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REPUBLIQUE DU SENEGAL
**********
l‘1: MINISTERE DU DEVELOPPEMENT RURAL
i‘.
I
**********
; 1 IINSTITUT SENEGALAIS DE RECHERCHES
,
AGRICOLES (1 .S.R.A.)
**********
1 DEPARTEMENT DE RECHERCHES SUR LES
PRODUCTIONS ET LA SANTE ANIMALES
i
**********
i/ LABORATOIRE NATIONAL DE L’ELEVAGE
ET DE REChTRCHES VETERINAIRES
‘B.P. 2057
I
DAKAR - HANN
il
CONVENTION AIEA/ISRA NO4975 RELATIVE A
L’UTILISATION DE LA TECHNIQUE ELISA DE
DETECTION DES ANTIGENES DANS L”ETUDE
DE L’INCIDENCE DE LA TRYPANOSOMIASE
ANIMALE EN ZONE D’ELEVAGE DU DIAKORE
(CROISEMENT ZEBU-NDAMA)
RAPPORT SUR LES TRAVAUX EFFECTUES AU
COURS DU PREMIER TRIMESTRE DE LA
DEUXIEME PHASE
(DECEMBRE 1989 - MARS 1990)
A.DIAITE, M.SEYE, A.MANE et Mme T.NDIAYE
R E F . N”2WMRASllO.
AVRIL 1990.

RESUME
La technique de détection des antigènes circulants par usage d’anticorps mono-
clonaux fait l’objet de validation dans la zone de Sokone (Sénégal).
IC.’ I
Des traitements ont été faits sur differents lots et l’incidence du traitement
sur la modification de la densité optique est appréciée.
II semble que la zone comporte
des souches chimie-résistantes
MOTS CLES
i :
Antigènes circulants, traitement, chimie-résistance
I
SUMMARY
The antigen ELISA trapping method, using monoclonal antibodies, is being
validated in tho Sokone area (Senegal) treatments have been made on differents
groups and the incidence of such treatments on the variation of the optical
densities is analysed. It seems, finally , that some chiomio-resistants strains do
exist in the area.
KEY -WORDS
Circulating antigens, treatment, chimie-resistance.
i

INTRODUCTION
Les travaux menés en exécution de la première phase de cette convention ont
montré que la technique ELISA de détection d’antigènes sériques trypanosomiens
poürrait devenir un complément précieux des méthodes habituelles de diagnostic
des trypanosomiases bovines par l’examen de sang au microscope.
En effet, des animaux à parasitémie si faible qu’elle sera indécelable au micros-
cope peuvent se montrer séro-positifs par cette technique.
De plus, il ressort d’autres travaux que la disparition des antigènes de la
circulation générale après traitement se produirait beaucoup plus vite que pour
c :’
les, anticorps , ce qui est un avantage’idiagnostic évident par rapport à la
technique de détection des anticorps. Mais ces constatations faites sur des
analyses relativement réduites, sont à confirmer à partir d’échantillons plus
importants en nombre et plus diversifiés quant à leurs provenances géographi-
ques. C’est la condition d’une validation définitive de la technique pour un
usage généralisé, et c’est l’objet de cet.te seconde phase des investigations
commencées au Sénégal depuis décembre 1988.
Les détails concernant le protocole de terrain et les analyses de laboratoire,
déjà indiqués dans plusieurs rapports, ne sont pas repris ici. Seules sont
mentionnées les innovations introduites. En outre, ce rapport, nécessairement
succinct, se limite aux résultats commentés du premier trimestre de la seconde
phase (décembre 1989 - mars 1990). Un dépouillement plus exhaustif suivi
d’une discussion et de conclusions interviendra à la fin des travaux relevant
de cette phase.
1. MATERIEL ET METHODES
Les animaux-cibles sont les mêmes que ceux de la première phase, sauf que
dix parmi eux (n O 91 à 100) n’ont pas subi les prelèvements post-thérapeutiques
par suite du désistement de l’éleveur-propriétaire.
. . . / . . .

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.
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b
- 2
L’innovation principale par rapport au protocole de la première phase a porté
sur les traitements : l’ensemble des animaux-cibles ont été traités au Bérénil
aussitôt après le premier prélèvement (visite n06, décembre 1989), puis au
trypamidium 15 ou 45 jours après.
I‘I
Le tableau ci-dessous donne le détail de ces traitements.
T R A I T E M E N T S
LOT
B&éni I
Trypamidium 0,5 mglkg
do 81 à
90
10,5 mg/kg, I . M .
15 jours après bérénil
No101
à 110
10,5 mg/kg, I . M .
45 jours après bérénil
No111
à 120
7,0 mglkg,
I . M .
15 jours après bérénil
No 91 à 100
3,5 mg/kg, I . M .
15 jours après bérénil
Ces traitements étaient destinés à apprécier leurs effets sur I’antigénémie et
à savoir s’il y avait ou non des souches de trypanosomes chimie-résistantes et,
le cas échéant, la nature et le degré de la résistance.
Les autres innovations concernent la préservation des sérums avec du benzoate
de sodium à la place de I’azide de sodium, l’usage d’un nouveau lot d’anticorps
et de conjugué monoclonaux à diluer respectivement au 1/500 et au 1 /lOOO au

