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TrJSTTTUT SEWGALAIS DF. KECHERCHES
MIEWCCLES (I.S.R.A.)
I-.-w e-m
URORATQIi?E NATIONAL DE L'ELEVAGE
ET DE RECHERÇHBS VETERIMAIRES
DAKAR-HANN
.-z
.-.a-_
‘SS-
_
.
- .
.-
___^
_--
.,.---
.._
._
RBF. If* 8l/mw
8EPTBMBRE 1984
nmI$OSTIC RAPIDFU-JE: LA PESTE
ETJDF LA PESTE DES PETITS RLTM
PAR SJMKtJNO-ELECTROSYNERES
J. SARR, M. DIOP
INTRODUCTlXNi
L’inxmtiw-61acthorynarese
ou encore contre im
no-électropho&se est une techni-
que d6crttq en 1959 par BUSSARD (1) reprise
r HOWE et COLL en 1967 (6). Elle
conuiste à appliquer a la double diffuaiona
geloae d’Outcherlony, un courant
constant de farte tension,
4 c
Depuis Zq 1, cette technique a été cour-en
utilisée dans la mise en évidence
de l*antfg&ne aqtra1i.a dan8 l’hépatite vira
de type B chez l’homme (12) et
pour la d$agnortia de vltoees animales et hu
ines les plus diverse8 (3, 10, 11)
Noun rapportons dana: ce travail, les résulta
de l’utilisation de cette techni-
que au dirgnortic virologique et ekologique
. :
II
e la peste bovine (PB) et de la
peste ded.“Petite Ruminants (@& permettant
ns i aux agents de 1’Elevage qui
travaillant su% le terrain, de cannaftre le
sultat du diagnostic une heure
aprka l*arride du prélèvement &Ü Laboratoir
T - MATERIEL ET METRODE
1’) AntigliM’ de r6fbranoe
Une culture primaire eu eecondaire de ce ulea r6nalea de fœ tus de b‘ovin
en bofte de Roux (300 cm2). dont le tapis est onfluent, est inoculée avec 2 ml
d’une suspension de virus bovipestique aoucb
Kabete “Ou #?&titrant au moins
rp@$c~ 50.
AprOs une p6riode d*;bcubatian de 30 minutes
la température du Laboratoire, on
ajoute pour chaque boSte 100 ml de Earle cro eance contenant 2 X de s6rum de
veau* Ai$e elles sont remiset B liq6t&e 3 37
_. *
et ob@ervdes tous les jours.
Les boftee 8cmt aon@6ee lorsque le tapir c lulaire est dstruit 51 40 X.
Apr2is d6cozkg6latioa et aentrifugation a 3 50
trsh pendant 15 minutes pour
éliminer Ier ddbria cellulairea, l’atntig$ne
Qaipitant ert attrait du surnageant
. . . / . . .
- 2 -
,-’
,*
/
.,i
selon le technique de HAFEZ at: C”IL (5).
L’Antigkw a i n s i o b t e n u , edt additionn6 ds 25 4: iie xisî d e s s i c a n , puirr
lyophilis&
htA&m4tro ter
Ler; prblbvemsntr d ’ o r g a n e ( f o i e , r a t e , ga lion, poumon, muqueuse iatesthale
e t c . . ., ) sont soigueuaament d6cou@, broy
a u mixter (Virtis) sous glacs,
mis en suapension Jann un 6881 volume de
mpon d’électrophor&oe préalable-
ment rbfrighé.
AprBe c e n t r i f u g a t i o n soua f r o i d (+4’C) B
500 tre/mn pendant 30 minutee, le
surnageant est recueilli et constitue l’a
igibe.
L’antisGrum
C’est un sérum de lapin prgcipitant le vi
is de la peste bovine gracieusement
offert par la FAO.
Technique Utilis@e
On prépare deux solgtioas d’agarose (Eior
:) avec le tampon d’dlectrophor&e
véronal 0,02 M ph 8,6 saua Nacl, de forae
.onique 0.05 (2).
