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.
.
VALEUR DE L'IM&lUJ!~ITE COIWEREE PAR DEUX VACCINS
ii “’
tr
LYOPHILISES PREPARES A LPAIDE DES SOUCHES KH?J ET Tl
par M.P.DOUTRE
f
. *
A la suite des recommandations de la Conférence des Experts de la
péripneumonie bovine tenue 8 Khartoum en février 1967 et des possibilités
de mise au point de campagnes inter--états de vaccination contre cette maladie,
le service de bactériologie du Laboratoire national de I'Elevage et de Recher-
ches vétérinaires du Sénégal a mené au cours des années 1967 et 1968 deux
expériences destinées ?i apprécier la valeur de lPimmunit~ que conféraient
deux vaccins lyophilisés préparés à partir des souches KHsJ (86ème passage)
et Tl (44ème passage). Les bovins utilisés aupartenaient a la race XDama,
race bovine africaine , particulièrement sensible à la péripneumonie. LPespace
disponible ne permettant pas de mener en m&ae temps les deux tests, ces der-
a
niers se sont déroulés de la façon suivante :
4
3
- l'expérience contact yKR3J a eu lieu dès la fin de la saison des pluies 1967,
- celle effectuée avec des animaux vaccinés avec T13 dès la fin de l'hivernage
1968.
Ces périodes ont ét& choisies de façon à faciliter lvalimentation
en vert des bovins maintenus en stabulation &roite.
/ VALEUR DE LvIMMUNITE CONFEREE PAR LA SOUCHE KH3J /
A - VACCIN UTILISE
5
Il résulte de la lyophilisation dPun mélange a volume égal dlunc
culture de Mycoplasma mycoides souche KH3J et de mist dessicans (*)v
La composition du milieu de culture rdsulte des travaux effectués au
Laboratoire de Fort-=Lamy (milieu F 66, rapport présent6 à la 3ème Réunion des
Experts sur la péripneumonie bovine FAO/OIE/OAU, tenue à Khartoum en février
1967) et de ceux des chercheurs australiens du CSIRO,
Quelques modifications ont été apport&s, elles portent sur la
suppression de _1 'acide palmitique uratiquemment insoluble même dans une SO-~
lution de soude 0,l M et sur la préparation et la quantité d'extrait frais
de levure ajouté.
- macération de coeur : on provoque la makration pendant une heure de 500 g
de hachis de coeur de boeuf degraisse dans un litre d'eau à 50°C, puis on
porte à ébullition. Filtration à chaud sur papier filtre. On ajoute par
litre : 10 g de tryptose (Difco), 2 g de glucose et 2,5 g de phosphate
disodique. On chauffe à 80°C, filtration à chaud.
- addition de :
. glycérol . ..“c..~.rJ*..**.e.o~..*.*..**
0,3 gllitre
0 acide oléique....OI......O...........
15 mg
0 extrait frais de levuremO.OOC.DO.OO.e. 100 ml
. sérum de cheval décomplémenté,....,.., 100 ml
0 pÉnicilline .,...**,~*...~~..d~0~"~..~.
1.000.000 unités
Le pH est amené 2 8,l avec une solution de soude 10 M. Lgacide
oldique est m&lang6 a 5 ml de soude 0,l Mg le gel fort& est dissous par
agitation magnGtique.
5
.
/
.
6e
*
î:
(+) Actuellement, seul le lait écrémé sec est utilisé comme support de lyo-
philisation dans la pr6paration des vaccins lyophilisés contre la péri-
pneumonie bovine.
w
3
- extrait de levure : l'extrait de levure prgparé extemporanément présente
des qualités supgrieures aux produits correspondants que l'on trouve dans
le commerce o La technique de préparation retenue est la suivante :
(1.E.M.V.T. .- laboratoire de microbiologie)
0 mettre en suspension homogène 1 kg,de levure fraîche de boülan-
gerie dans un litre dveau distillée en présence de 8 ml de
chloroforme
. laisser au bain-marie 24 heures à 5O'C en agitant de temps en
temps, centrifuger et recueillir un premier surnageant que lgon
conserve au froid
. reprendre les culots dans un litre d'eau distill6e et les soumettre
& quatre cycles gel-dégel
. centrifuger à nouveau et recueillir le deuxième surnageant
. melanger les deux surnageants
. filtrer sur filtre Seitz EKS 1, conservation a -2O'C.
Pour la préparation du vaccin, on utilise une culture de 72 heures.
Au cours des dernières 24 heures, les ballons sont portés sur agitateur magné.-
tique.
La répartition se fait sous un volume de 5 ml par flacon type péni-
cilline de 20 ml.
Au moment de l'emploi, le contenu de chaque flacon est reconstitué
avec 20 ml dgeau distill6e st6rile froide (20 doses vaccinales). Dans ces
conditions, le titrage des vaccins par la méthode des dilutions donne un
minimum de 109 unit& viables par ml. Ce titre est égal ou supérieur à celui
des meilleurs lots de vaccin-culture mesuré au moment de leur conditionnement.
B =* TEST D'INMUNITE
a/-, Principe de la méthode
Les animaux vacci&s ont et6 éprouv6s en utilisant la methode de
mise en contact etroit décrite par les auteurs australiens. Cette technique
consiste à mettre en présence,àans une enceinte close àe volume restreint,
un lot d'animaux vaccin&, un lot dPanimau.x temoins non vaccinés et un lot
de bovins infectés exp6rimentalement par voie endobronchique. Pour que lvex-
périence soit concluante, dans lfabsolu, il convient qu'en fin d'exp&iencc
les bovins intubés et les témoins non vaccin& succombent de péripneumonie
alors que les animaux vaccines résistent,
4
bj- Bâtiment
En tenant compte des dimensions relatives du bâtiment construit
par les chercheurs australiens du CSIRO, une íStable a été spécialement amé-
nagée à Sangalkam pour rgaliser les 6preuves d?immunité par la méthode de
contact,
Dimensions : longueur..... 10 m
largew.,.... 5 m
hauteur,..... 3 m,
Pour assurer l'alimentation des animaux, deux mangeoires de 5 m de
long sont placées de chaque côtS. Le foin stocké sur le faux-plafond en planches
est directement amené dans les mangeoires grâce à des trappes <amenagées à.
cet effet.
L'aération est assu&e par 7 ouvertures de 1 m x 0,50 m situées
à 2,35 m du sol.
A l'extérieur, WI parc de 120 m2 pourvu d'un abreuvoir permet de
recevoir les animaux chaque matin pendant environ une demi-heure. Une fois
par semaine, lors des prises de sang, ce temps est prolong de deux à trois
heures.
c/- Protocole expérimental
Tous les bovins utilisés appartiennent 5 la race NDama.
Au jour Jo9 11 bovins sont vaccin& par voie sous-cutanee, & la
côte, avec 1 ml de vaccin KH3J lyophilisé reconstitué avec de l'eau distillée
sterile rafr&hie (If* des animaux : 0001 I.~ 0002 == 0003 .. 0883 Ca 1505 p., 0885 -
1519 La 0871. .., 0887 - 0900 '.* 0896).
Le titre du vaccin est compris entre 10' et 1010 unit& viables
par ml (titrage par la methode des dilutions pasteuriennes).
Au jaur JQ + 14, 11 bovins sont inoculés par voie endobronchique
(NO de s animaux : Gd77 = 0872 aa 0889 I-p 0874 - 0875 -= 0882 =. 0881 -- 0873 -=
0894 - 0892 - o899L
Inoculum : après anesthésie au chloral intraveineux, chaque animal
reçoit une injection intra-trachéale administrge à la sonde, suivant la tech-
nique classique, de 20 ml d'un mglange à parties égales de :
. broyat de lésions pulmonaires péripneumoniques,
D lymphe p6ripneumonique,
. bouillon coeur sérum (milieu F 66 modifié),
5
Les lEsions pulmonaires et la lmphe péripneumonique sont r&olt6es
15 jours auparavant sur un malade au dernier stade de la maladie, sacrifik
sur le terrain, sur notre demande (Nioro-dw:Rip),
et conservées jusqupau
moment de l'emploi à -2O'C.
Un isolement de.M.mycoides à partir des lésions pulmonaires et de
la lymphe est effectug au moment de la préparation de l'inoculum pour confir-
mer la qualit du matériel utilis6.
3 ‘= Mise en contact étroit des trois lots d'animaux (vaccin&s
"7""r-=~----Y""~-rr,-~~~,~~~-=~,-~~~~.