lieu de l/lOO, d’une eau oxygénée livrée en pastilles effervescentes, à dissou-
dre dans de l’eau distillée, d’ABTS en poudre à reprendre également dans de
l’eau distillée, ces deux derniers réactifs ayant été livrés prêts à l’emploi dans
le premier trousseau. En effet, des éponges spéciales ont été utilisées pour
égoutter les plaques après lavages, à la place des mouchoirs absorbants.
II n’y a pas eu d’autre modification, ni du protocole de terrain, ni des analyses
en laboratoire.
c
. . . ! . . .

- 3
I 1. RESULTATS
2.1 - Hématocrite
L&tableau suivant donne les moyennes de I’hématocrite avant et après les
traitements.
MOYENNE % DE L'HEMATOCRITE + INTERVALLE DE CONFIANCE A 5 P.100
Avant bérénil
15j.après
bérénil 45 j. après bérénil lmois après trypam. 2moi.s après trypam.
35,39 + 2,41
37,34 + 2,35
31,43 5 6,37
37,16 2 2,17
36,89 2 3,43
L’effet des traitements trypanocides est net ici : remontée significative de
I’hématocrite 15 jours après l’administration du Bérénil, suivie d’une chute
également significative 45 jours aprés, c’est-à-dire un mois environ après la
fin de l’action du médicament dans le lot qui n’a pas encore reçu de trypami-
dium (bovins no1 0 à 120).
après
Par contre, les animaux traités au trypamidium 15 jours/le Bérénil ont gardé
un hématocrite stable et élevé deux mois après ce traitement. Ce qui semble
signifier une protection d’ensemble bonne mais de courte durée conférée dans
un premier temps par le Bérénil, puis relayée par celle plus durable due au
trypamidium.
A noter seulement que quelques individus échappent à cette règle générale
et obtiennent des hématocrites faibles tout au long de cette période.
2 . 3 - Coprologie
L’examen des selles prélevées en février 1990 (visite n09) donne des résultats
similaires à’ ceux obtenus lors de la première phase : infestations de niveau
1
très faible par des Strongles, des Coccidies, des Douves et des Paramphistomes.
,
/
. . . . . .

- 4
2 . 3 - Trypanosomes
La lecture de l’interphase sur le terrain puis des frottis en laboratoire n’a
permis de déceler qu’un seul cas de T.congolense (bovin no1 08) et un autre
cas de T.theileri (nO89).
Ces cas se rapportent à la visite n06, décembre 1989, avant le traitement au
Béréni 1.
T. vivax et T. brucei n’ont pas été visualisés.
2 . 4 - Autres hémoparasites
Il s’agit, principalement de Theileria mutans et Setaria Iabiatopapillosa, parasites
non pathogènes et, plus rarement, Anaplasma marginale, qui peut quelquefois
être hautement pathogène.
2 . 5 - Sérologie
Les figures I à IV indiquent à la fois les résultats d’ensemble des épreuves
sérologiques et les fluctuations de I’antigénémie après les traitements trypano-
cides.
Les tableaux 1 a 3 donnent les détails chiffres de ces resultats;
En retenant la densité optique de 0,050 comme seuil de posi, tivité, nous obte-
nons, sur 135 analyses :
i
T, brucei :
-. - - - -
5 séro-positifs, soit 3,70 p. 100 ; aucun cas à I ‘examen des lames.
T . v i v a x : 23 cas, soit 17,03 p.100 ; là aussi, toutes les lames lues étaient
- - - - - -
négatives
T. congolense : 1 cas diagnostiqué au microscope et confirmé en sérologie ;
17 autres séro-positifs mais aparasitémiques. Au total donc
18 sur 135 analyses, soit 13,33 p.100.
. . . / . . .

