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/3
VALEUR DE L'IMI4UljITE CONFEREE PAR DEUX VACCIMS
, ‘-, i.
LYOPHILISES PREPARES A LPAIDE DES SOUCHES KH?J ET Tl
.:
. $&,
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b .;.z :
I ; ; v
A"y'
: :;r;:5:
par M.P.DOUTRE
A la suite des recommandations de la Conférence des Experts de la
péripneumonie bovine tenue à Khartoum en février 1967 et des possibilités
de mise au point de campagnes inter&tats de vaccination contre cette maladie,
le service de bactériologie du Laboratoire national de 1'Elevage et de Recher-
ches vétérinaires du Sénégal a mené au cours des ann&s 1967 et 1968 deux
expériences destinées à apprécier la valeur de l'immunité que conféraient
deux vaccins lyophilisés préparés à partir des souches KHsJ (86ème passage)
et Tl (kkème passage). Les bovins utilisés appartenaient a la race NDama,
race bovine africaine, particulièrement sensible à la péripneumonie. L'espace
t
disponible ne permettant pas de mener en même temps les deux tests, ces der-
niers se sont déroulés de la façon suivante :
I
xk
- l'expérience contact KR3J a eu lieu dès la fin de la saison des pluies 1967,
- celle effectuée avec des animaux vaccinés avec Tl, dès la fin de l'hivernage
1968.
Ces périodes ont éte choisies de façon à faciliter lvalimentation
en vert des bovins maintenus en stabulation étroite.
:
fw
z
,
- - -
_-. - .--
2
/ #VALEUR DE LvIMMUNITE CONFEREE PAR LA SOUCHE KH3J /
A - VACCIN UTILISE
Il résulte de la lyophilisation dvun mélange a volume égal dFune
culture de Mycoplasma mycoides souche KH3J et de mist dessicans (*).
La composition du milieu de culture résulte des travaux effectués au
Laboratoire de Fort-Lamy (milieu F 66, rapport présent6 à la 3ème Réunion des
Experts sur la péripneumonie bovine FAO/OIE/OAU, tenue & Khartoum en février
196'7) et de ceux des chercheurs australiens du CSIRO,
Quelques modifications ont @té apportees, elles portent sur la
suppression de l'acide palmitique nratiquemment insoluble même dans une so-
lution de soude 0,l M et sur la prgparation et la quantité deextrait frais
de levure ajouté.
- macération de coeur : on provoque la mac&ation pendant une heure de 500 g
de hachis de coeur de boeuf dégraiss6 dans un litre d'eau à. 5O*C, puis on
porte à ébullition. Filtration à chaud sur papier filtre. On ajoute par
litre : 10 g de tryptose (Difco), 2 g de glucose et 2,5 g de phosphate
disodique. On chauffe à 8O*C, filtration à chaud.
- addition de :
;
. glycérol .*.*.',,~*O......C*O*..*....,.
0,3 g/litre
D acide oféique.........,..o...........
15 mg
0 extrait frais de levure....OOOOO.Je.e. 100 ml
4
. s6rum de che-rhl d.écomplémenté,.,...... 100 ml
a pénicilline .P....,......O~..~O~~~~..~.
1.000.000 unités
Le pH est amen6 à 8,l avec une solution de soude 10 M. LPacide
oléique est &lnngd a 5 ml de soude 0,l M; le gel formé est dissous par
agitation magnetique.
(w) Actuellement, seul le lait écrém6 sec est utilisé comme support de lyo-
philisation dans la préparation des vaccins lyophilisés contre la péri-
pneumonie bovine.
3
- extrait de levure : l'extrait de levure préparé cxtemporanement présente
des qualités sup&ieures
aux produits correspondants que l'on trouve dans
le commerce0 La technique de préparation retenue est la suivante :
(I.E.M.V.T. ._a laboratoire de microbiologie)
0 mettre en suspension homogène 1 kg.de levure fra?che de boulan-
gerie dans un litre d'eau distillée en pr&.ence de 8 ml de
chloroforme
. laisser au bairwilarie 24 heures à 5O*C en agitant de temps en
temps, centrifuger et recueillir un premier surnageant que l'on
conserve au froid
. reprendre les culots dans un litre d'eau distillÉe et les soumettre
2 quatre cycles gel-dégel
. centrifuger à nouveau et recueillir le deuxieme surnageant
. mélanger la deux surnageants
. filtrer sur filtre Seitz EKS 1, conservation a -2O'C.
Pour la preparation du vaccin, on utilise une culture de 72 heures,
Au cours des dernières 24 heures, les ballons sont portés sur agitateur magné-
tique.
La répartition se fait sous un volume de 5 ml par flacon type péni-
cilline de 20 ml.
Au moment de l'emploi, le contenu de chaque flacon est reconstitué
avec 20 ml dgeau distillée stérile froide (20 doses vaccinales). Dans ces
conditions, le titrage des vaccins par la méthode des dilutions donne un
minimum de 109 unitcs viables par ml. Ce titre est égal ou superieur à celui
des meilleurs lots de vaccin-culture mesuré au moment de leur conditionnement.
B n* TEST D'IMMUNITE
a/- Principe de la méthode
Les animaux vaccinds ont étÉ 6prouv&s en utilisant la methode de
mise en contact etroit décrite par les auteurs australiens. Cette technique
consiste à mettre en présence,dans une enceinte close de volume restreint,
un lot d'animaux vaccinés, un lot d'animaux temoins non vaccinés et un lot
de bovins infectés expérimentalement par voie endobronchique. Pour que l'ex-
p&ience soit concluante, dans l'absolu, il convient qu'en fin dPexp&ience
les bovins intubés et les temoins non vaccin& succombent de péripneumonie
alors que les animaux vaccin5s résistent,
.___
.-.--
4
b/- Bâtiment
En tenant compte des dimensions relatives du bâtiment construit
par les chercheurs australiens du CSIRO, une &able a été spécialement ané-
nagée à Sangalkam pour réaliser les épreuves dlimmunité par la méthode de
contact.
Dimensions : longueur..... 10 m
largeur...... 5 m
hauteur...... 3 m,
Pour assurer l'alimentation des animaux, deux mangeoires de 5 m de
long sont placées de chaque c$t6. Le foin stock6 sur le faux-plafond en planches
est directement amené dans les mangeoires grâce à des trappes aménagées &
cet effet.
L'aération est assurée par 7 ouvertures de 1 m x OP50 III situées
à 2,35 m du sol.
A l"extérieur, un parc de 120 m2 pourvu d"un abreuvoir permet de
recevoir les animaux chaque matin pendant environ une demi-heure. Une fois
par semaine, lors des prises de sang, ce temps est prolongé de deux à trois
heures.
c/- Protocole expérimental
Tous les bovins utilisés appartiennent & la race NDama.
1 =' Vaccination
C.._I~_=._I-PL.DL.,I
Au jour Jo, 11 bovins sont vaccin& par voie sous-~cutsnée, ?i la
côte, avec 1 ml de vaccin KR3J lyophilis6 reconstitué avec de l'eau distillée
stérile rafraîchie (No des animaux : 0001 c-4 0002 s= 0003 - 0883 -- 1505 ra 0885 -
1519 .= 0871 - 0887 - 0900 == 0896).
Le titre du vaccin est compris entre 109 et lo10 unités viables
par ml (titrage par la mgthode des dilutions pasteuriennes).
