0 -IL PARASITOLOGIE L’immunodiagnostic de la...
0 -IL
PARASITOLOGIE
L’immunodiagnostic de la fasciolose à Fasciola gigantica
par la technique ELISA au Sénégal.
Observations préliminaires chez deux agneaux
O.T. Diaw’, M.M. Seye ‘,M. Seye ‘, Y. Sarr l, G. Vassiliadès ’
DIAW (O.T.), SEYE (MM.), SEYE (M.), SARR (Y.), VASSILIADÈS
MATÉRIEL ET MÉTHODES
(C.). L’immunodiagnostic de la fasciolose j Fnscioln giganticu par la
technique ELISA au Sénégal. Observations préliminaires chez deux
agneaux. Revue Éh. Méd. vét. Pqys frop.. 1994, 47 (3) : 291-294
Animaux d’expérience
L’ohjet de ce travail est de tester l’utilisation de la technique ELISA
au Sénégal pour le diagnostic de la fasciolose à Fasciolu gigantica
Deux agneaux mâles âgés de 3 mois de race Peul-Peul,
chez le mouton en utilisant comme antigène les produits métaho-
nés à Dakar dans un élevage de case (zone indemne de
liques d’excrétion-sécrétion du parasite. Alors que les analyses
coprologiques classiques sont négatives jusqu’à la 14e semaine, l’ana-
trématodoses), ont été utilisés. Par ailleurs, l’analyse
lyse immunologique par le test ELISA permet de trouver les pre-
coprologique par sédimentation (7) effectuée au préa-
miers anticorps anti-Fasciola gigantica dès la 4e semaine après
lable a confirmé l’absence de trématodes.
l’infection.
Mot~ clés : Ovin - Agneau - Fasciolose - Fasciolcr gigflniira - Immuno-
Infestation
diagnostic - Diagnostic - Technique immunologique Fèces Sang - Test
ELISA - Sénégal.
Ces agneaux ont été infestés par voie orale à partir de
métacercaires de Fasciola gigantica. Ces dernières sont
INTRODUCTION
issues de limnées d’élevage infestées expérimentale-
ment en laboratoire et suivies jusqu’à la sortie des cer-
Au Sénégal, la fasciolose à Fasciola gigantica prend de
caires, puis elles sont conservées à +4” jusqu’à leur uti-
plus en plus d’importance depuis la construction du bar-
lisation. Les deux agneaux (no1 et n”2) ont reçu chacun,
rage de Diama et les nombreux aménagements hydroa-
en une seule prise, 300 métacercaires âgées de 3 mois
gricoles (6). Le diagnostic ante mortem de cette affection
et 15 jours.
pour la mise en place de mesures de lutte efficaces et
surtout de contrôle continu, pose des difficultés. En effet,
Prélèvements de fèces et de sang pour
la coprologie reste insuffisante car les premiers œufs ne
sont détectés qu’à partir du 3e mois de I’infestation (2).
analyses
Une technique plus sensible permettant un diagnostic
Pendant le suivi des animaux, des prélèvements de
précoce de la maladie s’avère donc nécessaire. II existe
fèces, suivis d’analyses coprologiques (7), ont été effec-
déja un test sérologique par la méthode ELISA qui per-
tués avant infestation d’abord, puis au rythme d’un prélè-
met de mettre en évidence, chez les animaux, I’appari-
vement par semaine à partir de la 3e semaine. Des pré-
tion des premiers anticorps anti-fascioliens (1, 3, 4, 5,
lèvements individuels de sang en vue de la récolte de
9,12. 14, 15, 21, 22). Récemment, ce test a été amélioré
sérums destinés aux tests sérologiques ont été égale-
en utilisant comme antigène les produits d’excrétion-
ment faits avant infestation (JO-l ), le jour de I’infestation
sécrétion des parasites (Fasciola) (2, 3, 16, 17, 19).
(JO) et ensuite une fois par semaine jusqu’à la mort natu-
L’ensemble des données de la fasciolose concerne Fas-
relle des animaux (étapes : JO+l, JO-t-2; JO+3, etc.). Les
ciola hepatica, seules quelques études ont été réalisées
analyses sérologiques ont été réalisées avec la tech-
avec Fasciola gigan tica (10, 11) .
‘nique de dosage des anticorps utilisant un antigène
L’objectif de ce présent travail est de tester la validité de
métabolique excrétion-sécrétion de Fasciola giganfica.
la technique ELISA en utilisant un antigène de Fasciola
Les prélèvements de fèces et de sang à J-l et JO consti-
gigantica d’excrétion-sécrétion et d’envisager son utilisa-
tuent les témoins de référence avant infestation.
tion sur le terrain comme moyen de diagnostic individuel.
Pour ce faire, I’infestation expérimentale de 2 ovins, sui-
Préparation de l’antigène et épreuve ELISA
vis au laboratoire du début jusqu’à la mort naturelle sur-
venue aux 10e et 14e semaines respectivement, a été
Des douves adultes ont été placées dans une boîte de
réalisée.
