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,
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,
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I N S T I T U T S E N E G A L A I S D E R E C H E R C H E S
DEPARTEMENT DE RECHERCHES
A G R I C O L E S (1 .S.R.A. i
.”
S U R L E S P R O D U C T I O N S
I
,1% 1,
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E T L A S A N T E A N I M A L E S
-------I----v-..-----
. . .
L
L A B O R A T O I R E N A T I O N A L D E L L ’ E L E V A G E
ET DE RECHERCHES VETERI NAI RES
DAKAR-HANN
MYCOPLASMES A TROP1 SME RESPI RAT01 RE
C H E Z L E S P E T I T S R U M I N A N T S A U S E N E G A L
P a r M. K O N T E e t D . D E S B U T T E R
C o m m u n i c a t i o n a u x
R E F . No 93,‘MICROBIO
x i 1‘
emes J o u r n é e s M é d i c a l e s e t P h a r m a c e u t i q u e s
D E C E M B R E 1 9 8 7
d e D a k a r . J A N V I E R 1 9 8 8
,
MYCOPLASMES A TROPlSME RESFWATOTRE CHEZ LES PETITS RWZNAM-S
R E S U M E
-l-
L’élevage des Petits Ruminants connait un regain d’intérêt en zone
soudano-sahélienne,en
général, au SénGgal, en patilculisr. En effet, face 2 la
détérioration constante des conditions d’élevage liées à des aléas climatiques
persistants, les ovins et les caprins offrent l’alternative souhaitée pour
maintenir, accrottre et diversidier la production de viande. lie plus, le riile
social et religieux des Petits Ruminants n’est plus à démontrer.
L’une des contraintes majeures liees à cette spéculation est d’ordre
pathologique et releve des affections respiratoires.
Nous dirons, commeLEJAN
et af. (71, que “l’impact éconcmique de ces
affecticns doit être apprkié plus en terme de lésions infracliniques, donc de
réduction des capacitk zootechniques et de la production de protéines animales
qu’en termes de morbi d i t6 et de morta I i te”.
Entre autres agents bactériens incriminés dans ce processus pal-ho logique,
deux espèces de mycoplasmes sont identifiées au Sénéga 1 au niveau du tractus
respi ratoi re : Mycoplasma cnqGzini
et M&wpZasma ovipnewnonine, soi t 1 ors
d’étude de portage sur animaux sains d ‘abat-toi r, soit lors d’examen de poumons
attei nts de pneunon i e.
l I est examine dans ce qui suit les problèmes posés au niveau des techni-
ques bactk-iologiques mises en couvre, quant à l’isolement et l’identification
de ces germes,
MATERIEL ET METHODES
A - MATERI EL
1°) - Les prélévements
- Etude de. Fortage
- - - - - - - - - - w-w- -
El le est effectuée en 1981 et 1982 par DOUTRE (2 ; 3) à partir d’or-
. . . / . . .
-2-
genes prélevés sur animaux sains, moutons et chèvres, à I ‘abattoir de Dakar. Pour
chaque expèce ont été examinés :
- 100 fragments de parenchyme pulmonaire
- 100 fragments de muqueuse tracheale
- 200 fragments de muqueuse laryngienne
- 100 fragments
de muqueuse sinusale
- Examen de matériel cathologigue
-----1----e--------
-w---w - mm
l f s’agit essentiel lement de pownons atteints de pneumonie
à divers stade d’évolution. En particulier, i l a été exami né un poumon hitpat i se
prélevé sur un mouton mort au cours d’une expérience d’ingestion de tourteau
d’arachide contaminée par I’aflatoxine pour suivre et dépister In toxine
d~AspergZZ2u.s flavus dans les résidus de viande (6).
2O) - Les mi 1 Ieux de cultures
Les Mycop I asmes,
bac-t&l es sans paroi, exi gent des candi t i ons
particul iêres de culture. Le grand nombre de mi lieux de culture prScon.i& en
atteste.
Aussi, est-i I judicieux druti liser en para1 Ièle plusieurs d’entre eux (41.
Les mi lieux testés et uti lisés à Dakar sont au nombre de 5 :
- Milieu HIB (liquide et solide)
Heart Infusion Broth Difco : 25 g
Neopeptone Difco :
2,5 9
Bacto-cas i tone D i fco :
295 9
Glucose :
2
9
Eau disti I lée :
700 ml
. . . / . . .
-3-
Extrait de levure fíafche à 25 p 100 :
100 ml
Sérum de cheval décctnplémenté :
200 ml
Penici l I ine
200 000 U.I.
