INSTITUT D’ELEVAGE ET DE ME VETERINAIRE DES PAYS ...
INSTITUT D’ELEVAGE ET DE ME
VETERINAIRE DES PAYS
REVUE D’ÉLE!vAcE
ET DE
MÉDECINE VÉT
DES PAYS TRO
Synthèse in vitro d’a Fœto proté e (a FP)
par le foie humain cancéreux e culture
par S. QLJELIN, M. RIOCHE, Y. B ESSON
et R. MASSEYEFF
Tome XXVI (nouvelle série)
No 3 - 1973
t
VIGOT FRERES, EDITE RS
23, rue de I’Ecole-de-Médecin , Paris-VI’
Rev. Elev. Méd. vét. Pays trop., 1973, 26 (3) : 299-303
Synthèse in vitro dTx Fœto prc téine (,x FP)
par le foie humain cancéreux t n culture (*)
par S. QUELIN (**), M. RIOCHE (***), Y. 1 RESSON (****)
et R. MASSEYEFF (‘k***) ]
RESUME
E
Des cultures sont faites à partir de fragments h patiques provenant
de malades atteints de cancer primitif du foie (,CPF).
ertaines produisent
de l’a FP; la synthèse de novo de la protéine est d montrée par incor-
poration d’acides aminés radioactifs et analyse auto- adioimmunologique
des milieux de culture.
i
L’a FP, constituant spécifique du sérum
Nous nous sommes proposés d’entreprendre
fœtal, disparaît après la naissance [(4), (16)];
des cultures rolongées de foies humains can-
sa réapparition chez l’adulte signale, le plus
céreux, dans le but de préciser la nature des
souvent, l’existence d’un cancer hépatocellu-
cellules pr
ctrices d’u FP et les facteurs
laire [(15), (14), (S)] et sa mise en évidence
pouvant infl er sur sa sécrétion.
dans le sérum est couramment utilisée pour le
diagnostic de la maladie (11).
METHODES
La preuve directe que la synthèse de l’u FP
est bien le fait de la cellule hépatique, fœtale
1.
i
Matériel
Cultures
ou néoplasique, peut être apportée par l’étude
t fait l’objet d’une précédente
de sa localisation en immunofluorescence ainsi
que l’ont montré GITLIN (5), GOUSSEV et
collab. (6), PURTILO et collab. (12). Par
ailleurs, ABELEV (2), IRLIN (10) et
HULL (9), utilisant des cultures de foies tumo-
culture prélevés 1 ou 2 fois
raux de rat, souris et singe, observent que les
filtrés, dialysés puis concen-
cellules hépatiques animales sont capables de
40 C : les échantillons sont
synthétiser l’cr. FP in vitro.
se immuno-électrophorétique
gélose à l’aide d’un
cx FP selon le procédé
(“) Paru in : C.R. Acad. Sci., Paris, 1972, 274
LEV (3) en utilisant
sér. D (5): 768-771. Reproduit avec l’aimable autori-
sation de Gauthier-Villars, éditeur de cette revue.
des sérums avec et sans CI FP
(:$*) Faculté de Médecine de Dakar, Laboratoires
de Biochimie et Physique Médicale.
(*‘*‘;:) I.E.M.V.T.,
Laboratoire National de I’Ele-
ation d’acides aminés radioactifs.
vage et de Recherches Vétérinaires, Service des Cul-
tures de Tissus, B.P. no 2057, Dakar.
(:b***:) Ecole Nationale de Médecine de Nice,
ilisé la méthode d’Hochwald
Laboratoires d’immunologie et de Biochimie, 06-Nice,
Alpes-Maritimes.
ajoute à un milieu de culture
- 299 -
/
sans lysine ni leucine ces mêmes acides aminés
1. No 6 : prélevées chez un malade a FP +,
marqués au r4C à la dose de 1 à 2 pCi/ml.
les cellules sont ensemencées séparément dans
L’incorporation de ces acides aminés dans les
deux milieux, à 30 p. 100 de sérum humain :
protéines est vérifiée par autoradiographie des
plaques d’immunodiffusion à l’aide de film - milieu 1 : Hank’s balanced sait solution +
« Kodak Tri X Pan-4194 » 320 ASA.