,,,,,,,,,,,.,,,,,,,,,,,.,,;.,,~
temolns non vaccines Intubes
,~~~~~=-~~~~.J-.--,-"-"*-,9,,,,,,,,
Au jour JC + 28, les animaux vaccines et les animaux infectants
sont groupés dans l'&able aména&e à cet effet, en presence de llbovins
t&oins.(M" des témoins : 1536 - 1501. - 898 $= 1576 - 893 - 1542 =. 884 1%a 1523 -
890 - 1530 (3 895).
d/- Evolution des animaux
Les observations s'arrêtent au jour JC + 100.
1 - Evolution des animaux infectants
-">---L;I~-r-u~I---~~~--~~~,-~~~~.,~~~~~-~,~
La réaction à l'infection intrav,trach6ale a été suivie sur les
plans thermique 3 clinique et sérologique (d6viation du complément),
Evolution thermique
Les temp&atures du @me au 36ème jour ont 6té reproduites d‘ans
le tableau 1 :
Sur 11 animaux intubés :
- 7 ont présent6 une élévation thermique significative (température sup&ieure
à 40Oc (no0899 -a 0892 r- 0873 -a 0882 -1 0874 C=l 0889 .- 0877)o
Parmi ces animaux, on peut distinguer 5 bovins ayant manifesté une réaction
précoce (6, 7, 8) gème jour) (no0899 -' 0892 .-- 0873 s9 0882 - 0877) et deux
une réaction tardive (18ème jour).
Sur ces 7 bovins, 6 sont morts en cours d'expkience en offrant à lgautopsie
des lésions caractéristiques, le 7ème (0877) a étt sacrifié en fin dOcxp&-
rience; des lésions péripneumoniques pulmonaires, Xycoplasma mycoides a
ê-té isoll,
- 4 n'ont pas manifesté dPélévation de température ccract&istique
(tJOO894 -
0881 - 0875 == 0872)~ Trois de ces bovins sont morts en cours d'expérience
(no0875 va 0881 - 0872), seuls les no0872 et 0881 présentent des lésions
péripneumoniques,
Le bovin 0894 sacrifié en fin d'expérience nFoffre
aucune Gsion.
En conclusion, sur 11 bovins intubes, 9 ont contra& la péripneu-
monie et 2 animaux nIont pas r6agi 2 l'intubation (no0875 r= 0804), On peut
Également supposer que cette opération ait Etd mal exécutk, ce qui est peu
probable.
-.
Tableau 1 - Evolution de la température chez les animaux infectants
---T-l-I
Nombre de jours
'
après début de
JO+18 Jo+ly/JO+20~Jo+21~Jo+22
,~~+26 ~~+27 Jo+28 JO+29 3 +32 J +35 J +42 J +& J 950
l'expérience
1
l
??Ombre de jours
12
13
14 1.5
4
9
10
11
après intubation
1415 l6 l7 la
1
1 39,2/ 38,71 3961 3921 398 40,2i 4091 3?,7 40,2 40~3 40,2 40,2
l
0892
39,2
3997
3938 j 40,5
40,7
40,9/ 4027
40,5
40 ,I 40,7
40,L +
lésions
-
-
0894
38,7
38,5
38,21 3a,6
3a91
38,4
38,6
3a,3
383
38,3
30,5 38,6 3
9
j 38.2/ 36~1 3~41
1 38,51 39,2l 39361 40 t 40
39,7
40,5
4057
40
40,2f 40,5 40,3
38251 * [
lesions
I
I
I
f 3921 38,51 3%,5/ 39,1/ 3992
39,4
39,4
3936
3923
39,a 39,4
3%,61 39 1 + f lésions
39,3
--
l
1
!
I
38,Zl 38,2j 38,8[ 40,5/ 3939
40,9
40,a 40~3
4039
4OJ 41,l 41-z
40,8i 3
9
j 33,11 39931
I
0875
1 3%,5/ 3894 3%,5 3835) 3832 38,3 39,31 38,% 3932 3999 3937 3995 3g,81 + 1 <ibsence Iksion
38,5
3%,4
38,5
38,5
38,2 38,3 39,3 38,8 3932 39.;9
0874
-i-
39,7
39,5 41 1 40,21 39,9/+ lésions
38,1! 39
39,21 38,7
38,2
39,3
38
383%
3896
39
38,7 382 3F!4u,6j
0889
I
l
37d 373% 3% 1 37,y 37,7 3%,5 38,2 37,7
0872
I
I
37,%
3732
37,7 37,9
3K7 3735 78,4 37,8
I
3737
38
39,2
39,2/ 3%,7
40,l
40
40,6
40,2
40
40,5 40
0877
39,l 38,2
-t
38 38
/
La mort d'un animal est indiquée par le signe +
Remarque : Chez tous les animaux morts de peripneumonie, les 16sions
pulmonaires sont des plus typiques (hépatisation englobant parfois la tota-
lité dPun poumon avec sclérose intersticielle), Toutefois, jamais n'apparazt
l'épanchement pleurétique important que l'on observe si souvent dans la mala-
die naturelle,
Evolution sérologique
La déviation du complément a été effectuée par la méthode de
Kolmer avec fixation d7une nuit à 4'C.
Le résultat des diffgrents titrages a été reproduit dans le ta-
bleau 2. Seules les réactions ++++ sont mentionnées,
Sur 11 animaux intubés, 9 ont réagi sérologiquement. Les no0872
et 0894 sont négatifs, toutefois le 0872 succombe en présentant des lésions
de péripneumonie (po ssibilité d'une hypoga3nmaglobulin6mie).
.-
Le 0894, sacrif%
en fin d'expérience, est indemne de péripneumonie. Four cet animal, il est
possible d'envisager soit quoi1 n'ait pas réagi à Ilinfection intra--trachGale,
soit que lropération ait été mal effectuée (sonde introduite dans l'oesophage),
Pour le nOo875, mort avec absence de l&ion pulmonaire, sans jamais avoir pr&
sent6 de poussée thermique, 1"errour de manipulation est à écarter, car 14 jours
aprk l'intubation, cet animal fixe le complêment au 11320.
Pour ce bovin, tout semble s'être passe comme si l'intubation avait
été effectuée avec une culture en bouillon d'une souche virulente de M.myc~i;~
des. Dans ce cas, on observe une montée régulière dPanticorps sans trace de
lésion pulmonaire â lPautopsie. La réaction sérologique semble seulement re--
fléter la phagocytose de substances étrangères introduites dans l'appareil
pulmonaire.
Evolution clinique
La presque totalité des animaux à sérologie positive présente de la
toux le matin au moment de l'abreuvement. Le phenom?ne est apparu chez les
premiers bovins, 10 jours après l'intubation.
Evolution thermique et sérologique
Pour les bovins t6moins, la courbe de température se superpose 5
lPélévation des taux des anticorps fixant le complément. Aussi, seule lqévo-
lution sérologique des animaux témoins figure-t-elle dans le tableau 3.
.
0. /.
.
8
.
Pi . Ii+ l-i
ml
5
CU
c
.
9
Tableau 3 y= Evolution shologique des aniïna,ux témoins
(Déviation du complément Kolmcr)
!
Nombre de jours
après début
JO+42
JO+59
JO+71
JO+75
~0+82
JO@9
JO+95
expérience
Nombre de jours
~après mise en
1.4
31
43
47
54
61
67
contact
1536
.:a
.Y
1/20
lb30
L+B
1501
ca
L.f.B
0898
'
m
abshce
l
L.PA3.j
1576
Le"
1/10
1/160
1/320
1/320
1/640
LAI?
0893
I-2
abs&ce
L.P.9
1542
.a
I...,
1/160
1/640
L3.B
0884
..A
a.bsCnce
L.P,B
1523
L?I
Y
1/320
1/640
1/640
1/640
1/640
+
L,P,B,
0890
l/lO
l/lO
1/160
+
L.P.B
1530
u5
115
1/40
1/320
+
L.POB
0895
+
absence
L.P.B
1 0
Sur 11 animaux têmoins :
y 7 sont morts naturellement en offrant à lvautopsie des lêsions peripnew
moniques d'oii M.rqycoides est isolé. Sur ces 7 bovins, un seul (1.501) n'a
pas prêsentê une montée appréciable des anticorps fixant le complément
(mort excessivement rapide 33 jours après la mise en contact ou hypogammaL-
globulinêmie). Les 6 autres traduisent sérologiquement l'infection entre
35 et 40 jours aprês la mise en contact avec les bovins infectants.