Au j,ur JO f 14, 11 bovins sont inoculés par voie endobronchique
(No des animaux : Oo77 = 0872 1m 0889 Ly 0874 - 0875 - 0882 =- 0881 .= 0873 c=
0894 - 0892 - oSgg),
Inoculum : après anesthésie ,au chloral intraveineux, chaque animal
reçoit une injection intra-trach&le
administr6e à la sonde, suivant la tech-
nique classique, de 20 ml d'un m6lange à parties égales de :
. broyat de lésions pulmonaires p&ipneumoniques,
e lymphe p&ipneumonique,
. bouillon coeur sCrum (milieu F 66 modifié).
:
a* /. .
5
Les lC?sians puhonaires et la lymphe péripneumonique Sont r6COlt~eS
15 jours aupamxant sur un malade au dernier stade de la maladie, sacrifié
sur le terrain, sur notre demande (Rioro==du*%Rip),
et conservées jusqu'au
moment de l'emploi à -2O'C.
Un isolement deM.mycoides a partir des lésions pulmonaires et de
la lymphe est effectué au moment de la preparation de l'inoculum pour confir-
mer la qualité du matériel utilisé.
Au jour JO + 28, les animaux vaccinés et les animaux infectants
sont groupés dans l'gtable aménag6e à cet effet, en pr&çence de 11 bovins
témoins.(W' des témoins : 1536 - l-501 =* 898 .-: 1576 - 893 - 1542 -, 884 .‘= 1523 -
890
- 1530 cs 895).
d/- Evolution des animaux
Les observations s'arrêtent au jour Jo + 100.
1 s= Evolution des animaux infectants
"~'O--N-r-‘~--u-~~---~~-~.-~~~"~.r.rYOFiI~.O
La r6action à l'infection intractrachéale a été suivie sur les
plans thcrmiqw , clinique et sérologique (deviation du compl6ment),
Evolution thermique
Les tcmpgratures du @me au 36ème jour ont Gtf, reproduites dans
le tableau 1 :
Sur 11 animaux intubes :
- 7 ont présenté une élévation thermique significative (température supérieure
à 4OoC (no0899 -.= 0892 E7 0873 LLi 0082 -%= 0874 -=> 0889 == 0877)~
Parmi ces animaux, on peut distinguer 5 bovins ayant manifesté une réaction
précoce (6, 7, 8, 9ème jour) (no0899 cI 0892 i_j 0873 -’ 0882 - 0877) et deux
une réaction tardive (18ème jour).
Sur ces 7 bovins, 6 sont morts en cours d'expérience en offrant à 19autopsie
des lésions cx~act&istiqucs,
le 7ème (0877) a étt sacrifié en fin d*oxpé-
rience; des lésions péripneumoniques pulmonaires, Xycoplasma mycoides a
été isolé.
- 4 n'ont pas manifesté d'élévation de température caractéristique (flOO894 -
088; - 0875 -2 0872). Trois de ces bovins sont morts en cours d'expérience
(no0875 cq 0881. - O872), seuls les no0872 et 0881 présentent des 1Êsions
péripneumoniques.
Le bovin 0894 sacrifié en fin d'expérience n?offre
aucune lésion.
En conclusion, sur 11 bovins intubés, 9 ont contracté la péripneu-
monie et 2 animaux n?ont pas réagi à l'intubetion (no0875 - 0894)~ On peut
également supposer que cette opération ait %té mal ex&utée, ce qui est peu
probable.
1
,*
,
é
.I
,
J
Tableau 1 - Evolution de la température chez les animaux infectants
r
Nombre de jours
I
I
I
l
f
après début de
~*+18 Jo+19 Jo+20 Jo+21 Jo+22 JO+23 ~~~24 JO+25 Jo+26 Jo+27 ~~+28 Jo+29 Jo+32 Jo+35 JO+42
Jo+49 JO+50
l'expérience
/
j
I
f
1
Nombre de jours
après intubation
4
5
6
7
8
g
10
II
1.2
13
14
15
18
21
28
35
1 36
0899
3g,2
38,7 3g,6
39,2
39,8
40,2
40,l
39,7
40,2
40,3
40,2
40,2
w
28S6
+
lésions
i
I
I
I
I
I
I
0892
392 39,7
39,q 40,51 40,7j 40,9j 40,7
4%5j 40,1/ 40,71 40,11 + 1
lésions
I
f
f
f
0894
38,7 38,5 38,2/ 38,61 38~1 38,4[ 3896 38,3 38,5
38,3
38,5
38,6
38,2
I
i
1
l
0873
3895 39,2
39,6/ 40 1 40 1 3997j 4095
40,7
40
40,2
40,5
40,3
38,5
+
lésions
0881
3992 38,5
38,51 39,1) 3921 39941 3994
39,6
3933
39,3
x9,8
39,4
3896
39
+
lésions
0882
1 38,2l 3832 38,81 40,5j 39,91 W( 40,8 40,3 40,9 40,7 41,1 41~ 4~8 39 3991 39,31
0875
1 38,51 38,4
38,8
39,2
39,9
3937
3935
3998
+
absence l&iOn
0874
1
I
38.5 38,4
38,8
39,2
3999
39,7
3995
41
40~21 39,9/+ lésions
I
1
I
I
I
-7
38,8
38,6
39
38,7
38,3
39
40,6
40,5. 39
i+ le-
sion
37,7
37,8
37,2
37,7
37,9
38,7
3755
3894
3738
@377
37,7 38
39,2/ 39,2/ 38,71 40~1 40
40,6/ 40,21 40 1 40,5j 40 1 39,1/ 38,2\\ 38
f
f
f
38 1
f
f
I
i
I
I
La mort dvun animal est indiquée par le signe +
Remarque : Chez tous le5 animaux morts de péripneumonie, les l&ions
pulmonaires sont des plus typiques (hépatisation englobant parfois la totat-
lit6 d'un poumon avec sclérose intersticielle). Toutefois, jamais n'apparaît
liépanchement pleurétique important que l'on observe si souvent dans la mala<-
die naturelle.
Evolution sérologique
La déviation du complément a été effectuée par la méthode de
Kolmer avec fixation dîune nuit à 4°C.
Le résultat des différents titrages a été reproduit dans le ta-a
bleau 2. Seules les réactions ++s+ sont mentionnées,,
Sur 11 animaux intubes, 9 ont réagi sérologiquement. Les no0872
et 0894 sont négatifs, toutefois le 0872 succombe en présentant des lésions
de péripneumonie (possibilité d'une hypogammaglobulinémie). Le 0894, sacrifié
en fin d'expérience, est indemne de péripneumonie. Pour cet animal, il est
possible d9envisager soit quoi1 njaît pas réagi à lkînfectîon întra-trachéale,
soit que lTopération ait été mal effectuée (sonde introduite dans l'oesophage).
Pour le n'O875, mort avec absence de lésion pulmonaire, sans jamais avoir pré--
sent6 de poussée thermique, 1"erreur de manipulation est à écarter, car 14 jours
aprês l'intubation, cet animal fixe le complêment au 1/320.
Pour ce bovin, tout semble s'être pas& comme si l'intubation avait
été effectuée avec une culture en bouillon d'une souche virulente de M.mycoi-
des. Dans ce cas, on observe une montée régulière dsanticorps sans trace de
lésion pulmonaire à lvautopsie. La réaction sérologique semble seulement re-
fldter la phagocytose de substances étrangères introduites dans l'appareil
.
pulmonaire.
Evolution clinique
La presque totalit6 des animaux à sérologie positive présente de la
toux le matin au moment de l'abreuvement. Le phenomène est apparu chez les
premiers bovins, 10 .jours après l'intubatîon.
2 c- Evolution des témoins
L9P~OU~DI:.1....-.Y--NLYI~E.,..~-=~-
Evolution thermique et sérologiquc
Pour les bovins témoins, la courbe de température se superpose 5
l'élévation des taux des anticorps fixant le complément. Aussi, seule l'évo=
lutîon sérologique des animaux témoins figure-=t-elle dans le tableau 3.
