KI3?I:BLIQUE DU SENEGAL ------__ - XlINISTERE DU...
KI3?I:BLIQUE DU SENEGAL
------__ -
XlINISTERE DU DEVELOPPEMENT
RURAL ET DE L’HYDRAULIQUE
---------
INS-I’ITUT SENEGALAIS DE RECHERCHES
AGRICOLES (I.S.R.A.)
----------
DIRECTION DES RECHERCHES SUR LES
PRODUCTIONS ET LA SANTE ANIMALES
------___-
LABORATOIRE NATIONAL DE L’ELEVAGE
ET DE RECHERCHES VETERINAIRES
DAKAR-HANN
CONVENTION AIEMSRA N” 4975/NL RELATIVE A
L’AMELIORATION DU DIAGNOSTIC ET DE LA
SURVEILLANCE DES TRYPANOSOMOSES ET
AUTRES MALADIES PARASfTAl.RES DU BETAIL
AFRICAIN PAR L’USAGE DE METHODES
SERO-IMMUNOLOGIQUES
RAPPORT FINAL SUR LES TRAVAUX REALISES
AU SENEGAL DE 1988 A 1992
A. DIAITE, M. SEYE, G. VASSILIADES, A. MANE et Mme T. NDIAYE
Ref.: 045/PATHO. Ahlhl.
Décembre 1992
APPLICATION DE LA TECHNIQUE ELISA DE DETECTION DES
ANTIGENES A L’ETUDE DE SOUCHES DE TRYPANOSOMES APPAREMMENT
CHIMIORESISTANTES AU SENEGAL
Par
A. DIAITE, M. SEYE, G. VASSILIADES, A. MANE et hlme T. NDIAYE
RESUME
La technique ELISA de détection d’antigènes sériques de ~~FJu~xx.w~~~ &KW’
kwce~ X cuuso/e.s~ et 27 W’KW a été utlilisée dans la zone centre-Sud du Sénégal infestée de
glossines, dans une étude comportant deux volets: un premier volet visant l’implantation de
cette technique à l’Institut Sénégalais de Recherches Agricoles (ISRA) ainsi que la validation
du test: puis un second volet portant sur l’utilisation de cette technique pour la détection de
souches de trypanosomes apparemment chimiorésistantes, chez des bovins nk,kw’
(croisement Zébu-Ndama).
Les résultats obtenus ici à I’ISRA sont satisfaisants et sont en général concordants
avec ceux des autres membres du réseau africain de validation de la technique ELISA-
Antigène. En conséquence, le test a été reconnu comme méthode fiable de diagnostic des
trypanosomoses animales en association cependant avec des méthodes déjà existantes.
Dans l’étude la chimiorésistance consécutive à la validation, plus de 1000 sérums de
bovins Diakoré et autant de tubes à hématocrite ont été examinés après traitement des bovins
concernés au Bérénil, au Samorin et/ou à 1’Ethidium. En même temps, une centaine de sérums
témoins récoltés sur des Zébus du Nord Sénegal indemne de glossines ont subi les épreuves
sérologiques. Les résultats semblent indiquer que certaines souches de trypanosomes de la
région centre-Sud sont chimiorésistantes. Des essais en laboratoire sur des animaux inoculés
avec ces souches sont cependant nécessaires pour confirmer ces résultats.
MOTS-C,LES
Trypanosomoses - ELISA - Chimiorésistance - Bovins - Sénégal
APPLICATION OF THE ANTIGEN-ELISA TECHNIQUE FOR THE DETECTION
OF APPARENT
DRUGRESISTANT TRYPANOSOME STRAINS IN SENEGAL
B y:
A. DAITE, M. SEYE, G. VASSILIADFS, A. MANE and T. NDIAYE
SUMMARY
The Antigen-ELISA technique for the detection af trypanosomal antigens in serum
was used in a two-part study in the south of the central region of Senegal (Sokone region)
which is infested by tsetse flics. The first part consisted of implementing the Antigen-ELISA
method at the Senegalese Institute for Agricultural Researc.h (ISRA) and the validation of the
test. In the second part, the technique was used to detect apparently drugresistant
trypanosome strains.
The Antigen-ELISA tehnique has been succesfully implemented at the Institute. It is
now considered, in association with other methods, as a good diagnostic technique after the
synthesis of a11 results obtained through an African network in which Senegal was one of the
contries involved.
In the drugresistance study, more than 1000 bovine sera and as many buffy coats
were examinated in the tsetse-infested area while a hundred of samples were taken from Zebu
cattle living in two tsetse-free areas in the Northen part of Senegal. The animals of the infested
zone were treated with Berenil, then with Samorin or Ethidium according to a defined
protocol. The results obtained seem to indicate the exixtence of drugresistant trypanosome
strains, but more investigations, including subinoculation of animals and laboratory triais are
needed to confirm these findings
KEY-WORDS
Trypanosomosis - ELISA - Drugresistance - Cattle - Senegal.
-l-
AI’PLICA’I’ION DE LA TECHNIQUE ELISA DE DE’l’EC’i’ION DES AN’I’IGENES A
L’ETUDE DE SOUCHES DE TRYPANOSOMES APPAREMENT
CHIMIORESISTANTES AU SENEGAL
Par
A. DIAITE*, M. SEYE”, G. VASSILIADES”, A. MANE” et ‘1‘. NDIAYE*
INTRODUCTION
Sur une superficie totale de 196 000 km2, 70 000, soit 36% sont occupés par les
glossines au Sénégal. Les deux espèc.es présentes sont Gfkw$~ p&$ti~kg~~bk~sk et G.
fzxxsfhx subfrzuf3-fika, qui transmettent ici fi;r~pmusofffa brucer’ bufcefi 7: cufzgdefzst et 7:
wkar chez les animaux.
La région de Sokone, située dans le c.entre-sud du pays, est totalement infestée par G.
Mor&“s su&ors$m: et, dans une moindre mesure, par G. p+&g~~b. Les bovins
qui y vivent sont principalement de race Dkkolp (croisement Zébu-Ndama) et possèdent un
degré de trypanotolérance intermédiaire entre la sensibilité du Zébu et la tolérance de la
Ndama (1). Ces D!kkon sont largement utilisés dans la culture attelée ainsi que pour la
production de lait et de viande.
Les éleveurs locaux, très avertis en matière trypanosomose animale, font constamment
appel aux agents vétérinaires pour des traitements trypanocides. L’utilisation intensive des
deux principaux trypanocides vétérinaires, le Bérénil et le Samorin, depuis plusieurs
décennies, a rendu ces deux médicaments apparemment moins efficaces aujourd’hui dans
cette zone. Les agents vétérinaires locaux, en effet, se plaignent de plus en plus de traitements
infructueux,
Il est donc apparu nécessaire de mener des investigations pour savoir s’il s’agissait de
souches de trypanosomes chimiorésistantes et, le cas échéant, évaluer le degré de la
résistance, son étendue dans la zone, et enfin définir une méthode de lutte efficace.