- 4 sont morts naturellement, très rapidement, sans présenter la moindre
lésion nécropsique dûe à la péripneumonie. La disparition de ces animaux
est consécutive aux conditions particulièrement sévères du stress qu'impose
le confinement. Ces accidents proviennent du fait qu'à l'achat les animaux
ne sont pas homogènes et que les sujets plus petits, plus faibles, ne
peuvent s"alimenter convenablement. Ecartés des mangeoires, ils se couchent
et succombent après avoir êté piétinés,
.
Evolution sêrologique après la vaccination
La vaccination avec KH J n'entraîne aucune montee post-vaccinale
des anticorps fixant le complême t.
a
.
Evolution sérologique après la mise en contact
Les résultats figurent dans le tableau 4.
r
*
4
.
1
.*
‘
.4
.
Tableau 4 CR Evolution sérologique des animaux vaccinés après la mise en contact
(Déviation du complément Kolmer)
Sombre de jours aprèS
Jo+59' Jo+71
Jo+-?+ ~~+82
début exphience
5*+28
Jo+42
I
5,+89
J,+95
I
I
l
1
Hombre de jours après
mise en contact
0
14
31
1
113
IL7
r-1.
labs ncel
0871
8
L. .B
-
1519
--
-.
abs % nce
L. .B
0885
1/40
abs nce
i
I
..a
"l" L g B
.A.
0883
s?.
abs nce
ci.2
L. i3 .B
0887
l/lC
115
u5
l/lO
l/lO
abs nce
%
L. .B
-
0002
.z*
=Ca
1
1/20
L.8.B
0001
x
115
1/5
l/lO
l/lO
l/lO
l/lO
l/lO
sacrifié
L.P.B.
0900
c.m
1/20
-
1/10
l/lO
l/lO
1/20
l/lO
sacrifi6
aucune L.P,B,
1505
1/10
-
us
1-/5
l/lO
1/20
1/40
sacrifié
aucune L.P.B,
0003
FS
1/5
1/5
l/lO
l/lO
l/lO
sacrifi6
aucune L.P.3,
0896
7..
sacrifié
l/lfSO
1/80
1/160
1/80
l/%O
1/80
1/160
aucune L.P.B.
visible
-
1 2
Sur 11 bovins vaccinés en vue de realiser l'expérience :
1 meurt le jour de la mise en contact (nO0871) sans présenter la moindre
atteinte de pkipneumonie,
5 succombent naturellement dans des temps variables, 4 n'offrent aucune
lésion pkipneumonique
(1519, 0885, 0883, 0887); par contre, le no0002
présente, 34 jours après la mise en contact, un séquestre péripneumonique
d'où M,mycoides est isolé.
5 sont sacrif& en fin d'expérience : sur ces 5 bovins, 4 &vèlent a
l'autopsie des poumons indemnes de péripneumonic (n'0900, 1505, 0003, 0896);
le sérum du bovin 0896 fixe le complément 8 un taux Qevé (1/160), sans
qu'aucune lésion ne puisse être décelée, Par contre, le no0001 montre deux
séquestres p&ipneumoniques
dPoU M.mycoides est isolé par culture,
En conclusion, la vaccination avec le vaccin KH3J lyophilis~ a donc
. .
apparemment favorise la création de deux bovins porteurs chroniques sur
11 animaux vaccinés un mois avant la mise en contact avec les sujets infec-
tants.
CONCLUSIONS
L'exp&ience contact destinee a
' *
apprecier la valeur de lgimmunité
conférée par un vaccin lyophilise prépare & partir de la souche KH3J un mois
après la vaccination montre :
l/,-, quvunc immunite certaine s'est développ& chez les sujets vaccinés,
7 temoins morts de p&ipneumonie présentent des lésions volumineuses
des $~US caractéristiques, Aucun vaccin6 n'offre des ldsions d'une telle
importance.
2/- que cette immunité est loin d'être totale, 2 bovins présentent à l'autop=-
sie effectuée, soit après la mort naturelle, soit après abattage, des
séquestres de la grosseur d'une pomme d'où M.mycoides est isolee par
culture. Au contact d'animaux infectants, d&x animaux porteurs chroni-
ques ont ainsi étG créés.
3/- que seules des vaccinations rép&$es au moins tous les 5 mois, pendant
plusieurs années, sur la quasi totalité du troupeau peuvent entraîner
une régression de la maladie.
13
/ VALEUR DE LsIMMU!?ITE CONFEREE PAR LA SOUCHE T, /
A- VACCIN UTILISE
Il résulte de la lyophîlisation dvun mélange & volume égal d'une
culture de Mycoplasma mycoides, souche Tl, et de mist dessicans, Le milieu
utilis6 pour la culture est celui d&rît précédemment (F 66 modifié),
Le vaccin reconstitu6 au moment de l'emploi titre un peu plus
de 10g unités viables par dose vaccinale (1 ml),
B- TEST DPIMMJNITE
.
a/- Bâtiment
Afin de pouvoir mener lvexpêrimentation sur un nombre plus élevé
d'animaux, la superficie du bâtiment ainsi que le nombre des mangeoires ont
été doublés :
longueur,.,., 10 m
largeur...... 10 m
Hauteur...... 3 m.
b/- Protocole exp&?imental
Tous les bovins utilisés appartiennent comme précédemment 2 la
race NDama. Achetés au Sénégal Oriental, ils sont garantis par le vendeur
comme non-vaccinés.
Le but de l'expérience consiste à apprécier la valeur de l'irnmu-
nitê que présentent des animaux vaccinés avec le vaccin Tl lyophilisê 3 mois,
7 mois et 12 mois après la vaccination. 50 bovins ont donc été vaccinés et
conservés à !a ferme de Sangalkam. Ils ont été répartis en trois lots utili-
sables respectivement 3, 7 et 12 mois après la vaccination. Seule la première
phase de l'expérience (valeur de l'immunité 3 mois après la vaccination)
fait l'objet de la description et des conclusions qui suivent :
c
.
Les 15 bovins vaccines utilisés lors de l'expérience contact
groupent 7 animaux qui n'ont pas prdsenté de réaction locale post-vaccinale
au point dPinoculation (n025, 24, 9, 42, 83, 10, 79) et 8 bovins qui offri-
rent une réaction locale ne dépassant pas la taille de la main (ntl B, 80,
go, 11, 82, 2, 18 B, 93).
L'&olution sérologique post-vaccinale de ces 15 animaux figure
dans le tableau 5 (deviation du complément Kolmer).
*. / . .
14
Tableau 5 - Sérologie post-vaccinale des animaux vaccinés
avec T1 avant la mise en contact
(Déviation du complément Kolmer)
No des animaux
Vaccination J +l?
JO
0 +
Jo+20
JO+28
JO+41
Réaction locale au
point d'inoculation
25
1/5
1/40
1/160
1/80
24
ca
u5
1/40
1/40
1/20
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1/10
1/10
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main)
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l/lO
aia0
1/160
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l
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l/lO
1/40
1/160
1/160
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l/lO
1140
1180
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l/lO ++
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l/lO
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93
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115
1110
1/5
-=
+++
. ./ . .
15
Sur 15 animaux vaccinés, 13 ont montré une réaction sérologique
posi+vaccinalc dqintensité variable selon les sujets, proportionnelle à
l'importance de la réaction locale, Toutefois, le no25 qui riva présenté aucune
réaction locale, fixe le compl6ment au 1/160, 28 jours après la vaccination.
2 ~1 Intubation des animaux destin& & devenir infectants
Y_. lIus.al dMO .m,.m 1.11S.7.C *Lil..?l*-Tr > s.r9L:,..~nlO"L- . ..III.IIP_U___NI..__.~--~~~~,~~~~~~~~,-,
L'inoculation intra-trachéale de la suspension infectante est
effectuée comme précédemment.
Deux lots d'animaux ont été successivement rendus infectants, En
effet, la mortalité très rapide des animaux du premier lot a fait craindre
la possibilité d'une mauvaise contamination des témoins et des vaccinés. Un
second lot de bovins infectants a donc été préparé. Ces animaux ont étê
introduits 21 jours après le début de la mise en contact, il ne restait alors
plus que trois bovins infectants survivants du premier lot.
(13, 88, 3 2 , 4 4 , 3 6 , 2 9 , 14
No des bovins infectants du ler lot (15 bovins) (26, 5 6 , 23, 57, 15, 1 8 , 7 6 ,
(95
No d e s bovins infectants du 2Gme lot (12 bovins) (702, 709, 710, 721, 722, 724,
(715, 34, 717, 716, 711, 718
Trois mois après la vaccination, 15 bovins vaccinés ont été groupés
avec 1 5 bovins infectants
(ler lot) en présence de 15 témoins (n0759 43, 38,
40, 2 2 , 31, 50, 3, 63 B, 41, 5 B, 4, 91, 20, 74). Le deuxième lot de bovins
infectants a ét6 introduit dans l'étable expérimentale 21 jours après le début
de la mise en contact.
c/- Evolution des animaux
Les observations s"arrêtent 94 jours après le début de la mise en
contact.