Pétri et laissées pendant 3 h dans de d’eau distillée. Le
produit des excrétions-sécrétions a été récolté, tamisé et
1. Service de Parasitologie, LNERV/ISRA, 6.P 2057, Dakar,
centrifugé. Le surnageant a été recueilli puis mis en ali-
Sénégal.
quotes après avoir déterminé le taux de protéines
Reçu le 154.1993, accepté le 11.10.1994.
(méthode électrophotométrique par référence à la table
Revue I?Iev. Méd. vét. Pays trop., 1994,47 (3) : 291-294
291
O.T. Diaw M.M. Seye M. Seye Y. Sarr G. Vassiliadès
nomographique de E. ADAMS). Deux dilutions de sérum
0,550 ”
-
ont été testées pour les épreuves sérologiques : l’une au
.
..
l/lOO et l’autre au 1/200 avec une concentration unique
0,495 --
: .
de conjugué à la péroxydase dilué au 1/5 000. L’antigène
fixé sur les plaques (Dynatech M.129A) était utilisé à la
concentration de 10 ug/ml dilué dans le tampon, Les
sérums de référence ayant servi pour la réalisation de ces
tests sont ceux récoltés sur l’agneau no1 avant infestation
pour le négatif et à la veille de sa mort pour le positif.
RÉSULTATS
Agneau no1
L’animal est mort à la 14e semaine après infestation (100
jours). A l’autopsie, on notait un début de calcification des
canaux hépatiques et la présence d’ascite dans la cavité
générale. Des douves adultes (39) ont été récoltées au
niveau du foie, et des oeufs ont été décelés dans le
parenchyme hépatique par examen microscopique.
Coprologie
MOUTON
. . . . .
*gneau
1 Sérum au 1/100
+++
Agneau 2 Sfxum a” I/l00
Toutes les analyses coprologiques sont restées négatives
00 00
Agneau 1 SBrum au 11200
jusqu’à la mort de l’agneau.
. .
. l
Agneau 2 Serum a ” 1/200
Sérologie (figure 1)
Dilution au 1/700
Sérologie (figure 1)
L’apparition des anticorps est intervenue dès la 3e semai-
ne ayant suivi I’infestation. Cependant, la courbe des
Dilution au I/l 00
densités optiques a connu une ascension dès la première
semaine. Le premier pic a été atteint à la 11 e semaine
Les premiers anticorps apparaissent à la 4e semaine et le
mais la valeur de la densité optique la plus élevée a été
premier pic est atteint à la 6e semaine, soit deux
enregistrée à la veille de la mort de l’animal, soit J+99.
semaines après. Comme précédemment, le maximum de
la valeur des densités optiques s’observe à la 10e semai-
Dilution au 1/200
ne après infestation et cette valeur se rapproche ne celle
La même ascension de la courbe des densités optiques
du sérum de l’agneau no1 à la même période mals avec
est apparue, mais les valeurs enregistrées sont plus
une dilution au 1/200.
faibles pour les mêmes sérums dilués au l/iOO. Le pre-
Dilution au Y/200
mier pic est observé à la veille de la mort de l’animal.
Les valeurs des densités optiques ont évolué de la même
Agneau no 2
manière que pour les épreuves précédentes et le pic se
situe à la 8e semaine. On note cependant une baisse de
L’agneau no2 n’a survécu que pendant 74 jours. A
la réponse immunitaire de l’agneau no2 dont les valeurs
l’autopsie, 56 douves immatures ont été récoltées au
des densités optiques de la dilution au l/lOO sent plus
niveau du foie mais aucun œuf n’a été observé à I’exa-
faibles que celles de l’agneau no1 à la même dilution et
men microscopique du parenchyme hépatique. L’agneau
se rapprochent plutôt des valeurs des densités optiques
n’a sans doute pas supporté I’infestation (migration mas-
de la dilution au 1/200 de ce même agneau.
sive des jeunes douves, foie fortement endommagé).
DISCUSSION
Coprologie
Dans cette étude comportant une infestation expérimen-
Aucun oeuf n’a été rencontré au cours des examens
tale avec F. gigantica, le test ELISA avec un a.ntigène
coprologiques effectués pendant l’expérience.
excrétion-sécrétion permet de déceler précocement, dès
2 9 2
PARASITOLOGIE
la 3e semaine, la présence des anticorps anti-F.