- u n e s o l u t i o n à 0.5 X
- u n e s o l u t i o n 21 1 Z.
Sur des lamas bien dbgrafre&es (25 x 75 m
on étale 1 goutte de la solution
a 0,s x.
On laisse sllchsr et l’on rajoute 3 ml de
i s o l u t i o n B 1 X
Puis on réalise des puits da 2 - 4 mm de
.at&?tre siSpar& de 1,5 8 2 cm.
t’antigane ert mis dans les puits située
L c8tL: d e l a c a t h o d e e t l’ilgU-
s6rum vers l ’ a n o d e .
Un courant de 12 mA est appliqu8 pendant
1 minutes.
BEsIlLTATS
4 - Immuno-Blectrocyner~re
= l’immum&um a étO tuté à d i f f é r e n t dilutions contre t
- l’aatigke de c u l t u r e c e l l u l a i r e ( t d e r8férame) ( t a b l e a u n’l)
- le poumon, la rate, le ganglion m6 tntdriqus d’un che’trreau suspect
de peo te dae Petits Rumhants . (ta .eau no 2 )
- la rate et le Ranglion de bovin su tact de peste bovine. (tableau nb 3)
,
*
b) - Irolemnt d e viqus
Le virus de la peste bovine a fit& iso:
sur Le gatiglion du bovin suspect.
La rate est rest& nbgative apr& ciqq pasa
Fe8 succlessifs sur culture cellu-
laire de rein de foetus bovin.
Qet l e uhevreau,
seul, un Ad4hxwirus a
:E ho16 B la foia aw, niveau de
la rate, de la muqueuse intestinale et du 1
unon.
. . . / . . .
AR. Ctalture
1/2
lJl6
1132
lJ64
uetl~lrin
Fur
4
4
4
c
œ’
1/2
+
4
+
4
4
1J4
+
4
1/8
2
L
f NT: non testé
TABLEAU Fi.2 : IMMUN8ERUM C&NTRE BROYAT DE: RAT
SUSPECT DE P?R
m
1/4
1/8
I/l6
1/32
?/64
- Pu-=
+
t
+
- lf2
+
- 1/4
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- 1/8
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IL pur
+
+
- 1/2
*
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= 112
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NT
- 1/8
NT
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MUQUEU8E
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- 1/4
NT
NT
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NT
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NT
NT
NT
NT
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DE PEt
Ap,. m prove-
riante du bovin
1/2
1/4
W3
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llS2
1/64
suspect de PE
GANGLIOMS
*
+
+
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- 1/2
*
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NT
- 1/8
NT
NT
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RATE
- pur
NT
- 1/2
T
NT
- 1/4
NT
YT
NT
NT
NT
- 1/8
NT
PT
NT
NT
NT
L’ilmnun~dlectrosyne~~6e
présente uf certai
nombre d‘nvantagas par rapport
aux techniques conventionnelles de diap,no
la peste bovine et cie la
peste des Petits Ruminants.
Sa rapidit6 et sa facilitb d~ex&sution pc
uatifiet: 80~. choix. En effet,
une heure apr8s l’arriv6e du pr61;értrnmsnt
aboratoire, le r6oultat est ma-
tiquaaeunt aomu crmtre 24 B 48 beums pcmr
immunodiffw&on
de type Outcharlony
(8,tiP).
La rsnsibilit4 s’rxpxirm par lr faible qua
t6 d’antigke qu’elle l st capaile
j
Je mettre en évid*nce (5 - 10 pl),
Elle reste awsi une technique dont l’int
ns l’iitsude quantitative et
qualitative de ‘la teneux eu antigaae dea
ents est &Vidant : l’arc de
précipitation est d’autant plus proche du p ta d’antirfbne que la quantit6
d’antfg&ne prdcipitsnt art faibla.