Acétate de thai 1 iwn à 10 p 100 :
l,25 ml
Agar N&bie Di fco (pour mi I ieu sol ide)
10 9
PH : 7,6
- Boul i ion tryptose pénici 1 l ine (DTP) ou mi f ieu PPLD
Bacto-t ryptose :
20 9
GI ucose :
29
NaC I
c-l
Phosphate di sod i que
2,5 9
Extr&t t de levure Difco 5 g
Eau disti I lée :
1 000 ml
Pénici I line :
1 0 0 0 U.I.
Serwn de cheval
100 ml
.
PH : 7,5 - 7,6
- Mitfeu d e Hayflick m o d i f i é
Bacto PPLO Bt-0th D;ifco
175 ml
sérum de cheval
50 ml
Extrait de levure fratche
25 mi
à 15 %
PH : 7,O - 7,8
Penlct I line ou acétate de i-bal iiun sont uii lises ou non en fonction
des préoccupations d’isolement ou d’entretien.
. . . / l . .
-4-
- Mi I ieu DE (IEMVT)
Bacio PPLO broth. Difco
21 9
Bacto Tryptan
10 9
G i ucose
f 9
Bacto Yeast extra-t
59
Eau distl l lée
700 ml
Pui s ajouter : extrait de Levure fraîche 25 %
100 ml
serum de cheval
200 ml
PH : 7,6 - 7,8
- Ml lieu A.C, Dow F 38
Brain Reart infusion broth
14,8 9
Lactalbumine hydrolysat Difco
29
Bacto yeast extract Difco
29
ADN
OPOl 9
Solution de Hanks
200 ml
Eau d4mln6ral fs6e
200 ml
Serum de cheval ou de chèvre
100 ml
B - METHODES
Dans le cadre de I'&ude du portage, le milieu solide (HIB) coulé en
boite de Petri est directement ensemencé par appl icatlon à partir des fragments
d'organes prélevés, puis incube en atmosphère enrichie en CO2$
Le clonage est effectué en BTP (ou milieu PPLO) après une semaine de
culture à 37OC.
. . . / . . .
.
-5-
Bien que preconisé,
I ‘acétate de l-ha f I l um n’a pas &l-é u-t! I isé au cours
de cette etude ; 1 I I ‘a par contre e-té pour le pounon hépatf s& pre levé sur le
cadavre du mouton soumis 5 l’ingestion d’aflatoxine (6).
Les souches de mycoplasmes isolées etai en-t envoyées pour diagnose
d’espèces au laboratoire Pierre PERREAU de 1’1 .E.M.V.T. 8 Maisons-Alfort en
France. Ce travaf
1 met en oeuvre le protocole d’étude suivant : morphologie,
étude des caractères culturaux et biochimlques; sérologie à 1 laide d’anti-sérums
de reference, ana I yse electrophorodque.
Les trois autres mi I ieux (tiayf i ick modifie ; DE et M F38) sont aussi
test& pour I ‘isolement et surtout pour I ‘entretien des souches sauvages ou
de coi lection.
RESULTBTS
I*l - Isolement de Mycoplasma arghini
C’est la seule especo de mycop lasme mise en évidence, aussi bien
à partir des prélèvements destin& à l’étude du portage que sur la quasi tota-
l i té des Foumons
atteints de pneumonie (2 ; 3).
.*. /
. . .
-6-
El le repond aux caract&res suivants :
résistance à la digltoninc : +
‘If i fms and spots” : -
hydrolyse du g ucose : -
I
hydrotyse d& + àrginine : +
Phosphatase : -
pourvoi protk2lytique : -
t-Eduction du chlorure de t&trazol ium : O/+ (aérobie/anaérobfe)
La sérologie et l’analyse &lectrophw&iques donnent un pr0fi.i. identique
à celui obtenu avec la souche de &fércnce G230 de M. arghini,
La répat-tltion des iscplements s’est révélée fonction de l’espèce animale
prélevée (ovine ou caprine) et du niveau de prélèvement sur le tractu- respi-
ratoire. DOUTRE (2, 3) a obtenu les résultats suivants :
Espéces
Sinus
Larynx
Trachée
Parenchyme
pu Imonai re
Tota I
Ovine
30
Capri ne
1
1
27) - Isotement de MucovZasrna ovitmemoniae
Ce mycoplasme est isolé une seule fois, 21 partir du poumon hépatisé
.’ .provenant du mouton soumis à I ‘ingestion d’aliment contaminé par I ‘aflatoxine (6)
Cette souche sénégalaise de M. ovipneumoniae montre une tégère différence d’avec
.a. /.
. .
-7-
la souche de référence Y-98 par la luxuriance de sa culture en boul Ilun.