REMERCIEMENTS
gigantica. Ces résultats sont semblables à ceux obtenus
par BOULARD (2, 3) chez des bovins avec l’antigène
Les auteurs remercient le comité de lecture et de rédac-
excrétion-sécrétion de Fasciola hepafica et ceux de PFIS-
tion de la Revue d’Élevage et de Médecine vétérinaire
TER (18) sur lapins et bovins ; mais ici, on constate de
des Pays tropicaux, ainsi que le Dr C. BOULARD (INRA,
légères différences en ce qui concerne la réceptivité et la
Tours) pour les remarques, suggestions et corrections
réaction sérologique. En effet, chez le premier sujet, les
qu’ils ont bien voulu apporter à ce manuscrit.
anticorps anti-Fasciola sont plus précoces (3e semaine)
que chez le second (4e semaine). Cependant, SANTIAGO
DE WEIL et HILLYER (20) ont observé ces mêmes diffé-
rences qu’ils attribuent à un simple phénomène de compor-
BIBLIOGRAPHIE
tement individuel.
1. AMBROISE-THOMAS (P,), DESGEORGES (P.T.), BOUTTAZ (M.).
L’utilisation de ce test en milieu naturel, où les animaux
Le diagnostic immunoenzymologique (ELISA) de la fasciolose humaine et
sont polyparasités, pose cependant le problème des com-
bovine. Détection d’anticorps et/ou d’antigènes circulants. Ann/.~ Soc. belge
munautés antigéniques et des réactions croisées avec les
Méd. trop.. 1980,60 : 47-60.
autres parasites. Les recherches d’éventuelles communau-
tés antigéniques entre Fasciola et d’autres parasites du
2. BOULARD (C.), BOUVRY (M.), ARGENTE (G.). Comparaison de la
bétail sont abondamment documentées (3, 13, 18). Dans
détection des foyers de fasciolose par test ELISA sur lactosérum et sérum
cette étude,
et par coproscopie. Annls Rech. vlr.,l985, 16 (4) : 363-368.
on a testé la technique ELISA avec l’antigène
excrétion-sécrétion de F, giganfica en faisant un premier
3. BOULARD (C.), REGNAULT (A.). L’immunodiagnostic de la fasciolo-
essai sur 4 sérums de référence dont l’un est négatif
se bovine par la technique ELISA. Bull. G.T.V., 1989, l-B-337 : 59-68.
(agneau indemne de trématodes) et les 3 autres positifs,
respectivement à F. gigantica, Schistosoma bovis et
4. BURDEN (D.J.), HAMMET (N.C.). Microplate enzyme-linked immu-
nosorbent assay for antibody to Fusciola hel~lticn in cattle. Vet. Rec.,1978:
Paramphistomum
sp. Seul le sérum homologue a réagi
103-158.
avec une densité optique égale à 4 fois celle des autres (la
densité optique du négatif est sensiblement la même que
5. BURDEN (D.J.), HAMMET (N.C.). The ELISA test for detection of
celle des autres sérums hétérologues).
Fusciola hepatica infection in cattle. Parasitnlog.v, 1979, 79: 3.
Cependant au Nigeria, Fagbemi et a/ (8) ont montré la
6. DIAW (O.T.), VASSILIADES (G.), SEYE (M.), SARR (Y.). Proliféra-
communauté antigénique entre F. giganfica, Dicrocoe-
tion des mollusques et incidences sur les trématodoses dans la région du
hum hospes et S. bovis mais ceci à partir d’antigènes
delta et du lac de Guiers après la construction du barrage de Diama sur le
bruts et semi-purifiés de vers entiers. Ces résultats sont
fleuve Sénégal. Revue Élev. M&i. véf. Pays trop., 1990,43 (4) : 499-502.
d’une grande importance quant à l’utilisation du test
7. EUZEBY (J.). Diagnostic expérimental des helminthoses animales. Tra-
ELISA en zone tropicale et posent le problème de la
vaux pratiques d’helminthologie vétérinaire. Paris, Vigot frères, 1958.
spécificité de l’antigène.
8. FAGBEMI (B.O.), OBARISIAGBON (1.0.). Common antigen of Fus-
Cette méthode ELISA, utilisée dans un autre essai en
ciola giganrica, Dicrocoelium ho.spes and Schistosoma hovis and their rele-
milieu naturel (troupeau de 33 moutons), a permis de
vance to serology. Ver. Q. 1991,13 (2): 81-87.
retrouver les mêmes animaux infestés (6) par F, giganfica
diagnostiqués auparavant avec la méthode coproscopique.
9. FARRELL (C.J.), SHEN (D.T.), WESCOTT (R.B.), LANG (B.Z.). An
enzyme-linked immunosorbent assay for diagnostic of Fasciola heputica
Les observations préliminaires faites ici sur 2 agneaux
infection in cattle. Am. J. vei. Ru., 1981,42 (2): 237-240.
avec un antigène excrétion-sécrétion sont intéressantes
10. GORAISH (I.A.), ABDELSALAM (E.B.), TARTOUR (Ci.), ABBAS
mais les recherches doivent se poursuivre, avec un plus
(B.), ARADAIB (I.E.). The effect of levamisole (L. tetramisole) treatment
grand nombre d’animaux, pour mieux approfondir ce pro-
on the susceptibility to Fmciolu gigantica infection in goats. Revue Elev.
blème de réactions croisées avec les autres parasites et
Méd. vét. Pays trop., 1988,41 (3): 283-287.
déterminer les limites d’utilisation pratique de ce test.