. . / . .
c
--
--
s;
s:
z
e
-
-
E
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I
2 0 Ii P-i z-
-
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3
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r-l
0
6
r-l
0
r-l \\ G
0
;
/
8
a
9
Tableau 3 := Evolution sérologique des animaux témoins
(Dhiation du complément Kolmer)
Nombre de jours
I
après début
JO+42
Jo+59
Jo+71
Jo+75
Jo+82
J,+89
JO+95
expérience
Nombre de jours
après mise en
1 4
3 1
4 3
4 7
5 4
6 1
6 7
contact
1536
..x.
:i,
1120
1/80
L+B
1501
*a
L+B
0 8 9 8
cm
absénce
L.P.B. /
1576
-
I
.-
l/lO
1/160
1/320 1 1/320
1/640
L. +,*
0893
*=
~a&n;e!
1542
1/160
1/640
LL,kB
0 8 8 4
.-a
absence
L.P.B
1523
cm
1/320
1,'640
11640
1/640
1/640
+
L.P,B.
0890
l/lO
l/lO
1/160
+
L.P.B
1530
1/5
1/5
1/40
1/320
+
L.P.B
0895
+
absence
L.P.B
1 0
Sur 11 animaux temoins :
- 7 sont morts naturellement en offrant à 1"autopsie des lésions péripneu-
moniques d90G M.mycoides est isolé. Sur ces 7 bovins, un seul (1.501) n*a
pas présenté une morkée appréciable des anticorps fixant le complément
(mort.excessivement raplüe 33 jours après la mise en contact ou hypogamma-
globulinémie).
Les 6 autres traduisent sérologiquement l'infection entre
35 et 40 jours apri% l-CI mise en contact avec les bovins infectants.
- 4 sont morts naturellement, très rapidement, sans présenter la moindre
lésion nécropsique due & la péripneumonie. La disparition de ces animaux
est consécutive aux conditions particuli&ement
sév&es du stress qu'impose
le confinement, Ces accidents proviennent du fait qu'a 19achat les animaux
ne sont pas homogènes et que les sujets plus petits, plus faibles, ne
peuvent s*alimenter convenablement. Ecartés des mangeoires, ils se couchent
et succombent après avoir été piétinés.
Evolution sérologique après la vaccination
La vaccination avec KH J n'entrake aucune montée postavaccinale
des anticorps fixant le compléme t.
a
Evolution sérologique après la, mise en contact
Les résultats figurent dans le tableau 4,
.
(I
4
<
t
I
Tableau 4 cm Evolution sérologique des animaux vaccinés après la mise en contact
(Déviation du complément Kolmer)
I1Jombre de jours après
+Ïl
I
J,+?5, Jo+82
5,+89
Jo+95
début exphience
~~+28
JO+42
Jo+591 Jo.
I
-
Horn1 )re de jours après
xlise en contact
0
14
31
43
47
54
61
67
abs nce
0871
L . z .B
1519
--
r-2
1 abs-nce
L. .B 6
0885
,.s
1/40
lb0 abs g nce
L ..L . B
0883
abs nce
.-m
Ci>
E
L. .B
0887
ca
l/lC
115
abs nce
1/5
l/lO
l
'Ilo L l 8.B
0002
-4
1/20
LAE
_..
.
.
1 2
Sur 11 bovins vaccines en vue de réaliser l'expérience :
- 1 meurt le jour de la mise en contact (nO0871) sans présenter la moindre
atteinte de p&ipneumonie.
- 5 succombent naturellement dans des temps variables, 4 n'offrent aucune
lésion péripneumonique (1519, 0885, 0883, 0887); par contre, le no0002
présente, 34 jours après la mise en contact, un séquestre péripneumonique
d'où M.mycoides est isolg,
- 5 sont sacrifiés en fin d7expéricnce : sur ces 5 bovins, 4 révèlent 2
l'autopsie des poumons indemnes de p&ipneumonic (n*0900, 1505, 0003, 0896);
le sérum du bovin 0896 fixe le complément à un taux élevd (1/160), sans
qu'aucune lésion ne puisse être dZk&e, Par contre, le no0001 montre deux
séquestres p&ipneumoniqucs
d?oG M.mycoides est isolé par culture,
-
En conclusion, la vaccination avec le vaccin KH3J lyophilisg a donc
apparemment favori& la cr&tion de deux bovins porteurs chroniques sur
11 animaux vaccinés un mois avant la mise en contact avec les sujets infec-
tants.
CONCLUSIONS
L'expérience contact destin& à
.
apprécier la valeur de lvimtnunité
conférée par un vaccin lyophilise prepare & partir de la souche NH J un mois
après la vaccination montre :
3
l/,;, qupune immunite certaine s'est développée chez les sujets vaccinés,
7 t&moins morts de péripneumonie presentent des lésions volumineuses
des plus caractÉristiques,
Aucun vacciné nvoffre des lésions dqune telle
importance.
2/- que cette icmunitg est loin d'être totale, 2 bovins présentent & lgautop-
sie effectuée, soit après la mort naturelle, soit après abattage, des
séquestres de la grosseur d'une pomme d'où E3,mycoides est isolee par
culture. Au contact d'animaux infectants,
deux animaux porteurs chroni-
ques ont ainsi été c&s.
3/- que seules des vaccinations répétEes au moins tous les 5 mois, pendant
plusieurs années, sur la qu%si totalité du troupeau peuvent entraîner
une régression de la maladie.
/ VALEUR DE LvIE4MU81TE CONFEREE PAR LA SOUCHE Tl-/
A - VACCITJ UTILISE
Il résulte de la lyophilisstion d'un mélange à volume égal d'une
culture de Mycoplasma mycoides, souche Tl, et de mist dessicans. Le milieu
utilise pour la culture est celui décrit pré&demment (F 66 modifié),
Le vaccin reconstitug au moment dc l'emploi titre un peu plus
de 10g unités viables par dose vaccinale (1 ml),
B - TEST DqIMNUNITE
a/- Bâtiment
Afin de pouvoir mener l'expérimentation sur un nombre plus élevé
d'animaux, la superficie du bâtiment ainsi que le nombre des mangeoires ont
été doublés :
longueur,,.., X0 m
largeur...... 10 m
.
Hauteur....., 3 m.
bj- Protocole expérimental
Tous les bovins utilisés appartiennent comme précédemment à la
race IJDama, Achet& au S6négal Oriental, ils sont garantis par le vendeur
comae non-vaccinés.
Le but de l'expérience consiste à apprécier la valeur de lqimmw
nité que présentent des animaux vaccinés avec le vaccin Tl lyophilisé 3 mois,
7 mois et 12 mois après la vaccination, 50 bovins ont donc été vaccinés et
conservés à !a ferme de Sangalkam. Ils ont été répartis en trois lots utili-
sables respectivement 3, 7 et 12 mois après la vaccination. Seule la première
phase de l'expérience (valeur de l'immunité 3 mois après la vaccination)
fait l'objet de la description et des conclusions qui suivent :
1 == Vaccination
ca.?~_ icllLi. d._j-a.yL%
Les 15 bovins vaccines utilisés lors de l'expérience contact
groupent 7 animaux qui n'ont pas présenté de reaction locale postzvaccinale
au point d'inoculation (n"25> 24, 9, 4 2 , 83, 1 0 , 79) e t 8 bovins qui offri-
rent une réaction locale ne dépassant pas la taille de la main (n%l 13, 80,
go, 11, 82, 2, 18 B, 93).
L"évolution sérologique pas%-vaccinale de ces 15 animaux figure
dans le tableau 5 (déviation du complément Kolmer).