De telles investigations requièrent des méthodes de diagnostic performantes, qui
optimisent les chances de détection des trypanosomes lorsqu’ils sont présents chez l’animal
examiné. Or les techniques classiques de diagnostic, bien qu’ayant des avantages certains, ne
sont pas toujours suffisamment sensibles et peuvent donner de faux résultats négatifs, surtout
dans les cas de trypanosomose chronique. Pour remédier à cela, il est indiqué d’associer
autant que possible deux ou plusieurs techniques reconnues complémentaires. Dans la
présente situation, l’emploi simultané de la méthode de lecture de l’interphase (BCT) et de la
technique ELISA de clétection de antigènes nous a semblé approprié.
L’étude a comporté deux phases:
- une première phase portant sur l’implantation de la technique ELISA-Antigène à
l’Institut Sénégalais de Recherches Agricoles (ISRA) et la validation du test comme moyen
fiable de diagnostic de trypanosomoses bovines:
- et dans une seconde phase, l’utilisation de cette technique pour la détection
éventuelle de souches de trypanosomes chimiorésistantes.
_____------------------------------
+ : Service de Parasitologie, ISRNLNERV, BP 2057, Dakar, Sénégal.
-2-
l - MAKKIIIL ET METHODES
1.1 - Phase d’implantation et dc validation
1.1.1 - Animaux cibles
Quarante bovins Dr;zk--(7îc de la zone de Sokone ont été retenus et identifiés par pose de
boucles numérotées à l’oreille. Ces animaux appartiennent à deux troupeaux de deux villages
situes à côté de forêts classées infestées par G: ~KYXZ&ZW subnlu~~&z~ Parallèlement, 95
sérums témoins ont été récoltés sur des bovins Zébus vivant à Dahra et Podor, localités
situées dans le Nord du Sénégal indemne de glossines ,
1.1.2 - Prélèvements - Analyses - Traitements
Sur chacun de ces 40 bovins de la zone à glossines, les prélèvements et analyses
suivants ont été effectués entre décembre 1988 et juin 1989, à raison d’une visite par mois,
sauf au mois de mai où la visite n’a pas pu se faire.
- récolte de sang périphérique à l’oreille (deux tubes capillaires par animal),
centrifugation sur place et lecture immédiate du PCV et de l’interphase(BCT);
- confection de frottis de sang, coloration et lecture au laboratoire;
- collecte de sang jugulaire sur vacutainer sec, centrifugation, récolte du
sérum et adjonction de O,Ol% d’azide de Sodium; conservation à -20°C jusqu’à l’emploi:
- épreuve ELISA de détection d’antigènes sériques de 1 brucei ?Y
cc?~~ufe~s~ et ?Y VYIGY avec les réactifs et le protocole du trousseau FAOIAIEA./ILRAD;
- prélèvement de selles faîches tous les trois mois et coprologie au
laboratoire:
- traitement au Bérénil, 7,0 mg/kg, I.M., des bovins positifs à ~y~zusu~,~~;
- traitement anthelminthique des bovins positifs en coprologie;
- bain anti-tiques des animaux cibles et non cibles des troupeaux suivis, par
suite du diagnostic d’ Ekk~~~ bnrk chez certains bovins: traitement de ces derniers à la
Terramycine Longue Action (TLA).
-3
1.2 - Phase d’application a l’étude de la chimiorésistance
En première partie de cette phase, 26 parmi les 40 bovins de la phase de validation ont
été à nouveau retenus. Ainsi que les 95 Zébus témoins de Dahra et Podor . Cette investigation
a duré 1 an.
En deuxième partie, 211 autres &~~UIP ont été sélectionnés dans 5 troupeaux de
Sokone et numérotés à l’oreille. Ces animaux comportaient toutes les tranches d’àge et étaient
composés de femelles, de mâles entiers et de mâles castrés. Le suivi post-thérapeutique a duré
ici 5 mois.
Les traitements trypanocides effectués au début de chacune de ces deux parties
figurent aux tableaux 1 et 2.
Les trois premières visites pour chaque partie ont eu lieu à 15 jours d’intervalle; les
visites suivantes étaient espacées de 30 jours.
Les récoltes de sang et les techniques d’analyse sont celles de la première phase, sauf
qu’ici le benzoate de Sodium a été employé à la place de l’azide comme préservatif des
sérums. En outre, il n’y a pas eu cette fois de prélèvements de selles ni de frottis de sang.
II - RESULTATS -DISCUSSION
2.1 - Implantation - Validation
La technique BCT et les épreuves ELISA-Ag ont donné des résultats différents: sur un
total de 72 cas de trypanosomose, 2 sont trouvées par les cieux techniques, 5 par le BCT seul
et 65 par I’ELISA seule.
En outre, I’ELISA a détecté 1,5 % de cas de 7: ~KXY~ 9.7 % de 7Y VY&,~ alors
qu’aucune de ces deux espèces n’a été visualisé au BCT (tableau 3 et 4). Cependant, parmi les
95 bovins prélevés en zone indemne, 1 seul a été antigénémique à ?Y U’KU, une espèce de
trypanosome pouvant être transmise par d’autres insectes que les glossines.
Ces résultats nous ont semblé traduire une bonne spécificité de la technique ELISA-
Afi?
En définitive, les deux techniques nous sont apparues complémentaires et leur
utilisation combinée est fortement souhaitable pour obtenir des résultats plus complets sur les
infections trypanosomiennes dans une zone donnée (2).
Des résultats et conclusions similaires ont du resle été trouvés au niveau du réseau
africain de validation du test sérologique.
-4-
2.2 - Etude de la chimiorésistance
2.2.1 - Première partie
La tendance constatée en phase de validation a été retrouvée ici: la sensibilité de la
technique ELISA-Ag est au moins cinq fois supérieure à celle du BCT: sur 298 prélèvements,
79 cas de trypanosomose ont été diagnostiqués; 14 seulement relevaient du BCT contre 72
pour I’ELISA-Ag (tableau 5).
S’agissant de la spécificité du test sérologique, nous avons noté, comme dans la
première phase, que l’ensemble des cas de î: bruc&et de z F~ÜY ont été trouvés uniquement
en ELISA. Il fallait donc établir que ces cas représentaient de réelles infections
trypanosomiennes. A cet effet, tous les sérums positifs en ELISA mais négatifs au BCT ont
été envoyés au Centre International de la Trypanotolérance en Gambie pour la recherche
d’anticorps anti-trypanosomes. Par la technique d’Immunofluorescence
indirecte, ils se sont
tous révélés positifs, y compris le sérum de la zone indemne antigénémique à X ~&XX
Pendant ce temps, un lot de 39 autres sérums récoltés sur des Zébus de Podor (région Nord
du Sénégal sans glossines) était séronégatif à 100 % en ELISA-Ag. De tout cela nous avons
conclu que le test était effectivement spécifique. Et que les Dkko~ prélevés pour ce travail
possèdaient sans doute un bon degré de trypanololérance,
qui leur permet de maintenir les
souches locales de ?Y ~*VA à des niveaux de parasitémie inférieurs au seuil de détection. Et
ce d’autant plus que ?Y W’KÜY a été visualisé chez des animaux trypanosensibles
de la zone
(chevaux et ânes), prouvant ainsi 1’existenc.e effective de 7: W’V~ dans la région. Quant à
X bruc~, sa fréquente localisation cérébrale explique certainement la difficulté à le visualiser
dans le sang.