II. GORAISH (I.A.), ABDELSALAM (E.B.), TARTOUR (G.). Suscepti-
b,ility to homologous reinfection with Fasciola giganticn in goats. Revue
CONCLUSION
Elev. Mld. vét. Pays trop., 1991,44 (1) : 69-73.
12. HILLYER (G.V.), SANTIAGO DE WEIL (N.). Use of immunologie
Les résultats de cette étude montrent que le diagnostic
technics to detect chemotherapeutic success in infections with Fusciola
ELISA utilisant un antigène métabolique excrétion-sécré-
hepatica II. The enzym linked immunosorbent assay in infected rats and
tion permet de déceler précocement la présence des anti-
rabbits. .I. Parmit., 1979,65: 680-684.
corps anti Fasciola giganfica chez le mouton alors que le
13. HILLYER (G.V.), SANTIAGO DE WEIL (N.). Serodiagnosis of expe-
diagnostic par les techniques de coprologie est impossible
rimental fasciolosis by immunoprecipitation tests. ht. J. Parusir., 1981. 11:
jusqu’au 3e mois. Cette technique est applicable aux
71-78.
études épidémiologiques de la fasciolose à Fasciola gigan-
f/ca et constitue un outil d’une grande importance dans
14. ITAGAKI (T.), OHTA (N.), HOSAKA (Y.), ISO (H.), KONISHI (M.),
CHINONE (S.), ITAGAKI (H). Diagnosis of Fasciola sp. infection in catt-
l’organisation et la mise en place de moyens de contrôle et
le by enzyme-linked immunosorbent assay. .Iap. J. vet. Sci.,1989, (51):
de lutte contre cette affection au Sénégal.
757-764.
293
O.T. Diaw M.M. Seye M. Seye Y. Sarr G. Vassiliadès
15. JEMLI (M.H.), DORCHIES (P.), MAGNAVAL (J.F.). Application de
19. RAJASEKARIAH (G.R.), MITCHELL (G.F.), CHAPMAN (C.B.).
la technique ELISA au diagnostic immunologique de la fasciolose ovine :
MONTAGUE (P.E.). Fusciola hepatica: attempts to induce protection
comparaison avec I’immunofluorescence indirecte et la double diffusion en
against induction in rats and mice by injection of excretorykcretory
pro-
gélose. Revue Méd. v&.,l987,138 : 355-359.
ducts of immature worms. Parasitology, 1979,79: 183-187.
16. LEHNER (R.P.), SEWELL (M.M.H.). A study of antigens produced by
20. SANTIAGO DE WEIL (N.), HILLYER (G.V.). Antibody profiles by
adults Fasciola hqatica maintained in vitro. Purasite Immunol.,l980, 2:
EITB and ELISA of cattle and sheep infected with Fusciolu heparku. J.
99-109.
Paras&, 1988,74 (5): 8 1 O-8 18.
17. LEVINE (D.M.), HILLYER (G.V.), FLORES (S.I.). Comparison of
21. WESCOTT (R.B.), FARREL (C.J.), SHEN (D.I.). Diagnosis of natu-
counterelectrophoresis, the enzyme-linked immunosorbent assay, and kato
rally-occurring Fusciola heputica infection in cattle with an enzyme-l nked
fecal examination for the diagnosis of fascioliasis in infected mice and rab-
immunosorbent assay. Am. J. vet. RU., 1983,45: 178-179.
bits. Am. J. trop. Med. Hyg., 1980,29: 602-608.
18. PFISTER (K.), DAVEAU (C.), AMBROISE-THOMAS (P.). Partial
22. ZIMMERMAN (G.L.), JEN (L.W.), CERRO (J.E.), FARNSWORTH
purification of somatic and excretory-secretory products of adult Fusciolu
(K.L.), WESCOTT (R.B.). Diagnosis of Fasciola hepaticu infections in
hepatica and their application for serodiagnosis of experimental and natural
sheep by an enzyme-linked immunosorbent assay. Am. J. vet. Res.,
9 8 2 ,
fasciolasis using an ELISA. Res. vet. Sci., 1984. 37: 39-43.
43 (12): 2097-2100.