Son application dans ie choix des prEsl&verpen
en vue de l’isolement de virus
donne des bons rlssuftats. Chez le bovin ausp t de peste bovine, le virus est
seulemunt retrouvé au niveau du ganglion.
est restF,e uégative aprira
cinq pamkages ouccessifa sur cellules rbn
foetus 4e bovin.
Chez le chevreau, le virue de la peste d
Ruminants n’est pas isold.
Seul un ad6novirus est retrouvÉ au niveau de
rate, du poumon et de la
muqueure fntes tinala . Ceci peut s’expliquer p
la faible ritalit6 du virus
PPR dans les pr6lSvementa. Aussi, l’asaociatf
du virus de la Peste des Petits
Ruminants et des adbnwirw
“pneumpathies des Petits
Ruminants” oet actuellement bien dtablie (4).
Cette Qtude mon&e enfin qua la contre immun0
ectrophorèse peut être appliquASe
aux enqu&ter QpidJhuiologiquea partant INIX la
ste bovine et la peste des
Petits Ruminants.
Cependant, elle me parrtnet pas de faire uu dia
Atlc dif+5rentiel entre les
deux affections.
C’immuno41ectro8ynerhse pexmet l e
peste bovine et de la peste
des Petite Rumina* um heure aprb
QlBvement au Laboratoire
. . . / . . .
*
.
Aussi, elle peut être Utilis$e dans le cho .x des pr%lCvamf!nts en vue de
1 t isolement de virus.
SUPPLARY
Counter
Counter immuno-ekmtrophoreets
immuno-eLoctrophareei.e
tu&miqw i
euccefully use to
euccefully use to dc3monsttnte
precipitin reactfon bttween
reactfon
bttween Rinderpert
and
este des Petits Ruminants virus
antigene
antigene with a
a rabbit anti-rfnderpest
rabbit
ser
one
one heur after
after the arriva1
the
arriva1 of
skunplee in tbe
the laboratozy,
I t *n alea be une i n ramples 6cree-ning for
rus isolation, but don’t permit
a differential dfegnosis between xind&post
id PPR,
1 - BU!?SARD, A, 1939
- Brmription d'une technique G mbinant simultanlsment l'glectro-
4
photlroe. et la pri?Mpitation i
nologiqua dana un gel : l'dlactro-
rynetbs 8.
Bbhin, biophysr, Acts 34 2 5
2 - CURTIS A. WILLIAHS, ZEXRXLL W, Chasa, 1968
M$thoda in Ivmmology and
Vol. II Acad, prrre a N
3 - A. GASP.AR et E. EDLINCJER
1978
F
Diagnostic yspide des
rctrorynar&8e.
Ann. Uiorobfol. (lnrt.
4 - GIBBS E.P.J., TAYLOR W.P., LAU&ZAN M.J.P. L@?7.
The isolatioa af ad0
ted with peste des
Petit8 Ruminanta, tn Nigerir
Roa, Vet .6ci. 23 (3)
331-335
fi- S.M. HAFEZ, A. AL RASHIB), S. AL - BEICRR
A rimpliffed technique for th
rapuation of Riuderpert preeipi-
bf cattle. Tbe nrtherlandr
6 - HOwE C., LEE L.T,,
Ibid 98 t 343,
7 - PLOWRIGNT au W. a n d
Ras, ,Vet. reX. 3, 172 - 182.
8 - PROVOST A., R. QUEVAL, C, BOBREDON et Y, MAURLCE.
Rechercher enwue d’une
de diagnoetic de la Peste
bovine.
Rev. d’Blev. Mad. vet. P a y a
. 16 no 3 287 - 297.
9 - SCOTT C.R. 1967
Diagnor ir of Rfnderpest
PAO No 71
10 - TSOTSOS A. SA, 1974 Identtfieation and
and detection of viral antibodir!
by countar imnurxwe
Path, microb. 41 297 - 310.