El les sont identiques par ai I leurs, pour les autres caract6res qui sont :
. croissance (notée de 0 à 4+) : 2+
aspect des coAonies
: type M. ovipnewnoniae,
petite colonie
l
à centre diffus, vacuolée et granuleuse
. sensibilité à la digltonine : + (9 mm)
. hydrolyse du glucose : - (après 12 jours)
. réduction du chlorure de tétrazoiium : -/2+ (aérobie/anaérobie)
. phosphatases : -
. digestlon du sérum coagulé : -
. tests d’inhibition de croissance
- sérum anti -M. ovipnewnoniae Y-98 : +6 mm(neta)
- sérum anti -MycopZasma sp. Fg 50
Mycoplasma
rp. F38, MycopZusma mycoides subsp. mycoides
SC 10114, MycopZasma mycoides subsp. capri Pg3, Mycoplasma
bovirhinis Pg43, MycopZasma mgcoides subsp. mycoides LC Y-(ha-t,
MycopZasma capticoZwn C. Kid : - (tous négati fs 1
. Immunof luorescence directe sur boul I Ion de culture :
sérum témoin négatif
- anti F 38
- anti-D 3
- anti+j 50
- anti-Pg 3
- antf VC 2 (M ovipnewnott2ael
: 3 à 4+
. analyse électrophorktique
: le sch6ma de l ‘antigène de la
souche sénegalaise montre un profi I très proche de celul obtenu à partir de
l’antigène M ÛuipnewnonSae Y-98.
.*. /
. . .
-8-
M a@nZnS n’a pas été mis en évidence dans ce prélèvement.
3’) - Qualité des cultures pour les differents milieux
h&coplasma arg&<ni pousse de façon satisfaisante sur
tous 1 es types de mi t f eux expBriment&s,
dans un délai de 2 à 4 jours après !a
mise en culture en mi lieu liquide se caractérisant par une croissance que l’on
qua Ii fiera de moyenne (par rapport à la croissance l uxuri ante de M. mycoides
mycoides LC 1. M. ouipnemon~ae
se révèle beaucoup p I us exigeant quant à I a
qua1 ii-é du mi I ieu de culture , ne donnant de résultats intéressants pour les
milieux testés que pour le milieu de HayTIickmodifte sur lequel sa croissance
reste cependant lente et peu abondante.
DISCUSSIONS
la) - Mi lieux de culture
L’isolement,ou I ‘entretien des mycopiasmes pose le délicat prl
problème de choix du mi I ieu de culture adéquat. Ces ml l i eux doivent nécessai re-
ment contenir un substrat de base constitué par un extrait de viande ou une
peptone ou les deux, un extrait de levure de bière (frais, de préférence à celui
du commerce ), du sérun (de cheval, boeuf, mouton, porc, lapin, etc.. .), des
inhibiteurs bactériens (pénicilflne, acétate de thaeilun). La réussite des
cultures dépend de la qualité de ces constituants : qualité de l’eau démi&-
tra I isée ut-i I isée paur préparer ces mi I i eux, qua1 ii-é du sérum qui ne doit pas
contenir d’anticorps inhibant les mycoplasmes.L’origine de I ‘agar n’est pas
sans importance,
i a gélose OXOID
permettant une mel l I cure trot ssance que
la gélose DIFCO pour certaines espbces de mycoplasmes (4).
.;. ./ . .
-9-
La culture des mycoplasmes est encore compliquée par le fait qu’il
n’exista pas un mi I îeu standard unique pour les dlfférentes espaces de
mycopl asmes des Pet i 7s Ruml nants ;
Ii est préconisé i8emploi simultané d’un
mi lieu permettant la croissance de M. sp F38 (A.CI, d’un mi lieu permettant la
croissance de M. &pnezunon$ae (mi lieu de Hayf lick modifié) et d’un troisième
mt lieu type mi lieu DE.
2*1 - Etude du portage de mycoplasmes
La trachée et le parenchyme pulmonatre apparaissent comme stéri les
et nous remarquons avec DOUTRE (2, 3) que tout se passe comme si le portage
normai , c’est-à-dire la croissance des micro-organismes sans que n’apparaissent
des téslons chez l’animal, allait décroissant d’amont en aval au niveau des
voies resplratoires supérieures pour s’annuler à partir du Iarynx ; ce serait
le résultat de la mise en oeuvre d’un système immunitaire local efficace (2, 3).
La fréquence du portage de M. arg%nini est très inférieure chez la chèvre:
par rapport au mouton,
M. arg$nZni est aussi isolé de lésions pneumoniques du mouton (très
frequent) e t d e l a chèvrè (race1 (2, 3).
Le passage chez 1 ‘animai, de l’état porteur sain à celui de maladé
pneumonique, se ferait à la faveur d’une dépression du système immunltai re
local du fait de facteurs stressants primaires. Ces facteurs sont, selon DOUTRE
2, 31, la peste des Petits Ruminants pour les caprins (donc agents d’ordre
virai ou infectieux) et le mauvais état physiologique pour les ovins (du fait
de parasitisme d’une mauvaise alimentation, du froid, etc...). Cette présenta-
tion dichotomique expliquerait les pneumonies des Petits Rwoiants (2 ; 3).
