INSTITUT D'ÉLEVAGE ET DE MEDECINE VÉTÉRINAIRE...
INSTITUT D'ÉLEVAGE ET DE MEDECINE
VÉTÉRINAIRE DES PAYS TROPICAUX
REVUE D’ÉLEVAGE
ET DE
MÉDECINE VÉTÉRINAIRE
DES PAYS TROPICAUX
Effet de la pression osmotique
sur la multiplication du virus
de la peste bovine en culture cellulaire
par P. BOURDIN et A. LAURENT
Tome XXI (nouvelle série)
NO 4 - 1968
-‘-: -:- VIGOT FRÈRES, ÉDITEURS =Izxlz
23, rue de l’École-de-Médecine, PARIS-VI’


Rev. Elev. Méd. véf. Pays trop., 1965, 21, 4 (437-441).
Effet de la pression osmotique
sur la multiplication du virus de la peste
bovine en culture cellulaire
P. BOURDIN ef A. LAURENT
R É S U M É
Une solution contenant 70 p. 100 de Hanks LAYE et dont la valeur osmotique
est égale à 219 milliosmoles, appliquée pendant 2 h 30 à des cellules rénales
d’embryon de veau inoculées depuis 3 jours avec le virus de la peste bovine,
augmente de façon appréciable le titre de ce virus.
EATON et SCALA (1956) pour le virus
MATÉRIEL ET MÉTHODES
.
Influenza, puis TOLSKAYA et coll. (1966) pour
le virus poliomyélitique, ont remarqué une
1) Cultures cellulaires.
inhibition de la multiplication de ces virus en
culture cellulaire lorsque les cellules infectées
La technique de culture cellulaire mise au
sont soumises à l’action d’un milieu hypotonique.
point par PLOWRIGHT et FERRIS (1959) pour
Ces auteurs ont montré que cette inhibition était
la multiplication du virus pestique sur cellules
en relation avec une diminution de la pression
rénales d’embryon de veau a été utilisée pour
osmotique.
l’ensemble des expériences. Les cellules sont
II a paru intéressant d’étudier l’action de la
mises en culture dans des flacons de 250 ml de
pression osmotique sur des cellules rénales
type « pharmacie » avec du milieu de Hanks
d’embryon de veau inoculées avec un Para-
LAYE contenant 10 p, 100 de sérum de veau,
% -
myxovirus, le virus de la peste bovine. Les virus
à raison de 25 ml par flacon et incubées à
de ce genre sortent de la cellule au niveau de
37OC. Au bout de 48 heures, ce milieu est
la membrane, comme l’ont montré COMPANS
renouvelé avec cette fois 5 p. 100 de sérum
I*.
et coll. (1966) pour le Para-lnfluenza et PRO-
de veau. Le tapis cellulaire est inoculé à la
VOST et coll. pour la peste bovine. Ce dernier
72e heure et le milieu d’entretien est constitué
a observé la formation de bourgeons viraux
par du Hanks LAYE., auquel on ajoute 2 p. 100
dès la 14e heure après l’infection. Des modifica-
de sérum de boeuf et 3 p. 100 de bicarbonate de
tions de la pression osmotique au niveau de la
soude à 55 p. 1.000. Tous ces milieux contien-
membrane cellulaire peuvent donc avoir une
nent des antibiotiques à raison de 100 UI de
influence sur la libération des particules virales
pénicilline, de 100 gama de streptomycine et
dans le milieu extérieur.
de 150 UI de mycostatine par millilitre.
431
REVUE D’ÉLEVAGE
3

