Rev. Elev. Med. Vét. Pays frop., 1966, 19,4...
Rev. Elev. Med. Vét. Pays frop., 1966, 19,4 (495-510).
.
Le botulisme des ruminants et des équidés
au Sénégal
Caractères de la souche isolée
de Clostridium botulinum et de sa toxine
Par
M. P. DOUTRE e f J. CHAMBRON
(avec la collaborafion fechnique de 1. FAYE)
RÉSUMÉ
Clostridium botulinum type C a été isolé du foie d’un bovin sacrifié 0 la période
agonique alors qu’il présentait tous les symptômes de l’intoxication botulique
aiguë telle qu’on peut la rencontrer dans le Ferlo chez les animaux en état
d’aphosphorose. Les différents lots de toxine préparés à partir de la souche
isolée par les méthodes de culture classique ont présenté une toxicité allant de
10.000 à 150.000 DMM/souris par ml. La culture du germe par dialyse en sac
L
de cellophane a fourni une toxine titrant 2,5 x 106 DMM/souris par ml.
Dans une publication précédente (*), la double
Dans le travail qui suit, nous nous proposons
étiologie de l’affection animale observée au
de rapporter les données nouvelles recueillies
Sénégal, dans la région du Ferlo, et connue
concernant le germe en cause, Closfridium
localement sous le nom de « Gniedo », a été
botulinum et sa toxine.
mise en évidence. Brièvement, elle peut être
représentée par le schéma suivant :
MATÉRIEL
Carence minérale (hypophosphorose) + Osté-
ophagie -> Botulisme.
Les prélèvements utilisés au laboratoire de
L’importance reconnue au botulisme se voyait
Dakar ont été effectués au cours d’une tournée
alors confirmée sur le plan bactériologique
accomplie dans la région dite des « six forages »
par l’obtention de deux résultats suffisamment
en mai 1965. Les zones de Lagbar, Tessekré,
démonstratifs mais incomplets :
Yaré Lao et Dodji ont été visitées afin de récolter
- la révélation d’une toxine dans un filtrat
le matériel d’étude.
de culture mixte effectuée à partir d’un frag-
Ce dernier est constitué essentiellement par
ment d’anse intestinale, avec perte de la toxicité
des fragments de foie, d’anse intestinale et de
dans les subcultures,
masse musculaire provenant : d’un mouton
- la réussite d’une séro-neutralisation qua-
abattu sur notre demande, de sept bovins morts
litative de cette toxine chez la souris en présence
depuis moins de 48 heures ou sacrifiés à la
d’un mélange des antisérums des types C et D.
période agonique et d’un âne déjà enterré et
exhumé par les propriétaires. Ainsi, 14 prélève-
ments d’organes ont été rassemblés et mis immé-
(*) Rev. Elev. Méd. vét. Pays trop., 1965, 3, 249-282.
diatement dans des flacons d’un litre. Un contai-
4 9 5
s
ner isotherme, rempli de pains de glace, a
ment contentés de faire appel à la thermo-
permis d’assurer une conservation a basse
résistance de la spore de Clostridium bofulinum.
température sur le terrain et lors du transport
Le broyat, recueilli dans un tube à essai, est
à Dakar.
chauffé 5 minutes à la température de IOOOC.
Puis une partie de ce produit sert à ensemencer
un ballon de 100 ml de bouillon pour anaérobies
MIsE EN ÉVIDENCE DE LA TOXINE
(Cooked Meat Medium Difco, B 267).
BOTULIQUE DANS LES PRÉLÈVEMENTS
Après 6 jours de conservation à l’étuve à
37 OC, la culture mixte est centrifugée puis
Pour chaque prélèvement, 60 g de matières
filtrée sur filtre Seitz EKS 1.
solides sont triturées au mortier dans 60 ml
La stérilité du filtrat est contrôlée par ense-
d’eau distillée en présence de sable fin stérile.
mencement d’un tube de bouillon VF glucosé
Chaque broyat est ensuite centrifugé à 3.000
avant inoculation de 5 souris par voie intra-
tours/mn pendant 10 mn puis filtré sur filtre
péritonéale (0,20 ml).
Seitz EKS 1. La stérilité des filtrats recueillis
est vérifiée par ensemencement d’un bouillon VF
Résultats.
glucosé mis à l’étuve pendant 48 heures à 370C.
Chaque filtrat sert à inoculer un lot de 5 souris
Les 5 souris meurent en moins de 24 heures.
par voie intra péritonéale (0,20 ml).
D’autres espèces animales reçoivent alors
différentes quantités du même ftltrat par des
Résultats.
voies diverses :
Les souris inoculées avec 5 filtrats différents
Cobaye (1 ml par voie intrapéritonéale).
succombent en moins de deux jours après avoir
L’animal présente une paralysie flasque géné-
présenté les symptômes typiques du botulisme
ralisée (photo no 1) et succombe dans les 24 heu-
chez cette espèce. Les souris inoculées avec les
res.
9 autres ne manifestent aucune mortalité.
Lapin (1 ml par voie intrapéritonéale). Le
Le filtrat le plus toxique pour la souris s’avère
lapin meurt dans les 48 heures après avoir
provenir d’un foie de zébu sacrifié par les éle-
montré les symptômes de l’intoxication botulique
veurs sur notre instance (Yaré Lao).
(photo no 2).
Le tableau clinique qu’offrait cet animal avait
Pigeon :(0,25 ml par voie intramusculaire).
tout particulièrement attiré notre attention
Moins de 24 heures après l’inoculation, l’oiseau
(ptyalisme intense et paralysie de la langue).
se paralyse, la tête pend et les membres antérieurs
A la dilution limite du Ij80, le filtrat tue encore
s’étendent (photo no 3). La mort survient avant
la souris.
la fin du 2e jour.
Par la suite, au cours des travaux ultérieurs,
Canard de Barbarie (1 ml par voie intra-
nous avons uniquement utilisé comme matériel / ’musculaire). Au bout de 3 jours, seuls les mou-
le prélèvement de foie à partir duquel avait
vements des ailes sont permis. Lecanard demeure
été préparé ce filtrat.
1
( Iouché, les ailes à plat sur le sol (photo no 4),
Inais ne succombe pas. Ce fait a déjà été rap-
Ioorté par DADOT lors d’un foyer de botulisme
(apparu chez cette espèce dans le nord de la
OBTENTION D’UNE TOXINE
I-rance (12).
DE CULTURE MIXTE
Bovin (2 ml par voie sous-cutanée). Au bout
Technique.
de 5 jours, un ptyalisme intense se déclare et
a langue paralysée sort de la bouche (photo
Un morceau de foie est trituré comme précé-
10s 5 et 6), 48 heures plus tard la mort survient.
demment en eau distillée. Pour réduire le
îette inoculation a permis de reproduire pour
nombre des germes de contamination particu-
a première fois le botulisme expérimental
lièrement important, nous nous sommes finale-
:hez le zébu au Sénégal.
496
Photo 1. - Cobaye paralysé ayant reçu 1 ml du filtrat de culture mixte
.
Photo 2. -Lapin paralysé ayant reçu 1 ml du filtrat de culture mixte
497
.
Photo 3. - Pigeon paralysé ayant reçu 0,25 ml du filtrat de culture mixte
Photo 4. - Canard de Barbarie ayant reFu 1 ml du filtrat de culture mixte
498
Photos 5 et 6. - Bouvillon ayant reçu 1 ml du
filtrat de culture mixte. Symptômes présentés 5 jours
après l’inoculation : paralysie des membres et de
la langue, ptyalisme.
ISOLEMENT DE CLOSTRIDIUM BOTULINUM
48 heures plus tard, dans les tubes où I’isole-
ment s’avère possible, des colonies différentes
Technique.
sont prélevées stérilement à la pipette, par
aspiration après rupture de la paroi de verre,
Les milieux suivants ont été utilisés :
et repiquées en bouillon anaérobie.
Milieu liquide : Cooked Meat Medium Difco,
Après 24 heures d’étuve, la pureté de ces
B 267, réparti sous 1 cm d’huile de vaseline
dernières cultures en bouillon est vérifiée par
en tubes de 18.
examen direct et coloration au Gram. Les
cultures pures sont alors gardées 5 jours de
Milieu solide : Brain Heart Infusion Agar
plus à l’étuve à 37 OC, afin de permettre l’ob-
Difco, B 418, réparti en tubes de 8,/180 mm,
tention d’un filtrat stérile immédiatement inoculé
sur une hauteur de 10 cm.
à un lot de 5 souris. La filtration est précédée
Nous avons eu recours comme méthode
d’un repiquage en milieu liquide qui permet la
d’isolement à la technique classique des pas-
conservation de la souche isolée.
sages successifs dans des tubes de gélose pro-
Résultat.
fonde, maintenue à 50 OC, d’une pipette Pasteur
préalablement introduite dans une culture en
A la suite d’un travail relativement long,
bouillon. En cas d’échec, nous nous réservions
nous avons ainsi obtenu le premier filtrat conte-
d’employer le procédé d’isolement, préconisé
nant la toxine botulique de culture pure et la
par BEERENS, sur boîtes de Pétri placées en
souche de Clostridium botulinum responsable
état d’anaérobiose (4).
de sa production.
Une subculture de la culture mixte précédente
constitue le matériel initial. Après 48 heures
CARACTÈRES DU CLOSTRIDIUM
de mise à l’étuve à 37 OC, cette subculture contient
BOTULINUM ISOLÉ
outre le germe recherché, Clostridium botulinum,
différents autres microbes anaérobies dont la
A) Caractères morphologiques
spore a pu résister au traitement thermique.
A ce stade, plusieurs séries de tubes de gélose
La morphologie du germe est classique.
profonde sont ensemencés suivant le processus
Dans les milieux nutritifs suffisants (Cooked
décrit ci-dessus et mis à l’étuve.
Meat Medium Difco, B267, bouillon VF glucosé
4 0 0
à 2 p. l.OOO), il se présente sous la forme de
Meat Medium Difco, B 267. Dans le bouillon VF
.
bâtonnets de 4 à 6 p de long sur 0,9 à 1,2 p
glucosé à 2 p, 1.000, elle est loin d’être achevée
de large, à bouts arrondis. Les éléments sont
au bout de ce temps. Enfin, elle est nulle en
soit isolés, soit assemblés par deux ou en courtes
milieu A C Difco, B 316, et dans le bouillon à la
chaînettes (photo no 7). Dans les vieilles cultures,
cystéine décrit ci-dessus.
apparaissent des formes filamenteuses.
Dans les milieux liquides défavorables (A C
B) Toxinogenèse, typage
Medium Difco, B 316 répondant à la composi-
tion suivante : pour 1.000 : extrait de viande
Afin de déterminer le type du Clostridium
3 g, extrait de levure 3 g, extrait de malt 3 g,
botulinum isolé et la toxicité de la toxine produite
peptone 20 g, glucose 5 g, gélose 1 g, acide
chez différentes espèces de laboratoire et chez
ascorbique 0,2 g, et le milieu à la cystéine cons-
les bovins, un lot de toxine a été préparé.
titué par : pour 1.000 : peptone trypsique 10 g,
Une culture en bouillon VF glucosé à
extrait de viande 3 g, glucose 2 g, chlorure de
10 p. 1.000 a été centrifugée (3.000 tours/mn
sodium 2 g, chlorhydrate de cystéine 0,5 g),
pendant 20 minutes) après 6 jours de mise à
le germe est plus gracile avec des formes incur-
l’étuve à 35 OC, puis filtrée sur filtre Seitz EKS 1.
vées et filamenteuses beaucoup plus abondantes
La stérilité du filtrat a été contrôlée comme pré-
(photo no 8) ; repiqué ensuite en bouillon VF
cédemment.
glucosé à 2 p, 1.000, il reprend sa morphologie
Les filtrats de culture du germe dans le milieu
habituelle.