/
. . . .
14
Tableau 5 - Sérologie post-vaccinale des animaux vaccinés
avec Tl avant la mise en contact
(Déviation du complément Kolmer)
No des animaux
Vaccination J +13
Jo
0
JO+20
JO+28
JO+41
Réaction locale au
point d'inoculation
25
115
1/40
1/160
1/80
24
.?a
x/5
1/40
1/40
1/20
-3
9
w.
4 2
l/lO
l/lO
lJ20
lj10
83
Pa
CI
10
l/lO
1/10
-
'--
I
I
.
79
LX
u5
1/20
1/10
x/5
1 1 B
ca
1/5
1/10
l/lO
u5
+++ (taille d e la
main)
1
80
C%A
l/lO
1.180
3y160
1/320
+++
90
l/lO
1/40
1/160
1/160
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11
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l/lO
1/40
1/80
1/20
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82
l/lO
1/40
l/lO
l/lO
++
2
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1/5
1/5
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18 B
1110
1/2c
l/lO
+++
93
1/5
1110
1/5
-
++-t
. ./ . .
1 5
Sur 15 animaux vaccines, 13 ont montré une réaction sérologique
post-vaccinale dqintensité variable selon les sujets, proportionnelle à
l'importance de la réaction Locale. Toutefois, le no25 qui n9a présenté aucune
réaction locale, fixe le complement au l/l60, 28 jours après la vaccination.
.
2 =' Intubation des animaux destinés à devenir infectants
ca-3 :.zLTD.., .-0~.111,-1 I _Ir*-o.l I.ikl,..C> .,._II ~czsL1Ixza~ .,c li,~~YcI~~oI~~oI~~~cI~.~ocuu~I~IcI~-"I
L'inoculation intra-trachéale de la suspension infectante est
effectuée comme précédemment.
Deux lots d'animaux ont été successivement rendus infectants, En
effet, la mortalité très rapide de@Q animaux du premier lot a fait craindre
la possibilité d'une mauvaise contamination des témoins et des vaccinés. Un
second lot de bovins infectants a donc été préparé. Ces animaux ont ete
introduits 21 jours après le début de la mise en contact, il ne restait alors
plus que trois bovins infectants survivants du premier lot.
(13, 88, 3 2 , 4 4 , 3 6 , 29, 14
No d e s bovins infectants du ler lot (75 bovins) (26, 5 6 , 23, 5 7 , 1 5 , 18, 7tjg
( 9 5
No des bovins infectants du 2ème lot ( 1 2 bovins) (702, 709, 710, 721, 722, 724,
(715, 3 4 , 717, 716, 711, 718
Trois mois après la vaccination, 15 bovins vaccinés ont été groupés
avec 15 bovins infectants (ler lot) en présence de 15 témoins (n'75, 43, 38,
40, 22, 31, 50, 3, 63 B, 41, 5 B, 4, 91, 20, 74). Le deuxième lot de bovins
infectants a été introduit dans IFétable expérimentale 21 jours après le début
de la mise en contact.
c/.-* Evolution des animaux
I,es observations s'arrêtent 94 jours après le début de la mise en
contact.
1 iJ Evolution des animaux infectants
a-..i7nwYo":-.l....w
..~~=Y.~<_1Y-I.-__-:.~_-__~.
. . a_. i
Seule l'évolution sérologique est rapportée dans les tableaux qui
suivent. Le devenir des anticorps fixant le complément a été suivi par la
méthode de Kolmer. La recherchf; de l'antigène circulant a été effectuee par
précipita-diffusion en boîte de Pétri (gélose noble à 1 p.100 dissoute dans
un tampon véronal 2 pH 7,3 - 7,4, merthiolaté à 0,04 p.100).
Les résultats obtenus figurent dans les tableaux 6, 7, 8 et 9
(ler et 2ème lot d'animaux infectants). En matière de déviation du complément,
seules les réactions +f++ ont été retenues.
16
-
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1
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Tableau 7 c.. Evolution sérologique des animaux intubés du premier lot
(Antigène circulant décelé par prhipito-diffusion
en boTte de Pétri)
3ombre de jours après
19intubation
7
13
21
28
35
41
49
56
63
70
77
84
91
No des animaux
13
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15
+
L.P.B.
+
18
i
-
1L.P.B.
+
L.P.B.
+
: Mort avec lésion de péripneumonie
+ : Présence d'antigène circulant
,
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Tableau 8 -' Evolution sg-ologique des animaux intubés du deuxième lot
(Déviation du complément Kolrner)
fiombre de jours
'
'
'
l
après intubation
0
7
10
16
24
31
38
45
52
59
66
84
go des animaux
702
l/lO
l/lO
l/lO
1/160
L.P.B.
+
709
*,
1/80
1/80
L*P.B.
+
1/5
1/20
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L.P.B.
+
721
115
1/20
1/80
1/320
1/160
1/x.60
L.P.E.
+
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722
..,
1/5
l/lO
1/20
1/80
1,'160
L.P.B.
+
-
724
0
1/20
1/40
1/160
1/80
1/40
l/lO
IllO
l/lO
1/13
Sacrifié
SGquestre
,p&ipn,
V-5
1/5
l/lO
1/20
1/40
L.P.B.
+
i
34
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1120
1/160
L.P,B.
+
l
717
. 1
1/20
1/40
L.P.B,
+
i
-
716
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1/5
1/5
1140
L.P.B.
+
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1/160 1 L*P*B*
+
L.P.B.
+
: mort avec lésions péripneurnoniques
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,
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. - .
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Tableau 9 a-- Evolution sérologique des animaux intubés du deuxième lot
(Antigène circulant décelé par prkipito-diffusion
en boîte dc Pétri)
-r
Piombre de jours
après intubation
0
7
10
16
2 4
31
38
45
52
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No des animaux
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I
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L.P.B.
+
L
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+
L.P.B,I
L >
+ I
L.P*B,
+
; mort avec lésions phipneumoniques
20
Sur 27 bovins infect& par voie endobronchique, 23 ont succombé
en présentant & l'autopsie des lesions p&ipneumoniques
et 4 ont été sacrifies
en fin dfexpéri.encc, Le maximum des mortalitG$s dûes & la maladie expérimen-
tale se situe vers le 2Oèmc jour qui suit l'intubation, Chez les survivants,
la pr&ence de sequestres encapsulés a été constatee chez 2 sujets (76 et
724). Le poumon gtait totalement indemne chez les deux autres (13 et 36).
le 36 fixait le comp&nent à un taux élevé, de plus l'antigène circulant a
été décelé entre le 35ème et le 75eme jour, Ces deux animaux sérologiquement
négatifs au départ pr&entaient une immunité certaine. Dans ce cas l'évolu-
tion sérologique ne semble traduire que la réaction de 10organisme'à
l'intro-
duction d'une substance antigènique étrang& en quantitg importante.
2 - Evolution des temoins
-_le.aUOerIUIPYïIL.Ic ,Iu~~.~~~~*~~...
L'évolution s&ologique fait l'objet des tableaux 10 et 11. (Dé==
vi.ation du complément, recherche de l'antigène circulant),
Sur 15 témoins, 11 sont morts de péripneumonie bovine entre le
35ème et 63ème jour qui suivirent 10 mise en contact. Les 4 survivants ont
éte sacrifiés au 95ème jour, 3 (43, 38 et 40) montraient des séquestres
.
encapsulés, 1 (38) une lésion évolutive englobant la totalitg d'un lobe
pulmonaire.
3 - Evolution des animaux vaccinés
.D.P3cacmUa*-, _lK,UI~~/~>.
.I_U=~_.,l__.iJI..~~I~,.~,~~,.-
L'évolution sérologique (déviation du complGment)fait l'objet du
tableau 12.
