E, F, G, H.
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8 - Laisser reposer à l& température ambiante et lire ap&S' 36, M'et'60 minutes
.
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et noter les résultats comme suit :
P = aggltitination compiète
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.
pk agglutination presque‘co&plète (cckonne @hématies son agglutl-
n6es à la périphérie
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PN = trac& dt agglutination en courwne autour du culot d'hématies
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-sédimenté&3
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N = aucune agglutination.
un culat
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Noter le titre :de lkntig?ne aq...&i$$ys pH.
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HA/o,o5 ml.
Ce titre sera divisé par 8 pour déterminer la dilution optimale de l'anti&e
pour avoir 4 unités HA/O,O25 ml.
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INHIBITION DE L'HEMA( ZLUTINATION
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tr' comme suit ':
I- Traiter &es @JYUEU~ typer-immms Du S~lWlllS 2 tes’
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1) Ajouter 8, 0,5 ml de s&um 4 ml. de Kaolin'3 1
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2) Agiter (agitateur).2.0 mn 8 température
3) Centrifuger à 4 000 t/&,pfind&t 39 mn
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4) Ajouter sans déc&ter 0,s rnl'de stipens
5) Garder à + k" pendant 20 m(r~o~~
, , 6) Centrifuger à 4 OOC, t/m pendant 33
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7) Ré~~lter~lk'~~~geànt.qui'ést le sém&, di.1
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Techniquk
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Chaque plaque est réservée Z3 un antigène L& plaque:est-disSlasée,verticT*ie-
ment de H 8 A correspondant aux dilutions
Les numéros 7 3 10 de la plaque carre
nt
a= différents
10
~&U-BS l
1) Distribuer rJ,CPj de BAT3 dans les cupule
2) Distribuer G,O5 ml de chaque s&um au 1
upae 10 corr=wnd~t
au no de chaque s&rum,
3) A l'aide de rxicrodiluteurs,
ir de la curule l@) i
raison 29
4) Distribuer O,C25 ml de l'antigène conten
t 4 unités HA dans toutes les
cupules.
5) a) Contr%e : Titre de l'antigène :
- distribuer 0,05 ml de BAB dans les
ules G, F, E, D, C.
- distribuer O,O$ ml d'antigène dans
s cupules H et G.
b) Contrôle hdnaties
Mettre O,C5 ml BAB dans
6) Recouvrir les plaques et
7) Diluer au pH indiqu6 pour chaque a?atigh
(voir A) la solution des h&aties
comme suit : 1 volunxe suspension au f/l
d'h&naties + 23 volumes BAB scit
une suspension de 0,4 p.100.
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8) Diluer les contrôles d'anti&e avec m&-odiluteurs de fl,o5 de G à C (on a
chaque plaque,
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10) tisser reposer les plaques 8 la temp%rature
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ambiante. Noter les r&&tats une
fois le tÉmoiri h&&ties,est ,comp@%ement sédimenté.
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Conclusion
Le titre inhibition d'un sérum est donn6,par l'inverse de sa plus grande
dilution qui inbibe complètement l'hémagglutination.
IR contrôle antigène doit montrer que 4 unités h6magglutinantes ont "et6
'uWLi&eci dans la.r6actionf
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