A C Difco, B 316, et dans le bouillon cystéiné
II retient difficilement la coloration de Gram.
se sont révélés totalement atoxiques pour la
Bien que cilié, il semble immobile.
souris (0,20 ml par voie intrapéritonéale).
Les spores sont du type déformant et subter-
Le titre du lot de toxine ainsi obtenu en bouil-
mina1 (photo no 9). Elles se manifestent avant la
lon VF glucosé a été préalablement déterminé
24e heure de culture dans un milieu de culture
chez la souris (nombre de DMM/souris par ml,
convenable. La sporulation est presque totale
cf. chapitre : pouvoir toxique pour différentes
au bout de 6 jours dans le bouillon Cooked
espèces animales).
Photo 7. - Culture de CI. bofulinum C en bouillon VF
Photo 8. - Culture de Cl. bofulinum C en milieu AC
glucoséau bout de 24 I-I
Difco B 316
500
C) Cultures
Les carc ictères culturaux observés de la souche
isolée ont été les suivants :
Gélose profonde ‘(glucosée à 2 p. 1, ,000) :
colonies
lenticulaires devenant irréql ulières,
production de gaz. Ce dernier caractère est
en désaccord avec les données classiques (16).
Gélose profonde au sang : colonies lenticu-
laires devenant irrégulières, non hémolytiques.
Gélose profonde coeur-cerveauglucosée,
Difco,
B 418 : colonies lenticulaires devenant irrégu-
lières. Légère production de gaz.
Bouillon ordinaire : trouble homogène puis
apparition de flocons.
Bouillon VF glucosé à 2 p. 1.000 : culture
dense floconneuse qui sédimente. Production
de gaz. Odeur putride.
Bouillon cystéiné : léger flocon dans le fond
du tube, la masse du milieu demeurant limpide.
Photo 9. - Formes sporulées et spores de CI. botulinum C
en bouillon VF glucosé au bout de 4 jours de culture
Milieu de Rosenow : bonne culture qui sédi-
mente, non-production de gaz, pas de décolo-
Le typage a été effectué à l’aide des 5 antisé-
ration.
rums A, B, C, D et E délivrés par l’Institut Pasteur
Gélatine de Kohn : Ilquéfiée. Pour le type Cp,
de Paris.
DOLMAN et MURAKAMI signalent au contraire
5 lots de 5 souris ont reçu par voie intrapéri-
que la gélatine n’est pas attaquée.
tonCale 0,20 ml du mélange toxine-antitoxine
Lait : digéré.
de chacun des types préalablement porté45:minu-
Blanc d’oeuf en bouillon VF : non attaqué.
tes à 370C. Pour chaque type, I unité antitoxique
Cerveau en bouillon VF : non attaqué.
*
(U.A.) était mise en présence de 100 DMMkouris,
Glucides : Nous avons étudié l’action de la
souche isolée sur les glucides selon la méthode
Résultats.
préconisée par H. BEERENS du service des
Seules les souris ayant reçu le mélange toxine-
anaérobies de l’Institut Pasteur de Lille.
antitoxine C ont survécu. La totalité des souris
Le milieu de base utilisé répond à la compo-
appartenant aux 4 autres lots a succombé.
sition suivante :
Les souris inoculées avec le mélange toxine-
Peptone tryptique
antitoxine D sont mortes les dernières ; ce fait
10
9
Chlorure de sodium
s’explique par la communauté antigénique
5
9
Extrait de viande
partielle, bien connue, des types C et D.
3 9
Extrait de levure
II est désormais possible d’affirmer que le
5
9
Chlorhydrate de cystéine 0,40 g
type C de Clostridium botulinum est responsable
Agar en poudre
CA60 g
des cas de botulisme observés dans le Ferlo.
Eau du robinet
1.000 ml
Toutefois, le type D peut très bien être isolé au
cours de recherches ultérieures ; l’association
A ce milieu de base est ajouté 1 p. 100 d’hydrate
des types C et D, constatée en Afrique du Sud,
de carbone sous forme de solution stérilisée
constitue une hypothèse qui justifie la poursuite
par filtration.
des isolements (*).
Après régénération, les différents sucres sont
ensemencés à l’aide d’une culture de 24 heures
(*) Cette souche a été identifiée comme appartenant
en milieu de Rosenow. La quantité d’inoculum est
1
au type Cg, par le Professeur R. PREVOT, du service des
importante, elle se situe entre 0,5 et 1 ml. Au
anaérobies de l’Institut Pasteur de Paris, que nous remer-
cions très vivement de cet examen.
bout de 48 heures, I’acidification est révélée
r
501
par adjonction dans chacun des tubes de quel-
normaux en particulier ont un pouvoir neutra-
ques gouttes de l’indicateur universel de pH
lisant assez marqué. L’action de I’ovalbumine
Prolabo.
est très nette, celle de la gélatine et du sérum
Résultats : Dans ces conditions, le glucose,
chauffé est nulle.
l’amidon, le glycérol, le lactose, le maltose,
JUDE, GIRARD et CARRAT (27) ont étudié
le mannitol, le saccharose et la salicine ne sont
l’action destructrice sur la toxine D du perman-
pas fermentés.
ganate de potassium, de I’hypochlorite de soude,
Ces observations recoupent les données de
d’un dérivé organique de l’iode (Triglycine
DOLMAN et MURAKAMI. Pour ces auteurs,
hydroperiodide) et d’un dérivé d’ammonium
Clostridium botulinum Cp ne fermente aucun des
quaternaire (chlorure de duodécyl-amidomé-
sucres suivants : Maltose, saccharose, galactose,
thylène-diméthyl-benzyl-ammonium). Nous nous
sorbitol, glycérol, dextrine, salicine, inositol,
proposons de rechercher prochainement l’effet
adonitol.
de certaines substances antiseptiques sur la
Le glucose et le fructose peuvent parfois être
toxine C produite par la souche isolée au Séné-
acidifiés avec une très légère production de
gal.
gaz par certaines souches.
Un premier lot expérimental d’anatoxine a
Le type C, fermente au contraire certains
été produit par action du formol à 8 p. 1.000 à
sucres : le glucose, le fructose, le maltose, le
400C sur un filtrat de culture de 6 jours en
glycérol, la dextrine, I’inositol et le galactose.
bouillon VF. Le temps nécessaire à l’inactivation
Ne sont pas attaqués par ce type le sorbitol, le
a été de 20 jours.
saccharose, la salicine et I’adonitol.
On peut remarquer que la souche de Clostri-
B) Pouvoir toxique pour différentes espèces
dium bofulinum Cp isolée offre la même action
animales
sur les sucres que Clostridium histolyficum. Tou-
tefois le test à la gélatine décrit par H. BEERENS
La toxicité de la souche isolée a été étudiée
et J. GUILLAUME et le Colonel PONTE permet
pour plusieurs toxines de culture obtenues de
de différencier les deux germes. Le test consiste
façons diverses. Les résultats sont rapportés
à ensemencer avec le germe étudié un tube de
dans l’ordre de déroulement de I’expérimenta-
milieu de Rosenow régénéré auquel ont été
tion.
ajoutés 3 ml de gélatine. Seul Clostridium hisfo-
10 Lot de toxine no / : constitué par un filtrat
lyficum produit une importante quantité d’am-
de culture de 6 jours, en bouillon VF glucosé à
moniaque, par désamination, au cours de son
10 p. 1.000, en ballon de 250 ml.
développement.
Toxicité pour lasouris : La DMM/souris se situe
au voisinage de 0,000 1 ml, soit 10.000DMM/ml
D) Physiologie
pour des souris de 18-20 g inoculées par voie
Pouvoir réducteur faible, ne réduit ni le
intrapéritonéale.
rouge neutre, ni la safranine.
LAMANNA, JENSEN et BROSS (31) ont
montré que le titre d’une solution de toxine
botulique C ne varie pas en fonction du poids
E) Biochimie
des souris inoculées. D’où il ressort que pour
Nitrates et sulfites non réduits.
cette espèce, il est erroné d’exprimer la toxicité
en ml de toxine par kg de poids vif.
Toxicité pour le cobaye (tableau 1). La DMM/
CARACTÈRES DE LA TOXINE
cobaye est voisine de 20 DMM/souris, soit
0,003 ml de toxine par kg de poids vif. Les
A) Résistance
cobayes utilisés ont été inoculés par voie intra-
péritonéale.
La toxine C est détruite par un chauffage de
Toxicité pour le lapin (tableau Il). La DMM/
10 à 15 minutes à IOOOC. Diverses protéines
lapin équivaut à environ 40 DMM/souris, ce qui
atténuent ou inactivent la toxine botulique C (43).
correspond dans les essais effectués à 0,0026 ml
Les antitoxines non spécifiques et les sérums
de toxine par kg de poids vif. Les différentes
502
c
.
Résultats
dilutions de toxine ont été injectées par voie
Toxicité pour la souris : la DMM/souris est
intrapéritonéale.
de 0,OOOOl ml, soit 100.000 DMM/souris par ml,
Toxicité pour le zébu (tableau III). La DMM/
pour des souris inoculées dans les mêmes
zébu est voisine de 1.500 DMM/souris, soit
conditions que précédemment.
environ 0,001 ml de toxine par kg de poids vif,
Toxicité pour le cobaye : 0,0003 ml/kg par
inoculée par voie sous-cutanée. En dehors de
voie intrapéritonéale.
l’abattement, le ptyalisme est le premier symp-
Toxicité pour le lapin : 0,0002 ml/kg par voie
tôme qui apparaît lors de l’inoculation d’une
intrapéritonéale.
dose Iéthale de toxine par voie sous-cutanée
Toxicité pour le zébu : 0,OOOl ml/kg par voie
chez cette espèce animale (15). La plus grande
sous-cutanée.
sensibilité des bovins à la toxine botulique C
30 Lot de toxine no 3 : constitué par un filtrat
est un fait bien connu (62).
de culture de 6 jours en bouillon VF glucosé à
20 Lot de toxine rP 2 : constitué par un filtrat
10 p. 1.000, auquel était ajouté du chlorhydrate
de culture de 6 jours en bouillon VF glucosé à
de cystéine au taux de 0,5 g p. 1.000. La culture
10 p. 1.000, en erlenmeyer de 2 1.
était effectuée en erlenmeyer de 100 ml.
.a
503
REVUE D’ÉLEVAGE
5
TAE@AU A"I1
Titrage de la toxiné chez le lapin (lot de toxine no 1)
746
2,@3Q
0,OJ
0,0144
300
mort en 40 h.
740
1,360
0.02
0,0147
200
mort en 40 h.
792
1,520
0,015
O,WB
150
mort en 4 jours
791
1 ,mo
0,010
0,0053
100
mort en 4 jours
790
1,890
0,005
O,CO26
50
mort en 7 jours
763
1,320
0.004
0,003o
40
mort en 5 jours
782
1,475
0,003
0,002o
30
a sui-vécu
781
1,940
0,002
0,0010
20
a survécu
785
2,500
0,001
O,OQO4
10
a survécu
TABLEAU NO111
Titrege de la
toxine chez le zébu (lot de toxine nO1)
Quantité toxine
Nombre
Zébu
Poids
Toxine pure par kg de poids
DW
Résultats
NO
(kg)
(ml)
Wkg)
souris
759
131
2
0,0152
2o.cOo
mort en 2 <jours +
751
113
195
0,0132
15.000
mort en 3 jours +
752
141
18
0,007o
10.000
mort en 3 jours +
753
143
095
0,0034
5.000
mort en 6 jours
749
145
0,4
,
O,CO27
4.000
mort en 7 jours
799
139
0,3
o,cO21
3.000
ptyelisme 5 jours après
mort en 21 jours
754
118
02
0,0016
2.000
mort au bout d'un mois
755
141
0,15
0,0010
1.5uo
mort au bout de 28 jours
756
126
0,lO
0,0007
1 .oco
n'a presenté aucun sympt&!le
.