0,5 p. 100 d’hydrolysat de lactalbumine +
0,l d’extrait de levure (Yeastolate Difco) +
Résultats : 11s sont résumés dans le tableau 1.
1 mg/p. 100 de dipyridamol;
Trois essais nous semblent d’un intérêt par-
- milieu 2 : minimum Essentiel de Eagle +
ticulier :
1 mg/p. 100 de dipyridamol.
TABLEAU 1
3 1. cultures
Toutes sont a FP - bien que 9
à croissance faible :
j
proviennent de malades a FP +
25 échantillons
18 cultures f
mis en culture
+
réussies
L
6 a FP + provenant toutes de
7 cultures
f
malades a FP +
à croissance active :
4
1 a FP - provenant d’un malade
à sérum très faiblement a FP +
Nous constatons que dans le milieu 1, la
- des cultures d’explants de foie non cancé-
croissance des cellules est très active et se
reux (prélevés loin de la tumeur);
prolonge un mois alors qu’elle est faible et
- des cultures d’explants cancéreux.
fugace dans le milieu 2; Le tableau II montre,
de plus, un parallélisme étroit entre la produc-
Les cultures d’explants cancéreux synthéti-
tion d’a FP et la multiplication cellulaire.
sant l’a FP pendant un mois et demi alors que
2. No 26 : malade dont le sérum contient
les autres n’en produisent à aucun moment.
des traces d’a FP; malgré une multiplication
Dans cet essai, la synthèse de IZUVO de l’cr FP
intense des cellules pendant un mois et demi,
est démontrée par incorporation d’acides ami-
l’a FP n’est jamais décelée dans les milieux de
nés radioactifs. En outre, des essais préliminai-
culture.
res faits selon la même technique montrent que
3. N0 31 : malade à sérum c1 FP+ ayant
les cellules cancéreuses synthétisent d’autres
subi une hépatectomie partielle. A partir du
protéines dont certaines ont été identifiées
lobe excisé, sont effectué& séparément :
(albumine, transferrine, fibrinogène).
TABLEAU No11
Essai no6 : activité de la culture et production d'a FP.
M i l i e u I I
Nombre
M i l i e u 1
de jours
de culture
Multiplication
Production
Multiplication
Production
cellulaire*
dia pp""
cellulaire
d'oi FP
6
Importante
+++ c-ii
Faible
++
11
*++
*
16
+++
Nulle
19
Moyenne
++
25
++
27
Faible
+
36
Nulle
(*) Appréciée d'après l'augmentation apparente de la densité cellulaire.
("") +++ : Précipitation intense; ++ : Précipitation nette; + : Précipitation faible; - : Absence de
précipitation; toutes conditions étant égales par ailleurs.
- 300 -
Fig. 1. - Incorporati
d’agarose: A. La
central: sérum de
milieu de culture
Fig. 2. - Incorporation d’acides aminés marqués au
immunoélectrophorétique
en gel d’agarose: A. Lame colorée au Noir Amide;
aphie de la même lame.
Trou central : milieu de culture CPF 31 (avec acide
és); Réservoir supérieur :
sérum de lapin anti a Fœto-Protéine humaine;
sérum de cheval
anti-protéines sériques
DISCUSSION
tion entre cancérisation et présence d’a FP
n’est pas absolue. En effet, certains CPF n’éla-
1. Réalité de la culture d’hépatocytes
borent pas d’a FP sérique; dans le foie d’un
cancéreux
malade à sérum a FPf, tous les nodules ne
sont pas sécréteurs, enfin, dans les nodules
Comme cela a été évoqué dans notre précé-
sécréteurs, toutes les cellules ne sécrètent pas
dent article (13), certains critères morphologi-
en même temps. Peut-on conclure que la capa-
ques (cellules multinucléées, polymorphisme) et
cité de synthèse de l’a FP est génétiquement
l’aspect général des cultures (prolifération en
transmise par les cellules ? Ce caractère ne
amas, auto-aggrégation spontanée des cellules)
serait pas modifié par la culture et correspon-
tendent à prouver que les cellules cultivées sont
drait à une altération de l’expression génétique.
