REPUBLIQUE DU SENEGAL MINISTERE DU DEVELOPPEMENT...
REPUBLIQUE DU SENEGAL
MINISTERE DU DEVELOPPEMENT RURAL
. DEPARTEMENT DE RECHERCHES SUR LES
PRODUCTIONS ET LA SANTE ANIMALES
INSTITUT SENEGALAIS DE RECHERCHES
AGRICOLES (I.S.R.A.)
4
LABORATOIRE NATIONAL DE L’ELEVAGE
ET DE RECHERCHES VETERINAIRES
B.P. 2057
D A K A R - HANN
i)/ 0 T E
T E C H N I Q U E
TECHNIQUE DES PRELEVEME@JTS FOUR
ANALYSES YICROBIOLOGlQIUES
Par Dr M. KONTE
REF. No 061 /MICROBIO.
SEPTEMBRE 1988.

R E S U M E
Note technique à l’attention des agents de IlElevage dans l’optique de
l’harmonisation et de l’amélioration des techniques de prélèvements destinés
au diagnostic de laboratoire.

TECHNIQUE DES PRELEVEMENTS POUR ANALYSES
BACTERIOLOGIQUE ET VIROLOCIQUE
1. S A N G
A. Sang pour préparation de sérum
- But :
Sérologie, recherche d”anticorps spécifiques.
- Matériel
“Vacutainer”
(ou assimilés) ou seringue stérile, flacons fermant
hermétiquement.
- Techniques
. Recueillir le sang de préférence à l’aide de vacutainer par ponction de la
veine jugulaire, à défaut utiliser une seringue préalablement stérilisée ;
. Laisser le sang coaguler à la température ambiante : 3 à 4 heures ;
. La rétraction complète durant un repos supplémentaire d’environ 4 heures
est souvent facilitée par un décollage à l’aide de fil de fer par exemple ;
. Recueillir le sérum par décantation dans un flacon bouchant hermétiquement
OU mieux après centrifugation ;
. Inscrire sur le flacon les éléments d’identification ;
. Conserver les flacons de sérum au réfrigkrateur ou au congélateur.
- Exnédition
Sous froid (en glacière ou boite isotherme)
N.B. : Le sérum peut être congelé, mais jamais le sang (risque d’hémolyse).
Joindre une fiche de renseignements,
. . . I . . .

- 2
B. Sang pour hémoculture
- But
Isolement de germes bactériens.
- Matériel
Vacutainer (de préférence) avec anticoagulant ; flacons à bouchon ; un
anticoagulant (citrate de soude, héparine.. .), exemple : 3 ml de citrate de
soude à 2 % pour 10 ml de sang ; boîte isotherme.
- Technique
. Faire plusieurs prélèvements espacés de quelques heures (décharge fugace
de bactéries dans la circulation) ;
. Effectuer les prises de sang en phase d’hyperthermie ;
. Prélever 10 à 40 ml de sang par ponction aseptiques à la jugulaire sur
animal à jeûn.
- Expédition
Ne pas congeler. Envoyer sous froid accompagné d’une fiche de rensei-
gnements.
. . . I . . .

- 3
I 1. ORGANES
A. Orqanes thoracique et abdominale
- But
Diagnostic des maladies microbiennes par isolement à partir d’organes
lésés : poumon, foie, rate, reins, ganglions, coeur.
- Matériel
Couteau désinfecté, flacons stériles à large ouverture fermant hermétique-
ment, sacs en plastique,
réfrigérateur,
bolte isotherme.
- Technique
. Effectuer les prélèvements immédiatement après la mort de l’animal, ne jamais
attendre au delà de 6 heures après la mort si ce n’est le cadavre d’un petit
animal conservé au froid ;
. Prélever ganglions, fragment de foie ou de poumon ; coeur et reins restent
entiers ;
. Les placer dans les flacons ou les sacs en plastique, et conserver au
réfrigérateur.
N . B . : Toutes les fois que cela est possible, utiliser le cadavre frais d’animaux
sacrifiés en période agonique ; prélever dans des conditions aseptiques
et utiliser du matériel stérilisé.
- Expédition
Sous froid. Joindre une fiche de renseignements.
B. Cerveau
- But
Diagnostic de la rage.
. . . / . . .

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- Matériel
Couperet, marteau, bistouri ou couteau, gants de caoutchouc, 2 flacons
à large ouverture fermant hermétiquement, formol à 12 %, glycérine à 50 %,
sparadrap.
- Technique
. Travailler avec soins pour éviter blessures et contaminations ;
. Enlever peau et muscle du haut du crâne, faire 3 incisions pour enlever
la calotte crânienne (la première en travers du crâne en arrière des yeux,
les deux autres de chaque côté du crâne) ;
. Prélever le cerveau et séparer les deux moitiés ;
. Mettre une moitié dans un flacon contenant le formol à 12 % et l’autre moitié
dans un flacon contenant de l’eau glycérinée à 50 % ;
. Désinfecter soigneusement tout le matériel ayant servi à faire l’autopsie ;
. Ne jamais congeler les prélèvements.
- Exbédition
. Fermer hermétiquement les flacons avec du sparadrap.
. Placer les flacons dans une boite rigide contenante de la sciure de bois,
du coton, du papier ou du sable.
. Joindre une fiche de renseignements.
. Envoyer au laboratoire en indiquant sur l’étiquette “Prélèvement pour diagnos-
tic de la rage”.
. . . / . . .