Sur 15 animaux vaccin&, 3 (n"9, 42, 93) ont succombé en cours d'ex-
périence sans que lQexcamen post-mortem ne révèle la moindre lésion pulmonaire,
La mort de ces animaux peut s'expliquer par le fait que, dans les conditions
difficiles imposées par le confinement, des différences de taille et de vita-
litg empêchent certains sujets d'atteindre les mangeoires et de s'alimenter
normalement. La cachexie svinstallc et la mort survient par épuisement.
Les 12 bovins vaccinés surviwants ont été sacrifiés 95 jours après
la mise en contact avec les animaux infectants. Aucun de ces individus ne
présentait la moindre atteinte pulmonaire et M.mycoides n'a pu être isolé
d9aucun ganglion trachée-bronchique.
Sur le plan sérologique, la presque totalité des animaux vaccinés
a présenté une montge dPanticorps fixant le complément au cours du contact
avec les animaux infectés expérimentalement et les témoins en cours dlinfec-
tion, Cette évolution traduit l'existence d'un stimulus antigénique certain
qui ne vas pas, grâce à lqimmunité existante , jusquPau développement de
lésion pulmonaire.
.
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.
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.
.
.
s
1
a
I
*
-b
*
c
c
.
Tableau 10 - Evolution sérologique des animaux témoins apr8s la mise en contact
(Déviation du complément Kolmer)
-
Flombre de jours
après la mise
7
14
21
28
35
42
49
56
63
77
95
en contact
I
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1/160
L.P.B.
+
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I
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1/40
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1/160
1/160
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séquestre
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k
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.
Tableau 12 1 Evolution sérologique des animaux vaccinés après la
mise en contact (Déviation du complément Kolmer)
Nombre de jours
après la mise
0
4 2
49
56
6 3
70
77
7
14 21
95
27
35
en contact
No des animaux
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25
1/20
l/lO
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-
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115
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1
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1/40
Mort sans
lésion P.B
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._
._
24
CONCLUSIO>T
A la suite doune expérience contact réalisée 3 mois apr& la vacci-
nation avec 15 bovins vaccinés & l'aide d'un vaccin lyophilisé préparé avec
la souche Tl (41ème passage), 3 bovins ont succombe pour des raisons &rangè-
res & la péripneumonie bovine, les 12 survivants, sacrifies 95 jours après
le début de la mise en contact, ont présenté à lPautopsie un appareil pulmo-
naire indemne de toute atteinte p&ipneumonique.
Ce résultat a et6 observé
à la fois chez des animaux qui avaient offert une réaction locale post-vacci-
nale au point dvinoculation et chez des individus où aucune réaction locale
n'avait été enregistree.
Cette expérience souligne la valeur de l'immunit6 développée à la
suite de la vaccination à l'aide de la souche Tl (44ème passage).
u
25
L
d
I
BIBLIOGRAPBIE
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conference of the JP/15/phase IV Rinderpest Csmpaign - Naîrobi
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VALEUR DE L'IMI4UljITE CONFEREE PAR DEUX VACCIMS
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LYOPHILISES PREPARES A LPAIDE DES SOUCHES KH?J ET Tl
.:
. $&,
: ,?y$
b .;.z :
I ; ; v
A"y'
: :;r;:5:
par M.P.DOUTRE
A la suite des recommandations de la Conférence des Experts de la
péripneumonie bovine tenue à Khartoum en février 1967 et des possibilités
de mise au point de campagnes inter&tats de vaccination contre cette maladie,
le service de bactériologie du Laboratoire national de 1'Elevage et de Recher-
ches vétérinaires du Sénégal a mené au cours des ann&s 1967 et 1968 deux
expériences destinées à apprécier la valeur de l'immunité que conféraient
deux vaccins lyophilisés préparés à partir des souches KHsJ (86ème passage)
et Tl (kkème passage). Les bovins utilisés appartenaient a la race NDama,
race bovine africaine, particulièrement sensible à la péripneumonie. L'espace
t
disponible ne permettant pas de mener en même temps les deux tests, ces der-
niers se sont déroulés de la façon suivante :
I
xk
- l'expérience contact KR3J a eu lieu dès la fin de la saison des pluies 1967,
- celle effectuée avec des animaux vaccinés avec Tl, dès la fin de l'hivernage
1968.
Ces périodes ont éte choisies de façon à faciliter lvalimentation
en vert des bovins maintenus en stabulation étroite.
:
fw
z
,
- - -
_-. - .--
2
/ #VALEUR DE LvIMMUNITE CONFEREE PAR LA SOUCHE KH3J /
A - VACCIN UTILISE
Il résulte de la lyophilisation dvun mélange a volume égal dFune
culture de Mycoplasma mycoides souche KH3J et de mist dessicans (*).
La composition du milieu de culture résulte des travaux effectués au
Laboratoire de Fort-Lamy (milieu F 66, rapport présent6 à la 3ème Réunion des
Experts sur la péripneumonie bovine FAO/OIE/OAU, tenue & Khartoum en février
196'7) et de ceux des chercheurs australiens du CSIRO,
Quelques modifications ont @té apportees, elles portent sur la
suppression de l'acide palmitique nratiquemment insoluble même dans une so-
lution de soude 0,l M et sur la prgparation et la quantité deextrait frais
de levure ajouté.
- macération de coeur : on provoque la mac&ation pendant une heure de 500 g
de hachis de coeur de boeuf dégraiss6 dans un litre d'eau à. 5O*C, puis on
porte à ébullition. Filtration à chaud sur papier filtre. On ajoute par
litre : 10 g de tryptose (Difco), 2 g de glucose et 2,5 g de phosphate
disodique. On chauffe à 8O*C, filtration à chaud.
- addition de :
;
. glycérol .*.*.',,~*O......C*O*..*....,.
0,3 g/litre
D acide oféique.........,..o...........
15 mg
0 extrait frais de levure....OOOOO.Je.e. 100 ml
4
. s6rum de che-rhl d.écomplémenté,.,...... 100 ml
a pénicilline .P....,......O~..~O~~~~..~.
1.000.000 unités
Le pH est amen6 à 8,l avec une solution de soude 10 M. LPacide
oléique est &lnngd a 5 ml de soude 0,l M; le gel formé est dissous par
agitation magnetique.
(w) Actuellement, seul le lait écrém6 sec est utilisé comme support de lyo-
philisation dans la préparation des vaccins lyophilisés contre la péri-
pneumonie bovine.
3
- extrait de levure : l'extrait de levure préparé cxtemporanement présente
des qualités sup&ieures
aux produits correspondants que l'on trouve dans
le commerce0 La technique de préparation retenue est la suivante :
(I.E.M.V.T. ._a laboratoire de microbiologie)
0 mettre en suspension homogène 1 kg.de levure fra?che de boulan-
gerie dans un litre d'eau distillée en pr&.ence de 8 ml de
chloroforme
. laisser au bairwilarie 24 heures à 5O*C en agitant de temps en
temps, centrifuger et recueillir un premier surnageant que l'on
conserve au froid
. reprendre les culots dans un litre d'eau distillÉe et les soumettre
2 quatre cycles gel-dégel
. centrifuger à nouveau et recueillir le deuxieme surnageant
. mélanger la deux surnageants
. filtrer sur filtre Seitz EKS 1, conservation a -2O'C.
Pour la preparation du vaccin, on utilise une culture de 72 heures,
Au cours des dernières 24 heures, les ballons sont portés sur agitateur magné-
tique.
La répartition se fait sous un volume de 5 ml par flacon type péni-
cilline de 20 ml.