bien cancéreuses. Leur capacité de synthétiser
l’a FP peut être considérée comme une preuve
Ces essais ne permettent pas de trancher
de leur nature hépatocytaire. En effet, à la suite
entre l’hypothèse d’une dérepression portant sur
d’expériences de transplantation in vive, ou
des cellules déjà différenciées et celle qui sup-
d’études en immunofluorescence, la majorité
pose que le phénomène de cancérisation porte
des auteurs admettent que l’a FP est synthétisée
sur des cellules souches n’ayant pas encore
par la cellule hépatique fœtale ou tumorale et
perdu leur capacité de synthèse de l’a FP [(l),
non par des cellules hématopoïétiques.
(17)]. Il est difficile de savoir si la synthèse
plus ou moins active d’a FP in vitro résulte
2. Synthèse de novo de l’a FP
d’une production maximale de la protéine par
un nombre limité de cellules ou d’une synthèse
Outre la mise en évidence d’a FP radioactive
modulée sur l’ensemble des cellules. Des études
dans les milieux de culture, après incorporation
en immunofluorescence pourraient nous ren-
d’acides aminés radioactifs, deux arguments
seigner à ce sujet.
nous autorisent à conclure qu’il y a synthèse
de novo:
L’origine des cellules et l’intensité de leur
a) Proportionnalité, lorsque la sécretion a
multiplication paraissent les deux facteurs
lieu, entre l’intensité de la multiplication cel-
majeurs déterminant la synthèse d’a FP.
lulaire et la quantité d’a FP produite.
b) Synthèse se prolongeant plusieurs semai-
Remerciements
nes.
M. le Professeur M. Sankale, doyen de la
Faculté de Médecine de Dakar, M. le Pro-
3. Facteurs qui gouvernent la synthèse
fesseur M. Gruet, MM. les Docteurs Bernard,
d’a FP au niveau cellulaire
Robin, Derrien, Hôpital principal, M. le Doc-
D’après nos expériences, seuls les hépato-
teur 1. Seck,
Faculté de Médecine et
cytes cancéreux provenant de malades à sérum
M.M. Jacquesson, Hôpital Le Dantec nous ont
riche en a FP synthétisent cette protéine in
fourni les prélèvements nécessaires. Le sérum
vitro.
humain a été fourni par M. le Professeur
Linhard, directeur du Centre de Transfusion.
Ces études confirment les conclusions de
Nous sommes redevables au CEA pour la
travaux antérieurs, selon lesquelles la corréla-
fourniture gracieuse d’acides aminés marqués.
SUMMARY
Synthesis N1 vitro of CC Foeto protein (a FP)
by cultivated cancerous lmman liver
Cultures are made from hepatic fragments of patients affected with
liver primitive cancer. Some of them produce a FP; the protein synthesis
de novo is proved by incorporation of radio-active amino-acids and auto-
radioimmunological analysis of culture media.
- 302 -
RE!XJMEN
Sitesis irt vitro de CI Feto prote
por el higado humano canceroso e
Se hicieron cultivas a partir de fragmentos
os proviniendo de
enfermos atacados por un cancer primitivo del
Algunos producen
cr FP; la sintesis de novo de la proteina esta
por incorporation
de kidos aminados radioactives y analisis auto
munologico de 10s
medios de cultiva.