2) Virus.
fait sur tubes roulants. La DICT 50 est calculée
Le virus est constitué par la souche Kabete 0
selon la méthode de REED et MUENCH (1938).
adaptée aux cellules rénales d’embryon de veau
par PLOWRIGHT et FERRIS (1959) et c’est
PREMIÈRE EXPÉRIENCE
son 103e passage qui est employé.
D’après les titrages effectués par PLOWRIGHT
3) Inoculation.
et FERRIS (1959) (1963) et les études personnelles
Les cultures cellulaires âgées de 3 jours sont
faites au microscope électronique, il est démontré
2
vidées de leur milieu et mises en contact pen-
que le virus de la peste bovine se répand de
dant 30 mn avec 1 ml de suspension virulente
façon importante dans le milieu extérieur dès
contenant 320.000 DICT 50. Au bout de ce temps,
le 3e jour, avant même que son effet cytopatho-
et suivant leur destination, les flacons sont
gène ne soit visible au microscope optique.
:
remplis avec, soit 25 ml de milieu d’entretien,
En conséquence, il a semblé intéressant dans un
soit 25 ml de solution hypotonique.
premier temps, d’essayer l’action de milieux
hypotoniques, dont la pression osmotique décroît
4) Solutions hypotoniques.
régulièrement de 100 p. 100 à 10 p. 100, sur des
II est pris comme bases, pour la préparation
cellules inoculées depuis 3 jours. Le contact
des solutions hypotoniques, d’une part le milieu
milieu hypotonique-cellule infectées a été fixé
de Hanks LAYE dont la pression est estimée
arbitrairement à 2 h 30. Après ce temps, les
à 100 p. 100, d’autre part l’eau distillée stérile
flacons sont rincés trois fois avec du Hanks LAYE,
dont la pression osmotique est estimée à 0 p. 100.
puis le milieu d’entretien est remis. Milieux
Il est préparé des solutions de Hanks LAYE
hypotoniques et milieux de rinçage sont soi-
contenant 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 p. 100
gneusement additionnés d’antibiotiques dans
d’eau distillée. La pression osmotique de cha-
les proportions déjà précisées. Les flacons sont
cune de ces solutions a été calculée à I’osmomè-
récoltés lorsque l’effet cytopathogène atteint
tre. Les résultats obtenus en milliosmoles sont
80 p. 100 des cellules et les liquides virulents sont
consignés dans le tableau ci-dessous.
conservés Ci -20°C jusqu’au titrage. Pour
TABLEAU No 1
Milieu
Pression
Valeur en p. 100
Hanks-hctalbumine
Eau
distillée
osmotique
de La.Y.E.
extrait de levure
Pur
0
307
100 p. 100
9 0 ml
10 ml
278
9 0
"
80
-
20
-
249,5
80
"
70
-
30 -
219
70
"
60
-
40
3
179
60
"
50
-
50
-
158
50
"
40
-
60
-
130
40
'>
.
4-r
30
-
70
"
94,5
30
"
20
-
80
-
64
20
'I
10 -
90 -
30,5
10
"
i
0
-
100 -
0
0
"
5) Titrage du virus.
chaque série d’expériences, les titrages sont
Le virus est récolté lorsque le tapis cellulaire
effectués sur les cellules d’un même embryon et
est détruit à 80 p. 100. Les flacons sont conser-
un témoin est mis en parallèle à titre compara-
vés à -20 OC en attendant le titrage qui est
tif.
438

RÉS U LTATS
>,’
:
>
2Ch
4Bh
7Zh
10 20
30
40 50
60
10
8 0 90 1 0 0
Milieux h.ypoton~qu*+ en p. 100 de
HANKS L A Y E
Fig.1
Fig. 2. - La solution hypotonique contient 70 p. 100
je H A N K S L A Y E . e t a é t é a p p l i q u é e p o u r c h a q u e
Fig. 1. - Les solutions hypotoniques ont été appliquées
emps pendant 2 h 30.
au bout de 3 jours d’infection, pendant 2 h 30.
avec les cellules trois jours après l’inoculation
L’examen de la figure I nous montre que le
exalte de façon importante la multiplication du

virus est présent en quantité plus importante
virus. On peut voir également que cet effet est
dans les cultures ayant subi l’action d’un milieu
progressif suivant le stade de la replication
hypotonique contenant 70 p. 100 de H. LAYE
virale.
c
(pression osmotique : 219 milliosm.).
TROISIÈME EXPÉRIENCE
DEUXIÈME EXPÉRIENCE
Les deux expériences précédentes ont mis
D’après les résultats de la première expé-
en évidence que l’introduction d’une solution
rience,
il s’est avéré intéressant d’étudier
hypotonique contenant 70 p. 100 de Hanks
l’influence d’une solution hypotonique à 70 p,
LAYE., 3 jours après l’inoculation du tapis cellu-
100 de H. LAYE à divers temps de la multi-
laire exaltait la replication du virus pestique.
plication du virus. Cette solution est introduite
Le temps de contact cellules infectées, solutions
30 mn, 24, 48 et 72 h après l’inoculation et
hypotoniques fixé arbitrairement est de 2 h 30.
laissée en contact 2 h 30. Les conditions de
II reste à vérifier si une variation de ce temps
lavage, d’entretien, de récolte et de titrage
peut aussi influencer la multiplication. Dans ce
sont les mêmes que précédemment.
but, les temps de contact ont été de 1, 2, 3, 6, 7,
8, 9, 14 et 33 h. Au-delà de ce délai, les cellu-
RÉSULTATS
les présentaient des lésions dues à un effet
toxique.
L’examen.de la figure 2 permet de constater
Pour chaque série d’expériences, le titrage
que la solution hypotonique mise en contact
est faii sur des cellules provenant d’un même
439