1 ca Evolution des animaux infectants
wm.L:r ~__-:_/..~-'_.-~r~Y.~~~~-~.~~~~~,~~~~.,,~~,
.li t.:z
Seule lvévolution sêrologique est rapportée dans les tableaux qui
suivent. Le devenir des anticorps fixant le complément a êté suivi par la
méthode de Kolmer. La recherche de l'antigène circulant a été effectuée par
prêcipito-diffusion en boîte de Pétri (gêlosc noble à 1 p.100 dissoute dans
un tampon véronal à pH 7,3 - 7,4, merthiolaté à 0,04 p.100).
Les résultats obtenus figurent dans les tableaux 6, 7, 8 et 9
(ler et Pème lot d'animaux infectants). En matière de dhiation du complément,
seules les réactions ++++ ont é-te retenues,
.
/
.
0.
L
.
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<”
Tableau 6 .- Evolution sérologique des animaux intubés du premier lot
(Déviation du complément Kolmer)
1
I
I
I
1
1
I
I
Nombre de jours aprh 7
-rl
l?intubation
13 21
28 j 35 1 41 1 49 ) 56 ) 63 1 70 ] 77 / 84 1 91 1
No des animaux
I
I
13
1/160
1/80
1/40
1/40
1/40
1/x0 l/ao 1/5 1/5 m Sacrifié.Absence'
1/10 1/320 1/320
lésion p&.-ipn.
/
/
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1
1/20 1/160 1/320
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3 2
1/40
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I
-
1/320 +
I
I
I
36
1/5 1/80 1/320 1/640 1/320
1/80
1/80
1/80
1,'40
1,'20
1/20
1/20
1/201~;~~~~i;~+&s~ce *
-
L.P.B
29
1/80
+
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1/40 L*y*B
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'L.P.B
1/80
+
-
56
1/40 f LeP*B
+
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L.P.B
J-/40
+
57
L.P.B
1/320 +
15
1,'5 1/80 1/160 L,P.B
+
18
L.P.B
1/80 +
I
I
I
I
76
cs.
x/80 1/160 2&,20 1/160 l/lG;O
1/80
1/40
1/40
1/40
1/20
1,'20
1/20(S:crifié-
Gros
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I
I
35
I
1/10 1/160 Ln+PaB
L.P.B.
+ : mort avec lésions péripneumoniques
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1
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3
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I
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Tableau 8 II Evolution sé-ologique des animaux intubés du deuxième lot
(Déviation du complément Kolmer)
I
16
24
31
38
45
52
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l
1/160 , L.P.B* 1
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I
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L.P.B.
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1/x0
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L.P.B.
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1/40
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L.P.B.
+
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1/20
1/80
+ 1
I
I
7-18
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L.P.B.
1/160
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L.P.B.
+
: mort avec lésions péripneumoniques
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2
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1
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l-i D-I- 4 - I
6
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1” a k
19
20
Sur 27 bovins infectés par voie endobronchique, 23 ont succomb6
en présentant à l'autopsie des lissions péripneumoniques et 4 ont été sacrifiés
en fin d'expérience, Le maximum des mortalités dûes à la maladie expérimen-
tale se situe vers le 20ème jour qui suit l'intubation, Chez les survivants,
la présence de séquestres encapsulés a été constatee chez 2 sujets (76 et
724). Le poumon était totalement indemne chez les deux autres (13 et 36).
Le 36 fixait le complemcnt & un taux élevé9 de plus l'antigène circulant a
été décelé entre le 35ème et le 75ème jour. Ces deux animaux sérologiquement
négatifs au départ pr~sentnient une immunité certaine. Dans ce cas, l'évolw
tion s&ologique ne semble traduire que la réaction de l'organisme à l'intro=
duction d'une substance altigènique étrangère en quantitÊ importante.
L'évolution s&ologique fait l'objet des tableaux 10 et 11. (Dé-
tiation du complément, recherche de l'antigene circulant).
Sur 15 témoins, 11 sont morts de péripneumonie bovine entre le
35smc et 63eme jour qui suivirent la mise en contact, Les 4 survivants ont
été sacrifiés au 95ème jour, 3 (43, 38 et 40) montraient des séquestres
cncapsulés, 1 (38) une lgsion évolutive englobant la totalité d'un lobe
pulmonaire.
3 c- Evolution des animaux vaccinés
cm."3‘sa-u~~ry.
*-u, ~~j,~l~D~<~~.."~~.Il-.~~l~~.~.~,~.~~
L'évolution sérologique (déviation du complément)fait l'objet du
tableau 12,
Sur 15 animaux vaccinés, 3 (n'9, 42, 93) ont succombé en cours d'ex-
périence sans que lvexamen post-mortem ne révèle la moindre lésion pulmonaire.
La mort de ces animaux peut s9expl.iquer par le fait que, dans les conditions
difficiles imposées par le confinement, des différences de taille et de vita==
lité empêchent certains sujets d'atteindre les mangeoires et de s'alimenter
normalement. La cachexie s'installe et la mort survient par épuisement.
Les 12 bovins vaccinés survivants ont é-te sacrifiés 95 jours après
la mise en contact avec les animaux infectants. Aucun de ces individus ne
prdsentait la moindre atteinte pulmonaire et M.mycoides n'a pu être isolé
d'aucun ganglion trachée-bronchiquc.
Sur le plan sérologique, la presque totalitG des animaux vaccinés
a présenté une montée d'anticorps fixant le complément au cours du contact
avec les animaux infectés expérimentalement et les témoins en cours d'infec-
tion. Cette évolution traduit l'existence d'un stimulus antigénique certain
qui ne vas pas, g&ce à l'immunité existante, jusqu'au développement de
lésion pulmonaire,
0. /.
.
.
M CO
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1
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-
2 21
.
.
I
.
,
.
.
Tableau 11 - Evolution shologique des animaux témoins après la mise en contact
(Antigène circulant décelé par précipita-diffusion en boçte de Pétri)
Nombre de jours après
la mise en contact
35
42 i 49 i 56
' 63 ' 70
77
U" des animaux
75
Mort
43
-.*
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38
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I +
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l
I
I + l + I + l + 1 +
I Mort I
+
+
Mort
74
l
Mort
+ : apparition de l'antigène circulant
,
Fa
.
.
Tableau 12 a Evolution sérolog;ique des animaux vac&-&s après la
mise en contact (Déviation du complément Kolmer)
Nombre de jours
après la mise
0
7
14
21
27
35
42
49
56
63
70
77
95
en contact
Na des animaux
25
c"
l/lO l/lO l/lO
l/lO
1/20
l/lO
l/lo
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Sacrifié.Pou-
mon indemne
24
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1/5
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l
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Sacrifié.pou-
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-
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1
l
1
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I-
I
l
!
l
l
(lésion P.B(
1
i
I
I
w
24
CONCLUSION
A la suite doune expérience contact réalisée 3 mois après la vacci-
nation avec 14 bovins vaccinés à l'aide dsun vaccin lyophilisé préparé avec
la souche Tl (41ème passage), 3 bovins ont succombé pour des raisons étrang&
res à la p6ripneumonie bovine, les 12 survivants, sacrifigs 95 jours après
le début de la mise en contact, ont présent& à 19autopsie un appareil pulrno-
l
naire indemne de toute atteinte péripneumonique. Ce résultat a ét6 observé
à la fois chez des anirraux qui avaient offert une réaction locale post-vacci-
nale au point d9inoculation et chez des individus où aucune réaction locale
n'avait été enregistrée.