Concernant les premiers essais de détection de souches de trypanosomes
chimiorésistantes, les résultats ont montré que pour YY druce. et jr cofgok~.~t, le traitement au
Bérénil ou au Samorin était généralement efficace: après l’administration du Bérénil, tous les
animaux suivis étaient négatifs au BCT dès la visite suivante; après traitement au Samorin, ils
sont restés négatifs au BCT et en ELISA-Ag pendant 5 mois pour z co~gok~~~ et quasi-
définitivement pour I: brucer’(tableau 5).
Mais des cas de séroposilivilé à z w’w persistaient (tableau 5). Notamment le bovin
no 87, qui est resté en permanence antigénémique à ZY W’W,J malgré tous les traitements
trypanocides. Cet animal est finalement mort, avec des symptomes cérébraux selon l’éleveur
propriétaire. Il s’agit là, probablement, d’une souche chimiorésistante. Des études plus
poussées étaient toutefois nécessaires pour se prononcer sur la résistance et, en cas de
confirmation, en connaitre le degré et l’étendue pour pouvoir définir des moyens de lutte.
C’est l’objet de la seconde partie de cette phase.
- 5.-
2.2.2 - Deuxième partie
Les résultats d’ensemble des examens parasitologiques et des épreuves sérologiques
sont présentés au tableau 6. D’une manière générale, le nombre de cas de trypanosomose a
régulièrement baisse après les traitements trypanocides. Cependant, pour 7: co~gok~us~ et
T
W’FGZY, des cas de séropositivité post-thérapeutique ont été relevés.
En outre, des différences importantes ont été notées selon que les animaux ont reçu
l’un ou l’autre des trypanocides utilisés (tableau 7). Dans le lot traité au Bérénil seul et une
seule fois, les infections ont chuté à la visite effectuée 15 jours après ce traitement. Par la suite
elles ont connu une hausse et sont restées très proches de leur niveau d’avant traitement. Cela
traduit sans doute l’activité essentiellement curative du Bérénil. Une évolution différente est
notée dans le lot traité au Samorin: le nombre d’infections post-thérapeutiques a baissé
significativement et n’a jamais regagné son niveau initial. Il en est de même dans le lot traité à
I’Ethidium. L’effet prophylactique de ces deux médicaments semble donc évident ici.
Par ailleurs et concernant l’ensemble des trois lots, on constate que les infections ont
été cette fois décelées aussi bien en ELISA-Ag qu’au BCT, avec une sensibilité plus élevée de
I’ELISA. Cela semble confirmer l’hypothèse que nous avons émise pour expliquer les faux
résultats négatifs du BCT dans la phase précédente. Et cela signifierait qu’au sein d’une race
animale réputée trypanotolérante, l’aptitude à contrôler la parasitémie se manifestait mieux
chez certains individus que chez d’autres.
En dehors de ces tendances générales, on relève des cas particuliers, qui sont
intéressants du point de vue de la chimiorésistance. Le tableau 8 montre ces cas: le bovin no
554 du lot Bérénil est resté constamment séropositif avec X’ CGYJ~O~XS~ et r bruce, le no 514
quasi-constamment avec. ?1 wiw, et le no 544 avec Z co~~oZ’~s~. Et il faut signaler que le no
5 14 est du même troupeau que le bovin ne 87 qui avait montré une antigénémie persistante à
X tiw, et que les bovins no 544 et 554 appartiennent à un même troupeau d’un autre village.
De l’ensemble de ces résultats et observations, se dégage une forte présomption de
l’existence effective de souches chimiorésistantes de trypanosomes dans cette zone.
S’agissant de l’effet de la chimiothérapie et de la chimioprophylaxie sur l’hématocrite
des animaux suivis, la tendance est à la hausse du PCV après le traitement. Ainsi, les bovins
qui avaient les moyennes les plus faibles avant traitement ont finalement rejoint le niveau des
autres à la dernière visite(tableau 9).
-6-
En conclusion, on peut dire du lest ELISA-Ag qu’il a une sensibilité élevée et une
spécificité satisfaisante. Et que ses performances paraissent meilleures dans les infections
trypanosomiennes chroniques que dans les cas aigus. Pour ces derniers, la technique du BCT
s’est montrée supérieure. L’utilisation combinée de ces deux méthodes, accompagnée d’une
analyse statistique des données de l’hématocrite, est à notre avis une bonne option pour avoir
des résultats plus précis.
Une option qui nous semble particulièrement indiquée dans les régions où l’on
soupçonne l’existence de souches chirniorésistantes de trypanosomes. Mais les résultats
devront être coinfirmés par des travaux en laboratoire sur des souches isolées à partir des
animaux des régions concernées. Signalons brièvement le premier essai que nous avons
réalisé à ce sujet. Deux moutons Peulh du Sahel (race trypanosensible) achetés en zone
indemne de glossines et négatifs tous les deux au BCT, ont été confiés respectivement au
berger du bovin no 5 14 et à celui des bovins 544 et 554. Ces moutons ont séjourné pendant 8
jours dans la zone de Sokone. Ils sont alks tous les jours au pâturage en compagnie des
troupeaux de bovins, pour être en contact quotidien avec les glossines.Les examens
parasitologiques restent encore négatifs, près de deux mois après,
Ces essais d’isolement de souches de trypanosomes se poursuivront ultérieurement
avec un protocole différent. Il s’agira, en résumé, d’obtenirer des isolats de jr F&ZY dans les
villages concernés et de faire des cultures au laboratoire sur petits Ruminants. Le degré de
résistance sera déterminé en élevant progressivement la dose de trypanocide. Un stabilat sera
cryopréservé à chaque étape.
-7-
REMERCIEMENTS
- La Division conjointe FAO/AIEA de Vienne a bien voulu apporter une contribution
financière tout en fournissant le matériel et les réactifs utilisés dans ces investigations, Nous
tenons à la remercier vivement.
- Des éleveurs de la zone de Sokone ont bien voulu mettre leurs animaux à notre
disposition et ont ainsi rendu possible ce travail.Les agents vétérinaires locaux nous ont
également apporté une précieuse assistance. Qu’ils trouvent ici nos sincères remerciements.
-8-
REFERENCES CONSULTEES
1. S. M. TOURE, A. GUEYE, M. SEYE, M.A. BA, et A. MANE -
Expérience de pathologie comparée entre bovins Zébus et Ndama soumis à l’infection
naturelle par des trypanosomes pathogènes.
Re K Ele K Méd Vét. Rys bqu., 1.974 3f (IL?Y3-313
2. A.DIAITE, M. SEYE, A. MANE et T. NDIAYE - Convention AIEAIISRA n”4975/NL
portant sur l’utilisation de la technique ELISA de détection des antigènes dans l’étude de
l’incidence de la trypanosomiase animale en zone d’élevage du Dkku~z (croisement Zébu-
Ndama).