1.. / .**
-lO-
3O 1 - Isolement de M. wipnewnonhc
Ce germe a été isol6 une seule fois, malgré le nombre important
de pourwns pneumon i ques exami ries . II faut noter qu’il a éié isole à la faveur
d’une agression de l’organisme par une mycotoxine (6) ; i 1 serait alors un
germe de sortle, ce qui supposerait un portage prealable au niveau du trsctus
respiratoire. Malheureusement, 1 ‘opportunité ne nous a pas été donnée d’effec-
tuer une recherche systématique de M. ovipnemoniae à partir d’écouvi 1 lonnages
nasaux pratiqués chez tous les animaux concernés par l’experience (1).
G. IONAS et al. (5) ont &t-tis Itidée que la colonisation secondaire du
parenchyme pulmonaire se ferait à partir d’un portage nasal préalable du germe
sans pour autant que celui-ci fasse partie intégrante de la flore normale ;
du reste cette apti tude n’est pas reconnue à toutes les souches de M. ovipneu-
moniae.
I I est poss ble que I’aflatoxine ait eu une action favorisante sur la
colonisation du tractus respiratoire par M. ovipnounoniae.
De plus, i’usage de I1acétate de thalliun pourrait avoir eu un effet
favorable sur son développement in vitro, soit en modulant If interf&ence
microbienne en faveur de M. cwipnewnoniae
au détrlment de germes saprophytes,
soit en minimisant un eventuel effet inhibiteur de la pénici I line G parfois
observé sur certaines espèces de mycoplasmes.
Quant au rôle exact joué par M. otipnezunoniae dans I’apparitlon des
symptômes observés, 1 ‘étude du pouvoir patho@ns
par la reproduction expé-
rimentale de la maladie chez les Petits Ruminants est en cours ; elle implique
I a taxi ne dlAspergiZZus comme facteur stressant.
. . . / .*.
-11-
Les foyers de “pasteurel loses” de plus en plus signales à travers le
pays incitent à plus dVattention quant à l’existence probable de Mgcaplasma spI
F 38 agent spécifique de la pieuropneumonie certtagleuse.caprine. Lluti 1 isation
syst6matique d’un milieu favorable à son isolement est faite dans cette optique.
+ *
.
B I B L I O G R A P H I E
1 - A L L E Y (M.R.), QOUILAN (J.R.1 a n d CLARKE (J.K.1 - The préva f ence of. F4~coptasma
ovipnewnciniae and MycopZasma arg2nkni 1 n t he res p i ratory tract of
s h e e p , W . Z . V e t . J . , 1 9 7 5 , 2 3 : 137-141
-
2 - WUTRE (M.P. 1 e t P E R R E A U (P. 1 - L e p o r t a g e d e Pas+eureZZa sp. et de
MycopZusma arg-iniz~
chez les moutons sa! ns BU Sénéga 1.
R e v . E l e v . Med. vét. P a y s t r o p . , 1981, 3 4 (41 : 3 6 5 - 3 6 8
-
3 - OOUTRE (M.P. 1 e t P E R R E A U (P. 1 - L e p o r t a g e d e Pustezcre& sp, e t d e
Mycopikwnu aqp%n~ chez la chèvre au Sénégal.
R e v , Elev. M é d . II&I-. P a y s trop.,1983, 3 6 (11 : Il-14
-
4- I.E.M.V.T./C.I.R.A.O.
- Mycoplasmes et Mycoplasmoses des Ruminants.
D o c u m e n t s t e c h n i q u e s ; 1 0 , r u e P i e r r e C u r i e , 9 4 7 0 4 - M a i s o n s - A Ifor-t,
j u i n 1 9 8 5 , 8 2 p .
5- IONAS (G.1, MEW (A.J. 1, ALLEY (M.R.1, CLARKE (J.K.1, ROBINSON (A.J. 1 and
MARSHALL (R.B. ) - Colonizatfon
o f t h e r e s p i r a t o r y i r a c t o f l a r u b s
by st ral ns of Mycoplasma ovipneumoniae
V e t e r l n a r y M i c r o b i o t o g y , Vol. 1 0 , NO 6 , Dkxnbre 1 9 8 5 ; 5 3 3 - 5 3 9
6 - K O N T E (M. 1 e t BREARD (A.1 - Presni w- I SO I ement de MycopLmm wipneumonZae
au Sénéga 1.
A paraTtre d a n s R e v . E l e v . Med. v&. P a y s t r o p . , 1 9 8 7 , 4 0 (2)
-
7- L E J A N (C. 1, S O W ( A . D . 1 e t C I S S E (T.? - R a p p o r t f i n a l d u s e r v i c e d e V i r o l o g i e
du CNERV - R é s e a u d ’ é t u d e ctes pnemopathies d e s P e t i t s R u m i n a n t s
Mauri tani e - Octobre 1986 non pub i i é.