Au moment de l'emploi, le contenu de chaque flacon est reconstitué
avec 20 ml dgeau distillée stérile froide (20 doses vaccinales). Dans ces
conditions, le titrage des vaccins par la méthode des dilutions donne un
minimum de 109 unitcs viables par ml. Ce titre est égal ou superieur à celui
des meilleurs lots de vaccin-culture mesuré au moment de leur conditionnement.
B n* TEST D'IMMUNITE
a/- Principe de la méthode
Les animaux vaccinds ont étÉ 6prouv&s en utilisant la methode de
mise en contact etroit décrite par les auteurs australiens. Cette technique
consiste à mettre en présence,dans une enceinte close de volume restreint,
un lot d'animaux vaccinés, un lot d'animaux temoins non vaccinés et un lot
de bovins infectés expérimentalement par voie endobronchique. Pour que l'ex-
p&ience soit concluante, dans l'absolu, il convient qu'en fin dPexp&ience
les bovins intubés et les temoins non vaccin& succombent de péripneumonie
alors que les animaux vaccin5s résistent,
.___
.-.--
4
b/- Bâtiment
En tenant compte des dimensions relatives du bâtiment construit
par les chercheurs australiens du CSIRO, une &able a été spécialement ané-
nagée à Sangalkam pour réaliser les épreuves dlimmunité par la méthode de
contact.
Dimensions : longueur..... 10 m
largeur...... 5 m
hauteur...... 3 m,
Pour assurer l'alimentation des animaux, deux mangeoires de 5 m de
long sont placées de chaque c$t6. Le foin stock6 sur le faux-plafond en planches
est directement amené dans les mangeoires grâce à des trappes aménagées &
cet effet.
L'aération est assurée par 7 ouvertures de 1 m x OP50 III situées
à 2,35 m du sol.
A l"extérieur, un parc de 120 m2 pourvu d"un abreuvoir permet de
recevoir les animaux chaque matin pendant environ une demi-heure. Une fois
par semaine, lors des prises de sang, ce temps est prolongé de deux à trois
heures.
c/- Protocole expérimental
Tous les bovins utilisés appartiennent & la race NDama.
1 =' Vaccination
C.._I~_=._I-PL.DL.,I
Au jour Jo, 11 bovins sont vaccin& par voie sous-~cutsnée, ?i la
côte, avec 1 ml de vaccin KR3J lyophilis6 reconstitué avec de l'eau distillée
stérile rafraîchie (No des animaux : 0001 c-4 0002 s= 0003 - 0883 -- 1505 ra 0885 -
1519 .= 0871 - 0887 - 0900 == 0896).
Le titre du vaccin est compris entre 109 et lo10 unités viables
par ml (titrage par la mgthode des dilutions pasteuriennes).
Au j,ur JO f 14, 11 bovins sont inoculés par voie endobronchique
(No des animaux : Oo77 = 0872 1m 0889 Ly 0874 - 0875 - 0882 =- 0881 .= 0873 c=
0894 - 0892 - oSgg),
Inoculum : après anesthésie ,au chloral intraveineux, chaque animal
reçoit une injection intra-trach&le
administr6e à la sonde, suivant la tech-
nique classique, de 20 ml d'un m6lange à parties égales de :
. broyat de lésions pulmonaires p&ipneumoniques,
e lymphe p&ipneumonique,
. bouillon coeur sCrum (milieu F 66 modifié).
:
a* /. .
5
Les lC?sians puhonaires et la lymphe péripneumonique Sont r6COlt~eS
15 jours aupamxant sur un malade au dernier stade de la maladie, sacrifié
sur le terrain, sur notre demande (Rioro==du*%Rip),
et conservées jusqu'au
moment de l'emploi à -2O'C.
Un isolement deM.mycoides a partir des lésions pulmonaires et de
la lymphe est effectué au moment de la preparation de l'inoculum pour confir-
mer la qualité du matériel utilisé.
Au jour JO + 28, les animaux vaccinés et les animaux infectants
sont groupés dans l'gtable aménag6e à cet effet, en pr&çence de 11 bovins
témoins.(W' des témoins : 1536 - l-501 =* 898 .-: 1576 - 893 - 1542 -, 884 .‘= 1523 -
890
- 1530 cs 895).
d/- Evolution des animaux
Les observations s'arrêtent au jour Jo + 100.
1 s= Evolution des animaux infectants
"~'O--N-r-‘~--u-~~---~~-~.-~~~"~.r.rYOFiI~.O
La r6action à l'infection intractrachéale a été suivie sur les
plans thcrmiqw , clinique et sérologique (deviation du compl6ment),
Evolution thermique
Les tcmpgratures du @me au 36ème jour ont Gtf, reproduites dans
le tableau 1 :
Sur 11 animaux intubes :
- 7 ont présenté une élévation thermique significative (température supérieure
à 4OoC (no0899 -.= 0892 E7 0873 LLi 0082 -%= 0874 -=> 0889 == 0877)~
Parmi ces animaux, on peut distinguer 5 bovins ayant manifesté une réaction
précoce (6, 7, 8, 9ème jour) (no0899 cI 0892 i_j 0873 -’ 0882 - 0877) et deux
une réaction tardive (18ème jour).
Sur ces 7 bovins, 6 sont morts en cours d'expérience en offrant à 19autopsie
des lésions cx~act&istiqucs,
le 7ème (0877) a étt sacrifié en fin d*oxpé-
rience; des lésions péripneumoniques pulmonaires, Xycoplasma mycoides a
été isolé.
- 4 n'ont pas manifesté d'élévation de température caractéristique (flOO894 -
088; - 0875 -2 0872). Trois de ces bovins sont morts en cours d'expérience
(no0875 cq 0881. - O872), seuls les no0872 et 0881 présentent des 1Êsions
péripneumoniques.
Le bovin 0894 sacrifié en fin d'expérience n?offre
aucune lésion.
En conclusion, sur 11 bovins intubés, 9 ont contracté la péripneu-
monie et 2 animaux n?ont pas réagi à l'intubetion (no0875 - 0894)~ On peut
également supposer que cette opération ait %té mal ex&utée, ce qui est peu
probable.
1
,*
,
é
.I
,
J
Tableau 1 - Evolution de la température chez les animaux infectants
r
Nombre de jours
I
I
I
l
f
après début de
~*+18 Jo+19 Jo+20 Jo+21 Jo+22 JO+23 ~~~24 JO+25 Jo+26 Jo+27 ~~+28 Jo+29 Jo+32 Jo+35 JO+42
Jo+49 JO+50
l'expérience
/
j
I
f
1
Nombre de jours
après intubation
4
5
6
7
8
g
10
II
1.2
13
14
15
18
21
28
35
1 36
0899
3g,2
38,7 3g,6
39,2
39,8
40,2
40,l
39,7
40,2
40,3
40,2
40,2
w
28S6
+
lésions
i
I
I
I
I
I
I
0892
392 39,7
39,q 40,51 40,7j 40,9j 40,7
4%5j 40,1/ 40,71 40,11 + 1
lésions
I
f
f
f
0894
38,7 38,5 38,2/ 38,61 38~1 38,4[ 3896 38,3 38,5
38,3
38,5
38,6
38,2
I
i
1
l
0873
3895 39,2
39,6/ 40 1 40 1 3997j 4095
40,7
40
40,2
40,5
40,3
38,5
+
lésions
0881
3992 38,5
38,51 39,1) 3921 39941 3994
39,6
3933
39,3
x9,8
39,4
3896
39
+
lésions
0882
1 38,2l 3832 38,81 40,5j 39,91 W( 40,8 40,3 40,9 40,7 41,1 41~ 4~8 39 3991 39,31
0875
1 38,51 38,4
38,8
39,2
39,9
3937
3935
3998
+
absence l&iOn
0874
1
I
38.5 38,4
38,8
39,2
3999
39,7
3995
41
40~21 39,9/+ lésions
I
1
I
I
I
-7
38,8
38,6
39
38,7
38,3
39
40,6
40,5. 39
i+ le-
sion
37,7
37,8
37,2
37,7
37,9
38,7
3755
3894
3738
@377
37,7 38
39,2/ 39,2/ 38,71 40~1 40
40,6/ 40,21 40 1 40,5j 40 1 39,1/ 38,2\\ 38
f
f
f
38 1
f
f
I
i
I
I
La mort dvun animal est indiquée par le signe +
Remarque : Chez tous le5 animaux morts de péripneumonie, les l&ions
pulmonaires sont des plus typiques (hépatisation englobant parfois la totat-
lit6 d'un poumon avec sclérose intersticielle). Toutefois, jamais n'apparaît
liépanchement pleurétique important que l'on observe si souvent dans la mala<-
die naturelle.