3. V.M. NANTULYA. - Immunological approaches to the control of Animal
‘Trypanosomiasis.
4. V.M. NANTULYA, A.J. MUSOKE, F.R. RURANGIRWA, N. SAIGAR, S.H.
MINJA - Monoclonal antibodies that distinguish T@wzusuma eunguhvse, X’ r&~and z
6mw~
ha.& Inmxmufog~; 158Z !J #2f -431.
5. V.M. NANTULYA, E. BANANA SONGA, R. HAMERS - Detection of circulating
trypanosomal antigens in jpmusuma erwx-infected animals using a jr brwe group-
specific monoclonal antibody.
Trqo. Aliw! Pxaszk, 4U(f 98$k263-266
6. V.M. NANTULYA, K.J. LINDQVIST - Antigen-detection enzyme immunoassays for
the detection of jqxnusuma r,fv~ I’ cunguiivm and jr dwce. infections in cattle.
.7kp. Med Par-asri., 4U (f 98?,l* 267272.
7. V.M. NANTULYA - Trypanosomiasis in domestic animais: the problems of diagnosis.
Xe K Sci UfL 112L Epi~, fYYl? Y(2): 3.S7-36%
8. MURRAY M., P.K. MIJRRAY and W.I.M. McINTYRE - An improved parasitological
tec.hniquc for diagnosis of African trypanosomiasis.
.hns. RC? F,: suc. lrup. ~Va f!&?, 71(1.9.7i.y: .323--.L%:
-9-
Tableau 1 : Traitements trypanocides initiaux en première partie de la phase 2
TRAITSMFXC
LOT
Bérénil IM
Samorin 0,5 mgfkg, IM
No 81 à
90
10,5 mg/kg
15 jours après Bérénil
No100 à 110
10,5 mg/kg
45 jours après Bérénil
Nol11 à 120
7,O mdkg
15 jours après Bérénil
No 91 à lOO*
3,5 mgfkg
15 jours après Bérénil
* Désistement de l'éleveur propriétaire de ces 10 animaux :
données non pris en compte ici.
Tableau 2 : Traitements initiaux en deuxième partie de la 2ème phase
TRAITEMENT
Nombre de
LOT
bovins
Bérénil
Samorin
Ethidium
10,5 mg/kg IM
0,5 mg/kg IM
1,O mg/kg IM
1
107
Visite 1 avant les
prélèvements (A.P.)
2
60
V 1 A.P.
15 jours après
Bérénil
3
44
V 1 A.P.
15 jours après
30 jours après
Bérénil
Samorin
Tableau 3 : Résultats du diagnostic des trypanosomoses par le BCT et par l'ELISA-Ag
en phase d'implantation et de validation
Nombre de cas de :
I
0
Nombre
Technique
d'analyses
.r.^
I
-
- -
- -
I
mm
-m m
I
m. 3
BCT
196
7
7
ELISA-Ag
196
3
22
18
12
10
2
67
COMBINES*
196
3
27
18
12
10
2
72
I
I
I
l
I
I
Tb = T.brucei, Tv = T.viva.x, Tc = T.congolense
* : combinés = résultats positifs du BCT et/ou de l'ELISA-Ag.
r>..
-
_.
_
.1.
-.
Tableau 4 : Evolution du nombre d'infections trypanosomiennes selon les mois de visite et
selon les espèces (phase d'implantation - validation)
Nombre
Nombre de cas de :
Mois
d'analyses
Tb
TC
TV
Tb Tc
TbTv
Tc TV
lb Tc TV
BCT EL
BCT EL
BCT EL
BCT EL
BCT EL
BCT EL
BCT EL
Janvier
40
-
-
1
4
2
3
2
1
Février
40
-
-
- 10
2
1
4
Mars
39
-
-
3
3
1
2
1
Avril
40
3
1
1
7
6
1
Juin
37
-
-
5 4
5
1
1
Total
196
3
7 22
-
19
-
12
-
10
2
Tableau 5 : Chimiorésistance,première partie : Diagnostic par BCT et par ELISA-Ag des trypanosomoses
chez des bovins traités au Bérénil puis au Samorin et suivis pendant 1 an
% positifs avec l'antigène de :
Nombre
%BCT
Visite
d'analyses
positif
Tb
TC
TV
Tb Tc
TbTv
Tc Tv
Tb Tc TV
15 décembre*
26
4
19
12
8
8
30 décembre **
26
4
8
12
4
Janvier
25
12
16
Février
25
12
Mars
15
I
Avril
23
4
NI
Mai
21
19
Juin
21
5
5
5
Juillet
21
5
5
5
Août
22
9
9
9
Septembre
20
25
20
10
Octobre
19
11
16
26
11
5
Novembre
17
29
18
16
Décembre
17
12
12
6
6
* = Animaux traités au Bérénil
** = Traitement au Samorin.
Tableau 6 : Résultats d'ensemble des examens parasitologiques et des épreuves ELISA-Ag pour le diagnostic
des trypanosomoses (chimiorésistance, deuxième partie)
Nombre de cas selon le BCT et/ou l'ELISA-Ag
Visite
Nombre
d'analyses
Tb
TC
TV
Tb/TC
I%/n
TCITV
l%/TC/TV
Total
1
211
3
11
13
4
1
2
34
2
177
2
8
3
2
2
17
3
164
1
6
3
1
1
12
4
175
5
6
2
13
5
156
1
3
6
1
11
Total n
883
5
27
36
11
3
5
87
(%>
(0,6)
(3,O)
(4,l)
(1,2)
CO,31
(0,6)
(9,8)
.”
.,.
-
.-
-
.
..>
Tableau 7 : Résultats comparés et combinés du BCT et de l'ELISA-Ag dans les différents lots traités
(chimiorésistance, deuxième partie)
Nombre de cas dans chaque lot selon BCT et l'ELISA-Ag
Visite
T
l-
Lot Bérénil
Lot Samorin
Lot Ethidium
"Anal.
BCT
ELISA
coMB*
nAnal.
BCI
ELISA
coMB*
"Anal.
BCI
ELISA
cola*
107
60
11
14
44
5
13
73
60
6
6
44
9
87
33
2
3
44
2
4
90
50
2
2
35
1
2
65
56
2
3
35
-*
3
: COMB. = positif au BCT et/ou en ELISA-Ag.
.”
.,.
- .,.m.%-. -
. . . ,
-15-
Tableau 8 : Exemples d'kolution post-thérapeutique de l'antigénémie
(chimiorésistance, deuxième
partie)
Bovin No
554*
514*
544**
Visite
Séropositif avec l'antigène de
1
Tb Tc
T V
TV Tc
2
Tb Tc
3% Tc TV
3
Tb Tc
0
Tb Tc TV
4
Tb Tc
TV
TC
5
Tb Tc
TV
0
c
* = Bovin du lot traité au Bérénil
* = Bovin du lot Samorin
k-k*
= Bovin du lot Ethidium
0 = Non examiné.