BIBLIOGRAPHIE
1. ABELEV (C. 1.). Cnrzcer Res., 1968, 28: 1344.
NE (P. P.). Proc. Amer. Assoc. Cancer
2. ABELEV (G. 1.) et BAKIROV (R.). I/opr. Med.
Khim., 1967, 13 : 378.
10.
S.),
PEROVA (S.D.) et ABELEV
DECKERS (C.) et ABELEV (G. 1.) in PEETERS
Cancer, 1966, 1: 337.
(H.). Protides of the biological fluids. Amsterdam,
11.
. T.), TATARINOV (Y. S.), ABE-
Elsevier, 1962, 1Q: 312.
et URIEL (J.). Cancer, 1970, 25 :
4. GITLIN (D.), BOESMAN (M.). J. Clin. Invest.,
1966, 45: 1826.
12.
T.) et YUNIS (E. J.). Fed. Pro~.,
5. GITLIN (D.), KITZES (J.) et BOESMAN (M.).
Nature, 1967, 215: 534.
13.
, QUELIN (S.), SECK (I.), JAC-
L
), BASTERIS (B.), MASSEYEFF
6. GOUSSEV (A. I.), ENGELHARDT (N. V.),
d . Sci., Paris, 1970, 271, sér. D. :
MASSEYEFF (R.); CAMAIN (R.) et BASTE-
RIS (B.). Int. J. Cancer, 1971, 7: 207.
14.
KI-BIRENCWAJG (M.), URIEL
7. HOCHWALD (G. M.), THORBECKE (G. 5.) et
(P.). Cancer Ru., 1967, 27: 1990.
ASOFSKY (R.). J. Exp. Med., 1961, 114 : 459.
15.
(Y. S.). Vonr. Med. Khim.. 1964.
I
,
8. HULL (E. W.), CARBONE (P. P.), GITLIN (D.),
’
L
O’GARA (R. W.), KELLY (M. G.). J. Nat. Can-
16.
OV (Y. S.), AFANASYEVA (A.). Bull.
cer In&., 1969, 12: 1035.
9. HULL (E. W.), O’GARA (R. W.), SMITH (C. F.)
17.
VETERINAIRE DES PAYS
REVUE D’ÉLE!vAcE
ET DE
MÉDECINE VÉT
DES PAYS TRO
Synthèse in vitro d’a Fœto proté e (a FP)
par le foie humain cancéreux e culture
par S. QLJELIN, M. RIOCHE, Y. B ESSON
et R. MASSEYEFF
Tome XXVI (nouvelle série)
No 3 - 1973
t
VIGOT FRERES, EDITE RS
23, rue de I’Ecole-de-Médecin , Paris-VI’
Rev. Elev. Méd. vét. Pays trop., 1973, 26 (3) : 299-303
Synthèse in vitro dTx Fœto prc téine (,x FP)
par le foie humain cancéreux t n culture (*)
par S. QUELIN (**), M. RIOCHE (***), Y. 1 RESSON (****)
et R. MASSEYEFF (‘k***) ]
RESUME
E
Des cultures sont faites à partir de fragments h patiques provenant
de malades atteints de cancer primitif du foie (,CPF).
ertaines produisent
de l’a FP; la synthèse de novo de la protéine est d montrée par incor-
poration d’acides aminés radioactifs et analyse auto- adioimmunologique
des milieux de culture.
i
L’a FP, constituant spécifique du sérum
Nous nous sommes proposés d’entreprendre
fœtal, disparaît après la naissance [(4), (16)];
des cultures rolongées de foies humains can-
sa réapparition chez l’adulte signale, le plus
céreux, dans le but de préciser la nature des
souvent, l’existence d’un cancer hépatocellu-
cellules pr
ctrices d’u FP et les facteurs
laire [(15), (14), (S)] et sa mise en évidence
pouvant infl er sur sa sécrétion.
dans le sérum est couramment utilisée pour le
diagnostic de la maladie (11).