1 1 - VESTERGAARD B.F. 1973Croooed imuuno-electrophoretie charactarfration of Herper hominis
typa 1 and 2 antigene, Acta path, microbio, rcand 81 808 - 810.
!
12 - WALLIS C. and MELNICK J.L. 1971
Entrcrnaed detecfion of Australfa antigen in 8emm hepatftis
patient by diacoutinuous countw Cnmuno-eleetrophoresir,
app. Wicrobio 21 867 - 869.
TrJSTTTUT SEWGALAIS DF. KECHERCHES
MIEWCCLES (I.S.R.A.)
I-.-w e-m
URORATQIi?E NATIONAL DE L'ELEVAGE
ET DE RECHERÇHBS VETERIMAIRES
DAKAR-HANN
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‘SS-
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RBF. If* 8l/mw
8EPTBMBRE 1984
nmI$OSTIC RAPIDFU-JE: LA PESTE
ETJDF LA PESTE DES PETITS RLTM
PAR SJMKtJNO-ELECTROSYNERES
J. SARR, M. DIOP
INTRODUCTlXNi
L’inxmtiw-61acthorynarese
ou encore contre im
no-électropho&se est une techni-
que d6crttq en 1959 par BUSSARD (1) reprise
r HOWE et COLL en 1967 (6). Elle
conuiste à appliquer a la double diffuaiona
geloae d’Outcherlony, un courant
constant de farte tension,
4 c
Depuis Zq 1, cette technique a été cour-en
utilisée dans la mise en évidence
de l*antfg&ne aqtra1i.a dan8 l’hépatite vira
de type B chez l’homme (12) et
pour la d$agnortia de vltoees animales et hu
ines les plus diverse8 (3, 10, 11)
Noun rapportons dana: ce travail, les résulta
de l’utilisation de cette techni-
que au dirgnortic virologique et ekologique
. :
II
e la peste bovine (PB) et de la
peste ded.“Petite Ruminants (@& permettant
ns i aux agents de 1’Elevage qui
travaillant su% le terrain, de cannaftre le
sultat du diagnostic une heure
aprka l*arride du prélèvement &Ü Laboratoir
T - MATERIEL ET METRODE
1’) AntigliM’ de r6fbranoe
Une culture primaire eu eecondaire de ce ulea r6nalea de fœ tus de b‘ovin
en bofte de Roux (300 cm2). dont le tapis est onfluent, est inoculée avec 2 ml
d’une suspension de virus bovipestique aoucb
Kabete “Ou #?&titrant au moins
rp@$c~ 50.
AprOs une p6riode d*;bcubatian de 30 minutes
la température du Laboratoire, on
ajoute pour chaque boSte 100 ml de Earle cro eance contenant 2 X de s6rum de
veau* Ai$e elles sont remiset B liq6t&e 3 37
_. *
et ob@ervdes tous les jours.
Les boftee 8cmt aon@6ee lorsque le tapir c lulaire est dstruit 51 40 X.
Apr2is d6cozkg6latioa et aentrifugation a 3 50
trsh pendant 15 minutes pour
éliminer Ier ddbria cellulairea, l’atntig$ne
Qaipitant ert attrait du surnageant
. . . / . . .
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selon le technique de HAFEZ at: C”IL (5).
L’Antigkw a i n s i o b t e n u , edt additionn6 ds 25 4: iie xisî d e s s i c a n , puirr
lyophilis&
htA&m4tro ter
Ler; prblbvemsntr d ’ o r g a n e ( f o i e , r a t e , ga lion, poumon, muqueuse iatesthale
e t c . . ., ) sont soigueuaament d6cou@, broy
a u mixter (Virtis) sous glacs,
mis en suapension Jann un 6881 volume de
mpon d’électrophor&oe préalable-
ment rbfrighé.
AprBe c e n t r i f u g a t i o n soua f r o i d (+4’C) B
500 tre/mn pendant 30 minutee, le
surnageant est recueilli et constitue l’a
igibe.