-16-
------__ -
XlINISTERE DU DEVELOPPEMENT
RURAL ET DE L’HYDRAULIQUE
---------
INS-I’ITUT SENEGALAIS DE RECHERCHES
AGRICOLES (I.S.R.A.)
----------
DIRECTION DES RECHERCHES SUR LES
PRODUCTIONS ET LA SANTE ANIMALES
------___-
LABORATOIRE NATIONAL DE L’ELEVAGE
ET DE RECHERCHES VETERINAIRES
DAKAR-HANN
CONVENTION AIEMSRA N” 4975/NL RELATIVE A
L’AMELIORATION DU DIAGNOSTIC ET DE LA
SURVEILLANCE DES TRYPANOSOMOSES ET
AUTRES MALADIES PARASfTAl.RES DU BETAIL
AFRICAIN PAR L’USAGE DE METHODES
SERO-IMMUNOLOGIQUES
RAPPORT FINAL SUR LES TRAVAUX REALISES
AU SENEGAL DE 1988 A 1992
A. DIAITE, M. SEYE, G. VASSILIADES, A. MANE et Mme T. NDIAYE
Ref.: 045/PATHO. Ahlhl.
Décembre 1992
APPLICATION DE LA TECHNIQUE ELISA DE DETECTION DES
ANTIGENES A L’ETUDE DE SOUCHES DE TRYPANOSOMES APPAREMMENT
CHIMIORESISTANTES AU SENEGAL
Par
A. DIAITE, M. SEYE, G. VASSILIADES, A. MANE et hlme T. NDIAYE
RESUME
La technique ELISA de détection d’antigènes sériques de ~~FJu~xx.w~~~ &KW’
kwce~ X cuuso/e.s~ et 27 W’KW a été utlilisée dans la zone centre-Sud du Sénégal infestée de
glossines, dans une étude comportant deux volets: un premier volet visant l’implantation de
cette technique à l’Institut Sénégalais de Recherches Agricoles (ISRA) ainsi que la validation
du test: puis un second volet portant sur l’utilisation de cette technique pour la détection de
souches de trypanosomes apparemment chimiorésistantes, chez des bovins nk,kw’
(croisement Zébu-Ndama).
Les résultats obtenus ici à I’ISRA sont satisfaisants et sont en général concordants
avec ceux des autres membres du réseau africain de validation de la technique ELISA-
Antigène. En conséquence, le test a été reconnu comme méthode fiable de diagnostic des
trypanosomoses animales en association cependant avec des méthodes déjà existantes.
Dans l’étude la chimiorésistance consécutive à la validation, plus de 1000 sérums de
bovins Diakoré et autant de tubes à hématocrite ont été examinés après traitement des bovins
concernés au Bérénil, au Samorin et/ou à 1’Ethidium. En même temps, une centaine de sérums
témoins récoltés sur des Zébus du Nord Sénegal indemne de glossines ont subi les épreuves
sérologiques. Les résultats semblent indiquer que certaines souches de trypanosomes de la
région centre-Sud sont chimiorésistantes. Des essais en laboratoire sur des animaux inoculés
avec ces souches sont cependant nécessaires pour confirmer ces résultats.
MOTS-C,LES
Trypanosomoses - ELISA - Chimiorésistance - Bovins - Sénégal
APPLICATION OF THE ANTIGEN-ELISA TECHNIQUE FOR THE DETECTION
OF APPARENT
DRUGRESISTANT TRYPANOSOME STRAINS IN SENEGAL
B y:
A. DAITE, M. SEYE, G. VASSILIADFS, A. MANE and T. NDIAYE
SUMMARY
The Antigen-ELISA technique for the detection af trypanosomal antigens in serum
was used in a two-part study in the south of the central region of Senegal (Sokone region)
which is infested by tsetse flics. The first part consisted of implementing the Antigen-ELISA
method at the Senegalese Institute for Agricultural Researc.h (ISRA) and the validation of the
test. In the second part, the technique was used to detect apparently drugresistant
trypanosome strains.
The Antigen-ELISA tehnique has been succesfully implemented at the Institute. It is
now considered, in association with other methods, as a good diagnostic technique after the
synthesis of a11 results obtained through an African network in which Senegal was one of the
contries involved.
In the drugresistance study, more than 1000 bovine sera and as many buffy coats
were examinated in the tsetse-infested area while a hundred of samples were taken from Zebu
cattle living in two tsetse-free areas in the Northen part of Senegal. The animals of the infested
zone were treated with Berenil, then with Samorin or Ethidium according to a defined
protocol. The results obtained seem to indicate the exixtence of drugresistant trypanosome
strains, but more investigations, including subinoculation of animals and laboratory triais are
needed to confirm these findings
KEY-WORDS
Trypanosomosis - ELISA - Drugresistance - Cattle - Senegal.
-l-
AI’PLICA’I’ION DE LA TECHNIQUE ELISA DE DE’l’EC’i’ION DES AN’I’IGENES A
L’ETUDE DE SOUCHES DE TRYPANOSOMES APPAREMENT
CHIMIORESISTANTES AU SENEGAL
Par
A. DIAITE*, M. SEYE”, G. VASSILIADES”, A. MANE” et ‘1‘. NDIAYE*
INTRODUCTION
Sur une superficie totale de 196 000 km2, 70 000, soit 36% sont occupés par les
glossines au Sénégal. Les deux espèc.es présentes sont Gfkw$~ p&$ti~kg~~bk~sk et G.
fzxxsfhx subfrzuf3-fika, qui transmettent ici fi;r~pmusofffa brucer’ bufcefi 7: cufzgdefzst et 7:
wkar chez les animaux.
La région de Sokone, située dans le c.entre-sud du pays, est totalement infestée par G.
Mor&“s su&ors$m: et, dans une moindre mesure, par G. p+&g~~b. Les bovins
qui y vivent sont principalement de race Dkkolp (croisement Zébu-Ndama) et possèdent un
degré de trypanotolérance intermédiaire entre la sensibilité du Zébu et la tolérance de la
Ndama (1). Ces D!kkon sont largement utilisés dans la culture attelée ainsi que pour la
production de lait et de viande.
Les éleveurs locaux, très avertis en matière trypanosomose animale, font constamment
appel aux agents vétérinaires pour des traitements trypanocides. L’utilisation intensive des
deux principaux trypanocides vétérinaires, le Bérénil et le Samorin, depuis plusieurs
décennies, a rendu ces deux médicaments apparemment moins efficaces aujourd’hui dans
cette zone. Les agents vétérinaires locaux, en effet, se plaignent de plus en plus de traitements
infructueux,
Il est donc apparu nécessaire de mener des investigations pour savoir s’il s’agissait de
souches de trypanosomes chimiorésistantes et, le cas échéant, évaluer le degré de la
résistance, son étendue dans la zone, et enfin définir une méthode de lutte efficace.