Toxicité pour la souris : La DMM/souris se
Le milieu utilisé est du bouillon VF cystéiné
situe au voisinage de 0,000006 ml, soit environ
(0,5 g p. 1.000) auquel est adjoint, après auto-
150.000 DMM/souris par ml, par voie intra-
clavage, 10 p. 1.000 de glucose stérilisé par
péritonéale.
filtration. Le montage du dispositif de culture
Toxicité pour le cobaye : voisine de 0,0001
est réalisé dans un flacon de 5 litres (figure 1).
ml/kg, par voie intrapéritonéale.
Le tube de cellophane appartient à la marque
Visking, SS de précision, no 100, largeur à plat
Toxicité pour le lapin : voisine de 0,00009
130,7 mm (Viscosa) (*).
ml/kg, par voie intrapéritonéale.
L’autoclavage (30 mn à 12OOC) porte sur
40 Lot de toxine no 4 : Afin de réaliser la pré-
l’appareil rempli de milieu avec le sac de cel-
paration prochaine d’une anatoxine destinée à
lophane contenant du sérum physiologique
vacciner les animaux du Ferlo, nous nous som-
jusqu’au 1/3 de sa hauteur.
mes efforcés d’obtenir une toxine de très haut
La récolte de la toxine s’effectue 8 jours après
titre en appliquant la technique des cultures en
l’ensemencement de l’intérieur du sac.
sac de cellophane mise au point par STERNE
et WENTZEL (58) et reprise par différents
(*) Etablissements SOPHYC, 4 rue du Dr Dumont,
auteurs (52, 65, 66).
Levallois, Seine.
S o l u t i o n glucosée s t é r i l e
(filwationIP
Manchon de
verre
Inoculum.sérum
physiologique
itiilieu:bouillon VF
cys:éiné.-
Culture
F i g u r e I.- Culture de Clostridium botulinum type C
en sac de cellophane.
505
Résultat. .’
Au Sénégal, le botulisme humain a récemment
fait l’objet d’une publication. REY et Coll. (49)
’
Dans ces conditions de culture du germe par
rapportent qu’en 1964 six cas cliniques, dont
dialyse, la toxine obtenue titre 25 x 106 DMM/
trois mortels, ont été observés chez des Serers
souris par ml.
contaminés dans leurs villages d’origine, en *
milieu coutumier rural. L’épidémiologie de
CLOSTRIDIUM BOTULINUM T Y P E C
l’affection ne fut pas précisée et il semble à
ET BOTULISME HUMAIN
première vue difficile d’effectuer un rappro-
chement avec le botulisme bovin du Ferlo.
Nous tenons à aborder brièvement cette
question, car il est d’usage courant dans le
FerIo que les éleveurs abattent les animaux
CONCLUSION
atteints de la « maladie des forages » avant qu’ils
ne succombent et que la viande soit consommée.
Les coutumes alimentaires font que la viande
Clostridium botulinum type C a été isolé du
de boeuf soit le plus souvent bouillie ; celle du
foie d’un bovin sacrifié à la période agonique
mouton est parfois grillée. Dans ces conditions,
alors qu’il présentait tous les symptômes de
la toxine relativement thermolabile est détruite.
l’intoxication botulique aiguë telle qu’on peut
Néanmoins,
nous pensons
utile d’attirer
la rencontrer dans le Ferlo chez les animaux en
l’attention sur ce problème en rappelant que le
état d’aphosphorose. Les différents lots de
botulisme humain de type C a déjà fait l’objet
toxine préparés à partir de la souche isolée
d’au moins trois descriptions. En 1953, un cas a
par les méthodes de culture classiques ont pré-
été rapporté par MEYER et Coll. (33), la recher-
senté une toxicité allant de 10.000 à 150.000
che de l’aliment causal fut confuse et demeura
DMM/souris par ml. La culture du germe par
sans résultat.
di,alyse en sac de cellophane a fourni une
Le second exemple date de 1955 et nous le
toxine titrant 2,5 x 106DMM/souris par ml.
devons à PREVOT (43) et Coll., deux personnes
présentèrent un botulisme typique à la suite de
.
l’ingestion d’un pâté de campagne et Clostridium
REMERCIEMENTS
botulinum type C fut isolé de cette charcuterie.
Un autre foyer humain de type C a été signalé
Nous tenons à remercier nos confrères CAL-
’
par FLEMING en Rhodésie ; également un
VET (H.), REGNOULT (M.) et GRETILLAT (S.)
pâté de préparation familiale était à l’origine de
pour le concours apporté dans la récolte des
l’intoxication (*).
prélèvements sur le terrain et dans l’exécution
-
-
des photographies que nous présentons.
(*) H. BEERENS nous a rapporté qu’au Congrès de
bactériologie, tenu à Moscou en 1966, Mme MATTWEEV
avait signalé deux nouveaux cas d’épidémie de botulisme
à type C chez l’homme en U. R. S. S.
Dans le premier cas, la consommation d’un poisson
Institut d’Elevoge et de Médecine vétérinaire
était à l’origine de l’infection. La souche fut isolée de
des Pays tropicaux. Maisons-Alfort
l’intestin d’une personne ayant succombé à la maladie.
Dans le second cas, une conserve familiale de concom-
Laboratoire national de /‘Elevage
bres fut rendue responsable du botulisme de type C
observé.
et de Recherches vétérinaires. Dakar-Hann
S UMMARY
The Botulism of Ruminants and Horses in Senegal
Characteristics of the Strain of Clostridium botulinum isolated and of its toxin
Clostridium botulinum type C has been isolated from the liver of a cattle
which had been slaughtered at its last gasp when showing all the symptoms of
an acute botulism intoxication such as it cari be seen in the Ferlo in animals
506
suffering from a lack of phosphorus. The different batches of toxin prepared
L
from the strain isolated by classical methods of culture, showed a toxicity
ranging from 10.000 to 150.000 LD/mouse per ml. The culture of the germ
by dialysis through cellophan membrane gave a toxin, the titer of which was
2.5 x 106 LD/mouse per ml.
RESUMEN
El botulisme de 10s rumiantes y de 10s caballos en Senegal
Caracteres de la cepa aislada de Clostridium bofulinum y de su toxina
Se ais16 Closfridium botulinum tipo C del higado de un bovino matado durante
su agonia cuando tenia todas las sintomas de la intoxication aguda causada
por el botulismo tal como se puede encontrarla en el Ferlo en 10s animales
atacados por una carencia en fbsforo. Los varios lotes de toxina preparados
a partir de la cepa aislada mediante 10s métodos clasicos de cultiva mostraron
una toxicidad Ilegando de 10.000 a 150.000 DMM/raton por ml. El cultiva del
germen por diolisis en saco de celofan produjo una toxina cuyo titulo era
2,5 x 106 DMM/raton por ml.
BIBLIOGRAPHIE
1. ANDERSEN (A. A.). - Une méthode rapide
6. CALVET (H.) et PICART (P.). - Etude sur
de numération des spores de « Closfridium
la maladie des forages. Lob. nat. Rech. vét.
bofulinum » sur boîte de Pétri. (A rapid
Dakar, Roj~. fonction., 1964.
plate method of counting spores of Clos-
7. CALVET (H.) et PICART (P.). - Aphos-
Iridium bofulinum). J. Bo~t., 1951 , 62,425-432.
phorose et botulisme au Sénégal. 4e Journées
2. BEER (J.). - U ne nouvelle substance chi-
médicales Dakar, 1965, à paraître.
mique inhibant le développement des bac-
8 . C A L V E T ( H . ) , PICART (P.), D O U T R E
téries, le PNPG/I. (Ein neuer, das Schwarmen
(M.) et CHAMBRON (J.). - Aphosphorose
von Bakterien hemmender chemischer Stoff,
et botulisme au Sénégal. Rev. Elev. Méd. vét.
PNPG/I). Zbl. Bokt., 1958,171,195-201.
Pays trop.,1965, 3, 249-282.
3. BEERENS (H.). - Amélioration des tech-
9. COBURN (N.). - Considérations sur les
niques d’étude et d’identification des bac-
différentes fractions de la toxine botulique
téries anaérobies. Ann. Inst. Pasteur Lille,
type C. (Concerning the nature of type
1953-1954, 6, 36-48.
C Botulinus toxin fractions). Sci., 1942, 95,
4. BEERENS (H.) et CASTEL (M. M.). - Pro-
389.
cédé simplifié de culture en surface des
10. COLLET (P.), BON (M.), RUBY et COUR-
bactéries anaérobies. Comparaison avec
RIER. - Plusieurs cas de botulisme sur les
la technique utilisant la culture en profon-
grandes espèces animales. Bull. Soc. Sci.
deur. Ann. Inst. Pasteur Lille, 1958-1959, 10,
vét. Lyon, 1951, 53, 139-146.
183-192.
11. COLIN (F.) et BONIN (M.),- Un cas de
5. BENNETTS (H.W.) et HALL (H. T. B.). -
botulisme bovin. Bull. Soc. Sci. vét. Lyon,
Le botulisme ovin et bovin en Australie
1958, 60, 201-204.
occidentale : sa cause et sa prévention par
12. DADOT (F.). - Botulisme du canard. Rec.
l’immunisation. (Botulism of sheep and cat-
Méd. vét. Ecole Alfort, 1945, 121, 177-181.
tle in western Australia : its cause and its
13. DONETS (Y. 1.). -Etude des propriétés
prevention by immunization). Aust. vet. J.,
infectieuses de l’agent causal du botulisme
1938, 14 (3), 105-118.
de type C. (The studyof infectious properties
of the C type causative agent of botulism).
trated media). Con. J. of Res., 1947, 25,
J. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol., 1961 , 6,
25-31.
104-I 10.
.3. HENNING (M. W.). - Les maladies ani-
14. DUBOVSKY (B. J.) et MEYER (K. F.). -
males en Afrique du Sud. (Animal diseases
i
Une étude expérimentale des méthodes
in South Africa). 2nd edit., Central news
disponibles pour l’enrichissement, la mise
agency South Africa, 1949.
en évidence et l’isolement de B. bofulinus
4. HERNANZ (M.). - Le botulisme des équi-
dans des prélèvements de sols ou de pro-
dés en Espagne. (El botulismo de losequidos
duits en dérivant, dans des aliments suspects
e n Espana). Trob. ht. ho/. anim., 1942, 7,
et dans du matériel cliniqueou nécropsique.
326-344.
(An experimental study of the methods avai-
5. HERNANZ (M.). - Le botulisme chez les
lable for the enrichment, denronstration and
animaux domestiques. (El botulismo en
isolation of 6. bofulinus in specimens of soi1
10s animales domesticos). Trab. Inst. Bol.
and its products, in suspected food, in cli-
anim., 1942, 7, 511-539.
nical and, in necropsy material). J, infect.
6. JANSEN (B. C.). - L’importance des mi-
Dis., 1922, 31, 501-540.
crobes anaérobies comme agents de mala-
15. EMMELIN (N.). -Hypersensibilitédesglan-
dies animales en Afrique du Sud. (The
des salivaires à la toxine botulique. (Super-
importance of anaerobes in the causation
sensitivity of salivary gland caused by botu-
of animal diseases in the Republic of South
linum toxin). J, Physiol., 1961, 156, 121-127.
Africa). Bull. Off. inf. Epiz., 1963,59,1333-50.
7. JUDE (A.), GIRARD (P.) et CARRAT (P.). -
16. FAGONDE (A. P.), - Le botulisme animal.
Action destructrice in vivo de certains agents
(Botulismo animal). Bull. OF int. Epiz.,
1963, 59, 1361-77.
chimiques sur les toxines botulique et
tétanique. C-R. Soc. Bol., 1949, 143, 318-319.