Cette expérience souligne la valeur de l'immunité développée à la
suite de la vaccination à l'aide de la souche Tl (j+k?me passage)*
c
25
BIBLIOGRAPHIE
DAVIES (Go) =s Mote on the Tl broth vaccine for the inaugural technical
conference of the JP/lT/phase IV Rinderpest Campaign == Naîrobi
(Kenya) '2% Movernber 1968
HUDSON (J.R.) -, Contagious bovine pleuropneumonie.- A coizparison of the
cfficiency of two types of vaccine.,-3 Aust.vet.J., 1963, 2, 373-7385
HUDSON (J.R.) rl Contagious bovine pleuropneumonie.?, The immnizing value of
the attenuated strain KH3J..- Aust.vét.J, 3 1965, kl, b3-49
HUDSOW (J-R,) .--> Contagious bovine pleuropneumonia.--2 Experiments on the sus.=>
ceptibility and protection by vaccination of different types of
cattle.-- Aust.vet.J. 9 1968, 44, 83.-89
1
PROVOST (A,) :- Rapport sur les recherches entreprises sur la péripneumonie
bovine au Laboratoire de Recherches vétkrinaires de Farcha,
Fort-Laxy (Tchad), de 1964 & lg66.- 3ème r&.nion du Groupe d9Ex-
perts FAO/OIE/OAU sur la péripneumonie bovine, 12-=15 février 1967.
.
VALEUR DE L'IM&lUJ!~ITE COIWEREE PAR DEUX VACCINS
ii “’
tr
LYOPHILISES PREPARES A LPAIDE DES SOUCHES KH?J ET Tl
par M.P.DOUTRE
f
. *
A la suite des recommandations de la Conférence des Experts de la
péripneumonie bovine tenue 8 Khartoum en février 1967 et des possibilités
de mise au point de campagnes inter--états de vaccination contre cette maladie,
le service de bactériologie du Laboratoire national de I'Elevage et de Recher-
ches vétérinaires du Sénégal a mené au cours des années 1967 et 1968 deux
expériences destinées ?i apprécier la valeur de lPimmunit~ que conféraient
deux vaccins lyophilisés préparés à partir des souches KHsJ (86ème passage)
et Tl (44ème passage). Les bovins utilisés aupartenaient a la race XDama,
race bovine africaine , particulièrement sensible à la péripneumonie. LPespace
disponible ne permettant pas de mener en m&ae temps les deux tests, ces der-
a
niers se sont déroulés de la façon suivante :
4
3
- l'expérience contact yKR3J a eu lieu dès la fin de la saison des pluies 1967,
- celle effectuée avec des animaux vaccinés avec T13 dès la fin de l'hivernage
1968.
Ces périodes ont ét& choisies de façon à faciliter lvalimentation
en vert des bovins maintenus en stabulation &roite.
/ VALEUR DE LvIMMUNITE CONFEREE PAR LA SOUCHE KH3J /
A - VACCIN UTILISE
5
Il résulte de la lyophilisation dPun mélange a volume égal dlunc
culture de Mycoplasma mycoides souche KH3J et de mist dessicans (*)v
La composition du milieu de culture rdsulte des travaux effectués au
Laboratoire de Fort-=Lamy (milieu F 66, rapport présent6 à la 3ème Réunion des
Experts sur la péripneumonie bovine FAO/OIE/OAU, tenue à Khartoum en février
1967) et de ceux des chercheurs australiens du CSIRO,
Quelques modifications ont été apport&s, elles portent sur la
suppression de _1 'acide palmitique uratiquemment insoluble même dans une SO-~
lution de soude 0,l M et sur la préparation et la quantité d'extrait frais
de levure ajouté.
- macération de coeur : on provoque la makration pendant une heure de 500 g
de hachis de coeur de boeuf degraisse dans un litre d'eau à 50°C, puis on
porte à ébullition. Filtration à chaud sur papier filtre. On ajoute par
litre : 10 g de tryptose (Difco), 2 g de glucose et 2,5 g de phosphate
disodique. On chauffe à 80°C, filtration à chaud.
- addition de :
. glycérol . ..“c..~.rJ*..**.e.o~..*.*..**
0,3 gllitre
0 acide oléique....OI......O...........
15 mg
0 extrait frais de levuremO.OOC.DO.OO.e. 100 ml
. sérum de cheval décomplémenté,....,.., 100 ml
0 pÉnicilline .,...**,~*...~~..d~0~"~..~.
1.000.000 unités
Le pH est amené 2 8,l avec une solution de soude 10 M. Lgacide
oldique est m&lang6 a 5 ml de soude 0,l Mg le gel fort& est dissous par
agitation magnGtique.
5
.
/
.
6e
*
î:
(+) Actuellement, seul le lait écrémé sec est utilisé comme support de lyo-
philisation dans la pr6paration des vaccins lyophilisés contre la péri-
pneumonie bovine.
w
3
- extrait de levure : l'extrait de levure prgparé extemporanément présente
des qualités supgrieures aux produits correspondants que l'on trouve dans
le commerce o La technique de préparation retenue est la suivante :
(1.E.M.V.T. .- laboratoire de microbiologie)
0 mettre en suspension homogène 1 kg,de levure fraîche de boülan-
gerie dans un litre dveau distillée en présence de 8 ml de
chloroforme
. laisser au bain-marie 24 heures à 5O'C en agitant de temps en
temps, centrifuger et recueillir un premier surnageant que lgon
conserve au froid
. reprendre les culots dans un litre d'eau distill6e et les soumettre
& quatre cycles gel-dégel
. centrifuger à nouveau et recueillir le deuxième surnageant
. melanger les deux surnageants
. filtrer sur filtre Seitz EKS 1, conservation a -2O'C.
Pour la préparation du vaccin, on utilise une culture de 72 heures.
Au cours des dernières 24 heures, les ballons sont portés sur agitateur magné.-
tique.
La répartition se fait sous un volume de 5 ml par flacon type péni-
cilline de 20 ml.
Au moment de l'emploi, le contenu de chaque flacon est reconstitué
avec 20 ml dgeau distill6e st6rile froide (20 doses vaccinales). Dans ces
conditions, le titrage des vaccins par la méthode des dilutions donne un
minimum de 109 unit& viables par ml. Ce titre est égal ou supérieur à celui
des meilleurs lots de vaccin-culture mesuré au moment de leur conditionnement.
B =* TEST D'INMUNITE
a/-, Principe de la méthode
Les animaux vacci&s ont et6 éprouv6s en utilisant la methode de
mise en contact etroit décrite par les auteurs australiens. Cette technique
consiste à mettre en présence,àans une enceinte close àe volume restreint,
un lot d'animaux vaccin&, un lot dPanimau.x temoins non vaccinés et un lot
de bovins infectés exp6rimentalement par voie endobronchique. Pour que lvex-
périence soit concluante, dans lfabsolu, il convient qu'en fin d'exp&iencc
les bovins intubés et les témoins non vaccin& succombent de péripneumonie
alors que les animaux vaccines résistent,
4
bj- Bâtiment
En tenant compte des dimensions relatives du bâtiment construit
par les chercheurs australiens du CSIRO, une íStable a été spécialement amé-
nagée à Sangalkam pour rgaliser les 6preuves d?immunité par la méthode de
contact,
Dimensions : longueur..... 10 m
largew.,.... 5 m
hauteur,..... 3 m,
Pour assurer l'alimentation des animaux, deux mangeoires de 5 m de
long sont placées de chaque côtS. Le foin stocké sur le faux-plafond en planches
est directement amené dans les mangeoires grâce à des trappes <amenagées à.
cet effet.
L'aération est assu&e par 7 ouvertures de 1 m x 0,50 m situées
à 2,35 m du sol.
A l'extérieur, WI parc de 120 m2 pourvu d'un abreuvoir permet de
recevoir les animaux chaque matin pendant environ une demi-heure. Une fois
par semaine, lors des prises de sang, ce temps est prolong de deux à trois
heures.
c/- Protocole expérimental
Tous les bovins utilisés appartiennent 5 la race NDama.
Au jour Jo9 11 bovins sont vaccin& par voie sous-cutanee, & la
côte, avec 1 ml de vaccin KH3J lyophilisé reconstitué avec de l'eau distillée
sterile rafr&hie (If* des animaux : 0001 I.~ 0002 == 0003 .. 0883 Ca 1505 p., 0885 -
1519 La 0871. .., 0887 - 0900 '.* 0896).
Le titre du vaccin est compris entre 10' et 1010 unit& viables
par ml (titrage par la methode des dilutions pasteuriennes).
Au jaur JQ + 14, 11 bovins sont inoculés par voie endobronchique
(NO de s animaux : Gd77 = 0872 aa 0889 I-p 0874 - 0875 -= 0882 =. 0881 -- 0873 -=
0894 - 0892 - o899L
Inoculum : après anesthésie au chloral intraveineux, chaque animal
reçoit une injection intra-trachéale administrge à la sonde, suivant la tech-
nique classique, de 20 ml d'un mglange à parties égales de :
. broyat de lésions pulmonaires péripneumoniques,
D lymphe p6ripneumonique,
. bouillon coeur sérum (milieu F 66 modifié),
5
Les lEsions pulmonaires et la lmphe péripneumonique sont r&olt6es
15 jours auparavant sur un malade au dernier stade de la maladie, sacrifik
sur le terrain, sur notre demande (Nioro-dw:Rip),
et conservées jusqupau
moment de l'emploi à -2O'C.