METHODES
La preuve directe que la synthèse de l’u FP
est bien le fait de la cellule hépatique, fœtale
1.
i
Matériel
Cultures
ou néoplasique, peut être apportée par l’étude
t fait l’objet d’une précédente
de sa localisation en immunofluorescence ainsi
que l’ont montré GITLIN (5), GOUSSEV et
collab. (6), PURTILO et collab. (12). Par
ailleurs, ABELEV (2), IRLIN (10) et
HULL (9), utilisant des cultures de foies tumo-
culture prélevés 1 ou 2 fois
raux de rat, souris et singe, observent que les
filtrés, dialysés puis concen-
cellules hépatiques animales sont capables de
40 C : les échantillons sont
synthétiser l’cr. FP in vitro.
se immuno-électrophorétique
gélose à l’aide d’un
cx FP selon le procédé
(“) Paru in : C.R. Acad. Sci., Paris, 1972, 274
LEV (3) en utilisant
sér. D (5): 768-771. Reproduit avec l’aimable autori-
sation de Gauthier-Villars, éditeur de cette revue.
des sérums avec et sans CI FP
(:$*) Faculté de Médecine de Dakar, Laboratoires
de Biochimie et Physique Médicale.
(*‘*‘;:) I.E.M.V.T.,
Laboratoire National de I’Ele-
ation d’acides aminés radioactifs.
vage et de Recherches Vétérinaires, Service des Cul-
tures de Tissus, B.P. no 2057, Dakar.
(:b***:) Ecole Nationale de Médecine de Nice,
ilisé la méthode d’Hochwald
Laboratoires d’immunologie et de Biochimie, 06-Nice,
Alpes-Maritimes.
ajoute à un milieu de culture
- 299 -
/
sans lysine ni leucine ces mêmes acides aminés
1. No 6 : prélevées chez un malade a FP +,
marqués au r4C à la dose de 1 à 2 pCi/ml.
les cellules sont ensemencées séparément dans
L’incorporation de ces acides aminés dans les
deux milieux, à 30 p. 100 de sérum humain :
protéines est vérifiée par autoradiographie des
plaques d’immunodiffusion à l’aide de film - milieu 1 : Hank’s balanced sait solution +
« Kodak Tri X Pan-4194 » 320 ASA.
0,5 p. 100 d’hydrolysat de lactalbumine +
0,l d’extrait de levure (Yeastolate Difco) +
Résultats : 11s sont résumés dans le tableau 1.
1 mg/p. 100 de dipyridamol;
Trois essais nous semblent d’un intérêt par-
- milieu 2 : minimum Essentiel de Eagle +
ticulier :
1 mg/p. 100 de dipyridamol.
TABLEAU 1
3 1. cultures
Toutes sont a FP - bien que 9
à croissance faible :
j
proviennent de malades a FP +
25 échantillons
18 cultures f
mis en culture
+
réussies
L
6 a FP + provenant toutes de
7 cultures
f
malades a FP +
à croissance active :
4
1 a FP - provenant d’un malade
à sérum très faiblement a FP +
Nous constatons que dans le milieu 1, la
- des cultures d’explants de foie non cancé-
croissance des cellules est très active et se
reux (prélevés loin de la tumeur);
prolonge un mois alors qu’elle est faible et
- des cultures d’explants cancéreux.
fugace dans le milieu 2; Le tableau II montre,
de plus, un parallélisme étroit entre la produc-
Les cultures d’explants cancéreux synthéti-
tion d’a FP et la multiplication cellulaire.
sant l’a FP pendant un mois et demi alors que
2. No 26 : malade dont le sérum contient
les autres n’en produisent à aucun moment.
des traces d’a FP; malgré une multiplication
Dans cet essai, la synthèse de IZUVO de l’cr FP
intense des cellules pendant un mois et demi,
est démontrée par incorporation d’acides ami-
l’a FP n’est jamais décelée dans les milieux de
nés radioactifs. En outre, des essais préliminai-
culture.
res faits selon la même technique montrent que
3. N0 31 : malade à sérum c1 FP+ ayant
les cellules cancéreuses synthétisent d’autres
subi une hépatectomie partielle. A partir du
protéines dont certaines ont été identifiées
lobe excisé, sont effectué& séparément :
(albumine, transferrine, fibrinogène).