DIAW (O.T.), SEYE (M.M.), SEYE (M.), SARR (Y.), VASSILIADÈS
DIAW (O.T.), SEYE (M.M.), SEYE (M.), SARR (Y.), VASSILIADÈS
(G.). Immunodiagnosis of fasciolosis (Fusciola gigantica) with ELISA
(G.). Inmunodiagnostico de la fasciolosis por Fusciolu gigantica median-
test in Senegal. Preliminary observations in two lambs. Revue Elev. Me’d.
te la técnica,de ELISA en Senegal. Observacion preliminar en dos corde-
vét. Pays trop.. 1994, 47 (3): 29 l-294
ros. Revue E~T,. Méd. vét. Pays trop., 1994,47 (3) : 291-294
The purpose of this work was to investigate the use of the ELISA test
El objetivo de este estudio es el de probar la utilizacion de la técnica
for the diagnosis of fasciolosis (Fascioia gigantica) in sheep, in Sene-
de ELISA en Senegal, para el diagnostico de la fasciolosis por .Fus-
gai, nsing Fusciolu gigunticu metabolic excretion-secretion products
ciolu gigunticu en el cordero, utilizando como antigenos 10s produc-
as antigens. Coprological analysis results were negative until the
tos del metabolismo de excrecion y secrecion del parasita. Mientras
fourteenth week following infection; using the ELISA test , the first
que 10s analisis coprologicos clasicos fueron negativos hasta la sema-
anti-Fusciolu gigunticu antibodies cari be detected as early as the
na 14, el analisis inmunologico mediante el ELISA permit% la
fourth week following infection.
demostracion de 10s primeros anticuerpos anti-Fusciolu gigunticu a
partir de la cuarta semana post-infestacion.
Key words : Sheep - Lamb - Fasciolosis - Fusciola gigantica - Immuno-
diagnosis - Diagnosis - Immunological technique - Faeces - Blood -
Pulubras clave : Ovino - Cordero - Fasciolosis Fasciola giganrica -
ELISA test - Senegal.
Inmunodiagnostico - Diagnostico - Técnica inmunologica - Heces -
Sangre Test ELISA - Senegal.
‘
294
PARASITOLOGIE
L’immunodiagnostic de la fasciolose à Fasciola gigantica
par la technique ELISA au Sénégal.
Observations préliminaires chez deux agneaux
O.T. Diaw’, M.M. Seye ‘,M. Seye ‘, Y. Sarr l, G. Vassiliadès ’
DIAW (O.T.), SEYE (MM.), SEYE (M.), SARR (Y.), VASSILIADÈS
MATÉRIEL ET MÉTHODES
(C.). L’immunodiagnostic de la fasciolose j Fnscioln giganticu par la
technique ELISA au Sénégal. Observations préliminaires chez deux
agneaux. Revue Éh. Méd. vét. Pqys frop.. 1994, 47 (3) : 291-294
Animaux d’expérience
L’ohjet de ce travail est de tester l’utilisation de la technique ELISA
au Sénégal pour le diagnostic de la fasciolose à Fasciolu gigantica
Deux agneaux mâles âgés de 3 mois de race Peul-Peul,
chez le mouton en utilisant comme antigène les produits métaho-
nés à Dakar dans un élevage de case (zone indemne de
liques d’excrétion-sécrétion du parasite. Alors que les analyses
coprologiques classiques sont négatives jusqu’à la 14e semaine, l’ana-
trématodoses), ont été utilisés. Par ailleurs, l’analyse
lyse immunologique par le test ELISA permet de trouver les pre-
coprologique par sédimentation (7) effectuée au préa-
miers anticorps anti-Fasciola gigantica dès la 4e semaine après
lable a confirmé l’absence de trématodes.
l’infection.
Mot~ clés : Ovin - Agneau - Fasciolose - Fasciolcr gigflniira - Immuno-
Infestation
diagnostic - Diagnostic - Technique immunologique Fèces Sang - Test
ELISA - Sénégal.
Ces agneaux ont été infestés par voie orale à partir de
métacercaires de Fasciola gigantica. Ces dernières sont
INTRODUCTION
issues de limnées d’élevage infestées expérimentale-
ment en laboratoire et suivies jusqu’à la sortie des cer-
Au Sénégal, la fasciolose à Fasciola gigantica prend de
caires, puis elles sont conservées à +4” jusqu’à leur uti-
plus en plus d’importance depuis la construction du bar-
lisation. Les deux agneaux (no1 et n”2) ont reçu chacun,
rage de Diama et les nombreux aménagements hydroa-
en une seule prise, 300 métacercaires âgées de 3 mois
gricoles (6). Le diagnostic ante mortem de cette affection
et 15 jours.
pour la mise en place de mesures de lutte efficaces et
surtout de contrôle continu, pose des difficultés. En effet,
Prélèvements de fèces et de sang pour
la coprologie reste insuffisante car les premiers œufs ne
sont détectés qu’à partir du 3e mois de I’infestation (2).
analyses
Une technique plus sensible permettant un diagnostic
Pendant le suivi des animaux, des prélèvements de
précoce de la maladie s’avère donc nécessaire. II existe
fèces, suivis d’analyses coprologiques (7), ont été effec-
déja un test sérologique par la méthode ELISA qui per-
tués avant infestation d’abord, puis au rythme d’un prélè-
met de mettre en évidence, chez les animaux, I’appari-
vement par semaine à partir de la 3e semaine. Des pré-
tion des premiers anticorps anti-fascioliens (1, 3, 4, 5,
lèvements individuels de sang en vue de la récolte de
9,12. 14, 15, 21, 22). Récemment, ce test a été amélioré
sérums destinés aux tests sérologiques ont été égale-
en utilisant comme antigène les produits d’excrétion-
ment faits avant infestation (JO-l ), le jour de I’infestation
sécrétion des parasites (Fasciola) (2, 3, 16, 17, 19).