,
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I N S T I T U T S E N E G A L A I S D E R E C H E R C H E S
DEPARTEMENT DE RECHERCHES
A G R I C O L E S (1 .S.R.A. i
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S U R L E S P R O D U C T I O N S
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-------I----v-..-----
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L
L A B O R A T O I R E N A T I O N A L D E L L ’ E L E V A G E
ET DE RECHERCHES VETERI NAI RES
DAKAR-HANN
MYCOPLASMES A TROP1 SME RESPI RAT01 RE
C H E Z L E S P E T I T S R U M I N A N T S A U S E N E G A L
P a r M. K O N T E e t D . D E S B U T T E R
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MYCOPLASMES A TROPlSME RESFWATOTRE CHEZ LES PETITS RWZNAM-S
R E S U M E
-l-
L’élevage des Petits Ruminants connait un regain d’intérêt en zone
soudano-sahélienne,en
général, au SénGgal, en patilculisr. En effet, face 2 la
détérioration constante des conditions d’élevage liées à des aléas climatiques
persistants, les ovins et les caprins offrent l’alternative souhaitée pour
maintenir, accrottre et diversidier la production de viande. lie plus, le riile
social et religieux des Petits Ruminants n’est plus à démontrer.
L’une des contraintes majeures liees à cette spéculation est d’ordre
pathologique et releve des affections respiratoires.
Nous dirons, commeLEJAN
et af. (71, que “l’impact éconcmique de ces
affecticns doit être apprkié plus en terme de lésions infracliniques, donc de
réduction des capacitk zootechniques et de la production de protéines animales
qu’en termes de morbi d i t6 et de morta I i te”.
Entre autres agents bactériens incriminés dans ce processus pal-ho logique,
deux espèces de mycoplasmes sont identifiées au Sénéga 1 au niveau du tractus
respi ratoi re : Mycoplasma cnqGzini
et M&wpZasma ovipnewnonine, soi t 1 ors
d’étude de portage sur animaux sains d ‘abat-toi r, soit lors d’examen de poumons
attei nts de pneunon i e.
l I est examine dans ce qui suit les problèmes posés au niveau des techni-
ques bactk-iologiques mises en couvre, quant à l’isolement et l’identification
de ces germes,
MATERIEL ET METHODES
A - MATERI EL
1°) - Les prélévements
- Etude de. Fortage
- - - - - - - - - - w-w- -
El le est effectuée en 1981 et 1982 par DOUTRE (2 ; 3) à partir d’or-
. . . / . . .
-2-
genes prélevés sur animaux sains, moutons et chèvres, à I ‘abattoir de Dakar. Pour
chaque expèce ont été examinés :
- 100 fragments de parenchyme pulmonaire
- 100 fragments de muqueuse tracheale
- 200 fragments de muqueuse laryngienne
- 100 fragments
de muqueuse sinusale
- Examen de matériel cathologigue
-----1----e--------
-w---w - mm
l f s’agit essentiel lement de pownons atteints de pneumonie
à divers stade d’évolution. En particulier, i l a été exami né un poumon hitpat i se
prélevé sur un mouton mort au cours d’une expérience d’ingestion de tourteau
d’arachide contaminée par I’aflatoxine pour suivre et dépister In toxine
d~AspergZZ2u.s flavus dans les résidus de viande (6).
2O) - Les mi 1 Ieux de cultures
Les Mycop I asmes,
bac-t&l es sans paroi, exi gent des candi t i ons
particul iêres de culture. Le grand nombre de mi lieux de culture prScon.i& en
atteste.
Aussi, est-i I judicieux druti liser en para1 Ièle plusieurs d’entre eux (41.
Les mi lieux testés et uti lisés à Dakar sont au nombre de 5 :
- Milieu HIB (liquide et solide)
Heart Infusion Broth Difco : 25 g
Neopeptone Difco :
2,5 9
Bacto-cas i tone D i fco :
295 9
Glucose :
2
9
Eau disti I lée :
700 ml
. . . / . . .
-3-
Extrait de levure fíafche à 25 p 100 :
100 ml
Sérum de cheval décctnplémenté :
200 ml
Penici l I ine
200 000 U.I.
Acétate de thai 1 iwn à 10 p 100 :
l,25 ml
Agar N&bie Di fco (pour mi I ieu sol ide)
10 9
PH : 7,6
- Boul i ion tryptose pénici 1 l ine (DTP) ou mi f ieu PPLD
Bacto-t ryptose :
20 9
GI ucose :
29
NaC I
c-l
Phosphate di sod i que
2,5 9
Extr&t t de levure Difco 5 g
Eau disti I lée :
1 000 ml
Pénici I line :
1 0 0 0 U.I.