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C. Os long
- But
Diagnostic des charbons et des pasteurelloses.
- Matériel
Couteau, réfrigérateur,
boîte isotherme.
- Technique
. Prélever l’os long d’un des membres, de préférence métacarpe ou métatarse ;
. Enlever tous les fragments de chair ;
. L’envelopper à sec dans un linge propre ou dans un sac en plastique ;
. Conserver au réfrigérateur.
- Expédition
Si l’os doit voyager longtemps, l’emballer dans du sel ou sous protection
du froid ; joindre une fiche de renseignements.
. . . I . . .

- 6
III. P U S
- But
Isolement de bactéries ou de virus.
- Matériel
Seringue stérile, tubes ou flacons stériles bouchant hermétiquement,
spatule stérile.
- Technique
. Abcés ouvert : procéder par nettoyage de la plaie puis grattage ; réaliser
les prélèvements le plus stérilement possible
. Abcés fermé : antisepsie cutanée, ponction avec une aiguille de diamètre
supérieur à 1 mm.
- Exnédition
Envoyer le pus dans la séringue de prélèvement après courbure de l’aiguille,
sous froid, ou le déposer dans un tube ou flacon bouchant hermétiquement.
Joindre une fiche de renseignements.
. . . / . . .

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I V . L A I T
- B u t
isolement de bactéries ou de virus.
- Matériel
Tubes à vis, flacons bouchant hermétiquement, stériles, alcool.
- Technique
. Laver et sécher complètement la mamelle ; aucun liquide ne doit s’écouler
sur le trayon ;
. Prélever séparément les 4 quartiers ;
. Désinfecter l’extrémité du trayon à l’alcool à 70’ ; il est important d’insister
sur l’orifice du canal du trayon ;
. Le flacon stérile est ouvert au dernier moment, le bouchon étant tenu pour
protéger le flacon qui restera le plus possible à l’horizontal ;
. Les premiers jets de lait sont éliminés et 10 ml de lait sont prélevés en
évitant de bouger le flacon qui sera immédiatement fermé sans être déplacé.
- Expédition
Sous froid mais non congelé.
Joindre une fiche de renseignements.
. . . / . . .

- 8
V. AVORTEMENTS
- B u t
Isolement de bactéries ou de virus ; sérologie.
- Matériel
Vacutainer,
écouvillons stériles, flacons stériles à large ouverture ou
sacs en plastique stériles.
- Techniaue
. Prélever du sang pour préparation de sérum (selon la méthode classique)
sur la femelle ayant avorté ;
. Prélever les sécrétions utérines (par écouvillonnage du col utérin), les
enveloppes ou fragments d’enveloppes, les avortons ou leurs organes
(estomac, rate, os long désarticulé). ;
N-B : Opérer avec soins pour éviter contamination ou propagation du contage.
- Expédition
Sous froid, congelés. (à l’exclusion du sang) ou non ; joindre une fiche
de renseignements,
..a /.
. .

- 9
VI. ECOUVILLONNAGES NASAL ET OCULAIRE
- B u t
Isolement de bactéries ou virus à tropisme respiratoire (agents de pneumo-
pathies) ou oculaire.
- Matériel
Ecouvillons sur tige en plastique ou en métal, de préférence à tige en
bois, matériel de froid.
- Technique
. Ecouvi I lonnage
: ne pas réaliser le prélèvement au stade jetage muco-purulent
ou purulent (le virus éventuel n’est plus retrouvé dans le jetage, et seule-
ment la flore banale bactérienne subsistera en plus de bactéries de sunrinfec-
tion ;

. Enfoncer l’écouvillon le plus profondément possible dans les cavités nasales.
. Ecouvillonnage oculaire : introduire l’écouvillon dans le cul-de-sac conjontival
inférieur,
sans toucher la face extérieure de la paupière.
- Expédition
Sous froid en évitant tout dessèchement des prélèvements si usage non
fait des milieux de transport du genre “portagerm ND” de BioMérieux “T.G.V.
ND” de l’Institut Pasteur Production, “culturet Pak ND” de Polylabo.
Joindre une fiche de renseignements.
. . . l . . .