(JO) et ensuite une fois par semaine jusqu’à la mort natu-
L’ensemble des données de la fasciolose concerne Fas-
relle des animaux (étapes : JO+l, JO-t-2; JO+3, etc.). Les
ciola hepatica, seules quelques études ont été réalisées
analyses sérologiques ont été réalisées avec la tech-
avec Fasciola gigan tica (10, 11) .
‘nique de dosage des anticorps utilisant un antigène
L’objectif de ce présent travail est de tester la validité de
métabolique excrétion-sécrétion de Fasciola giganfica.
la technique ELISA en utilisant un antigène de Fasciola
Les prélèvements de fèces et de sang à J-l et JO consti-
gigantica d’excrétion-sécrétion et d’envisager son utilisa-
tuent les témoins de référence avant infestation.
tion sur le terrain comme moyen de diagnostic individuel.
Pour ce faire, I’infestation expérimentale de 2 ovins, sui-
Préparation de l’antigène et épreuve ELISA
vis au laboratoire du début jusqu’à la mort naturelle sur-
venue aux 10e et 14e semaines respectivement, a été
Des douves adultes ont été placées dans une boîte de
réalisée.
Pétri et laissées pendant 3 h dans de d’eau distillée. Le
produit des excrétions-sécrétions a été récolté, tamisé et
1. Service de Parasitologie, LNERV/ISRA, 6.P 2057, Dakar,
centrifugé. Le surnageant a été recueilli puis mis en ali-
Sénégal.
quotes après avoir déterminé le taux de protéines
Reçu le 154.1993, accepté le 11.10.1994.
(méthode électrophotométrique par référence à la table
Revue I?Iev. Méd. vét. Pays trop., 1994,47 (3) : 291-294
291
O.T. Diaw M.M. Seye M. Seye Y. Sarr G. Vassiliadès
nomographique de E. ADAMS). Deux dilutions de sérum
0,550 ”
-
ont été testées pour les épreuves sérologiques : l’une au
.
..
l/lOO et l’autre au 1/200 avec une concentration unique
0,495 --
: .
de conjugué à la péroxydase dilué au 1/5 000. L’antigène
fixé sur les plaques (Dynatech M.129A) était utilisé à la
concentration de 10 ug/ml dilué dans le tampon, Les
sérums de référence ayant servi pour la réalisation de ces
tests sont ceux récoltés sur l’agneau no1 avant infestation
pour le négatif et à la veille de sa mort pour le positif.
RÉSULTATS
Agneau no1
L’animal est mort à la 14e semaine après infestation (100
jours). A l’autopsie, on notait un début de calcification des
canaux hépatiques et la présence d’ascite dans la cavité
générale. Des douves adultes (39) ont été récoltées au
niveau du foie, et des oeufs ont été décelés dans le
parenchyme hépatique par examen microscopique.
Coprologie
MOUTON
. . . . .
*gneau
1 Sérum au 1/100
+++
Agneau 2 Sfxum a” I/l00
Toutes les analyses coprologiques sont restées négatives
00 00
Agneau 1 SBrum au 11200
jusqu’à la mort de l’agneau.
. .
. l
Agneau 2 Serum a ” 1/200
Sérologie (figure 1)
Dilution au 1/700
Sérologie (figure 1)
L’apparition des anticorps est intervenue dès la 3e semai-
ne ayant suivi I’infestation. Cependant, la courbe des
Dilution au I/l 00
densités optiques a connu une ascension dès la première
semaine. Le premier pic a été atteint à la 11 e semaine
Les premiers anticorps apparaissent à la 4e semaine et le
mais la valeur de la densité optique la plus élevée a été
premier pic est atteint à la 6e semaine, soit deux
enregistrée à la veille de la mort de l’animal, soit J+99.
semaines après. Comme précédemment, le maximum de
la valeur des densités optiques s’observe à la 10e semai-
Dilution au 1/200
ne après infestation et cette valeur se rapproche ne celle
La même ascension de la courbe des densités optiques
du sérum de l’agneau no1 à la même période mals avec
est apparue, mais les valeurs enregistrées sont plus
une dilution au 1/200.
faibles pour les mêmes sérums dilués au l/iOO. Le pre-
Dilution au Y/200
mier pic est observé à la veille de la mort de l’animal.