Un isolement de.M.mycoides à partir des lésions pulmonaires et de
la lymphe est effectug au moment de la préparation de l'inoculum pour confir-
mer la qualit du matériel utilis6.
3 ‘= Mise en contact étroit des trois lots d'animaux (vaccin&s
"7""r-=~----Y""~-rr,-~~~,~~~-=~,-~~~~.
,,,,,,,,,,,.,,,,,,,,,,,.,,;.,,~
temolns non vaccines Intubes
,~~~~~=-~~~~.J-.--,-"-"*-,9,,,,,,,,
Au jour JC + 28, les animaux vaccines et les animaux infectants
sont groupés dans l'&able aména&e à cet effet, en presence de llbovins
t&oins.(M" des témoins : 1536 - 1501. - 898 $= 1576 - 893 - 1542 =. 884 1%a 1523 -
890 - 1530 (3 895).
d/- Evolution des animaux
Les observations s'arrêtent au jour JC + 100.
1 - Evolution des animaux infectants
-">---L;I~-r-u~I---~~~--~~~,-~~~~.,~~~~~-~,~
La réaction à l'infection intrav,trach6ale a été suivie sur les
plans thermique 3 clinique et sérologique (d6viation du complément),
Evolution thermique
Les temp&atures du @me au 36ème jour ont 6té reproduites d‘ans
le tableau 1 :
Sur 11 animaux intubés :
- 7 ont présent6 une élévation thermique significative (température sup&ieure
à 40Oc (no0899 -a 0892 r- 0873 -a 0882 -1 0874 C=l 0889 .- 0877)o
Parmi ces animaux, on peut distinguer 5 bovins ayant manifesté une réaction
précoce (6, 7, 8) gème jour) (no0899 -' 0892 .-- 0873 s9 0882 - 0877) et deux
une réaction tardive (18ème jour).
Sur ces 7 bovins, 6 sont morts en cours d'expkience en offrant à lgautopsie
des lésions caractéristiques, le 7ème (0877) a étt sacrifié en fin dOcxp&-
rience; des lésions péripneumoniques pulmonaires, Xycoplasma mycoides a
ê-té isoll,
- 4 n'ont pas manifesté dPélévation de température ccract&istique
(tJOO894 -
0881 - 0875 == 0872)~ Trois de ces bovins sont morts en cours d'expérience
(no0875 va 0881 - 0872), seuls les no0872 et 0881 présentent des lésions
péripneumoniques,
Le bovin 0894 sacrifié en fin d'expérience nFoffre
aucune Gsion.
En conclusion, sur 11 bovins intubes, 9 ont contra& la péripneu-
monie et 2 animaux nIont pas r6agi 2 l'intubation (no0875 r= 0804), On peut
Également supposer que cette opération ait Etd mal exécutk, ce qui est peu
probable.
-.
Tableau 1 - Evolution de la température chez les animaux infectants
---T-l-I
Nombre de jours
'
après début de
JO+18 Jo+ly/JO+20~Jo+21~Jo+22
,~~+26 ~~+27 Jo+28 JO+29 3 +32 J +35 J +42 J +& J 950
l'expérience
1
l
??Ombre de jours
12
13
14 1.5
4
9
10
11
après intubation
1415 l6 l7 la
1
1 39,2/ 38,71 3961 3921 398 40,2i 4091 3?,7 40,2 40~3 40,2 40,2
l
0892
39,2
3997
3938 j 40,5
40,7
40,9/ 4027
40,5
40 ,I 40,7
40,L +
lésions
-
-
0894
38,7
38,5
38,21 3a,6
3a91
38,4
38,6
3a,3
383
38,3
30,5 38,6 3
9
j 38.2/ 36~1 3~41
1 38,51 39,2l 39361 40 t 40
39,7
40,5
4057
40
40,2f 40,5 40,3
38251 * [
lesions
I
I
I
f 3921 38,51 3%,5/ 39,1/ 3992
39,4
39,4
3936
3923
39,a 39,4
3%,61 39 1 + f lésions
39,3
--
l
1
!
I
38,Zl 38,2j 38,8[ 40,5/ 3939
40,9
40,a 40~3
4039
4OJ 41,l 41-z
40,8i 3
9
j 33,11 39931
I
0875
1 3%,5/ 3894 3%,5 3835) 3832 38,3 39,31 38,% 3932 3999 3937 3995 3g,81 + 1 <ibsence Iksion
38,5
3%,4
38,5
38,5
38,2 38,3 39,3 38,8 3932 39.;9
0874
-i-
39,7
39,5 41 1 40,21 39,9/+ lésions
38,1! 39
39,21 38,7
38,2
39,3
38
383%
3896
39
38,7 382 3F!4u,6j
0889
I
l
37d 373% 3% 1 37,y 37,7 3%,5 38,2 37,7
0872
I
I
37,%
3732
37,7 37,9
3K7 3735 78,4 37,8
I
3737
38
39,2
39,2/ 3%,7
40,l
40
40,6
40,2
40
40,5 40
0877
39,l 38,2
-t
38 38
/
La mort d'un animal est indiquée par le signe +
Remarque : Chez tous les animaux morts de peripneumonie, les 16sions
pulmonaires sont des plus typiques (hépatisation englobant parfois la tota-
lité dPun poumon avec sclérose intersticielle), Toutefois, jamais n'apparazt
l'épanchement pleurétique important que l'on observe si souvent dans la mala-
die naturelle,
Evolution sérologique
La déviation du complément a été effectuée par la méthode de
Kolmer avec fixation d7une nuit à 4'C.
Le résultat des diffgrents titrages a été reproduit dans le ta-
bleau 2. Seules les réactions ++++ sont mentionnées,
Sur 11 animaux intubés, 9 ont réagi sérologiquement. Les no0872
et 0894 sont négatifs, toutefois le 0872 succombe en présentant des lésions
de péripneumonie (po ssibilité d'une hypoga3nmaglobulin6mie).
.-
Le 0894, sacrif%
en fin d'expérience, est indemne de péripneumonie. Four cet animal, il est
possible d'envisager soit quoi1 n'ait pas réagi à Ilinfection intra--trachGale,
soit que lropération ait été mal effectuée (sonde introduite dans l'oesophage),
Pour le nOo875, mort avec absence de l&ion pulmonaire, sans jamais avoir pr&
sent6 de poussée thermique, 1"errour de manipulation est à écarter, car 14 jours
aprk l'intubation, cet animal fixe le complêment au 11320.
Pour ce bovin, tout semble s'être passe comme si l'intubation avait
été effectuée avec une culture en bouillon d'une souche virulente de M.myc~i;~
des. Dans ce cas, on observe une montée régulière dPanticorps sans trace de
lésion pulmonaire â lPautopsie. La réaction sérologique semble seulement re--
fléter la phagocytose de substances étrangères introduites dans l'appareil
pulmonaire.
Evolution clinique
La presque totalité des animaux à sérologie positive présente de la
toux le matin au moment de l'abreuvement. Le phenom?ne est apparu chez les
premiers bovins, 10 jours après l'intubation.
Evolution thermique et sérologique
Pour les bovins t6moins, la courbe de température se superpose 5
lPélévation des taux des anticorps fixant le complément. Aussi, seule lqévo-
lution sérologique des animaux témoins figure-t-elle dans le tableau 3.
.
0. /.
.
8
.
Pi . Ii+ l-i
ml
5
CU
c
.
9
Tableau 3 y= Evolution shologique des aniïna,ux témoins
(Déviation du complément Kolmcr)
!
Nombre de jours
après début
JO+42
JO+59
JO+71
JO+75
~0+82
JO@9
JO+95
expérience
Nombre de jours
~après mise en
1.4
31
43
47
54
61
67
contact
1536
.:a
.Y
1/20
lb30
L+B
1501
ca
L.f.B
0898
'
m
abshce
l
L.PA3.j
1576
Le"
1/10
1/160
1/320
1/320
1/640
LAI?