17. FILMER (J. F.) et KULL (K. E.). - Le botu-
8. KATITCH (R.),
CVETKOVITCH (L.),
lisme chez les animaux domestiques de
DJOUKITCH (B.), VOUKITCHEVITCH (Z.)
l’Australie occidentale. (Botulism in domes-
et TOMANOVITCH (B.). - Possibilité d’in-
-
tic animals in Western Australia). Aust.
fection par Cl. bofulinum C beta. Lésions
vet.J., 1937, 13, 170-172.
provoquées par Ascoris suum. Rec. Méd.
18. GALLUP (D. M.) et GERHARDT (P.), -
vét., 1965, 141, 433-439.
-
Cultures concentrées de bactéries obtenues
9. KATITCH (R. V.). - Les maladies des
en tubes de dialyse et dans des fermentateurs.
animaux domestiques causées par les micro-
(Concentrated culture of bacteria in dialysis
bes anaérobies. Vigot, 1965.
flask and fermentor systems). Bacteriol. Proc.,
3. McKEE (M. T.), BELL (J. F.) et HOYER
1962, 52.
(B. H.). - Culture de Clostridium botuli-
19. GRAHAM (R.) et SCHARZE (H.). - Le
num type C à pH contrôlé. (Culture of
botulisme des bovins. (Botulism in cattle). 1.
Clostridium bofulinum type C with control-
ht., 1921, 4, 1-21.
led pH). j. Bact., 1958, 75, 135-142.
20. GUILLAUMIE (M.) et KREGUER (A.). -
1. LAMANNA (C.), JENSEN (W. 1.) et BROSS
Contribution à l’étude des hémolysines
(1. D. J.). - Rôle du poids dans la réponse
bacthriennes. Propriétés des toxines botu-
de la souris aux toxines botuliques. (Body
liniques des types C et D. C-R. Soc. Biol.,
weight as a factor in the response of mice
1951, 145, 179-182.
to botulinal toxins). Amer J. Hyg., 1955,
21. HELLER (H. H.). - Principes concernant
62, 2?-28.
l’isolement des germes anaérobies. (Princi-
2. LEWIS (K. N.) et HILL (E. V.). - Milieu
ples concerning the isolation of anaerobes).
pratique et mesures de contrôle pour la
J. Bac/., 1921, 6, 445-470.
production de cultures de haute toxicité de
22. HELSON (V. A.), STEVENSON (J.W.) et
Clostridium bofulinum type A. (Practical
REED (G. B.). - Quantité de toxine botu-
media and control measures for producing
lique obtenue dans des milieux concen-
highly toxic cultures of Closfridium botu-
trés. (Yield of botulinum toxin in concen-
linum type A). j. Bact., 1947, 53, 213-230.
508
Ir
f
33. MEYER (K. F.), EDDIE (BS), YORK (G. K.),
dû à Cl. bofulinum C. Ann. Inst. Pasteur, 1955,’
COLLIER (C. P.) et TOWNSEND (C. T.). -
88, 513-515.
Closfridium bofulinom type C et le botulisme
t5. PREVOT (A. R.), TERRASSE (J.), DAU-
I
humain. (Closfridium bofolinum type C
MAIL (J.), CAVAROC (M.), RIOL (J.) et
and human botulism). VIe Congrès int. Micr.,
SILLIOC (R.). - Existence en France du
1353, vol. 2, sez VIII-XVI, 276.
botulisme humain de type C. Bull. Acad.
34. MOINE (G, G.). - Du danger des cada-
naf. Méd. Paris, 1955, 139, 355-358.
vres en putréfaction au sein des denrées
46. PREVOT (A. R.). -Manuel de classifica-
alimentaires. Rev. Path. corne., 1950, 50,411-
tion et de détermination des bactéries
413.
anaérobies. Monographie Inst. Pasteur, Mas-
35. MULLER (J.). - Botulisme du type C chez
son, 1957.
l’homme et les animaux. Incidence chez
les bovins et les équidés. (Type C botulism
47. PREVOT (A. R.). - A propos de la toxino-
in man and animais. Incidence in cattle and
typie botulique. Bull. Ass. Dipl. Microbiol.,
horses). Medlemsbl. danske Dryloegeforen,
Nancy, 1959, 74, 2-7.
1961, 44, 547-57.
48. REED (G. B.) et ORR (J. H.). - Identifica-
36. MULLER (J.). - Botulisme équin et bovin
tion rapide des germes anaérobies des
au Danemark. (Equine and bovine botulism
gangrènes gazeuses (Rapid identification
in Denmark). Bull. Off. int. Epi~., 1963, 59,
of gas gangrene anearobes). War Med.,
1379-90.
1941, 1, 493-510.
37. PIGOURY (L.), MICHEL (C.) et CHABAS-
49. REY (M.), DIOP MAR (l.), BAYLET (R.),
SOL (C.). - Rôle de l’eau dans I’étiologie
ARMENGAUD (M.), MICHEL (R.), BON-
du botulisme animal. Méthode de recherche
NARDOT (R.) et SOW (M.). - Du botu-
de la toxine botulique C dans l’eau. Rev.
lisme en pays Serer, à propos de six cas
Cps Santé Armées, 1962, 3, 649.
hospitalisés. Bull. Soc. Med. Afr. noire, 1964,
38. POLSON (A,) et STERNE (M.). - Produc-
9, 34-44.
2
tion de toxines botuliques de haut titre et
50. SANCHEZ BOTIJA (C.). - Epizootologie
d’anatoxines. (Production of potent botuli-
du botulisme des équidés en Espagne. Enquê-
num toxins and formol toxoids). Nature,
te sur la contamination des aliments (Epizoo-
5
1946,158, 238-239.
telogia del botulismo de 10s equidos en
39. PREVOT (A. R.). -Techniques pour le
Espana. Investigaciones sobre la contami-
diagnostic des bactéries anaérobies. Coll.
nation de 10s alimentos). Trab. Inst. Biol.
« Techniques de base», 119 p., Edit. de la
anim., 1942, 7, 223-288.
Tourelle, Saint-Mandé.
40. PREVOT (A. R.), HUET (M.) et TARDIEUX
51. SARTORY (R.), MEYER (J.), MALGRAS
(J,) et SUPPIGER (H.), - Recherche et
(P,). - Etude de vingt-cinq foyers récents
dosage des principaux facteurs de crois-
de botulisme animal. Bull. Acad. vét. France,
sance dans le milieu VF pour bactéries
1950, 23, 481-487.
anaérobies. Ann. Inst. Pasteur, 1955, 89,
41. PREVOT (A. R.), SILLIOC (R.) et QUEN-
TIN (M.).
358-368.
- Existence en France du botu-
lisme bovin de type C. Bull. Acad. vét. France,
52. SCHNEIDER (M. D.), GRECZ (N.) et ANEL-
1953, 26, 73-78.
LIS (A.). - Sporulatjon de Closfridium bofu-
42. PREVOT (A. R.), SILLIOC (R.) et GAY
linum type A, B et E, de Closfridium per-
(H.). - Etude d’un foyer de botulisme
fringens et de l’anaérobie putréfiant 3679
équin de type C. Rec. Méd. vét. Ecole Alfort,
en sacs de dialyse (Sporulation of Closfri-
1954, 130, 353-355.
dium bofulinum types A, B et E, Closfridium
43. PREVOT (A, R.). - Biologie des maladies
perfringens and putrefactive anerobes 3679
dues aux anaérobies. 572 p., Edit. médicales
in dialysis sacs). J. Bact., 1963, 85, 126-133.
Flammarion, Paris, 1955.
.
53. SCOTT MILLAR (J. W.). - Le botulisme
44. PREVOT (A. R.), SILLIOC (R.) et PROUTE
en Afrique du Sud (Botulism in South Africa).
(J.). - Etude d’un foyer de botulisme bovin
South Afr. Med.J.,1964, 38, 310-315.
l
5 0 9
54. SEDDON (H. R.). - Les maladies des
production by Closfridium). Con. 1. of Res.,
animaux domestiques en Australie (Disease:
1947, 25, 9-13.
.
of domestic animals in Australia). Common-
61. STEVENSON (J-W.), HELSON (V. A.) et
weolth of Australia, Depart. of Health, 1953
REED (G. B.). - Préparation des toxines
9
55. SEERGEEVA (T. 1.). - Recherche des taxi.
des Closfridium parobofulinum (Prepara-
nes botuliques et des germes de type B et C
tion of Closfridium parobofulinum
toxins).
chez les malades et dans les cadavre:
CanJ. ofRes.,1947, 25, 14-24.
(Detection of botulism toxins and microbes
62. THEILER (H.), VILJOEN (P. R.), GREEN
of the B and C types in the organism oi :
(H. H.), DU TOIT (P. J.), MEIER (H.) et
sick man, animals and in corpses). J,
ROBINSON (E. M.). - Le Lamsiekte (para-
Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol., 1963, 7,
botulisme) des bovins en Afrique du Sud
77-82.
(Lamsiekte (parabotulism) in cattle in South
Africa). 12th Ann. Rep. Director vet. Res. South
56. SHOOP (G.). - Mise en évidence de Clos-
Afr., 1927, 12, 821-1961.
fridium bofulinum type C chez les bovins
63. VERGE (1.) et GORET (P.). - Sur la patho-
(Demonstration of Closfridium bofulinum
génie du botulisme. Bull. Soc. Sci. vét. Lyon,
type C in cattle). Dtsch. Tierorztl. Wschr.,
1947, 49, 92-95.
1961, 68, 71-72.
64. VERGE (J.) et POGGIOLI (Ch.). - Bull.
57. SIMMONS (G. C.) et TAMMEMAGI (L.). -
Acod. vét. France, 1951. 24, 509-517.
Closfridium bofulinum type D, agent res-
BRUYERE (A.) et DAVID (A.). - Paralysie
ponsable du botulisme bovin (Closfridium
labio-glosso-pharyngée et botulisme chez
bofulinum type D as a cause of bovine
le cheval. Rev. Méd. vét,. 1951, 102,155-160.
botulism in Queensland). Austral. vét. J.,
65. VINET (G.) et FREDETTE (V.). - Appareil
1964, 40, 123-127.
pour la culture des bactéries en tubes de
58. STERNE (M.) et WENTZEL (L. M.). -
cellophane. (Apparatus for the culture of
Une nouvelle méthode de production impor-
bacteria in cellophane tubes). Science, 1951,
tante d’anatoxine botulique de titre élevé
114, 549-550.
des types C et D (A new method for the
56. VINET (G.) et RAYNAUD (M.). - Pro-
--
large-scale production of high-titre botu-
duction et purification de la toxine botulique
linum formol-toxoid types C and D). 1,
typeC.Rev.Can. Biol., 1963, 22 (l), 119-120.
C
Immunol., 1950, 65, 175-183.
t57. VIRAT (B.), VALLEE (A.) et KREGUER (A.).
- A propos du botulisme du mouton ;
59. STERNE (M.) et THOMSON (A.). - Isole-
première souche ovine isolée en France.
ment et identification de « Closfridia » dans
Bull. Acad. vét. France, 29, 425-426.
les maladies animales (The isolation and
58.WENTZEL ( L . M . ) e t S T E R N E (M.). -
identification of « Closfridia » from patholo-
Une membrane dialysante simple à double
gical conditions of animals). Bull. Off. int.
surface (A simple double-surface dialysing
Epiz., 1963, 59, 1487-98.
membrane). Science, 1949, 110, 259.
60. STEVENSON (J. W.), HÉLSON (V. A.) et
t;9,WENTZEL (L. M.), STERNE (M.) et POL-
REED (G. B.). - Un milieu à base de
SON (A.). - La haute toxicité de la toxine
digestat de caséine pour la production de
botulique type D purifiée (High toxicity of
toxine par les germes du groupe des Clos-
pure botulinum type D toxin). Nafure,
fridium (A casein digest medium for toxin
1950, 166, 739-740.