TABLEAU No11
Essai no6 : activité de la culture et production d'a FP.
M i l i e u I I
Nombre
M i l i e u 1
de jours
de culture
Multiplication
Production
Multiplication
Production
cellulaire*
dia pp""
cellulaire
d'oi FP
6
Importante
+++ c-ii
Faible
++
11
*++
*
16
+++
Nulle
19
Moyenne
++
25
++
27
Faible
+
36
Nulle
(*) Appréciée d'après l'augmentation apparente de la densité cellulaire.
("") +++ : Précipitation intense; ++ : Précipitation nette; + : Précipitation faible; - : Absence de
précipitation; toutes conditions étant égales par ailleurs.
- 300 -
Fig. 1. - Incorporati
d’agarose: A. La
central: sérum de
milieu de culture
Fig. 2. - Incorporation d’acides aminés marqués au
immunoélectrophorétique
en gel d’agarose: A. Lame colorée au Noir Amide;
aphie de la même lame.
Trou central : milieu de culture CPF 31 (avec acide
és); Réservoir supérieur :
sérum de lapin anti a Fœto-Protéine humaine;
sérum de cheval
anti-protéines sériques
DISCUSSION
tion entre cancérisation et présence d’a FP
n’est pas absolue. En effet, certains CPF n’éla-
1. Réalité de la culture d’hépatocytes
borent pas d’a FP sérique; dans le foie d’un
cancéreux
malade à sérum a FPf, tous les nodules ne
sont pas sécréteurs, enfin, dans les nodules
Comme cela a été évoqué dans notre précé-
sécréteurs, toutes les cellules ne sécrètent pas
dent article (13), certains critères morphologi-
en même temps. Peut-on conclure que la capa-
ques (cellules multinucléées, polymorphisme) et
cité de synthèse de l’a FP est génétiquement
l’aspect général des cultures (prolifération en
transmise par les cellules ? Ce caractère ne
amas, auto-aggrégation spontanée des cellules)
serait pas modifié par la culture et correspon-
tendent à prouver que les cellules cultivées sont
drait à une altération de l’expression génétique.
bien cancéreuses. Leur capacité de synthétiser
l’a FP peut être considérée comme une preuve
Ces essais ne permettent pas de trancher
de leur nature hépatocytaire. En effet, à la suite
entre l’hypothèse d’une dérepression portant sur
d’expériences de transplantation in vive, ou
des cellules déjà différenciées et celle qui sup-
d’études en immunofluorescence, la majorité
pose que le phénomène de cancérisation porte
des auteurs admettent que l’a FP est synthétisée
sur des cellules souches n’ayant pas encore
par la cellule hépatique fœtale ou tumorale et
perdu leur capacité de synthèse de l’a FP [(l),
non par des cellules hématopoïétiques.
(17)]. Il est difficile de savoir si la synthèse
plus ou moins active d’a FP in vitro résulte
2. Synthèse de novo de l’a FP
d’une production maximale de la protéine par
un nombre limité de cellules ou d’une synthèse
Outre la mise en évidence d’a FP radioactive
modulée sur l’ensemble des cellules. Des études
dans les milieux de culture, après incorporation
en immunofluorescence pourraient nous ren-
d’acides aminés radioactifs, deux arguments
seigner à ce sujet.
nous autorisent à conclure qu’il y a synthèse
de novo:
L’origine des cellules et l’intensité de leur
a) Proportionnalité, lorsque la sécretion a
multiplication paraissent les deux facteurs
lieu, entre l’intensité de la multiplication cel-
majeurs déterminant la synthèse d’a FP.
lulaire et la quantité d’a FP produite.
b) Synthèse se prolongeant plusieurs semai-
Remerciements
nes.