- 5
Ces chiffres, bien qu’intéressants, donneraient à eux seuls une idee incomplète ;
des résultats.
En les examinant en fonction des traitements (tableaux 1 à 3), on note :
- que les pourcentages de séro-positivité les plus élevés se rapportent aux
prélévements effectués avant les traitements. Sauf pour les sérums de 45
jours après le Bérénil pour T.vivax. Et ces sérums pourraient bien se ranger
parmi les échantillons avant traitement puisqu’en 45 jours, l’activité du béré-
nil aura cessé depuis longtemps ;
- en période post-thérapeutique, 1 seul cas de séro-positivité à T. brucei, qui
persiste 15 jours après traitement au bérénil, puis l’ensemble des prélèvements
des visites suivantes sont négatifs ;
- pour T. congolense, persistance de quelques cas de séro-positivité jusqu’à
1 mois après le traitement au trypamidium ; au-delà de cette date, tous les
échantillons sont négatifs pour cette espace ;
- avec T.vivax, on n’obtient les 100 p. 100 de séro-négatifs que 3 mois après
.& traitement au trypamidium. Et cela seulement après la mort du no87 qui,
avec le 108 et le 114, sont restés longtemps séro-positifs malgré les deux
traitements.
Il y a certainement lieu de penser à l’existence dans cette zone
de souches de T.vivax chimie-résistantes ;
- l’inoculation d’une chèvre avec du sang récolté sur le bovin no108 ou 114
est prévue lors d’une de nos prochaines missions. S’il en résulte une sortie
de trypanosomes, ce serait l’occasion de mieux étudier cette éventuelle
chimie-résistance ;
- enfin, et sur un plan plus général, on retiendra la bonne corrélation entre
la hausse significative de I’hématocrite post-thérapeutique et la baisse impor-
tante de I’antigénémie dans la même période.
Les essais se poursuivent toujours sur le terrain et en laboratoire.
Notre souhait est qu’ils permettent finalement de distinguer l’accidentel du fait
constant et reproductible. Ce serait là une contribution à la validation de
cette technique, objet de beaucoup d’espoir dans la lutte’ contre les trypano-
somiases.


- 6
B I B L I O G R A P H I E
1 - V . M . N A N T U L Y A - An antigen detection enzyme immoassay for the diagno-
sis of rhodenense sleching sickness.
Parasite immonology 1989, 11 : 69-75.
-
2 - V.M. NANTULYA, E. BAJYANASONGA, R. HAMERS : Détection of circula-
ting trypanosomal antigens in trypanosoma evansi infected animal using a
T. brucei group specific monoclonal antibody.
Trop. Med. Parasit., 40 (1989) : 263-266.
-
3 - V.M. NANTULYA, K.J. LI NDQVIST - Antigen - detection enzyme immuno-
assay for the diagnosis of Trypanosoma vivax, T. congolense and T. brucei
infections in cattle.
Trop. Med. Parasit., 40 (1989) : 267-272.
-
4- V.M. NANTULYA, K.J. LINDQVIST, 0. DIALL, 0. LAHO M U K A N I -
y\\ II-. “- , ’
. .
Two simple antigen detection enzyme immuno-assays for the diagnosis of
trypanosoma evansi infections in the dromadery came1 (Camelus dromaderius)
Trop. Med. Parasit., 40 (1989) : 415-418.
-

- I
Tableau 1 : Plaques à T. hxwxi
Avant
15 jours
45 jours
1 mois après
2 mois après 3 mois après
B&éni1
après Bérénfl après Bérénil trypamidium
trypamidium trypamidium
Nombre d'analyses
35
35
7
25
18
15
n
5
1
0
0
0
0
Séro-positifs
%
14,28
2,85
0,oo
0,oo
0,oo
0,oo
Il
io
34
7
25
18
15
Séro-négatifs
"4
85,72
97,15
100
100
100
100
Tableau 2 : Plaques à T. tiwzax
Avant
15 jours
45 jours
1 mois après 2 mois après 3 mois après
Bérénil
après Bérénil après Bérénil trypamidium
trypamidium
trypamidium
Nombre d'analyses
35
35
7
25
18
15
n
8
5
4
4
2
0
Séro-positifs
%
22,85
14,28
57,14
16,00
11,ll
0,oo
n
27
30
3
21
16
15
Séro-négatifs
%
77,15
85,72
42,86
84,OO
88,89
100
c
Tableau 3 : PLaques à +. wI.enuwz
1 mois après 2 mois après 3 mois après
trypamidium
trypamidium
trypamidium
25
I
18
I
15
I
%
34,213
8,57
28,57
n
23
32
5
23
I
18
I
13
I
Séro-négatifs
%
65,82
91,43
71,43
92,00
100
100
l
I

Figure 1 : Résultats de microscopie et de sérologie
M = trypanosomes décelés au microscope
S = Séro-positif
fl = non examiné
Avant
15 jours après
1 mois après
2 mois après
3 mois après
B&éni1 (avant
Bérénil
trypamidium)
trypamidium
trypamidium
trypamidium
1 - ) 2 'j--b 1~~~ 1~'~ T.b) T.v) T.c T.bl T.vIT.c T.b 1T.v 1T.c T.bl T.vI T.c'
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LOT TRAITE AU TRYPAMIDILIM
45 JOURS APRES BERENIL 10,5 mg/kg
Avant Bérénil

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