Serwn de cheval
100 ml
.
PH : 7,5 - 7,6
- Mitfeu d e Hayflick m o d i f i é
Bacto PPLO Bt-0th D;ifco
175 ml
sérum de cheval
50 ml
Extrait de levure fratche
25 mi
à 15 %
PH : 7,O - 7,8
Penlct I line ou acétate de i-bal iiun sont uii lises ou non en fonction
des préoccupations d’isolement ou d’entretien.
. . . / l . .
-4-
- Mi I ieu DE (IEMVT)
Bacio PPLO broth. Difco
21 9
Bacto Tryptan
10 9
G i ucose
f 9
Bacto Yeast extra-t
59
Eau distl l lée
700 ml
Pui s ajouter : extrait de Levure fraîche 25 %
100 ml
serum de cheval
200 ml
PH : 7,6 - 7,8
- Ml lieu A.C, Dow F 38
Brain Reart infusion broth
14,8 9
Lactalbumine hydrolysat Difco
29
Bacto yeast extract Difco
29
ADN
OPOl 9
Solution de Hanks
200 ml
Eau d4mln6ral fs6e
200 ml
Serum de cheval ou de chèvre
100 ml
B - METHODES
Dans le cadre de I'&ude du portage, le milieu solide (HIB) coulé en
boite de Petri est directement ensemencé par appl icatlon à partir des fragments
d'organes prélevés, puis incube en atmosphère enrichie en CO2$
Le clonage est effectué en BTP (ou milieu PPLO) après une semaine de
culture à 37OC.
. . . / . . .
.
-5-
Bien que preconisé,
I ‘acétate de l-ha f I l um n’a pas &l-é u-t! I isé au cours
de cette etude ; 1 I I ‘a par contre e-té pour le pounon hépatf s& pre levé sur le
cadavre du mouton soumis 5 l’ingestion d’aflatoxine (6).
Les souches de mycoplasmes isolées etai en-t envoyées pour diagnose
d’espèces au laboratoire Pierre PERREAU de 1’1 .E.M.V.T. 8 Maisons-Alfort en
France. Ce travaf
1 met en oeuvre le protocole d’étude suivant : morphologie,
étude des caractères culturaux et biochimlques; sérologie à 1 laide d’anti-sérums
de reference, ana I yse electrophorodque.
Les trois autres mi I ieux (tiayf i ick modifie ; DE et M F38) sont aussi
test& pour I ‘isolement et surtout pour I ‘entretien des souches sauvages ou
de coi lection.
RESULTBTS
I*l - Isolement de Mycoplasma arghini
C’est la seule especo de mycop lasme mise en évidence, aussi bien
à partir des prélèvements destin& à l’étude du portage que sur la quasi tota-
l i té des Foumons
atteints de pneumonie (2 ; 3).
.*. /
. . .
-6-
El le repond aux caract&res suivants :
résistance à la digltoninc : +
‘If i fms and spots” : -
hydrolyse du g ucose : -
I
hydrotyse d& + àrginine : +
Phosphatase : -
pourvoi protk2lytique : -
t-Eduction du chlorure de t&trazol ium : O/+ (aérobie/anaérobfe)
La sérologie et l’analyse &lectrophw&iques donnent un pr0fi.i. identique
à celui obtenu avec la souche de &fércnce G230 de M. arghini,
La répat-tltion des iscplements s’est révélée fonction de l’espèce animale
prélevée (ovine ou caprine) et du niveau de prélèvement sur le tractu- respi-
ratoire. DOUTRE (2, 3) a obtenu les résultats suivants :
Espéces
Sinus
Larynx
Trachée
Parenchyme
pu Imonai re
Tota I
Ovine
30
Capri ne
1
1
27) - Isotement de MucovZasrna ovitmemoniae
Ce mycoplasme est isolé une seule fois, 21 partir du poumon hépatisé
.’ .provenant du mouton soumis à I ‘ingestion d’aliment contaminé par I ‘aflatoxine (6)
Cette souche sénégalaise de M. ovipneumoniae montre une tégère différence d’avec
.a. /.
. .
-7-
la souche de référence Y-98 par la luxuriance de sa culture en boul Ilun.