0893
I-2
abs&ce
L.P.9
1542
.a
I...,
1/160
1/640
L3.B
0884
..A
a.bsCnce
L.P,B
1523
L?I
Y
1/320
1/640
1/640
1/640
1/640
+
L,P,B,
0890
l/lO
l/lO
1/160
+
L.P.B
1530
u5
115
1/40
1/320
+
L.POB
0895
+
absence
L.P.B
1 0
Sur 11 animaux têmoins :
y 7 sont morts naturellement en offrant à lvautopsie des lêsions peripnew
moniques d'oii M.rqycoides est isolé. Sur ces 7 bovins, un seul (1.501) n'a
pas prêsentê une montée appréciable des anticorps fixant le complément
(mort excessivement rapide 33 jours après la mise en contact ou hypogammaL-
globulinêmie). Les 6 autres traduisent sérologiquement l'infection entre
35 et 40 jours aprês la mise en contact avec les bovins infectants.
- 4 sont morts naturellement, très rapidement, sans présenter la moindre
lésion nécropsique dûe à la péripneumonie. La disparition de ces animaux
est consécutive aux conditions particulièrement sévères du stress qu'impose
le confinement. Ces accidents proviennent du fait qu'à l'achat les animaux
ne sont pas homogènes et que les sujets plus petits, plus faibles, ne
peuvent s"alimenter convenablement. Ecartés des mangeoires, ils se couchent
et succombent après avoir êté piétinés,
.
Evolution sêrologique après la vaccination
La vaccination avec KH J n'entraîne aucune montee post-vaccinale
des anticorps fixant le complême t.
a
.
Evolution sérologique après la mise en contact
Les résultats figurent dans le tableau 4.
r
*
4
.
1
.*
‘
.4
.
Tableau 4 CR Evolution sérologique des animaux vaccinés après la mise en contact
(Déviation du complément Kolmer)
Sombre de jours aprèS
Jo+59' Jo+71
Jo+-?+ ~~+82
début exphience
5*+28
Jo+42
I
5,+89
J,+95
I
I
l
1
Hombre de jours après
mise en contact
0
14
31
1
113
IL7
r-1.
labs ncel
0871
8
L. .B
-
1519
--
-.
abs % nce
L. .B
0885
1/40
abs nce
i
I
..a
"l" L g B
.A.
0883
s?.
abs nce
ci.2
L. i3 .B
0887
l/lC
115
u5
l/lO
l/lO
abs nce
%
L. .B
-
0002
.z*
=Ca
1
1/20
L.8.B
0001
x
115
1/5
l/lO
l/lO
l/lO
l/lO
l/lO
sacrifié
L.P.B.
0900
c.m
1/20
-
1/10
l/lO
l/lO
1/20
l/lO
sacrifi6
aucune L.P,B,
1505
1/10
-
us
1-/5
l/lO
1/20
1/40
sacrifié
aucune L.P.B,
0003
FS
1/5
1/5
l/lO
l/lO
l/lO
sacrifi6
aucune L.P.3,
0896
7..
sacrifié
l/lfSO
1/80
1/160
1/80
l/%O
1/80
1/160
aucune L.P.B.
visible
-
1 2
Sur 11 bovins vaccinés en vue de realiser l'expérience :
1 meurt le jour de la mise en contact (nO0871) sans présenter la moindre
atteinte de pkipneumonie,
5 succombent naturellement dans des temps variables, 4 n'offrent aucune
lésion pkipneumonique
(1519, 0885, 0883, 0887); par contre, le no0002
présente, 34 jours après la mise en contact, un séquestre péripneumonique
d'où M,mycoides est isolé.
5 sont sacrif& en fin d'expérience : sur ces 5 bovins, 4 &vèlent a
l'autopsie des poumons indemnes de péripneumonic (n'0900, 1505, 0003, 0896);
le sérum du bovin 0896 fixe le complément 8 un taux Qevé (1/160), sans
qu'aucune lésion ne puisse être décelée, Par contre, le no0001 montre deux
séquestres p&ipneumoniques
dPoU M.mycoides est isolé par culture,
En conclusion, la vaccination avec le vaccin KH3J lyophilis~ a donc
. .
apparemment favorise la création de deux bovins porteurs chroniques sur
11 animaux vaccinés un mois avant la mise en contact avec les sujets infec-
tants.
CONCLUSIONS
L'exp&ience contact destinee a
' *
apprecier la valeur de lgimmunité
conférée par un vaccin lyophilise prépare & partir de la souche KH3J un mois
après la vaccination montre :
l/,-, quvunc immunite certaine s'est développ& chez les sujets vaccinés,
7 temoins morts de p&ipneumonie présentent des lésions volumineuses
des $~US caractéristiques, Aucun vaccin6 n'offre des ldsions d'une telle
importance.
2/- que cette immunité est loin d'être totale, 2 bovins présentent à l'autop=-
sie effectuée, soit après la mort naturelle, soit après abattage, des
séquestres de la grosseur d'une pomme d'où M.mycoides est isolee par
culture. Au contact d'animaux infectants, d&x animaux porteurs chroni-
ques ont ainsi étG créés.
3/- que seules des vaccinations rép&$es au moins tous les 5 mois, pendant
plusieurs années, sur la quasi totalité du troupeau peuvent entraîner
une régression de la maladie.
13
/ VALEUR DE LsIMMU!?ITE CONFEREE PAR LA SOUCHE T, /
A- VACCIN UTILISE
Il résulte de la lyophîlisation dvun mélange & volume égal d'une
culture de Mycoplasma mycoides, souche Tl, et de mist dessicans, Le milieu
utilis6 pour la culture est celui d&rît précédemment (F 66 modifié),
Le vaccin reconstitu6 au moment de l'emploi titre un peu plus
de 10g unités viables par dose vaccinale (1 ml),
B- TEST DPIMMJNITE
.
a/- Bâtiment
Afin de pouvoir mener lvexpêrimentation sur un nombre plus élevé
d'animaux, la superficie du bâtiment ainsi que le nombre des mangeoires ont
été doublés :
longueur,.,., 10 m
largeur...... 10 m
Hauteur...... 3 m.
b/- Protocole exp&?imental
Tous les bovins utilisés appartiennent comme précédemment 2 la
race NDama. Achetés au Sénégal Oriental, ils sont garantis par le vendeur
comme non-vaccinés.
Le but de l'expérience consiste à apprécier la valeur de l'irnmu-
nitê que présentent des animaux vaccinés avec le vaccin Tl lyophilisê 3 mois,
7 mois et 12 mois après la vaccination. 50 bovins ont donc été vaccinés et
conservés à !a ferme de Sangalkam. Ils ont été répartis en trois lots utili-
sables respectivement 3, 7 et 12 mois après la vaccination. Seule la première
phase de l'expérience (valeur de l'immunité 3 mois après la vaccination)
fait l'objet de la description et des conclusions qui suivent :
c
.
Les 15 bovins vaccines utilisés lors de l'expérience contact
groupent 7 animaux qui n'ont pas prdsenté de réaction locale post-vaccinale
au point dPinoculation (n025, 24, 9, 42, 83, 10, 79) et 8 bovins qui offri-
rent une réaction locale ne dépassant pas la taille de la main (ntl B, 80,
go, 11, 82, 2, 18 B, 93).
L'&olution sérologique post-vaccinale de ces 15 animaux figure
dans le tableau 5 (deviation du complément Kolmer).
*. / . .
14
Tableau 5 - Sérologie post-vaccinale des animaux vaccinés
avec T1 avant la mise en contact
(Déviation du complément Kolmer)
No des animaux
Vaccination J +l?
JO
0 +
Jo+20
JO+28
JO+41
Réaction locale au
point d'inoculation
25
1/5
1/40
1/160
1/80
24
ca
u5
1/40
1/40
1/20
I>
9
sa
I
-7
42
l/lO
1/10
Il20
1/10
a3
il
CI
_I
10
-2
1110
l/lO
-
'=
I
79
.x
1/5
1120
l/lO
1/5
11 B
e.'
1/5
1/10
1/10
1/5
++f (taille d e la
main)
a0
D
l/lO
aia0
1/160
1/320
+-t-k
l
90
l/lO
1/40
1/160
1/160
+++
11
-3
l/lO
1140
1180
1/20
-l-4-+
a2
"3
1110
i/40
l/lO
l/lO ++
l
2
i-
1/5
1/5
1/5
.-:,
++
18 B
I
l/lO 1 1/20
l/lO
+++
93
-s
115
1110
1/5
-=
+++
. ./ . .
15
Sur 15 animaux vaccinés, 13 ont montré une réaction sérologique
posi+vaccinalc dqintensité variable selon les sujets, proportionnelle à
l'importance de la réaction locale, Toutefois, le no25 qui riva présenté aucune
réaction locale, fixe le compl6ment au 1/160, 28 jours après la vaccination.