embryon. Les titres sont comparés au titre
DISCUSSION
d’un liquide virulent témoin n’ayant subi aucun
traitement.
Les expériences précédentes montrent que :
RÉSULTATS
1) suivant la valeur de la pression osmotique
donnée en p. 100 de H. LAYE, la replication
Les résultats réunis dans la figure 3 col?fit--
du virus pestique sur cellules rénales d’embryon
ment que pour obtenir une augmentation du
de veau est inhibée pour de faibles concentra-
titre du virus pestique, il convient de laisser
tions (10, 20 p. 100) sans changement pour les
agir la solution hypotonique entre 2 et 3 h.
concentrations avoisinant 50 p. 100 et 100 p. 100,
Fig. 3. - La solution hypotonique est à 70 p. 100 de HANKS La. Y. E.
et a été appliquée au 3e jour de l’inoculation.
mais qu’elle est exaltée pour les concentrations
3) La durée d’action d’un milieu hypotonique
voisines de 70 p. 100 (Fig. 1).
à 70 p. 100 de H. LAYE 3 jours après l’inocu-
lation est aussi un facteur important puisque
2) pour un milieu hypotonique contenant
pour un temps de contact de 1 h, la sortie du
70 p. 100 de H. LAYE, cette replication est
virus est faible, qu’elle est importante pour un
inhibée au début de l’inoculation des cellules
temps de 2 à 3 h, et qu’elle diminue progressive-
et est augmentée à partir de la 24e h pour deve-
ment pour des temps compris entre 6 et 33 h
nir maxima au 3e jour (Fig. 2). Cette observation
(Fig. 3). On peut penser que la solution hypo-
semble indiquer que l’action d’un milieu hypo-
tonique appliquée trop longtemps altère la
tonique défavorise la pénétration du virus dans
membrane cellulaire, la rendant impropre à
la cellule, mais facilite sa sortie, particulière-
assurer son rôle primordial dans la formation
ment au 3e jour, époque à laquelle le virus cul-
complète du virus. Il est difficile d’expliquer
tivé dans des conditions normales est déjà abon-
l’inhibition résultant de l‘application de la solu-
dant dans te milieu extérieur.
tion hypotonique pendant 1 h.
440

CONCLUSION
replication du virus de la peste bovine par
l’abaissement de la pression osmotique.
Contrairement aux observations de EATON et
Institut d’Elevage et de Médecine
SCALA (1956) pour le virus Influenza et TOLS-
vétérinaire des Pays tropicaux
KAYA et coll. (1966) p our le virus poliomyéliti-
Laboratorre National de I’Ele-
que, dans des conditions bien précises, il est
vage et de Recherches vétéri-
possible d’obtenir une augmentation de la
naires du Sénégal, Dakar-Hann.
SUMMARY
Effect of the osmotic pressure on the multiplication
of rinderpest virus in cell culture
The htre of rinderpest virus inoculated in calf embryo kidney cells for three
days has been increased by action for two and a half hours, of a 70 per cent
Hanks LAYE soluiion at 219 milliosmoles osmotic pressure.
RESUME N
Efecto de la presion osmotica sobre la multiplication
del virus de la peste bovina en cultivas celulares
Se colocon durante 2 h 30 células renales de embrion de ternero inoculadas
desde 3 dias con el virus de la peste bovina en una soluci6n cabiendo 70 p. 100
de HANKS LAYE y cuyo valor osmotico es de 219 miliosmoles.
Esta solution aumenta notablemente et titulo del dicho virus.
BIBLIOGRAPHIE
.
COMPANS (R-W.), HOLMES (K. V.), SAMUEL
of rinderpest virus in primary calf kidney
( D . ) , C H O P P I N (P. W . ) . - A n electron
cells. Arch. f. Virusforschung, 1963, XIV :
microscopic study of moderate and virulent
43’1-48.
*
virus cell interactions of the Para-lnfluenza
PROVOST (A.), QUEVAL (R.), et BORREDON
virus SV5. Virology, 1966, 30 : 411-26.
(C.). - Quelques recherches fondamen-
EATON (M. D.) et SCALA (A. R.). - Reversible
tales sur le virus bovipestique. Rev. Elev. Méd.
effect of hypotonic solutions on growth of
vét. Pays trop., 1965, 18 (4) : 371-83.
influenza virus in tissue culture. froc. soc.
REED (L. J.) et MUENCH (H.). - Amer. J. Hyg.,
exp. Biol. (N. Y.), 1956, 92 : 289-97.
1938, 27 : 493.
PLOWRIGHT (W.), et FERRIS (R. D.). - Studies
TOLSKAYA (E. A.), AGOL (V. l.), VOROSHI-
,
with Rinderpest virus in tissue culture.]. camp.
LOVA (V. l.), LIPSKAYA (G. Yu.). -The
Path., 1959, 69 : 151-76.
osmotic pressure of the maintenance medium
PLOWRIGHT (W.), et FERRIS (R. D.). - The
and reproduction of Poliovirus. Virology,
growth of virulent and attenuated strains
1966, 29 : 613-21.
_-- -
Imprimé en France. - I~D JOUVE. 12. Rue de Tournon. Paris (6’)