Les valeurs des densités optiques ont évolué de la même
Agneau no 2
manière que pour les épreuves précédentes et le pic se
situe à la 8e semaine. On note cependant une baisse de
L’agneau no2 n’a survécu que pendant 74 jours. A
la réponse immunitaire de l’agneau no2 dont les valeurs
l’autopsie, 56 douves immatures ont été récoltées au
des densités optiques de la dilution au l/lOO sent plus
niveau du foie mais aucun œuf n’a été observé à I’exa-
faibles que celles de l’agneau no1 à la même dilution et
men microscopique du parenchyme hépatique. L’agneau
se rapprochent plutôt des valeurs des densités optiques
n’a sans doute pas supporté I’infestation (migration mas-
de la dilution au 1/200 de ce même agneau.
sive des jeunes douves, foie fortement endommagé).
DISCUSSION
Coprologie
Dans cette étude comportant une infestation expérimen-
Aucun oeuf n’a été rencontré au cours des examens
tale avec F. gigantica, le test ELISA avec un a.ntigène
coprologiques effectués pendant l’expérience.
excrétion-sécrétion permet de déceler précocement, dès
2 9 2
PARASITOLOGIE
la 3e semaine, la présence des anticorps anti-F.
REMERCIEMENTS
gigantica. Ces résultats sont semblables à ceux obtenus
par BOULARD (2, 3) chez des bovins avec l’antigène
Les auteurs remercient le comité de lecture et de rédac-
excrétion-sécrétion de Fasciola hepafica et ceux de PFIS-
tion de la Revue d’Élevage et de Médecine vétérinaire
TER (18) sur lapins et bovins ; mais ici, on constate de
des Pays tropicaux, ainsi que le Dr C. BOULARD (INRA,
légères différences en ce qui concerne la réceptivité et la
Tours) pour les remarques, suggestions et corrections
réaction sérologique. En effet, chez le premier sujet, les
qu’ils ont bien voulu apporter à ce manuscrit.
anticorps anti-Fasciola sont plus précoces (3e semaine)
que chez le second (4e semaine). Cependant, SANTIAGO
DE WEIL et HILLYER (20) ont observé ces mêmes diffé-
rences qu’ils attribuent à un simple phénomène de compor-
BIBLIOGRAPHIE
tement individuel.
1. AMBROISE-THOMAS (P,), DESGEORGES (P.T.), BOUTTAZ (M.).
L’utilisation de ce test en milieu naturel, où les animaux
Le diagnostic immunoenzymologique (ELISA) de la fasciolose humaine et
sont polyparasités, pose cependant le problème des com-
bovine. Détection d’anticorps et/ou d’antigènes circulants. Ann/.~ Soc. belge
munautés antigéniques et des réactions croisées avec les
Méd. trop.. 1980,60 : 47-60.
autres parasites. Les recherches d’éventuelles communau-
tés antigéniques entre Fasciola et d’autres parasites du
2. BOULARD (C.), BOUVRY (M.), ARGENTE (G.). Comparaison de la
bétail sont abondamment documentées (3, 13, 18). Dans
détection des foyers de fasciolose par test ELISA sur lactosérum et sérum
cette étude,
et par coproscopie. Annls Rech. vlr.,l985, 16 (4) : 363-368.
on a testé la technique ELISA avec l’antigène
excrétion-sécrétion de F, giganfica en faisant un premier
3. BOULARD (C.), REGNAULT (A.). L’immunodiagnostic de la fasciolo-
essai sur 4 sérums de référence dont l’un est négatif
se bovine par la technique ELISA. Bull. G.T.V., 1989, l-B-337 : 59-68.
(agneau indemne de trématodes) et les 3 autres positifs,
respectivement à F. gigantica, Schistosoma bovis et
4. BURDEN (D.J.), HAMMET (N.C.). Microplate enzyme-linked immu-
nosorbent assay for antibody to Fusciola hel~lticn in cattle. Vet. Rec.,1978:
Paramphistomum
sp. Seul le sérum homologue a réagi
103-158.
avec une densité optique égale à 4 fois celle des autres (la
densité optique du négatif est sensiblement la même que
5. BURDEN (D.J.), HAMMET (N.C.). The ELISA test for detection of
celle des autres sérums hétérologues).
Fusciola hepatica infection in cattle. Parasitnlog.v, 1979, 79: 3.
Cependant au Nigeria, Fagbemi et a/ (8) ont montré la
6. DIAW (O.T.), VASSILIADES (G.), SEYE (M.), SARR (Y.). Proliféra-
communauté antigénique entre F. giganfica, Dicrocoe-
tion des mollusques et incidences sur les trématodoses dans la région du
hum hospes et S. bovis mais ceci à partir d’antigènes
delta et du lac de Guiers après la construction du barrage de Diama sur le
bruts et semi-purifiés de vers entiers. Ces résultats sont
fleuve Sénégal. Revue Élev. M&i. véf. Pays trop., 1990,43 (4) : 499-502.
d’une grande importance quant à l’utilisation du test
7. EUZEBY (J.). Diagnostic expérimental des helminthoses animales. Tra-
ELISA en zone tropicale et posent le problème de la
vaux pratiques d’helminthologie vétérinaire. Paris, Vigot frères, 1958.
spécificité de l’antigène.