- 10
VII. FECES
- But
Isolement de bactérie (Salmonelles, autres entérobactéries bacille de
Johne.. . ) et de virus (Coronavirus, Rotavirus).
- Matériel
Ecouvillons stériles,
tubes ou flacons stériles bouchant hermétiquement,
gants en caoutchouc stériles.
- Technique
Pour analyses bactériologique : prélèvement dans ampoule rectale ou rectum
ou dès leur émission (60 à 80 ml de prélèvement ;
Lors de diarrhée aiguë, prélever dans les heures qui suivent l’apparition
des symptômes ;
Ne pas congeler, utilisation parfois de milieu de transport spécial ;
Envoie possible d’anses intestinales ligaturées prélevées en régions les plus
liquides ;

Pour analyse virologique, procéder par écouvillonnage rectal ; la congéla-
tion est possible ; utiliser un milieu de transport (Hanks).
- Expédition
Sous froid. Joindre une fiche de renseignements.

- 11
VIII. URINES
- But
I solement de bactéries.
- Matériel
Flacons stériles bouchant hermétiquement.
- Technique
. Opérer par sondage ou prélever lors de miction après asepties 10 à 20 ml
d’urine.
- Expédition
Envoie rapide, sous froid (4OC).
Joindre unefiche de renseignements.
IX. LIQUIDES D’EPANCHEMENT
- B u t
Prélèvement de liquide pleural, péritonéal, péricardique, pour isolement
microbien.
- Matériel
Seringues et flacons stériles.
- Technique
. Lymphe thoracique : ponction aseptique de la cavité thoracique entre la 7ème
et la 8ème côte ; déposer le liquide dans le flacon stérile ;
. Liquide péritonéal : prélever par ponction aseptique dans la cavité abdomi-
nale et déposer dans le flacon stérile.
- Expédition : Sous froid. Joindre une fiche de renseignements.

- 12
FICHE DE RENSEIGNEMENTS
Le prélèvement doit être impérativement accompagné d’une fiche de rensei-
gnements détaillée, établie en 3 exemplaires : un exemplaire est conservé par
I’expédi teur, le second est adressé directement au laboratoire par les voies
les plus rapides, le troisième est placé dans le colis contenant le prélèvement,
YODELE DE FICHES
No de référence :
Nom, fonction et adresse de l’expéditeur :
Date et lieu de prélèvement :
Intervalle de temps entre le moment de la mort et celui du prélèvement :
Espèce, sexe, âge de l’animal sur lequel a été effectué le prélèvement :
Nature du prélèvement :
Nature de la recherche demandée :
Résultat de l’examen :
- de l’animal sur lequel a été effectué le prélèvement :
- des autres animaux du troupeau présentant apparemment la même maladie :
Résultat de l’autopsie :
Maladie suspectée :
Effectif du troupeau où a été effectué le prélèvement :
Nombre de malades dans le troupeau à la date du prélèvement (malades actuels)
en précisant si.. la morbidité est en relation avec certains facteurs (âge, sexe,
e t c . . . )
Nombre de morts dans le troupeau à la date du prélèvement :
Date d’expédition :
Observations (constatations ou renseignements pouvant présenter un intérêt
pour l’orientation du diagnostic).

- 13
Nature du prélèvement en fonction de la maladie suspectée
P R E L E V E M E N T S
Maladies suspectées
Sang
Sérum
Ganglions Os long
Divers
1Maladies bactériennes
Péripneumonie
+
Lymphe thora-
cique
Tuberculose
-t
Farcin du boeuf
+
Paratuberculose
Produit raclage
muqueuse rec-
tale ; fécès, in-
testin grêle, gan

glion mésentérique
Charbon bactéridien
+
Rate
Charbon symptomatique
+
1 Muscle à tumeur
Pasteurelloses
+
Fragment tissu
pulmonaire

Botulisme
Foie, contenu
stomacal

Streptothricose
Croûtes
Brucet lose
+
Cotylédons
Listériose
Cerveau, avorte
ton, cotylédon

Leptospi rose
+
Avorton
Campylobactériose =
Mucus vaginal e’
Vibriose
préputial, avorton
Chlamydiose
+
Cotylédons
Fièvre Q
+
Cotylédons
Syndromes divers : mammites
Lait
métrite
Ecoulement,
vaginal

diarrhée
fécès
abcès
Pus
arthrite
liquide synovl.
Maladies virales
Peste bovine et maladies
+
+
apparentes
Peste porcine
+
+
Peste équine
+
l--
. . . /. . .

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Peste des petits ruminants
Rate
Ecthyma contagieux
Croûtes labiales,
muqueuse gingi-

vale
Clavelée
Croûtes, vésico-
pustules

Fièvres aphteuse
Liquide vésicu- :
laire épithélium
lingual et labial

Blue tongue
Rate
Virus à tropisme respira-
Ecouvillonnage
toi re
nasal pour ense-
mencement immé-
diat

Maladies aviaires
Sujets agonisants
cadavres frais

entiers