De telles investigations requièrent des méthodes de diagnostic performantes, qui
optimisent les chances de détection des trypanosomes lorsqu’ils sont présents chez l’animal
examiné. Or les techniques classiques de diagnostic, bien qu’ayant des avantages certains, ne
sont pas toujours suffisamment sensibles et peuvent donner de faux résultats négatifs, surtout
dans les cas de trypanosomose chronique. Pour remédier à cela, il est indiqué d’associer
autant que possible deux ou plusieurs techniques reconnues complémentaires. Dans la
présente situation, l’emploi simultané de la méthode de lecture de l’interphase (BCT) et de la
technique ELISA de clétection de antigènes nous a semblé approprié.
L’étude a comporté deux phases:
- une première phase portant sur l’implantation de la technique ELISA-Antigène à
l’Institut Sénégalais de Recherches Agricoles (ISRA) et la validation du test comme moyen
fiable de diagnostic de trypanosomoses bovines:
- et dans une seconde phase, l’utilisation de cette technique pour la détection
éventuelle de souches de trypanosomes chimiorésistantes.
_____------------------------------
+ : Service de Parasitologie, ISRNLNERV, BP 2057, Dakar, Sénégal.
-2-
l - MAKKIIIL ET METHODES
1.1 - Phase d’implantation et dc validation
1.1.1 - Animaux cibles
Quarante bovins Dr;zk--(7îc de la zone de Sokone ont été retenus et identifiés par pose de
boucles numérotées à l’oreille. Ces animaux appartiennent à deux troupeaux de deux villages
situes à côté de forêts classées infestées par G: ~KYXZ&ZW subnlu~~&z~ Parallèlement, 95
sérums témoins ont été récoltés sur des bovins Zébus vivant à Dahra et Podor, localités
situées dans le Nord du Sénégal indemne de glossines ,
1.1.2 - Prélèvements - Analyses - Traitements
Sur chacun de ces 40 bovins de la zone à glossines, les prélèvements et analyses
suivants ont été effectués entre décembre 1988 et juin 1989, à raison d’une visite par mois,
sauf au mois de mai où la visite n’a pas pu se faire.
- récolte de sang périphérique à l’oreille (deux tubes capillaires par animal),
centrifugation sur place et lecture immédiate du PCV et de l’interphase(BCT);
- confection de frottis de sang, coloration et lecture au laboratoire;
- collecte de sang jugulaire sur vacutainer sec, centrifugation, récolte du
sérum et adjonction de O,Ol% d’azide de Sodium; conservation à -20°C jusqu’à l’emploi:
- épreuve ELISA de détection d’antigènes sériques de 1 brucei ?Y
cc?~~ufe~s~ et ?Y VYIGY avec les réactifs et le protocole du trousseau FAOIAIEA./ILRAD;
- prélèvement de selles faîches tous les trois mois et coprologie au
laboratoire:
- traitement au Bérénil, 7,0 mg/kg, I.M., des bovins positifs à ~y~zusu~,~~;
- traitement anthelminthique des bovins positifs en coprologie;
- bain anti-tiques des animaux cibles et non cibles des troupeaux suivis, par
suite du diagnostic d’ Ekk~~~ bnrk chez certains bovins: traitement de ces derniers à la
Terramycine Longue Action (TLA).
-3
1.2 - Phase d’application a l’étude de la chimiorésistance
En première partie de cette phase, 26 parmi les 40 bovins de la phase de validation ont
été à nouveau retenus. Ainsi que les 95 Zébus témoins de Dahra et Podor . Cette investigation
a duré 1 an.
En deuxième partie, 211 autres &~~UIP ont été sélectionnés dans 5 troupeaux de
Sokone et numérotés à l’oreille. Ces animaux comportaient toutes les tranches d’àge et étaient
composés de femelles, de mâles entiers et de mâles castrés. Le suivi post-thérapeutique a duré
ici 5 mois.
Les traitements trypanocides effectués au début de chacune de ces deux parties
figurent aux tableaux 1 et 2.
Les trois premières visites pour chaque partie ont eu lieu à 15 jours d’intervalle; les
visites suivantes étaient espacées de 30 jours.
Les récoltes de sang et les techniques d’analyse sont celles de la première phase, sauf
qu’ici le benzoate de Sodium a été employé à la place de l’azide comme préservatif des
sérums. En outre, il n’y a pas eu cette fois de prélèvements de selles ni de frottis de sang.
II - RESULTATS -DISCUSSION
2.1 - Implantation - Validation
La technique BCT et les épreuves ELISA-Ag ont donné des résultats différents: sur un
total de 72 cas de trypanosomose, 2 sont trouvées par les cieux techniques, 5 par le BCT seul
et 65 par I’ELISA seule.
En outre, I’ELISA a détecté 1,5 % de cas de 7: ~KXY~ 9.7 % de 7Y VY&,~ alors
qu’aucune de ces deux espèces n’a été visualisé au BCT (tableau 3 et 4). Cependant, parmi les
95 bovins prélevés en zone indemne, 1 seul a été antigénémique à ?Y U’KU, une espèce de
trypanosome pouvant être transmise par d’autres insectes que les glossines.
Ces résultats nous ont semblé traduire une bonne spécificité de la technique ELISA-
Afi?
En définitive, les deux techniques nous sont apparues complémentaires et leur
utilisation combinée est fortement souhaitable pour obtenir des résultats plus complets sur les
infections trypanosomiennes dans une zone donnée (2).
Des résultats et conclusions similaires ont du resle été trouvés au niveau du réseau
africain de validation du test sérologique.
-4-
2.2 - Etude de la chimiorésistance
2.2.1 - Première partie
La tendance constatée en phase de validation a été retrouvée ici: la sensibilité de la
technique ELISA-Ag est au moins cinq fois supérieure à celle du BCT: sur 298 prélèvements,
79 cas de trypanosomose ont été diagnostiqués; 14 seulement relevaient du BCT contre 72
pour I’ELISA-Ag (tableau 5).
S’agissant de la spécificité du test sérologique, nous avons noté, comme dans la
première phase, que l’ensemble des cas de î: bruc&et de z F~ÜY ont été trouvés uniquement
en ELISA. Il fallait donc établir que ces cas représentaient de réelles infections
trypanosomiennes. A cet effet, tous les sérums positifs en ELISA mais négatifs au BCT ont
été envoyés au Centre International de la Trypanotolérance en Gambie pour la recherche
d’anticorps anti-trypanosomes. Par la technique d’Immunofluorescence
indirecte, ils se sont
tous révélés positifs, y compris le sérum de la zone indemne antigénémique à X ~&XX
Pendant ce temps, un lot de 39 autres sérums récoltés sur des Zébus de Podor (région Nord
du Sénégal sans glossines) était séronégatif à 100 % en ELISA-Ag. De tout cela nous avons
conclu que le test était effectivement spécifique. Et que les Dkko~ prélevés pour ce travail
possèdaient sans doute un bon degré de trypanololérance,
qui leur permet de maintenir les
souches locales de ?Y ~*VA à des niveaux de parasitémie inférieurs au seuil de détection. Et
ce d’autant plus que ?Y W’KÜY a été visualisé chez des animaux trypanosensibles
de la zone
(chevaux et ânes), prouvant ainsi 1’existenc.e effective de 7: W’V~ dans la région. Quant à
X bruc~, sa fréquente localisation cérébrale explique certainement la difficulté à le visualiser
dans le sang.