L’antisGrum
C’est un sérum de lapin prgcipitant le vi
is de la peste bovine gracieusement
offert par la FAO.
Technique Utilis@e
On prépare deux solgtioas d’agarose (Eior
:) avec le tampon d’dlectrophor&e
véronal 0,02 M ph 8,6 saua Nacl, de forae
.onique 0.05 (2).
- u n e s o l u t i o n à 0.5 X
- u n e s o l u t i o n 21 1 Z.
Sur des lamas bien dbgrafre&es (25 x 75 m
on étale 1 goutte de la solution
a 0,s x.
On laisse sllchsr et l’on rajoute 3 ml de
i s o l u t i o n B 1 X
Puis on réalise des puits da 2 - 4 mm de
.at&?tre siSpar& de 1,5 8 2 cm.
t’antigane ert mis dans les puits située
L c8tL: d e l a c a t h o d e e t l’ilgU-
s6rum vers l ’ a n o d e .
Un courant de 12 mA est appliqu8 pendant
1 minutes.
BEsIlLTATS
4 - Immuno-Blectrocyner~re
= l’immum&um a étO tuté à d i f f é r e n t dilutions contre t
- l’aatigke de c u l t u r e c e l l u l a i r e ( t d e r8férame) ( t a b l e a u n’l)
- le poumon, la rate, le ganglion m6 tntdriqus d’un che’trreau suspect
de peo te dae Petits Rumhants . (ta .eau no 2 )
- la rate et le Ranglion de bovin su tact de peste bovine. (tableau nb 3)
,
*
b) - Irolemnt d e viqus
Le virus de la peste bovine a fit& iso:
sur Le gatiglion du bovin suspect.
La rate est rest& nbgative apr& ciqq pasa
Fe8 succlessifs sur culture cellu-
laire de rein de foetus bovin.
Qet l e uhevreau,
seul, un Ad4hxwirus a
:E ho16 B la foia aw, niveau de
la rate, de la muqueuse intestinale et du 1
unon.
. . . / . . .
AR. Ctalture
1/2
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2
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f NT: non testé
TABLEAU Fi.2 : IMMUN8ERUM C&NTRE BROYAT DE: RAT
SUSPECT DE P?R
m
1/4
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- Pu-=
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Ap,. m prove-
riante du bovin
1/2
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W3
1/16
llS2
1/64
suspect de PE
GANGLIOMS
*
+
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- 1/2
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- 1/4
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NT
NT
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- 1/8
NT
PT
NT
NT
NT
L’ilmnun~dlectrosyne~~6e
présente uf certai
nombre d‘nvantagas par rapport
aux techniques conventionnelles de diap,no
la peste bovine et cie la
peste des Petits Ruminants.
Sa rapidit6 et sa facilitb d~ex&sution pc
uatifiet: 80~. choix. En effet,
une heure apr8s l’arriv6e du pr61;értrnmsnt
aboratoire, le r6oultat est ma-
tiquaaeunt aomu crmtre 24 B 48 beums pcmr
immunodiffw&on
de type Outcharlony
(8,tiP).
La rsnsibilit4 s’rxpxirm par lr faible qua
t6 d’antigke qu’elle l st capaile
j
Je mettre en évid*nce (5 - 10 pl),
Elle reste awsi une technique dont l’int
ns l’iitsude quantitative et
qualitative de ‘la teneux eu antigaae dea
ents est &Vidant : l’arc de
précipitation est d’autant plus proche du p ta d’antirfbne que la quantit6
d’antfg&ne prdcipitsnt art faibla.
Son application dans ie choix des prEsl&verpen
en vue de l’isolement de virus
donne des bons rlssuftats. Chez le bovin ausp t de peste bovine, le virus est
seulemunt retrouvé au niveau du ganglion.
est restF,e uégative aprira
cinq pamkages ouccessifa sur cellules rbn
foetus 4e bovin.
Chez le chevreau, le virue de la peste d
Ruminants n’est pas isold.