Evolution sérologique
La déviation du complément a été effectuée par la méthode de
Kolmer avec fixation dîune nuit à 4°C.
Le résultat des différents titrages a été reproduit dans le ta-a
bleau 2. Seules les réactions ++s+ sont mentionnées,,
Sur 11 animaux intubes, 9 ont réagi sérologiquement. Les no0872
et 0894 sont négatifs, toutefois le 0872 succombe en présentant des lésions
de péripneumonie (possibilité d'une hypogammaglobulinémie). Le 0894, sacrifié
en fin d'expérience, est indemne de péripneumonie. Pour cet animal, il est
possible d9envisager soit quoi1 njaît pas réagi à lkînfectîon întra-trachéale,
soit que lTopération ait été mal effectuée (sonde introduite dans l'oesophage).
Pour le n'O875, mort avec absence de lésion pulmonaire, sans jamais avoir pré--
sent6 de poussée thermique, 1"erreur de manipulation est à écarter, car 14 jours
aprês l'intubation, cet animal fixe le complêment au 1/320.
Pour ce bovin, tout semble s'être pas& comme si l'intubation avait
été effectuée avec une culture en bouillon d'une souche virulente de M.mycoi-
des. Dans ce cas, on observe une montée régulière dsanticorps sans trace de
lésion pulmonaire à lvautopsie. La réaction sérologique semble seulement re-
fldter la phagocytose de substances étrangères introduites dans l'appareil
.
pulmonaire.
Evolution clinique
La presque totalit6 des animaux à sérologie positive présente de la
toux le matin au moment de l'abreuvement. Le phenomène est apparu chez les
premiers bovins, 10 .jours après l'intubatîon.
2 c- Evolution des témoins
L9P~OU~DI:.1....-.Y--NLYI~E.,..~-=~-
Evolution thermique et sérologiquc
Pour les bovins témoins, la courbe de température se superpose 5
l'élévation des taux des anticorps fixant le complément. Aussi, seule l'évo=
lutîon sérologique des animaux témoins figure-=t-elle dans le tableau 3.
. . / . .
c
--
--
s;
s:
z
e
-
-
E
T3
-
oh
s
I
2 0 Ii P-i z-
-
-
-
-
-i
3
--
l-i rt
0
ci4
r-l
0
6
r-l
0
r-l \\ G
0
;
/
8
a
9
Tableau 3 := Evolution sérologique des animaux témoins
(Dhiation du complément Kolmer)
Nombre de jours
I
après début
JO+42
Jo+59
Jo+71
Jo+75
Jo+82
J,+89
JO+95
expérience
Nombre de jours
après mise en
1 4
3 1
4 3
4 7
5 4
6 1
6 7
contact
1536
..x.
:i,
1120
1/80
L+B
1501
*a
L+B
0 8 9 8
cm
absénce
L.P.B. /
1576
-
I
.-
l/lO
1/160
1/320 1 1/320
1/640
L. +,*
0893
*=
~a&n;e!
1542
1/160
1/640
LL,kB
0 8 8 4
.-a
absence
L.P.B
1523
cm
1/320
1,'640
11640
1/640
1/640
+
L.P,B.
0890
l/lO
l/lO
1/160
+
L.P.B
1530
1/5
1/5
1/40
1/320
+
L.P.B
0895
+
absence
L.P.B
1 0
Sur 11 animaux temoins :
- 7 sont morts naturellement en offrant à 1"autopsie des lésions péripneu-
moniques d90G M.mycoides est isolé. Sur ces 7 bovins, un seul (1.501) n*a
pas présenté une morkée appréciable des anticorps fixant le complément
(mort.excessivement raplüe 33 jours après la mise en contact ou hypogamma-
globulinémie).
Les 6 autres traduisent sérologiquement l'infection entre
35 et 40 jours apri% l-CI mise en contact avec les bovins infectants.
- 4 sont morts naturellement, très rapidement, sans présenter la moindre
lésion nécropsique due & la péripneumonie. La disparition de ces animaux
est consécutive aux conditions particuli&ement
sév&es du stress qu'impose
le confinement, Ces accidents proviennent du fait qu'a 19achat les animaux
ne sont pas homogènes et que les sujets plus petits, plus faibles, ne
peuvent s*alimenter convenablement. Ecartés des mangeoires, ils se couchent
et succombent après avoir été piétinés.
Evolution sérologique après la vaccination
La vaccination avec KH J n'entrake aucune montée postavaccinale
des anticorps fixant le compléme t.
a
Evolution sérologique après la, mise en contact
Les résultats figurent dans le tableau 4,
.
(I
4
<
t
I
Tableau 4 cm Evolution sérologique des animaux vaccinés après la mise en contact
(Déviation du complément Kolmer)
I1Jombre de jours après
+Ïl
I
J,+?5, Jo+82
5,+89
Jo+95
début exphience
~~+28
JO+42
Jo+591 Jo.
I
-
Horn1 )re de jours après
xlise en contact
0
14
31
43
47
54
61
67
abs nce
0871
L . z .B
1519
--
r-2
1 abs-nce
L. .B 6
0885
,.s
1/40
lb0 abs g nce
L ..L . B
0883
abs nce
.-m
Ci>
E
L. .B
0887
ca
l/lC
115
abs nce
1/5
l/lO
l
'Ilo L l 8.B
0002
-4
1/20
LAE
_..
.
.
1 2
Sur 11 bovins vaccines en vue de réaliser l'expérience :
- 1 meurt le jour de la mise en contact (nO0871) sans présenter la moindre
atteinte de p&ipneumonie.
- 5 succombent naturellement dans des temps variables, 4 n'offrent aucune
lésion péripneumonique (1519, 0885, 0883, 0887); par contre, le no0002
présente, 34 jours après la mise en contact, un séquestre péripneumonique
d'où M.mycoides est isolg,
- 5 sont sacrifiés en fin d7expéricnce : sur ces 5 bovins, 4 révèlent 2
l'autopsie des poumons indemnes de p&ipneumonic (n*0900, 1505, 0003, 0896);
le sérum du bovin 0896 fixe le complément à un taux élevd (1/160), sans
qu'aucune lésion ne puisse être dZk&e, Par contre, le no0001 montre deux
séquestres p&ipneumoniqucs
d?oG M.mycoides est isolé par culture,
-
En conclusion, la vaccination avec le vaccin KH3J lyophilisg a donc
apparemment favori& la cr&tion de deux bovins porteurs chroniques sur
11 animaux vaccinés un mois avant la mise en contact avec les sujets infec-
tants.