El les sont identiques par ai I leurs, pour les autres caract6res qui sont :
. croissance (notée de 0 à 4+) : 2+
aspect des coAonies
: type M. ovipnewnoniae,
petite colonie
l
à centre diffus, vacuolée et granuleuse
. sensibilité à la digltonine : + (9 mm)
. hydrolyse du glucose : - (après 12 jours)
. réduction du chlorure de tétrazoiium : -/2+ (aérobie/anaérobie)
. phosphatases : -
. digestlon du sérum coagulé : -
. tests d’inhibition de croissance
- sérum anti -M. ovipnewnoniae Y-98 : +6 mm(neta)
- sérum anti -MycopZasma sp. Fg 50
Mycoplasma
rp. F38, MycopZusma mycoides subsp. mycoides
SC 10114, MycopZasma mycoides subsp. capri Pg3, Mycoplasma
bovirhinis Pg43, MycopZasma mgcoides subsp. mycoides LC Y-(ha-t,
MycopZasma capticoZwn C. Kid : - (tous négati fs 1
. Immunof luorescence directe sur boul I Ion de culture :
sérum témoin négatif
- anti F 38
- anti-D 3
- anti+j 50
- anti-Pg 3
- antf VC 2 (M ovipnewnott2ael
: 3 à 4+
. analyse électrophorktique
: le sch6ma de l ‘antigène de la
souche sénegalaise montre un profi I très proche de celul obtenu à partir de
l’antigène M ÛuipnewnonSae Y-98.
.*. /
. . .
-8-
M a@nZnS n’a pas été mis en évidence dans ce prélèvement.
3’) - Qualité des cultures pour les differents milieux
h&coplasma arg&<ni pousse de façon satisfaisante sur
tous 1 es types de mi t f eux expBriment&s,
dans un délai de 2 à 4 jours après !a
mise en culture en mi lieu liquide se caractérisant par une croissance que l’on
qua Ii fiera de moyenne (par rapport à la croissance l uxuri ante de M. mycoides
mycoides LC 1. M. ouipnemon~ae
se révèle beaucoup p I us exigeant quant à I a
qua1 ii-é du mi I ieu de culture , ne donnant de résultats intéressants pour les
milieux testés que pour le milieu de HayTIickmodifte sur lequel sa croissance
reste cependant lente et peu abondante.
DISCUSSIONS
la) - Mi lieux de culture
L’isolement,ou I ‘entretien des mycopiasmes pose le délicat prl
problème de choix du mi I ieu de culture adéquat. Ces ml l i eux doivent nécessai re-
ment contenir un substrat de base constitué par un extrait de viande ou une
peptone ou les deux, un extrait de levure de bière (frais, de préférence à celui
du commerce ), du sérun (de cheval, boeuf, mouton, porc, lapin, etc.. .), des
inhibiteurs bactériens (pénicilflne, acétate de thaeilun). La réussite des
cultures dépend de la qualité de ces constituants : qualité de l’eau démi&-
tra I isée ut-i I isée paur préparer ces mi I i eux, qua1 ii-é du sérum qui ne doit pas
contenir d’anticorps inhibant les mycoplasmes.L’origine de I ‘agar n’est pas
sans importance,
i a gélose OXOID
permettant une mel l I cure trot ssance que
la gélose DIFCO pour certaines espbces de mycoplasmes (4).
.;. ./ . .
-9-
La culture des mycoplasmes est encore compliquée par le fait qu’il
n’exista pas un mi I îeu standard unique pour les dlfférentes espaces de
mycopl asmes des Pet i 7s Ruml nants ;
Ii est préconisé i8emploi simultané d’un
mi lieu permettant la croissance de M. sp F38 (A.CI, d’un mi lieu permettant la
croissance de M. &pnezunon$ae (mi lieu de Hayf lick modifié) et d’un troisième
mt lieu type mi lieu DE.
2*1 - Etude du portage de mycoplasmes
La trachée et le parenchyme pulmonatre apparaissent comme stéri les
et nous remarquons avec DOUTRE (2, 3) que tout se passe comme si le portage
normai , c’est-à-dire la croissance des micro-organismes sans que n’apparaissent
des téslons chez l’animal, allait décroissant d’amont en aval au niveau des
voies resplratoires supérieures pour s’annuler à partir du Iarynx ; ce serait
le résultat de la mise en oeuvre d’un système immunitaire local efficace (2, 3).
La fréquence du portage de M. arg%nini est très inférieure chez la chèvre:
par rapport au mouton,
M. arg$nZni est aussi isolé de lésions pneumoniques du mouton (très
frequent) e t d e l a chèvrè (race1 (2, 3).
Le passage chez 1 ‘animai, de l’état porteur sain à celui de maladé
pneumonique, se ferait à la faveur d’une dépression du système immunltai re
local du fait de facteurs stressants primaires. Ces facteurs sont, selon DOUTRE
2, 31, la peste des Petits Ruminants pour les caprins (donc agents d’ordre
virai ou infectieux) et le mauvais état physiologique pour les ovins (du fait
de parasitisme d’une mauvaise alimentation, du froid, etc...). Cette présenta-
tion dichotomique expliquerait les pneumonies des Petits Rwoiants (2 ; 3).