Seul un ad6novirus est retrouvÉ au niveau de
rate, du poumon et de la
muqueure fntes tinala . Ceci peut s’expliquer p
la faible ritalit6 du virus
PPR dans les pr6lSvementa. Aussi, l’asaociatf
du virus de la Peste des Petits
Ruminants et des adbnwirw
“pneumpathies des Petits
Ruminants” oet actuellement bien dtablie (4).
Cette Qtude mon&e enfin qua la contre immun0
ectrophorèse peut être appliquASe
aux enqu&ter QpidJhuiologiquea partant INIX la
ste bovine et la peste des
Petits Ruminants.
Cependant, elle me parrtnet pas de faire uu dia
Atlc dif+5rentiel entre les
deux affections.
C’immuno41ectro8ynerhse pexmet l e
peste bovine et de la peste
des Petite Rumina* um heure aprb
QlBvement au Laboratoire
. . . / . . .
*
.
Aussi, elle peut être Utilis$e dans le cho .x des pr%lCvamf!nts en vue de
1 t isolement de virus.
SUPPLARY
Counter
Counter immuno-ekmtrophoreets
immuno-eLoctrophareei.e
tu&miqw i
euccefully use to
euccefully use to dc3monsttnte
precipitin reactfon bttween
reactfon
bttween Rinderpert
and
este des Petits Ruminants virus
antigene
antigene with a
a rabbit anti-rfnderpest
rabbit
ser
one
one heur after
after the arriva1
the
arriva1 of
skunplee in tbe
the laboratozy,
I t *n alea be une i n ramples 6cree-ning for
rus isolation, but don’t permit
a differential dfegnosis between xind&post
id PPR,
1 - BU!?SARD, A, 1939
- Brmription d'une technique G mbinant simultanlsment l'glectro-
4
photlroe. et la pri?Mpitation i
nologiqua dana un gel : l'dlactro-
rynetbs 8.
Bbhin, biophysr, Acts 34 2 5
2 - CURTIS A. WILLIAHS, ZEXRXLL W, Chasa, 1968
M$thoda in Ivmmology and
Vol. II Acad, prrre a N
3 - A. GASP.AR et E. EDLINCJER
1978
F
Diagnostic yspide des
rctrorynar&8e.
Ann. Uiorobfol. (lnrt.
4 - GIBBS E.P.J., TAYLOR W.P., LAU&ZAN M.J.P. L@?7.
The isolatioa af ad0
ted with peste des
Petit8 Ruminanta, tn Nigerir
Roa, Vet .6ci. 23 (3)
331-335
fi- S.M. HAFEZ, A. AL RASHIB), S. AL - BEICRR
A rimpliffed technique for th
rapuation of Riuderpert preeipi-
bf cattle. Tbe nrtherlandr
6 - HOwE C., LEE L.T,,
Ibid 98 t 343,
7 - PLOWRIGNT au W. a n d
Ras, ,Vet. reX. 3, 172 - 182.
8 - PROVOST A., R. QUEVAL, C, BOBREDON et Y, MAURLCE.
Rechercher enwue d’une
de diagnoetic de la Peste
bovine.
Rev. d’Blev. Mad. vet. P a y a
. 16 no 3 287 - 297.
9 - SCOTT C.R. 1967
Diagnor ir of Rfnderpest
PAO No 71
10 - TSOTSOS A. SA, 1974 Identtfieation and
and detection of viral antibodir!
by countar imnurxwe
Path, microb. 41 297 - 310.
1 1 - VESTERGAARD B.F. 1973Croooed imuuno-electrophoretie charactarfration of Herper hominis
typa 1 and 2 antigene, Acta path, microbio, rcand 81 808 - 810.
!
12 - WALLIS C. and MELNICK J.L. 1971
Entrcrnaed detecfion of Australfa antigen in 8emm hepatftis
patient by diacoutinuous countw Cnmuno-eleetrophoresir,
app. Wicrobio 21 867 - 869.