M. le Professeur M. Sankale, doyen de la
Faculté de Médecine de Dakar, M. le Pro-
3. Facteurs qui gouvernent la synthèse
fesseur M. Gruet, MM. les Docteurs Bernard,
d’a FP au niveau cellulaire
Robin, Derrien, Hôpital principal, M. le Doc-
D’après nos expériences, seuls les hépato-
teur 1. Seck,
Faculté de Médecine et
cytes cancéreux provenant de malades à sérum
M.M. Jacquesson, Hôpital Le Dantec nous ont
riche en a FP synthétisent cette protéine in
fourni les prélèvements nécessaires. Le sérum
vitro.
humain a été fourni par M. le Professeur
Linhard, directeur du Centre de Transfusion.
Ces études confirment les conclusions de
Nous sommes redevables au CEA pour la
travaux antérieurs, selon lesquelles la corréla-
fourniture gracieuse d’acides aminés marqués.
SUMMARY
Synthesis N1 vitro of CC Foeto protein (a FP)
by cultivated cancerous lmman liver
Cultures are made from hepatic fragments of patients affected with
liver primitive cancer. Some of them produce a FP; the protein synthesis
de novo is proved by incorporation of radio-active amino-acids and auto-
radioimmunological analysis of culture media.
- 302 -
RE!XJMEN
Sitesis irt vitro de CI Feto prote
por el higado humano canceroso e
Se hicieron cultivas a partir de fragmentos
os proviniendo de
enfermos atacados por un cancer primitivo del
Algunos producen
cr FP; la sintesis de novo de la proteina esta
por incorporation
de kidos aminados radioactives y analisis auto
munologico de 10s
medios de cultiva.
BIBLIOGRAPHIE
1. ABELEV (C. 1.). Cnrzcer Res., 1968, 28: 1344.
NE (P. P.). Proc. Amer. Assoc. Cancer
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Khim., 1967, 13 : 378.
10.
S.),
PEROVA (S.D.) et ABELEV
DECKERS (C.) et ABELEV (G. 1.) in PEETERS
Cancer, 1966, 1: 337.
(H.). Protides of the biological fluids. Amsterdam,
11.
. T.), TATARINOV (Y. S.), ABE-
Elsevier, 1962, 1Q: 312.
et URIEL (J.). Cancer, 1970, 25 :
4. GITLIN (D.), BOESMAN (M.). J. Clin. Invest.,
1966, 45: 1826.
12.
T.) et YUNIS (E. J.). Fed. Pro~.,
5. GITLIN (D.), KITZES (J.) et BOESMAN (M.).
Nature, 1967, 215: 534.
13.
, QUELIN (S.), SECK (I.), JAC-
L
), BASTERIS (B.), MASSEYEFF
6. GOUSSEV (A. I.), ENGELHARDT (N. V.),
d . Sci., Paris, 1970, 271, sér. D. :
MASSEYEFF (R.); CAMAIN (R.) et BASTE-
RIS (B.). Int. J. Cancer, 1971, 7: 207.
14.
KI-BIRENCWAJG (M.), URIEL
7. HOCHWALD (G. M.), THORBECKE (G. 5.) et
(P.). Cancer Ru., 1967, 27: 1990.
ASOFSKY (R.). J. Exp. Med., 1961, 114 : 459.
15.
(Y. S.). Vonr. Med. Khim.. 1964.
I
,
8. HULL (E. W.), CARBONE (P. P.), GITLIN (D.),
’
L
O’GARA (R. W.), KELLY (M. G.). J. Nat. Can-
16.
OV (Y. S.), AFANASYEVA (A.). Bull.
cer In&., 1969, 12: 1035.
9. HULL (E. W.), O’GARA (R. W.), SMITH (C. F.)
17.