1.. / .**
-lO-
3O 1 - Isolement de M. wipnewnonhc
Ce germe a été isol6 une seule fois, malgré le nombre important
de pourwns pneumon i ques exami ries . II faut noter qu’il a éié isole à la faveur
d’une agression de l’organisme par une mycotoxine (6) ; i 1 serait alors un
germe de sortle, ce qui supposerait un portage prealable au niveau du trsctus
respiratoire. Malheureusement, 1 ‘opportunité ne nous a pas été donnée d’effec-
tuer une recherche systématique de M. ovipnemoniae à partir d’écouvi 1 lonnages
nasaux pratiqués chez tous les animaux concernés par l’experience (1).
G. IONAS et al. (5) ont &t-tis Itidée que la colonisation secondaire du
parenchyme pulmonaire se ferait à partir d’un portage nasal préalable du germe
sans pour autant que celui-ci fasse partie intégrante de la flore normale ;
du reste cette apti tude n’est pas reconnue à toutes les souches de M. ovipneu-
moniae.
I I est poss ble que I’aflatoxine ait eu une action favorisante sur la
colonisation du tractus respiratoire par M. ovipnounoniae.
De plus, i’usage de I1acétate de thalliun pourrait avoir eu un effet
favorable sur son développement in vitro, soit en modulant If interf&ence
microbienne en faveur de M. cwipnewnoniae
au détrlment de germes saprophytes,
soit en minimisant un eventuel effet inhibiteur de la pénici I line G parfois
observé sur certaines espèces de mycoplasmes.
Quant au rôle exact joué par M. otipnezunoniae dans I’apparitlon des
symptômes observés, 1 ‘étude du pouvoir patho@ns
par la reproduction expé-
rimentale de la maladie chez les Petits Ruminants est en cours ; elle implique
I a taxi ne dlAspergiZZus comme facteur stressant.
. . . / .*.
-11-
Les foyers de “pasteurel loses” de plus en plus signales à travers le
pays incitent à plus dVattention quant à l’existence probable de Mgcaplasma spI
F 38 agent spécifique de la pieuropneumonie certtagleuse.caprine. Lluti 1 isation
syst6matique d’un milieu favorable à son isolement est faite dans cette optique.
+ *
.
B I B L I O G R A P H I E
1 - A L L E Y (M.R.), QOUILAN (J.R.1 a n d CLARKE (J.K.1 - The préva f ence of. F4~coptasma
ovipnewnciniae and MycopZasma arg2nkni 1 n t he res p i ratory tract of
s h e e p , W . Z . V e t . J . , 1 9 7 5 , 2 3 : 137-141
-
2 - WUTRE (M.P. 1 e t P E R R E A U (P. 1 - L e p o r t a g e d e Pas+eureZZa sp. et de
MycopZusma arg-iniz~
chez les moutons sa! ns BU Sénéga 1.
R e v . E l e v . Med. vét. P a y s t r o p . , 1981, 3 4 (41 : 3 6 5 - 3 6 8
-
3 - OOUTRE (M.P. 1 e t P E R R E A U (P. 1 - L e p o r t a g e d e Pustezcre& sp, e t d e
Mycopikwnu aqp%n~ chez la chèvre au Sénégal.
R e v , Elev. M é d . II&I-. P a y s trop.,1983, 3 6 (11 : Il-14
-
4- I.E.M.V.T./C.I.R.A.O.
- Mycoplasmes et Mycoplasmoses des Ruminants.
D o c u m e n t s t e c h n i q u e s ; 1 0 , r u e P i e r r e C u r i e , 9 4 7 0 4 - M a i s o n s - A Ifor-t,
j u i n 1 9 8 5 , 8 2 p .
5- IONAS (G.1, MEW (A.J. 1, ALLEY (M.R.1, CLARKE (J.K.1, ROBINSON (A.J. 1 and
MARSHALL (R.B. ) - Colonizatfon
o f t h e r e s p i r a t o r y i r a c t o f l a r u b s
by st ral ns of Mycoplasma ovipneumoniae
V e t e r l n a r y M i c r o b i o t o g y , Vol. 1 0 , NO 6 , Dkxnbre 1 9 8 5 ; 5 3 3 - 5 3 9
6 - K O N T E (M. 1 e t BREARD (A.1 - Presni w- I SO I ement de MycopLmm wipneumonZae
au Sénéga 1.
A paraTtre d a n s R e v . E l e v . Med. v&. P a y s t r o p . , 1 9 8 7 , 4 0 (2)
-
7- L E J A N (C. 1, S O W ( A . D . 1 e t C I S S E (T.? - R a p p o r t f i n a l d u s e r v i c e d e V i r o l o g i e
du CNERV - R é s e a u d ’ é t u d e ctes pnemopathies d e s P e t i t s R u m i n a n t s
Mauri tani e - Octobre 1986 non pub i i é.