510
.
Le botulisme des ruminants et des équidés
au Sénégal
Caractères de la souche isolée
de Clostridium botulinum et de sa toxine
Par
M. P. DOUTRE e f J. CHAMBRON
(avec la collaborafion fechnique de 1. FAYE)
RÉSUMÉ
Clostridium botulinum type C a été isolé du foie d’un bovin sacrifié 0 la période
agonique alors qu’il présentait tous les symptômes de l’intoxication botulique
aiguë telle qu’on peut la rencontrer dans le Ferlo chez les animaux en état
d’aphosphorose. Les différents lots de toxine préparés à partir de la souche
isolée par les méthodes de culture classique ont présenté une toxicité allant de
10.000 à 150.000 DMM/souris par ml. La culture du germe par dialyse en sac
L
de cellophane a fourni une toxine titrant 2,5 x 106 DMM/souris par ml.
Dans une publication précédente (*), la double
Dans le travail qui suit, nous nous proposons
étiologie de l’affection animale observée au
de rapporter les données nouvelles recueillies
Sénégal, dans la région du Ferlo, et connue
concernant le germe en cause, Closfridium
localement sous le nom de « Gniedo », a été
botulinum et sa toxine.
mise en évidence. Brièvement, elle peut être
représentée par le schéma suivant :
MATÉRIEL
Carence minérale (hypophosphorose) + Osté-
ophagie -> Botulisme.
Les prélèvements utilisés au laboratoire de
L’importance reconnue au botulisme se voyait
Dakar ont été effectués au cours d’une tournée
alors confirmée sur le plan bactériologique
accomplie dans la région dite des « six forages »
par l’obtention de deux résultats suffisamment
en mai 1965. Les zones de Lagbar, Tessekré,
démonstratifs mais incomplets :
Yaré Lao et Dodji ont été visitées afin de récolter
- la révélation d’une toxine dans un filtrat
le matériel d’étude.
de culture mixte effectuée à partir d’un frag-
Ce dernier est constitué essentiellement par
ment d’anse intestinale, avec perte de la toxicité
des fragments de foie, d’anse intestinale et de
dans les subcultures,
masse musculaire provenant : d’un mouton
- la réussite d’une séro-neutralisation qua-
abattu sur notre demande, de sept bovins morts
litative de cette toxine chez la souris en présence
depuis moins de 48 heures ou sacrifiés à la
d’un mélange des antisérums des types C et D.
période agonique et d’un âne déjà enterré et
exhumé par les propriétaires. Ainsi, 14 prélève-
ments d’organes ont été rassemblés et mis immé-
(*) Rev. Elev. Méd. vét. Pays trop., 1965, 3, 249-282.
diatement dans des flacons d’un litre. Un contai-
4 9 5
s
ner isotherme, rempli de pains de glace, a
ment contentés de faire appel à la thermo-
permis d’assurer une conservation a basse
résistance de la spore de Clostridium bofulinum.
température sur le terrain et lors du transport
Le broyat, recueilli dans un tube à essai, est
à Dakar.
chauffé 5 minutes à la température de IOOOC.
Puis une partie de ce produit sert à ensemencer
un ballon de 100 ml de bouillon pour anaérobies
MIsE EN ÉVIDENCE DE LA TOXINE
(Cooked Meat Medium Difco, B 267).
BOTULIQUE DANS LES PRÉLÈVEMENTS
Après 6 jours de conservation à l’étuve à
37 OC, la culture mixte est centrifugée puis
Pour chaque prélèvement, 60 g de matières
filtrée sur filtre Seitz EKS 1.
solides sont triturées au mortier dans 60 ml
La stérilité du filtrat est contrôlée par ense-
d’eau distillée en présence de sable fin stérile.
mencement d’un tube de bouillon VF glucosé
Chaque broyat est ensuite centrifugé à 3.000
avant inoculation de 5 souris par voie intra-
tours/mn pendant 10 mn puis filtré sur filtre
péritonéale (0,20 ml).
Seitz EKS 1. La stérilité des filtrats recueillis
est vérifiée par ensemencement d’un bouillon VF
Résultats.
glucosé mis à l’étuve pendant 48 heures à 370C.
Chaque filtrat sert à inoculer un lot de 5 souris
Les 5 souris meurent en moins de 24 heures.
par voie intra péritonéale (0,20 ml).
D’autres espèces animales reçoivent alors
différentes quantités du même ftltrat par des
Résultats.
voies diverses :
Les souris inoculées avec 5 filtrats différents
Cobaye (1 ml par voie intrapéritonéale).
succombent en moins de deux jours après avoir
L’animal présente une paralysie flasque géné-
présenté les symptômes typiques du botulisme
ralisée (photo no 1) et succombe dans les 24 heu-
chez cette espèce. Les souris inoculées avec les
res.
9 autres ne manifestent aucune mortalité.
Lapin (1 ml par voie intrapéritonéale). Le
Le filtrat le plus toxique pour la souris s’avère
lapin meurt dans les 48 heures après avoir
provenir d’un foie de zébu sacrifié par les éle-
montré les symptômes de l’intoxication botulique
veurs sur notre instance (Yaré Lao).
(photo no 2).
Le tableau clinique qu’offrait cet animal avait
Pigeon :(0,25 ml par voie intramusculaire).
tout particulièrement attiré notre attention
Moins de 24 heures après l’inoculation, l’oiseau
(ptyalisme intense et paralysie de la langue).
se paralyse, la tête pend et les membres antérieurs
A la dilution limite du Ij80, le filtrat tue encore
s’étendent (photo no 3). La mort survient avant
la souris.
la fin du 2e jour.
Par la suite, au cours des travaux ultérieurs,
Canard de Barbarie (1 ml par voie intra-
nous avons uniquement utilisé comme matériel / ’musculaire). Au bout de 3 jours, seuls les mou-
le prélèvement de foie à partir duquel avait
vements des ailes sont permis. Lecanard demeure
été préparé ce filtrat.
1
( Iouché, les ailes à plat sur le sol (photo no 4),
Inais ne succombe pas. Ce fait a déjà été rap-
Ioorté par DADOT lors d’un foyer de botulisme
(apparu chez cette espèce dans le nord de la
OBTENTION D’UNE TOXINE
I-rance (12).
DE CULTURE MIXTE
Bovin (2 ml par voie sous-cutanée). Au bout
Technique.
de 5 jours, un ptyalisme intense se déclare et
a langue paralysée sort de la bouche (photo
Un morceau de foie est trituré comme précé-
10s 5 et 6), 48 heures plus tard la mort survient.
demment en eau distillée. Pour réduire le
îette inoculation a permis de reproduire pour
nombre des germes de contamination particu-
a première fois le botulisme expérimental
lièrement important, nous nous sommes finale-
:hez le zébu au Sénégal.
496
Photo 1. - Cobaye paralysé ayant reçu 1 ml du filtrat de culture mixte
.
Photo 2. -Lapin paralysé ayant reçu 1 ml du filtrat de culture mixte
497
.
Photo 3. - Pigeon paralysé ayant reçu 0,25 ml du filtrat de culture mixte
Photo 4. - Canard de Barbarie ayant reFu 1 ml du filtrat de culture mixte
498
Photos 5 et 6. - Bouvillon ayant reçu 1 ml du
filtrat de culture mixte. Symptômes présentés 5 jours
après l’inoculation : paralysie des membres et de
la langue, ptyalisme.
ISOLEMENT DE CLOSTRIDIUM BOTULINUM
48 heures plus tard, dans les tubes où I’isole-
ment s’avère possible, des colonies différentes
Technique.
sont prélevées stérilement à la pipette, par
aspiration après rupture de la paroi de verre,
Les milieux suivants ont été utilisés :
et repiquées en bouillon anaérobie.
Milieu liquide : Cooked Meat Medium Difco,
Après 24 heures d’étuve, la pureté de ces
B 267, réparti sous 1 cm d’huile de vaseline
dernières cultures en bouillon est vérifiée par
en tubes de 18.
examen direct et coloration au Gram. Les
cultures pures sont alors gardées 5 jours de
Milieu solide : Brain Heart Infusion Agar
plus à l’étuve à 37 OC, afin de permettre l’ob-
Difco, B 418, réparti en tubes de 8,/180 mm,
tention d’un filtrat stérile immédiatement inoculé
sur une hauteur de 10 cm.
à un lot de 5 souris. La filtration est précédée
Nous avons eu recours comme méthode
d’un repiquage en milieu liquide qui permet la
d’isolement à la technique classique des pas-
conservation de la souche isolée.
sages successifs dans des tubes de gélose pro-
Résultat.
fonde, maintenue à 50 OC, d’une pipette Pasteur
préalablement introduite dans une culture en
A la suite d’un travail relativement long,
bouillon. En cas d’échec, nous nous réservions
nous avons ainsi obtenu le premier filtrat conte-
d’employer le procédé d’isolement, préconisé
nant la toxine botulique de culture pure et la
par BEERENS, sur boîtes de Pétri placées en
souche de Clostridium botulinum responsable
état d’anaérobiose (4).
de sa production.
Une subculture de la culture mixte précédente
constitue le matériel initial. Après 48 heures
CARACTÈRES DU CLOSTRIDIUM
de mise à l’étuve à 37 OC, cette subculture contient
BOTULINUM ISOLÉ
outre le germe recherché, Clostridium botulinum,
différents autres microbes anaérobies dont la
A) Caractères morphologiques
spore a pu résister au traitement thermique.
A ce stade, plusieurs séries de tubes de gélose
La morphologie du germe est classique.
profonde sont ensemencés suivant le processus
Dans les milieux nutritifs suffisants (Cooked
décrit ci-dessus et mis à l’étuve.
Meat Medium Difco, B267, bouillon VF glucosé
4 0 0
à 2 p. l.OOO), il se présente sous la forme de
Meat Medium Difco, B 267. Dans le bouillon VF
.
bâtonnets de 4 à 6 p de long sur 0,9 à 1,2 p
glucosé à 2 p, 1.000, elle est loin d’être achevée
de large, à bouts arrondis. Les éléments sont
au bout de ce temps. Enfin, elle est nulle en
soit isolés, soit assemblés par deux ou en courtes
milieu A C Difco, B 316, et dans le bouillon à la
chaînettes (photo no 7). Dans les vieilles cultures,
cystéine décrit ci-dessus.
apparaissent des formes filamenteuses.
Dans les milieux liquides défavorables (A C
B) Toxinogenèse, typage
Medium Difco, B 316 répondant à la composi-
tion suivante : pour 1.000 : extrait de viande
Afin de déterminer le type du Clostridium
3 g, extrait de levure 3 g, extrait de malt 3 g,
botulinum isolé et la toxicité de la toxine produite
peptone 20 g, glucose 5 g, gélose 1 g, acide
chez différentes espèces de laboratoire et chez
ascorbique 0,2 g, et le milieu à la cystéine cons-
les bovins, un lot de toxine a été préparé.
titué par : pour 1.000 : peptone trypsique 10 g,
Une culture en bouillon VF glucosé à
extrait de viande 3 g, glucose 2 g, chlorure de
10 p. 1.000 a été centrifugée (3.000 tours/mn
sodium 2 g, chlorhydrate de cystéine 0,5 g),
pendant 20 minutes) après 6 jours de mise à
le germe est plus gracile avec des formes incur-
l’étuve à 35 OC, puis filtrée sur filtre Seitz EKS 1.
vées et filamenteuses beaucoup plus abondantes
La stérilité du filtrat a été contrôlée comme pré-
(photo no 8) ; repiqué ensuite en bouillon VF
cédemment.
glucosé à 2 p, 1.000, il reprend sa morphologie
Les filtrats de culture du germe dans le milieu
habituelle.