2 ~1 Intubation des animaux destin& & devenir infectants
Y_. lIus.al dMO .m,.m 1.11S.7.C *Lil..?l*-Tr > s.r9L:,..~nlO"L- . ..III.IIP_U___NI..__.~--~~~~,~~~~~~~~,-,
L'inoculation intra-trachéale de la suspension infectante est
effectuée comme précédemment.
Deux lots d'animaux ont été successivement rendus infectants, En
effet, la mortalité très rapide des animaux du premier lot a fait craindre
la possibilité d'une mauvaise contamination des témoins et des vaccinés. Un
second lot de bovins infectants a donc été préparé. Ces animaux ont étê
introduits 21 jours après le début de la mise en contact, il ne restait alors
plus que trois bovins infectants survivants du premier lot.
(13, 88, 3 2 , 4 4 , 3 6 , 2 9 , 14
No des bovins infectants du ler lot (15 bovins) (26, 5 6 , 23, 57, 15, 1 8 , 7 6 ,
(95
No d e s bovins infectants du 2Gme lot (12 bovins) (702, 709, 710, 721, 722, 724,
(715, 34, 717, 716, 711, 718
Trois mois après la vaccination, 15 bovins vaccinés ont été groupés
avec 1 5 bovins infectants
(ler lot) en présence de 15 témoins (n0759 43, 38,
40, 2 2 , 31, 50, 3, 63 B, 41, 5 B, 4, 91, 20, 74). Le deuxième lot de bovins
infectants a ét6 introduit dans l'étable expérimentale 21 jours après le début
de la mise en contact.
c/- Evolution des animaux
Les observations s"arrêtent 94 jours après le début de la mise en
contact.
1 ca Evolution des animaux infectants
wm.L:r ~__-:_/..~-'_.-~r~Y.~~~~-~.~~~~~,~~~~.,,~~,
.li t.:z
Seule lvévolution sêrologique est rapportée dans les tableaux qui
suivent. Le devenir des anticorps fixant le complément a êté suivi par la
méthode de Kolmer. La recherche de l'antigène circulant a été effectuée par
prêcipito-diffusion en boîte de Pétri (gêlosc noble à 1 p.100 dissoute dans
un tampon véronal à pH 7,3 - 7,4, merthiolaté à 0,04 p.100).
Les résultats obtenus figurent dans les tableaux 6, 7, 8 et 9
(ler et Pème lot d'animaux infectants). En matière de dhiation du complément,
seules les réactions ++++ ont é-te retenues,
.
/
.
0.
L
.
.”
<”
Tableau 6 .- Evolution sérologique des animaux intubés du premier lot
(Déviation du complément Kolmer)
1
I
I
I
1
1
I
I
Nombre de jours aprh 7
-rl
l?intubation
13 21
28 j 35 1 41 1 49 ) 56 ) 63 1 70 ] 77 / 84 1 91 1
No des animaux
I
I
13
1/160
1/80
1/40
1/40
1/40
1/x0 l/ao 1/5 1/5 m Sacrifié.Absence'
1/10 1/320 1/320
lésion p&.-ipn.
/
/
L+B
1
1/20 1/160 1/320
88
I
!
I
t--
L,P,B
3 2
1/40
t
44
L.P,B
I
-
1/320 +
I
I
I
36
1/5 1/80 1/320 1/640 1/320
1/80
1/80
1/80
1,'40
1,'20
1/20
1/20
1/201~;~~~~i;~+&s~ce *
-
L.P.B
29
1/80
+
-
14
1/5
1/40 L*y*B
v-
26
'L.P.B
1/80
+
-
56
1/40 f LeP*B
+
23
L.P.B
J-/40
+
57
L.P.B
1/320 +
15
1,'5 1/80 1/160 L,P.B
+
18
L.P.B
1/80 +
I
I
I
I
76
cs.
x/80 1/160 2&,20 1/160 l/lG;O
1/80
1/40
1/40
1/40
1/20
1,'20
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Tableau 8 II Evolution sé-ologique des animaux intubés du deuxième lot
(Déviation du complément Kolmer)
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: mort avec lésions péripneumoniques
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Sur 27 bovins infectés par voie endobronchique, 23 ont succomb6
en présentant à l'autopsie des lissions péripneumoniques et 4 ont été sacrifiés
en fin d'expérience, Le maximum des mortalités dûes à la maladie expérimen-
tale se situe vers le 20ème jour qui suit l'intubation, Chez les survivants,
la présence de séquestres encapsulés a été constatee chez 2 sujets (76 et
724). Le poumon était totalement indemne chez les deux autres (13 et 36).
Le 36 fixait le complemcnt & un taux élevé9 de plus l'antigène circulant a
été décelé entre le 35ème et le 75ème jour. Ces deux animaux sérologiquement
négatifs au départ pr~sentnient une immunité certaine. Dans ce cas, l'évolw
tion s&ologique ne semble traduire que la réaction de l'organisme à l'intro=
duction d'une substance altigènique étrangère en quantitÊ importante.
L'évolution s&ologique fait l'objet des tableaux 10 et 11. (Dé-
tiation du complément, recherche de l'antigene circulant).
Sur 15 témoins, 11 sont morts de péripneumonie bovine entre le
35smc et 63eme jour qui suivirent la mise en contact, Les 4 survivants ont
été sacrifiés au 95ème jour, 3 (43, 38 et 40) montraient des séquestres
cncapsulés, 1 (38) une lgsion évolutive englobant la totalité d'un lobe
pulmonaire.
3 c- Evolution des animaux vaccinés
cm."3‘sa-u~~ry.
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L'évolution sérologique (déviation du complément)fait l'objet du
tableau 12,
Sur 15 animaux vaccinés, 3 (n'9, 42, 93) ont succombé en cours d'ex-
périence sans que lvexamen post-mortem ne révèle la moindre lésion pulmonaire.
La mort de ces animaux peut s9expl.iquer par le fait que, dans les conditions
difficiles imposées par le confinement, des différences de taille et de vita==
lité empêchent certains sujets d'atteindre les mangeoires et de s'alimenter
normalement. La cachexie s'installe et la mort survient par épuisement.
Les 12 bovins vaccinés survivants ont é-te sacrifiés 95 jours après
la mise en contact avec les animaux infectants. Aucun de ces individus ne
prdsentait la moindre atteinte pulmonaire et M.mycoides n'a pu être isolé
d'aucun ganglion trachée-bronchiquc.
Sur le plan sérologique, la presque totalitG des animaux vaccinés
a présenté une montée d'anticorps fixant le complément au cours du contact
avec les animaux infectés expérimentalement et les témoins en cours d'infec-
tion. Cette évolution traduit l'existence d'un stimulus antigénique certain
qui ne vas pas, g&ce à l'immunité existante, jusqu'au développement de
lésion pulmonaire,
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Tableau 11 - Evolution shologique des animaux témoins après la mise en contact
(Antigène circulant décelé par précipita-diffusion en boçte de Pétri)
Nombre de jours après
la mise en contact
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+ : apparition de l'antigène circulant
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Tableau 12 a Evolution sérolog;ique des animaux vac&-&s après la
mise en contact (Déviation du complément Kolmer)
Nombre de jours
après la mise
0
7
14
21
27
35
42
49
56
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77
95
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Na des animaux
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24
CONCLUSION
A la suite doune expérience contact réalisée 3 mois après la vacci-
nation avec 14 bovins vaccinés à l'aide dsun vaccin lyophilisé préparé avec
la souche Tl (41ème passage), 3 bovins ont succombé pour des raisons étrang&
res à la p6ripneumonie bovine, les 12 survivants, sacrifigs 95 jours après
le début de la mise en contact, ont présent& à 19autopsie un appareil pulrno-
l
naire indemne de toute atteinte péripneumonique. Ce résultat a ét6 observé
à la fois chez des anirraux qui avaient offert une réaction locale post-vacci-
nale au point d9inoculation et chez des individus où aucune réaction locale
n'avait été enregistrée.
Cette expérience souligne la valeur de l'immunité développée à la
suite de la vaccination à l'aide de la souche Tl (j+k?me passage)*
c
25
BIBLIOGRAPHIE
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conference of the JP/lT/phase IV Rinderpest Campaign == Naîrobi
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PROVOST (A,) :- Rapport sur les recherches entreprises sur la péripneumonie
bovine au Laboratoire de Recherches vétkrinaires de Farcha,
Fort-Laxy (Tchad), de 1964 & lg66.- 3ème r&.nion du Groupe d9Ex-
perts FAO/OIE/OAU sur la péripneumonie bovine, 12-=15 février 1967.