Concernant les premiers essais de détection de souches de trypanosomes
chimiorésistantes, les résultats ont montré que pour YY druce. et jr cofgok~.~t, le traitement au
Bérénil ou au Samorin était généralement efficace: après l’administration du Bérénil, tous les
animaux suivis étaient négatifs au BCT dès la visite suivante; après traitement au Samorin, ils
sont restés négatifs au BCT et en ELISA-Ag pendant 5 mois pour z co~gok~~~ et quasi-
définitivement pour I: brucer’(tableau 5).
Mais des cas de séroposilivilé à z w’w persistaient (tableau 5). Notamment le bovin
no 87, qui est resté en permanence antigénémique à ZY W’W,J malgré tous les traitements
trypanocides. Cet animal est finalement mort, avec des symptomes cérébraux selon l’éleveur
propriétaire. Il s’agit là, probablement, d’une souche chimiorésistante. Des études plus
poussées étaient toutefois nécessaires pour se prononcer sur la résistance et, en cas de
confirmation, en connaitre le degré et l’étendue pour pouvoir définir des moyens de lutte.
C’est l’objet de la seconde partie de cette phase.
- 5.-
2.2.2 - Deuxième partie
Les résultats d’ensemble des examens parasitologiques et des épreuves sérologiques
sont présentés au tableau 6. D’une manière générale, le nombre de cas de trypanosomose a
régulièrement baisse après les traitements trypanocides. Cependant, pour 7: co~gok~us~ et
T
W’FGZY, des cas de séropositivité post-thérapeutique ont été relevés.
En outre, des différences importantes ont été notées selon que les animaux ont reçu
l’un ou l’autre des trypanocides utilisés (tableau 7). Dans le lot traité au Bérénil seul et une
seule fois, les infections ont chuté à la visite effectuée 15 jours après ce traitement. Par la suite
elles ont connu une hausse et sont restées très proches de leur niveau d’avant traitement. Cela
traduit sans doute l’activité essentiellement curative du Bérénil. Une évolution différente est
notée dans le lot traité au Samorin: le nombre d’infections post-thérapeutiques a baissé
significativement et n’a jamais regagné son niveau initial. Il en est de même dans le lot traité à
I’Ethidium. L’effet prophylactique de ces deux médicaments semble donc évident ici.
Par ailleurs et concernant l’ensemble des trois lots, on constate que les infections ont
été cette fois décelées aussi bien en ELISA-Ag qu’au BCT, avec une sensibilité plus élevée de
I’ELISA. Cela semble confirmer l’hypothèse que nous avons émise pour expliquer les faux
résultats négatifs du BCT dans la phase précédente. Et cela signifierait qu’au sein d’une race
animale réputée trypanotolérante, l’aptitude à contrôler la parasitémie se manifestait mieux
chez certains individus que chez d’autres.
En dehors de ces tendances générales, on relève des cas particuliers, qui sont
intéressants du point de vue de la chimiorésistance. Le tableau 8 montre ces cas: le bovin no
554 du lot Bérénil est resté constamment séropositif avec X’ CGYJ~O~XS~ et r bruce, le no 514
quasi-constamment avec. ?1 wiw, et le no 544 avec Z co~~oZ’~s~. Et il faut signaler que le no
5 14 est du même troupeau que le bovin ne 87 qui avait montré une antigénémie persistante à
X tiw, et que les bovins no 544 et 554 appartiennent à un même troupeau d’un autre village.
De l’ensemble de ces résultats et observations, se dégage une forte présomption de
l’existence effective de souches chimiorésistantes de trypanosomes dans cette zone.
S’agissant de l’effet de la chimiothérapie et de la chimioprophylaxie sur l’hématocrite
des animaux suivis, la tendance est à la hausse du PCV après le traitement. Ainsi, les bovins
qui avaient les moyennes les plus faibles avant traitement ont finalement rejoint le niveau des
autres à la dernière visite(tableau 9).
-6-
En conclusion, on peut dire du lest ELISA-Ag qu’il a une sensibilité élevée et une
spécificité satisfaisante. Et que ses performances paraissent meilleures dans les infections
trypanosomiennes chroniques que dans les cas aigus. Pour ces derniers, la technique du BCT
s’est montrée supérieure. L’utilisation combinée de ces deux méthodes, accompagnée d’une
analyse statistique des données de l’hématocrite, est à notre avis une bonne option pour avoir
des résultats plus précis.
Une option qui nous semble particulièrement indiquée dans les régions où l’on
soupçonne l’existence de souches chirniorésistantes de trypanosomes. Mais les résultats
devront être coinfirmés par des travaux en laboratoire sur des souches isolées à partir des
animaux des régions concernées. Signalons brièvement le premier essai que nous avons
réalisé à ce sujet. Deux moutons Peulh du Sahel (race trypanosensible) achetés en zone
indemne de glossines et négatifs tous les deux au BCT, ont été confiés respectivement au
berger du bovin no 5 14 et à celui des bovins 544 et 554. Ces moutons ont séjourné pendant 8
jours dans la zone de Sokone. Ils sont alks tous les jours au pâturage en compagnie des
troupeaux de bovins, pour être en contact quotidien avec les glossines.Les examens
parasitologiques restent encore négatifs, près de deux mois après,
Ces essais d’isolement de souches de trypanosomes se poursuivront ultérieurement
avec un protocole différent. Il s’agira, en résumé, d’obtenirer des isolats de jr F&ZY dans les
villages concernés et de faire des cultures au laboratoire sur petits Ruminants. Le degré de
résistance sera déterminé en élevant progressivement la dose de trypanocide. Un stabilat sera
cryopréservé à chaque étape.
-7-
REMERCIEMENTS
- La Division conjointe FAO/AIEA de Vienne a bien voulu apporter une contribution
financière tout en fournissant le matériel et les réactifs utilisés dans ces investigations, Nous
tenons à la remercier vivement.
- Des éleveurs de la zone de Sokone ont bien voulu mettre leurs animaux à notre
disposition et ont ainsi rendu possible ce travail.Les agents vétérinaires locaux nous ont
également apporté une précieuse assistance. Qu’ils trouvent ici nos sincères remerciements.
-8-
REFERENCES CONSULTEES
1. S. M. TOURE, A. GUEYE, M. SEYE, M.A. BA, et A. MANE -
Expérience de pathologie comparée entre bovins Zébus et Ndama soumis à l’infection
naturelle par des trypanosomes pathogènes.
Re K Ele K Méd Vét. Rys bqu., 1.974 3f (IL?Y3-313
2. A.DIAITE, M. SEYE, A. MANE et T. NDIAYE - Convention AIEAIISRA n”4975/NL
portant sur l’utilisation de la technique ELISA de détection des antigènes dans l’étude de
l’incidence de la trypanosomiase animale en zone d’élevage du Dkku~z (croisement Zébu-
Ndama).