A C Difco, B 316, et dans le bouillon cystéiné
II retient difficilement la coloration de Gram.
se sont révélés totalement atoxiques pour la
Bien que cilié, il semble immobile.
souris (0,20 ml par voie intrapéritonéale).
Les spores sont du type déformant et subter-
Le titre du lot de toxine ainsi obtenu en bouil-
mina1 (photo no 9). Elles se manifestent avant la
lon VF glucosé a été préalablement déterminé
24e heure de culture dans un milieu de culture
chez la souris (nombre de DMM/souris par ml,
convenable. La sporulation est presque totale
cf. chapitre : pouvoir toxique pour différentes
au bout de 6 jours dans le bouillon Cooked
espèces animales).
Photo 7. - Culture de CI. bofulinum C en bouillon VF
Photo 8. - Culture de Cl. bofulinum C en milieu AC
glucoséau bout de 24 I-I
Difco B 316
500
C) Cultures
Les carc ictères culturaux observés de la souche
isolée ont été les suivants :
Gélose profonde ‘(glucosée à 2 p. 1, ,000) :
colonies
lenticulaires devenant irréql ulières,
production de gaz. Ce dernier caractère est
en désaccord avec les données classiques (16).
Gélose profonde au sang : colonies lenticu-
laires devenant irrégulières, non hémolytiques.
Gélose profonde coeur-cerveauglucosée,
Difco,
B 418 : colonies lenticulaires devenant irrégu-
lières. Légère production de gaz.
Bouillon ordinaire : trouble homogène puis
apparition de flocons.
Bouillon VF glucosé à 2 p. 1.000 : culture
dense floconneuse qui sédimente. Production
de gaz. Odeur putride.
Bouillon cystéiné : léger flocon dans le fond
du tube, la masse du milieu demeurant limpide.
Photo 9. - Formes sporulées et spores de CI. botulinum C
en bouillon VF glucosé au bout de 4 jours de culture
Milieu de Rosenow : bonne culture qui sédi-
mente, non-production de gaz, pas de décolo-
Le typage a été effectué à l’aide des 5 antisé-
ration.
rums A, B, C, D et E délivrés par l’Institut Pasteur
Gélatine de Kohn : Ilquéfiée. Pour le type Cp,
de Paris.
DOLMAN et MURAKAMI signalent au contraire
5 lots de 5 souris ont reçu par voie intrapéri-
que la gélatine n’est pas attaquée.
tonCale 0,20 ml du mélange toxine-antitoxine
Lait : digéré.
de chacun des types préalablement porté45:minu-
Blanc d’oeuf en bouillon VF : non attaqué.
tes à 370C. Pour chaque type, I unité antitoxique
Cerveau en bouillon VF : non attaqué.
*
(U.A.) était mise en présence de 100 DMMkouris,
Glucides : Nous avons étudié l’action de la
souche isolée sur les glucides selon la méthode
Résultats.
préconisée par H. BEERENS du service des
Seules les souris ayant reçu le mélange toxine-
anaérobies de l’Institut Pasteur de Lille.
antitoxine C ont survécu. La totalité des souris
Le milieu de base utilisé répond à la compo-
appartenant aux 4 autres lots a succombé.
sition suivante :
Les souris inoculées avec le mélange toxine-
Peptone tryptique
antitoxine D sont mortes les dernières ; ce fait
10
9
Chlorure de sodium
s’explique par la communauté antigénique
5
9
Extrait de viande
partielle, bien connue, des types C et D.
3 9
Extrait de levure
II est désormais possible d’affirmer que le
5
9
Chlorhydrate de cystéine 0,40 g
type C de Clostridium botulinum est responsable
Agar en poudre
CA60 g
des cas de botulisme observés dans le Ferlo.
Eau du robinet
1.000 ml
Toutefois, le type D peut très bien être isolé au
cours de recherches ultérieures ; l’association
A ce milieu de base est ajouté 1 p. 100 d’hydrate
des types C et D, constatée en Afrique du Sud,
de carbone sous forme de solution stérilisée
constitue une hypothèse qui justifie la poursuite
par filtration.
des isolements (*).
Après régénération, les différents sucres sont
ensemencés à l’aide d’une culture de 24 heures
(*) Cette souche a été identifiée comme appartenant
en milieu de Rosenow. La quantité d’inoculum est
1
au type Cg, par le Professeur R. PREVOT, du service des
importante, elle se situe entre 0,5 et 1 ml. Au
anaérobies de l’Institut Pasteur de Paris, que nous remer-
cions très vivement de cet examen.
bout de 48 heures, I’acidification est révélée
r
501
par adjonction dans chacun des tubes de quel-
normaux en particulier ont un pouvoir neutra-
ques gouttes de l’indicateur universel de pH
lisant assez marqué. L’action de I’ovalbumine
Prolabo.
est très nette, celle de la gélatine et du sérum
Résultats : Dans ces conditions, le glucose,
chauffé est nulle.
l’amidon, le glycérol, le lactose, le maltose,
JUDE, GIRARD et CARRAT (27) ont étudié
le mannitol, le saccharose et la salicine ne sont
l’action destructrice sur la toxine D du perman-
pas fermentés.
ganate de potassium, de I’hypochlorite de soude,
Ces observations recoupent les données de
d’un dérivé organique de l’iode (Triglycine
DOLMAN et MURAKAMI. Pour ces auteurs,
hydroperiodide) et d’un dérivé d’ammonium
Clostridium botulinum Cp ne fermente aucun des
quaternaire (chlorure de duodécyl-amidomé-
sucres suivants : Maltose, saccharose, galactose,
thylène-diméthyl-benzyl-ammonium). Nous nous
sorbitol, glycérol, dextrine, salicine, inositol,
proposons de rechercher prochainement l’effet
adonitol.
de certaines substances antiseptiques sur la
Le glucose et le fructose peuvent parfois être
toxine C produite par la souche isolée au Séné-
acidifiés avec une très légère production de
gal.
gaz par certaines souches.
Un premier lot expérimental d’anatoxine a
Le type C, fermente au contraire certains
été produit par action du formol à 8 p. 1.000 à
sucres : le glucose, le fructose, le maltose, le
400C sur un filtrat de culture de 6 jours en
glycérol, la dextrine, I’inositol et le galactose.
bouillon VF. Le temps nécessaire à l’inactivation
Ne sont pas attaqués par ce type le sorbitol, le
a été de 20 jours.
saccharose, la salicine et I’adonitol.
On peut remarquer que la souche de Clostri-
B) Pouvoir toxique pour différentes espèces
dium bofulinum Cp isolée offre la même action
animales
sur les sucres que Clostridium histolyficum. Tou-
tefois le test à la gélatine décrit par H. BEERENS
La toxicité de la souche isolée a été étudiée
et J. GUILLAUME et le Colonel PONTE permet
pour plusieurs toxines de culture obtenues de
de différencier les deux germes. Le test consiste
façons diverses. Les résultats sont rapportés
à ensemencer avec le germe étudié un tube de
dans l’ordre de déroulement de I’expérimenta-
milieu de Rosenow régénéré auquel ont été
tion.
ajoutés 3 ml de gélatine. Seul Clostridium hisfo-
10 Lot de toxine no / : constitué par un filtrat
lyficum produit une importante quantité d’am-
de culture de 6 jours, en bouillon VF glucosé à
moniaque, par désamination, au cours de son
10 p. 1.000, en ballon de 250 ml.
développement.
Toxicité pour lasouris : La DMM/souris se situe
au voisinage de 0,000 1 ml, soit 10.000DMM/ml
D) Physiologie
pour des souris de 18-20 g inoculées par voie
Pouvoir réducteur faible, ne réduit ni le
intrapéritonéale.
rouge neutre, ni la safranine.
LAMANNA, JENSEN et BROSS (31) ont
montré que le titre d’une solution de toxine
botulique C ne varie pas en fonction du poids
E) Biochimie
des souris inoculées. D’où il ressort que pour
Nitrates et sulfites non réduits.
cette espèce, il est erroné d’exprimer la toxicité
en ml de toxine par kg de poids vif.
Toxicité pour le cobaye (tableau 1). La DMM/
CARACTÈRES DE LA TOXINE
cobaye est voisine de 20 DMM/souris, soit
0,003 ml de toxine par kg de poids vif. Les
A) Résistance
cobayes utilisés ont été inoculés par voie intra-
péritonéale.
La toxine C est détruite par un chauffage de
Toxicité pour le lapin (tableau Il). La DMM/
10 à 15 minutes à IOOOC. Diverses protéines
lapin équivaut à environ 40 DMM/souris, ce qui
atténuent ou inactivent la toxine botulique C (43).
correspond dans les essais effectués à 0,0026 ml
Les antitoxines non spécifiques et les sérums
de toxine par kg de poids vif. Les différentes
502
c
.
Résultats
dilutions de toxine ont été injectées par voie
Toxicité pour la souris : la DMM/souris est
intrapéritonéale.
de 0,OOOOl ml, soit 100.000 DMM/souris par ml,
Toxicité pour le zébu (tableau III). La DMM/
pour des souris inoculées dans les mêmes
zébu est voisine de 1.500 DMM/souris, soit
conditions que précédemment.
environ 0,001 ml de toxine par kg de poids vif,
Toxicité pour le cobaye : 0,0003 ml/kg par
inoculée par voie sous-cutanée. En dehors de
voie intrapéritonéale.
l’abattement, le ptyalisme est le premier symp-
Toxicité pour le lapin : 0,0002 ml/kg par voie
tôme qui apparaît lors de l’inoculation d’une
intrapéritonéale.
dose Iéthale de toxine par voie sous-cutanée
Toxicité pour le zébu : 0,OOOl ml/kg par voie
chez cette espèce animale (15). La plus grande
sous-cutanée.
sensibilité des bovins à la toxine botulique C
30 Lot de toxine no 3 : constitué par un filtrat
est un fait bien connu (62).
de culture de 6 jours en bouillon VF glucosé à
20 Lot de toxine rP 2 : constitué par un filtrat
10 p. 1.000, auquel était ajouté du chlorhydrate
de culture de 6 jours en bouillon VF glucosé à
de cystéine au taux de 0,5 g p. 1.000. La culture
10 p. 1.000, en erlenmeyer de 2 1.
était effectuée en erlenmeyer de 100 ml.
.a
503
REVUE D’ÉLEVAGE
5
TAE@AU A"I1
Titrage de la toxiné chez le lapin (lot de toxine no 1)
746
2,@3Q
0,OJ
0,0144
300
mort en 40 h.
740
1,360
0.02
0,0147
200
mort en 40 h.
792
1,520
0,015
O,WB
150
mort en 4 jours
791
1 ,mo
0,010
0,0053
100
mort en 4 jours
790
1,890
0,005
O,CO26
50
mort en 7 jours
763
1,320
0.004
0,003o
40
mort en 5 jours
782
1,475
0,003
0,002o
30
a sui-vécu
781
1,940
0,002
0,0010
20
a survécu
785
2,500
0,001
O,OQO4
10
a survécu
TABLEAU NO111
Titrege de la
toxine chez le zébu (lot de toxine nO1)
Quantité toxine
Nombre
Zébu
Poids
Toxine pure par kg de poids
DW
Résultats
NO
(kg)
(ml)
Wkg)
souris
759
131
2
0,0152
2o.cOo
mort en 2 <jours +
751
113
195
0,0132
15.000
mort en 3 jours +
752
141
18
0,007o
10.000
mort en 3 jours +
753
143
095
0,0034
5.000
mort en 6 jours
749
145
0,4
,
O,CO27
4.000
mort en 7 jours
799
139
0,3
o,cO21
3.000
ptyelisme 5 jours après
mort en 21 jours
754
118
02
0,0016
2.000
mort au bout d'un mois
755
141
0,15
0,0010
1.5uo
mort au bout de 28 jours
756
126
0,lO
0,0007
1 .oco
n'a presenté aucun sympt&!le
.