8. FAGBEMI (B.O.), OBARISIAGBON (1.0.). Common antigen of Fus-
Cette méthode ELISA, utilisée dans un autre essai en
ciola giganrica, Dicrocoelium ho.spes and Schistosoma hovis and their rele-
milieu naturel (troupeau de 33 moutons), a permis de
vance to serology. Ver. Q. 1991,13 (2): 81-87.
retrouver les mêmes animaux infestés (6) par F, giganfica
diagnostiqués auparavant avec la méthode coproscopique.
9. FARRELL (C.J.), SHEN (D.T.), WESCOTT (R.B.), LANG (B.Z.). An
enzyme-linked immunosorbent assay for diagnostic of Fasciola heputica
Les observations préliminaires faites ici sur 2 agneaux
infection in cattle. Am. J. vei. Ru., 1981,42 (2): 237-240.
avec un antigène excrétion-sécrétion sont intéressantes
10. GORAISH (I.A.), ABDELSALAM (E.B.), TARTOUR (Ci.), ABBAS
mais les recherches doivent se poursuivre, avec un plus
(B.), ARADAIB (I.E.). The effect of levamisole (L. tetramisole) treatment
grand nombre d’animaux, pour mieux approfondir ce pro-
on the susceptibility to Fmciolu gigantica infection in goats. Revue Elev.
blème de réactions croisées avec les autres parasites et
Méd. vét. Pays trop., 1988,41 (3): 283-287.
déterminer les limites d’utilisation pratique de ce test.
II. GORAISH (I.A.), ABDELSALAM (E.B.), TARTOUR (G.). Suscepti-
b,ility to homologous reinfection with Fasciola giganticn in goats. Revue
CONCLUSION
Elev. Mld. vét. Pays trop., 1991,44 (1) : 69-73.
12. HILLYER (G.V.), SANTIAGO DE WEIL (N.). Use of immunologie
Les résultats de cette étude montrent que le diagnostic
technics to detect chemotherapeutic success in infections with Fusciola
ELISA utilisant un antigène métabolique excrétion-sécré-
hepatica II. The enzym linked immunosorbent assay in infected rats and
tion permet de déceler précocement la présence des anti-
rabbits. .I. Parmit., 1979,65: 680-684.
corps anti Fasciola giganfica chez le mouton alors que le
13. HILLYER (G.V.), SANTIAGO DE WEIL (N.). Serodiagnosis of expe-
diagnostic par les techniques de coprologie est impossible
rimental fasciolosis by immunoprecipitation tests. ht. J. Parusir., 1981. 11:
jusqu’au 3e mois. Cette technique est applicable aux
71-78.
études épidémiologiques de la fasciolose à Fasciola gigan-
f/ca et constitue un outil d’une grande importance dans
14. ITAGAKI (T.), OHTA (N.), HOSAKA (Y.), ISO (H.), KONISHI (M.),
CHINONE (S.), ITAGAKI (H). Diagnosis of Fasciola sp. infection in catt-
l’organisation et la mise en place de moyens de contrôle et
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ros. Revue E~T,. Méd. vét. Pays trop., 1994,47 (3) : 291-294
The purpose of this work was to investigate the use of the ELISA test
El objetivo de este estudio es el de probar la utilizacion de la técnica
for the diagnosis of fasciolosis (Fascioia gigantica) in sheep, in Sene-
de ELISA en Senegal, para el diagnostico de la fasciolosis por .Fus-
gai, nsing Fusciolu gigunticu metabolic excretion-secretion products
ciolu gigunticu en el cordero, utilizando como antigenos 10s produc-
as antigens. Coprological analysis results were negative until the
tos del metabolismo de excrecion y secrecion del parasita. Mientras
fourteenth week following infection; using the ELISA test , the first
que 10s analisis coprologicos clasicos fueron negativos hasta la sema-
anti-Fusciolu gigunticu antibodies cari be detected as early as the
na 14, el analisis inmunologico mediante el ELISA permit% la
fourth week following infection.
demostracion de 10s primeros anticuerpos anti-Fusciolu gigunticu a
partir de la cuarta semana post-infestacion.
Key words : Sheep - Lamb - Fasciolosis - Fusciola gigantica - Immuno-
diagnosis - Diagnosis - Immunological technique - Faeces - Blood -
Pulubras clave : Ovino - Cordero - Fasciolosis Fasciola giganrica -
ELISA test - Senegal.
Inmunodiagnostico - Diagnostico - Técnica inmunologica - Heces -
Sangre Test ELISA - Senegal.
‘
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