3. V.M. NANTULYA. - Immunological approaches to the control of Animal
‘Trypanosomiasis.
4. V.M. NANTULYA, A.J. MUSOKE, F.R. RURANGIRWA, N. SAIGAR, S.H.
MINJA - Monoclonal antibodies that distinguish T@wzusuma eunguhvse, X’ r&~and z
6mw~
ha.& Inmxmufog~; 158Z !J #2f -431.
5. V.M. NANTULYA, E. BANANA SONGA, R. HAMERS - Detection of circulating
trypanosomal antigens in jpmusuma erwx-infected animals using a jr brwe group-
specific monoclonal antibody.
Trqo. Aliw! Pxaszk, 4U(f 98$k263-266
6. V.M. NANTULYA, K.J. LINDQVIST - Antigen-detection enzyme immunoassays for
the detection of jqxnusuma r,fv~ I’ cunguiivm and jr dwce. infections in cattle.
.7kp. Med Par-asri., 4U (f 98?,l* 267272.
7. V.M. NANTULYA - Trypanosomiasis in domestic animais: the problems of diagnosis.
Xe K Sci UfL 112L Epi~, fYYl? Y(2): 3.S7-36%
8. MURRAY M., P.K. MIJRRAY and W.I.M. McINTYRE - An improved parasitological
tec.hniquc for diagnosis of African trypanosomiasis.
.hns. RC? F,: suc. lrup. ~Va f!&?, 71(1.9.7i.y: .323--.L%:
-9-
Tableau 1 : Traitements trypanocides initiaux en première partie de la phase 2
TRAITSMFXC
LOT
Bérénil IM
Samorin 0,5 mgfkg, IM
No 81 à
90
10,5 mg/kg
15 jours après Bérénil
No100 à 110
10,5 mg/kg
45 jours après Bérénil
Nol11 à 120
7,O mdkg
15 jours après Bérénil
No 91 à lOO*
3,5 mgfkg
15 jours après Bérénil
* Désistement de l'éleveur propriétaire de ces 10 animaux :
données non pris en compte ici.
Tableau 2 : Traitements initiaux en deuxième partie de la 2ème phase
TRAITEMENT
Nombre de
LOT
bovins
Bérénil
Samorin
Ethidium
10,5 mg/kg IM
0,5 mg/kg IM
1,O mg/kg IM
1
107
Visite 1 avant les
prélèvements (A.P.)
2
60
V 1 A.P.
15 jours après
Bérénil
3
44
V 1 A.P.
15 jours après
30 jours après
Bérénil
Samorin
Tableau 3 : Résultats du diagnostic des trypanosomoses par le BCT et par l'ELISA-Ag
en phase d'implantation et de validation
Nombre de cas de :
I
0
Nombre
Technique
d'analyses
.r.^
I
-
- -
- -
I
mm
-m m
I
m. 3
BCT
196
7
7
ELISA-Ag
196
3
22
18
12
10
2
67
COMBINES*
196
3
27
18
12
10
2
72
I
I
I
l
I
I
Tb = T.brucei, Tv = T.viva.x, Tc = T.congolense
* : combinés = résultats positifs du BCT et/ou de l'ELISA-Ag.
r>..
-
_.
_
.1.
-.
Tableau 4 : Evolution du nombre d'infections trypanosomiennes selon les mois de visite et
selon les espèces (phase d'implantation - validation)
Nombre
Nombre de cas de :
Mois
d'analyses
Tb
TC
TV
Tb Tc
TbTv
Tc TV
lb Tc TV
BCT EL
BCT EL
BCT EL
BCT EL
BCT EL
BCT EL
BCT EL
Janvier
40
-
-
1
4
2
3
2
1
Février
40
-
-
- 10
2
1
4
Mars
39
-
-
3
3
1
2
1
Avril
40
3
1
1
7
6
1
Juin
37
-
-
5 4
5
1
1
Total
196
3
7 22
-
19
-
12
-
10
2
Tableau 5 : Chimiorésistance,première partie : Diagnostic par BCT et par ELISA-Ag des trypanosomoses
chez des bovins traités au Bérénil puis au Samorin et suivis pendant 1 an
% positifs avec l'antigène de :
Nombre
%BCT
Visite
d'analyses
positif
Tb
TC
TV
Tb Tc
TbTv
Tc Tv
Tb Tc TV
15 décembre*
26
4
19
12
8
8
30 décembre **
26
4
8
12
4
Janvier
25
12
16
Février
25
12
Mars
15
I
Avril
23
4
NI
Mai
21
19
Juin
21
5
5
5
Juillet
21
5
5
5
Août
22
9
9
9
Septembre
20
25
20
10
Octobre
19
11
16
26
11
5
Novembre
17
29
18
16
Décembre
17
12
12
6
6
* = Animaux traités au Bérénil
** = Traitement au Samorin.
Tableau 6 : Résultats d'ensemble des examens parasitologiques et des épreuves ELISA-Ag pour le diagnostic
des trypanosomoses (chimiorésistance, deuxième partie)
Nombre de cas selon le BCT et/ou l'ELISA-Ag
Visite
Nombre
d'analyses
Tb
TC
TV
Tb/TC
I%/n
TCITV
l%/TC/TV
Total
1
211
3
11
13
4
1
2
34
2
177
2
8
3
2
2
17
3
164
1
6
3
1
1
12
4
175
5
6
2
13
5
156
1
3
6
1
11
Total n
883
5
27
36
11
3
5
87
(%>
(0,6)
(3,O)
(4,l)
(1,2)
CO,31
(0,6)
(9,8)
.”
.,.
-
.-
-
.
..>
Tableau 7 : Résultats comparés et combinés du BCT et de l'ELISA-Ag dans les différents lots traités
(chimiorésistance, deuxième partie)
Nombre de cas dans chaque lot selon BCT et l'ELISA-Ag
Visite
T
l-
Lot Bérénil
Lot Samorin
Lot Ethidium
"Anal.
BCT
ELISA
coMB*
nAnal.
BCI
ELISA
coMB*
"Anal.
BCI
ELISA
cola*
107
60
11
14
44
5
13
73
60
6
6
44
9
87
33
2
3
44
2
4
90
50
2
2
35
1
2
65
56
2
3
35
-*
3
: COMB. = positif au BCT et/ou en ELISA-Ag.
.”
.,.
- .,.m.%-. -
. . . ,
-15-
Tableau 8 : Exemples d'kolution post-thérapeutique de l'antigénémie
(chimiorésistance, deuxième
partie)
Bovin No
554*
514*
544**
Visite
Séropositif avec l'antigène de
1
Tb Tc
T V
TV Tc
2
Tb Tc
3% Tc TV
3
Tb Tc
0
Tb Tc TV
4
Tb Tc
TV
TC
5
Tb Tc
TV
0
c
* = Bovin du lot traité au Bérénil
* = Bovin du lot Samorin
k-k*
= Bovin du lot Ethidium
0 = Non examiné.
-16-