Toxicité pour la souris : La DMM/souris se
Le milieu utilisé est du bouillon VF cystéiné
situe au voisinage de 0,000006 ml, soit environ
(0,5 g p. 1.000) auquel est adjoint, après auto-
150.000 DMM/souris par ml, par voie intra-
clavage, 10 p. 1.000 de glucose stérilisé par
péritonéale.
filtration. Le montage du dispositif de culture
Toxicité pour le cobaye : voisine de 0,0001
est réalisé dans un flacon de 5 litres (figure 1).
ml/kg, par voie intrapéritonéale.
Le tube de cellophane appartient à la marque
Visking, SS de précision, no 100, largeur à plat
Toxicité pour le lapin : voisine de 0,00009
130,7 mm (Viscosa) (*).
ml/kg, par voie intrapéritonéale.
L’autoclavage (30 mn à 12OOC) porte sur
40 Lot de toxine no 4 : Afin de réaliser la pré-
l’appareil rempli de milieu avec le sac de cel-
paration prochaine d’une anatoxine destinée à
lophane contenant du sérum physiologique
vacciner les animaux du Ferlo, nous nous som-
jusqu’au 1/3 de sa hauteur.
mes efforcés d’obtenir une toxine de très haut
La récolte de la toxine s’effectue 8 jours après
titre en appliquant la technique des cultures en
l’ensemencement de l’intérieur du sac.
sac de cellophane mise au point par STERNE
et WENTZEL (58) et reprise par différents
(*) Etablissements SOPHYC, 4 rue du Dr Dumont,
auteurs (52, 65, 66).
Levallois, Seine.
S o l u t i o n glucosée s t é r i l e
(filwationIP
Manchon de
verre
Inoculum.sérum
physiologique
itiilieu:bouillon VF
cys:éiné.-
Culture
F i g u r e I.- Culture de Clostridium botulinum type C
en sac de cellophane.
505
Résultat. .’
Au Sénégal, le botulisme humain a récemment
fait l’objet d’une publication. REY et Coll. (49)
’
Dans ces conditions de culture du germe par
rapportent qu’en 1964 six cas cliniques, dont
dialyse, la toxine obtenue titre 25 x 106 DMM/
trois mortels, ont été observés chez des Serers
souris par ml.
contaminés dans leurs villages d’origine, en *
milieu coutumier rural. L’épidémiologie de
CLOSTRIDIUM BOTULINUM T Y P E C
l’affection ne fut pas précisée et il semble à
ET BOTULISME HUMAIN
première vue difficile d’effectuer un rappro-
chement avec le botulisme bovin du Ferlo.
Nous tenons à aborder brièvement cette
question, car il est d’usage courant dans le
FerIo que les éleveurs abattent les animaux
CONCLUSION
atteints de la « maladie des forages » avant qu’ils
ne succombent et que la viande soit consommée.
Les coutumes alimentaires font que la viande
Clostridium botulinum type C a été isolé du
de boeuf soit le plus souvent bouillie ; celle du
foie d’un bovin sacrifié à la période agonique
mouton est parfois grillée. Dans ces conditions,
alors qu’il présentait tous les symptômes de
la toxine relativement thermolabile est détruite.
l’intoxication botulique aiguë telle qu’on peut
Néanmoins,
nous pensons
utile d’attirer
la rencontrer dans le Ferlo chez les animaux en
l’attention sur ce problème en rappelant que le
état d’aphosphorose. Les différents lots de
botulisme humain de type C a déjà fait l’objet
toxine préparés à partir de la souche isolée
d’au moins trois descriptions. En 1953, un cas a
par les méthodes de culture classiques ont pré-
été rapporté par MEYER et Coll. (33), la recher-
senté une toxicité allant de 10.000 à 150.000
che de l’aliment causal fut confuse et demeura
DMM/souris par ml. La culture du germe par
sans résultat.
di,alyse en sac de cellophane a fourni une
Le second exemple date de 1955 et nous le
toxine titrant 2,5 x 106DMM/souris par ml.
devons à PREVOT (43) et Coll., deux personnes
présentèrent un botulisme typique à la suite de
.
l’ingestion d’un pâté de campagne et Clostridium
REMERCIEMENTS
botulinum type C fut isolé de cette charcuterie.
Un autre foyer humain de type C a été signalé
Nous tenons à remercier nos confrères CAL-
’
par FLEMING en Rhodésie ; également un
VET (H.), REGNOULT (M.) et GRETILLAT (S.)
pâté de préparation familiale était à l’origine de
pour le concours apporté dans la récolte des
l’intoxication (*).
prélèvements sur le terrain et dans l’exécution
-
-
des photographies que nous présentons.
(*) H. BEERENS nous a rapporté qu’au Congrès de
bactériologie, tenu à Moscou en 1966, Mme MATTWEEV
avait signalé deux nouveaux cas d’épidémie de botulisme
à type C chez l’homme en U. R. S. S.
Dans le premier cas, la consommation d’un poisson
Institut d’Elevoge et de Médecine vétérinaire
était à l’origine de l’infection. La souche fut isolée de
des Pays tropicaux. Maisons-Alfort
l’intestin d’une personne ayant succombé à la maladie.
Dans le second cas, une conserve familiale de concom-
Laboratoire national de /‘Elevage
bres fut rendue responsable du botulisme de type C
observé.
et de Recherches vétérinaires. Dakar-Hann
S UMMARY
The Botulism of Ruminants and Horses in Senegal
Characteristics of the Strain of Clostridium botulinum isolated and of its toxin
Clostridium botulinum type C has been isolated from the liver of a cattle
which had been slaughtered at its last gasp when showing all the symptoms of
an acute botulism intoxication such as it cari be seen in the Ferlo in animals
506
suffering from a lack of phosphorus. The different batches of toxin prepared
L
from the strain isolated by classical methods of culture, showed a toxicity
ranging from 10.000 to 150.000 LD/mouse per ml. The culture of the germ
by dialysis through cellophan membrane gave a toxin, the titer of which was
2.5 x 106 LD/mouse per ml.
RESUMEN
El botulisme de 10s rumiantes y de 10s caballos en Senegal
Caracteres de la cepa aislada de Clostridium bofulinum y de su toxina
Se ais16 Closfridium botulinum tipo C del higado de un bovino matado durante
su agonia cuando tenia todas las sintomas de la intoxication aguda causada
por el botulismo tal como se puede encontrarla en el Ferlo en 10s animales
atacados por una carencia en fbsforo. Los varios lotes de toxina preparados
a partir de la cepa aislada mediante 10s métodos clasicos de cultiva mostraron
una toxicidad Ilegando de 10.000 a 150.000 DMM/raton por ml. El cultiva del
germen por diolisis en saco de celofan produjo una toxina cuyo titulo era
2,5 x 106 DMM/raton por ml.
BIBLIOGRAPHIE
1. ANDERSEN (A. A.). - Une méthode rapide
6. CALVET (H.) et PICART (P.). - Etude sur
de numération des spores de « Closfridium
la maladie des forages. Lob. nat. Rech. vét.
bofulinum » sur boîte de Pétri. (A rapid
Dakar, Roj~. fonction., 1964.
plate method of counting spores of Clos-
7. CALVET (H.) et PICART (P.). - Aphos-
Iridium bofulinum). J. Bo~t., 1951 , 62,425-432.
phorose et botulisme au Sénégal. 4e Journées
2. BEER (J.). - U ne nouvelle substance chi-
médicales Dakar, 1965, à paraître.
mique inhibant le développement des bac-
8 . C A L V E T ( H . ) , PICART (P.), D O U T R E
téries, le PNPG/I. (Ein neuer, das Schwarmen
(M.) et CHAMBRON (J.). - Aphosphorose
von Bakterien hemmender chemischer Stoff,
et botulisme au Sénégal. Rev. Elev. Méd. vét.
PNPG/I). Zbl. Bokt., 1958,171,195-201.
Pays trop.,1965, 3, 249-282.
3. BEERENS (H.). - Amélioration des tech-
9. COBURN (N.). - Considérations sur les
niques d’étude et d’identification des bac-
différentes fractions de la toxine botulique
téries anaérobies. Ann. Inst. Pasteur Lille,
type C. (Concerning the nature of type
1953-1954, 6, 36-48.
C Botulinus toxin fractions). Sci., 1942, 95,
4. BEERENS (H.) et CASTEL (M. M.). - Pro-
389.
cédé simplifié de culture en surface des
10. COLLET (P.), BON (M.), RUBY et COUR-
bactéries anaérobies. Comparaison avec
RIER. - Plusieurs cas de botulisme sur les
la technique utilisant la culture en profon-
grandes espèces animales. Bull. Soc. Sci.
deur. Ann. Inst. Pasteur Lille, 1958-1959, 10,
vét. Lyon, 1951, 53, 139-146.
183-192.
11. COLIN (F.) et BONIN (M.),- Un cas de
5. BENNETTS (H.W.) et HALL (H. T. B.). -
botulisme bovin. Bull. Soc. Sci. vét. Lyon,
Le botulisme ovin et bovin en Australie
1958, 60, 201-204.
occidentale : sa cause et sa prévention par
12. DADOT (F.). - Botulisme du canard. Rec.
l’immunisation. (Botulism of sheep and cat-
Méd. vét. Ecole Alfort, 1945, 121, 177-181.
tle in western Australia : its cause and its
13. DONETS (Y. 1.). -Etude des propriétés
prevention by immunization). Aust. vet. J.,
infectieuses de l’agent causal du botulisme
1938, 14 (3), 105-118.
de type C. (The studyof infectious properties
of the C type causative agent of botulism).
trated media). Con. J. of Res., 1947, 25,
J. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol., 1961 , 6,
25-31.
104-I 10.
.3. HENNING (M. W.). - Les maladies ani-
14. DUBOVSKY (B. J.) et MEYER (K. F.). -
males en Afrique du Sud. (Animal diseases
i
Une étude expérimentale des méthodes
in South Africa). 2nd edit., Central news
disponibles pour l’enrichissement, la mise
agency South Africa, 1949.
en évidence et l’isolement de B. bofulinus
4. HERNANZ (M.). - Le botulisme des équi-
dans des prélèvements de sols ou de pro-
dés en Espagne. (El botulismo de losequidos
duits en dérivant, dans des aliments suspects
e n Espana). Trob. ht. ho/. anim., 1942, 7,
et dans du matériel cliniqueou nécropsique.
326-344.
(An experimental study of the methods avai-
5. HERNANZ (M.). - Le botulisme chez les
lable for the enrichment, denronstration and
animaux domestiques. (El botulismo en
isolation of 6. bofulinus in specimens of soi1
10s animales domesticos). Trab. Inst. Bol.
and its products, in suspected food, in cli-
anim., 1942, 7, 511-539.
nical and, in necropsy material). J, infect.
6. JANSEN (B. C.). - L’importance des mi-
Dis., 1922, 31, 501-540.
crobes anaérobies comme agents de mala-
15. EMMELIN (N.). -Hypersensibilitédesglan-
dies animales en Afrique du Sud. (The
des salivaires à la toxine botulique. (Super-
importance of anaerobes in the causation
sensitivity of salivary gland caused by botu-
of animal diseases in the Republic of South
linum toxin). J, Physiol., 1961, 156, 121-127.
Africa). Bull. Off. inf. Epiz., 1963,59,1333-50.
7. JUDE (A.), GIRARD (P.) et CARRAT (P.). -
16. FAGONDE (A. P.), - Le botulisme animal.
Action destructrice in vivo de certains agents
(Botulismo animal). Bull. OF int. Epiz.,
1963, 59, 1361-77.
chimiques sur les toxines botulique et
tétanique. C-R. Soc. Bol., 1949, 143, 318-319.
17. FILMER (J. F.) et KULL (K. E.). - Le botu-
8. KATITCH (R.),
CVETKOVITCH (L.),
lisme chez les animaux domestiques de
DJOUKITCH (B.), VOUKITCHEVITCH (Z.)
l’Australie occidentale. (Botulism in domes-
et TOMANOVITCH (B.). - Possibilité d’in-
-
tic animals in Western Australia). Aust.
fection par Cl. bofulinum C beta. Lésions
vet.J., 1937, 13, 170-172.
provoquées par Ascoris suum. Rec. Méd.
18. GALLUP (D. M.) et GERHARDT (P.), -
vét., 1965, 141, 433-439.
-
Cultures concentrées de bactéries obtenues
9. KATITCH (R. V.). - Les maladies des
en tubes de dialyse et dans des fermentateurs.
animaux domestiques causées par les micro-
(Concentrated culture of bacteria in dialysis
bes anaérobies. Vigot, 1965.
flask and fermentor systems). Bacteriol. Proc.,
3. McKEE (M. T.), BELL (J. F.) et HOYER
1962, 52.
(B. H.). - Culture de Clostridium botuli-
19. GRAHAM (R.) et SCHARZE (H.). - Le
num type C à pH contrôlé. (Culture of
botulisme des bovins. (Botulism in cattle). 1.
Clostridium bofulinum type C with control-
ht., 1921, 4, 1-21.
led pH). j. Bact., 1958, 75, 135-142.
20. GUILLAUMIE (M.) et KREGUER (A.). -
1. LAMANNA (C.), JENSEN (W. 1.) et BROSS
Contribution à l’étude des hémolysines
(1. D. J.). - Rôle du poids dans la réponse
bacthriennes. Propriétés des toxines botu-
de la souris aux toxines botuliques. (Body
liniques des types C et D. C-R. Soc. Biol.,
weight as a factor in the response of mice
1951, 145, 179-182.
to botulinal toxins). Amer J. Hyg., 1955,
21. HELLER (H. H.). - Principes concernant
62, 2?-28.
l’isolement des germes anaérobies. (Princi-
2. LEWIS (K. N.) et HILL (E. V.). - Milieu
ples concerning the isolation of anaerobes).
pratique et mesures de contrôle pour la
J. Bac/., 1921, 6, 445-470.
production de cultures de haute toxicité de
22. HELSON (V. A.), STEVENSON (J.W.) et
Clostridium bofulinum type A. (Practical
REED (G. B.). - Quantité de toxine botu-
media and control measures for producing
lique obtenue dans des milieux concen-
highly toxic cultures of Closfridium botu-
trés. (Yield of botulinum toxin in concen-
linum type A). j. Bact., 1947, 53, 213-230.
508
Ir
f
33. MEYER (K. F.), EDDIE (BS), YORK (G. K.),
dû à Cl. bofulinum C. Ann. Inst. Pasteur, 1955,’
COLLIER (C. P.) et TOWNSEND (C. T.). -
88, 513-515.
Closfridium bofulinom type C et le botulisme
t5. PREVOT (A. R.), TERRASSE (J.), DAU-
I
humain. (Closfridium bofolinum type C
MAIL (J.), CAVAROC (M.), RIOL (J.) et
and human botulism). VIe Congrès int. Micr.,
SILLIOC (R.). - Existence en France du
1353, vol. 2, sez VIII-XVI, 276.
botulisme humain de type C. Bull. Acad.
34. MOINE (G, G.). - Du danger des cada-
naf. Méd. Paris, 1955, 139, 355-358.
vres en putréfaction au sein des denrées
46. PREVOT (A. R.). -Manuel de classifica-
alimentaires. Rev. Path. corne., 1950, 50,411-
tion et de détermination des bactéries
413.
anaérobies. Monographie Inst. Pasteur, Mas-
35. MULLER (J.). - Botulisme du type C chez
son, 1957.
l’homme et les animaux. Incidence chez
les bovins et les équidés. (Type C botulism
47. PREVOT (A. R.). - A propos de la toxino-
in man and animais. Incidence in cattle and
typie botulique. Bull. Ass. Dipl. Microbiol.,
horses). Medlemsbl. danske Dryloegeforen,
Nancy, 1959, 74, 2-7.
1961, 44, 547-57.
48. REED (G. B.) et ORR (J. H.). - Identifica-
36. MULLER (J.). - Botulisme équin et bovin
tion rapide des germes anaérobies des
au Danemark. (Equine and bovine botulism
gangrènes gazeuses (Rapid identification
in Denmark). Bull. Off. int. Epi~., 1963, 59,
of gas gangrene anearobes). War Med.,
1379-90.
1941, 1, 493-510.
37. PIGOURY (L.), MICHEL (C.) et CHABAS-
49. REY (M.), DIOP MAR (l.), BAYLET (R.),
SOL (C.). - Rôle de l’eau dans I’étiologie
ARMENGAUD (M.), MICHEL (R.), BON-
du botulisme animal. Méthode de recherche
NARDOT (R.) et SOW (M.). - Du botu-
de la toxine botulique C dans l’eau. Rev.
lisme en pays Serer, à propos de six cas
Cps Santé Armées, 1962, 3, 649.
hospitalisés. Bull. Soc. Med. Afr. noire, 1964,
38. POLSON (A,) et STERNE (M.). - Produc-
9, 34-44.
2
tion de toxines botuliques de haut titre et
50. SANCHEZ BOTIJA (C.). - Epizootologie
d’anatoxines. (Production of potent botuli-
du botulisme des équidés en Espagne. Enquê-
num toxins and formol toxoids). Nature,
te sur la contamination des aliments (Epizoo-
5
1946,158, 238-239.
telogia del botulismo de 10s equidos en
39. PREVOT (A. R.). -Techniques pour le
Espana. Investigaciones sobre la contami-
diagnostic des bactéries anaérobies. Coll.
nation de 10s alimentos). Trab. Inst. Biol.
« Techniques de base», 119 p., Edit. de la
anim., 1942, 7, 223-288.
Tourelle, Saint-Mandé.
40. PREVOT (A. R.), HUET (M.) et TARDIEUX
51. SARTORY (R.), MEYER (J.), MALGRAS
(J,) et SUPPIGER (H.), - Recherche et
(P,). - Etude de vingt-cinq foyers récents
dosage des principaux facteurs de crois-
de botulisme animal. Bull. Acad. vét. France,
sance dans le milieu VF pour bactéries
1950, 23, 481-487.
anaérobies. Ann. Inst. Pasteur, 1955, 89,
41. PREVOT (A. R.), SILLIOC (R.) et QUEN-
TIN (M.).
358-368.
- Existence en France du botu-
lisme bovin de type C. Bull. Acad. vét. France,
52. SCHNEIDER (M. D.), GRECZ (N.) et ANEL-
1953, 26, 73-78.
LIS (A.). - Sporulatjon de Closfridium bofu-
42. PREVOT (A. R.), SILLIOC (R.) et GAY
linum type A, B et E, de Closfridium per-
(H.). - Etude d’un foyer de botulisme
fringens et de l’anaérobie putréfiant 3679
équin de type C. Rec. Méd. vét. Ecole Alfort,
en sacs de dialyse (Sporulation of Closfri-
1954, 130, 353-355.
dium bofulinum types A, B et E, Closfridium
43. PREVOT (A, R.). - Biologie des maladies
perfringens and putrefactive anerobes 3679
dues aux anaérobies. 572 p., Edit. médicales
in dialysis sacs). J. Bact., 1963, 85, 126-133.
Flammarion, Paris, 1955.
.
53. SCOTT MILLAR (J. W.). - Le botulisme
44. PREVOT (A. R.), SILLIOC (R.) et PROUTE
en Afrique du Sud (Botulism in South Africa).
(J.). - Etude d’un foyer de botulisme bovin
South Afr. Med.J.,1964, 38, 310-315.
l
5 0 9
54. SEDDON (H. R.). - Les maladies des
production by Closfridium). Con. 1. of Res.,
animaux domestiques en Australie (Disease:
1947, 25, 9-13.
.
of domestic animals in Australia). Common-
61. STEVENSON (J-W.), HELSON (V. A.) et
weolth of Australia, Depart. of Health, 1953
REED (G. B.). - Préparation des toxines
9
55. SEERGEEVA (T. 1.). - Recherche des taxi.
des Closfridium parobofulinum (Prepara-
nes botuliques et des germes de type B et C
tion of Closfridium parobofulinum
toxins).
chez les malades et dans les cadavre:
CanJ. ofRes.,1947, 25, 14-24.
(Detection of botulism toxins and microbes
62. THEILER (H.), VILJOEN (P. R.), GREEN
of the B and C types in the organism oi :
(H. H.), DU TOIT (P. J.), MEIER (H.) et
sick man, animals and in corpses). J,
ROBINSON (E. M.). - Le Lamsiekte (para-
Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol., 1963, 7,
botulisme) des bovins en Afrique du Sud
77-82.
(Lamsiekte (parabotulism) in cattle in South
Africa). 12th Ann. Rep. Director vet. Res. South
56. SHOOP (G.). - Mise en évidence de Clos-
Afr., 1927, 12, 821-1961.
fridium bofulinum type C chez les bovins
63. VERGE (1.) et GORET (P.). - Sur la patho-
(Demonstration of Closfridium bofulinum
génie du botulisme. Bull. Soc. Sci. vét. Lyon,
type C in cattle). Dtsch. Tierorztl. Wschr.,
1947, 49, 92-95.
1961, 68, 71-72.
64. VERGE (J.) et POGGIOLI (Ch.). - Bull.
57. SIMMONS (G. C.) et TAMMEMAGI (L.). -
Acod. vét. France, 1951. 24, 509-517.
Closfridium bofulinum type D, agent res-
BRUYERE (A.) et DAVID (A.). - Paralysie
ponsable du botulisme bovin (Closfridium
labio-glosso-pharyngée et botulisme chez
bofulinum type D as a cause of bovine
le cheval. Rev. Méd. vét,. 1951, 102,155-160.
botulism in Queensland). Austral. vét. J.,
65. VINET (G.) et FREDETTE (V.). - Appareil
1964, 40, 123-127.
pour la culture des bactéries en tubes de
58. STERNE (M.) et WENTZEL (L. M.). -
cellophane. (Apparatus for the culture of
Une nouvelle méthode de production impor-
bacteria in cellophane tubes). Science, 1951,
tante d’anatoxine botulique de titre élevé
114, 549-550.
des types C et D (A new method for the
56. VINET (G.) et RAYNAUD (M.). - Pro-
--
large-scale production of high-titre botu-
duction et purification de la toxine botulique
linum formol-toxoid types C and D). 1,
typeC.Rev.Can. Biol., 1963, 22 (l), 119-120.
C
Immunol., 1950, 65, 175-183.
t57. VIRAT (B.), VALLEE (A.) et KREGUER (A.).
- A propos du botulisme du mouton ;
59. STERNE (M.) et THOMSON (A.). - Isole-
première souche ovine isolée en France.
ment et identification de « Closfridia » dans
Bull. Acad. vét. France, 29, 425-426.
les maladies animales (The isolation and
58.WENTZEL ( L . M . ) e t S T E R N E (M.). -
identification of « Closfridia » from patholo-
Une membrane dialysante simple à double
gical conditions of animals). Bull. Off. int.
surface (A simple double-surface dialysing
Epiz., 1963, 59, 1487-98.
membrane). Science, 1949, 110, 259.
60. STEVENSON (J. W.), HÉLSON (V. A.) et
t;9,WENTZEL (L. M.), STERNE (M.) et POL-
REED (G. B.). - Un milieu à base de
SON (A.). - La haute toxicité de la toxine
digestat de caséine pour la production de
botulique type D purifiée (High toxicity of
toxine par les germes du groupe des Clos-
pure botulinum type D toxin). Nafure,
fridium (A casein digest medium for toxin
1950, 166, 739-740.
510