CONCLUSIONS
L'expérience contact destin& à
.
apprécier la valeur de lvimtnunité
conférée par un vaccin lyophilise prepare & partir de la souche NH J un mois
après la vaccination montre :
3
l/,;, qupune immunite certaine s'est développée chez les sujets vaccinés,
7 t&moins morts de péripneumonie presentent des lésions volumineuses
des plus caractÉristiques,
Aucun vacciné nvoffre des lésions dqune telle
importance.
2/- que cette icmunitg est loin d'être totale, 2 bovins présentent & lgautop-
sie effectuée, soit après la mort naturelle, soit après abattage, des
séquestres de la grosseur d'une pomme d'où E3,mycoides est isolee par
culture. Au contact d'animaux infectants,
deux animaux porteurs chroni-
ques ont ainsi été c&s.
3/- que seules des vaccinations répétEes au moins tous les 5 mois, pendant
plusieurs années, sur la qu%si totalité du troupeau peuvent entraîner
une régression de la maladie.
/ VALEUR DE LvIE4MU81TE CONFEREE PAR LA SOUCHE Tl-/
A - VACCITJ UTILISE
Il résulte de la lyophilisstion d'un mélange à volume égal d'une
culture de Mycoplasma mycoides, souche Tl, et de mist dessicans. Le milieu
utilise pour la culture est celui décrit pré&demment (F 66 modifié),
Le vaccin reconstitug au moment dc l'emploi titre un peu plus
de 10g unités viables par dose vaccinale (1 ml),
B - TEST DqIMNUNITE
a/- Bâtiment
Afin de pouvoir mener l'expérimentation sur un nombre plus élevé
d'animaux, la superficie du bâtiment ainsi que le nombre des mangeoires ont
été doublés :
longueur,,.., X0 m
largeur...... 10 m
.
Hauteur....., 3 m.
bj- Protocole expérimental
Tous les bovins utilisés appartiennent comme précédemment à la
race IJDama, Achet& au S6négal Oriental, ils sont garantis par le vendeur
comae non-vaccinés.
Le but de l'expérience consiste à apprécier la valeur de lqimmw
nité que présentent des animaux vaccinés avec le vaccin Tl lyophilisé 3 mois,
7 mois et 12 mois après la vaccination, 50 bovins ont donc été vaccinés et
conservés à !a ferme de Sangalkam. Ils ont été répartis en trois lots utili-
sables respectivement 3, 7 et 12 mois après la vaccination. Seule la première
phase de l'expérience (valeur de l'immunité 3 mois après la vaccination)
fait l'objet de la description et des conclusions qui suivent :
1 == Vaccination
ca.?~_ icllLi. d._j-a.yL%
Les 15 bovins vaccines utilisés lors de l'expérience contact
groupent 7 animaux qui n'ont pas présenté de reaction locale postzvaccinale
au point d'inoculation (n"25> 24, 9, 4 2 , 83, 1 0 , 79) e t 8 bovins qui offri-
rent une réaction locale ne dépassant pas la taille de la main (n%l 13, 80,
go, 11, 82, 2, 18 B, 93).
L"évolution sérologique pas%-vaccinale de ces 15 animaux figure
dans le tableau 5 (déviation du complément Kolmer).
/
. . . .
14
Tableau 5 - Sérologie post-vaccinale des animaux vaccinés
avec Tl avant la mise en contact
(Déviation du complément Kolmer)
No des animaux
Vaccination J +13
Jo
0
JO+20
JO+28
JO+41
Réaction locale au
point d'inoculation
25
115
1/40
1/160
1/80
24
.?a
x/5
1/40
1/40
1/20
-3
9
w.
4 2
l/lO
l/lO
lJ20
lj10
83
Pa
CI
10
l/lO
1/10
-
'--
I
I
.
79
LX
u5
1/20
1/10
x/5
1 1 B
ca
1/5
1/10
l/lO
u5
+++ (taille d e la
main)
1
80
C%A
l/lO
1.180
3y160
1/320
+++
90
l/lO
1/40
1/160
1/160
+-l-t
11
.z
l/lO
1/40
1/80
1/20
+++
82
l/lO
1/40
l/lO
l/lO
++
2
?m
x/5
1/5
1/5
CZ'
++
18 B
1110
1/2c
l/lO
+++
93
1/5
1110
1/5
-
++-t
. ./ . .
1 5
Sur 15 animaux vaccines, 13 ont montré une réaction sérologique
post-vaccinale dqintensité variable selon les sujets, proportionnelle à
l'importance de la réaction Locale. Toutefois, le no25 qui n9a présenté aucune
réaction locale, fixe le complement au l/l60, 28 jours après la vaccination.
.
2 =' Intubation des animaux destinés à devenir infectants
ca-3 :.zLTD.., .-0~.111,-1 I _Ir*-o.l I.ikl,..C> .,._II ~czsL1Ixza~ .,c li,~~YcI~~oI~~oI~~~cI~.~ocuu~I~IcI~-"I
L'inoculation intra-trachéale de la suspension infectante est
effectuée comme précédemment.
Deux lots d'animaux ont été successivement rendus infectants, En
effet, la mortalité très rapide de@Q animaux du premier lot a fait craindre
la possibilité d'une mauvaise contamination des témoins et des vaccinés. Un
second lot de bovins infectants a donc été préparé. Ces animaux ont ete
introduits 21 jours après le début de la mise en contact, il ne restait alors
plus que trois bovins infectants survivants du premier lot.
(13, 88, 3 2 , 4 4 , 3 6 , 29, 14
No d e s bovins infectants du ler lot (75 bovins) (26, 5 6 , 23, 5 7 , 1 5 , 18, 7tjg
( 9 5
No des bovins infectants du 2ème lot ( 1 2 bovins) (702, 709, 710, 721, 722, 724,
(715, 3 4 , 717, 716, 711, 718
Trois mois après la vaccination, 15 bovins vaccinés ont été groupés
avec 15 bovins infectants (ler lot) en présence de 15 témoins (n'75, 43, 38,
40, 22, 31, 50, 3, 63 B, 41, 5 B, 4, 91, 20, 74). Le deuxième lot de bovins
infectants a été introduit dans IFétable expérimentale 21 jours après le début
de la mise en contact.
c/.-* Evolution des animaux
I,es observations s'arrêtent 94 jours après le début de la mise en
contact.
1 iJ Evolution des animaux infectants
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Seule l'évolution sérologique est rapportée dans les tableaux qui
suivent. Le devenir des anticorps fixant le complément a été suivi par la
méthode de Kolmer. La recherchf; de l'antigène circulant a été effectuee par
précipita-diffusion en boîte de Pétri (gélose noble à 1 p.100 dissoute dans
un tampon véronal 2 pH 7,3 - 7,4, merthiolaté à 0,04 p.100).
Les résultats obtenus figurent dans les tableaux 6, 7, 8 et 9
(ler et 2ème lot d'animaux infectants). En matière de déviation du complément,
seules les réactions +f++ ont été retenues.
16
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Tableau 7 c.. Evolution sérologique des animaux intubés du premier lot
(Antigène circulant décelé par prhipito-diffusion
en boTte de Pétri)
3ombre de jours après
19intubation
7
13
21
28
35
41
49
56
63
70
77
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: Mort avec lésion de péripneumonie
+ : Présence d'antigène circulant
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Tableau 8 -' Evolution sg-ologique des animaux intubés du deuxième lot
(Déviation du complément Kolrner)
fiombre de jours
'
'
'
l
après intubation
0
7
10
16
24
31
38
45
52
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l/lO
l/lO
1/160
L.P.B.
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1/80
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0
1/20
1/40
1/160
1/80
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l/lO
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l/lO
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1/5
l/lO
1/20
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L.P.B.
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1/160
L.P,B.
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l
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1/40
L.P.B,
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1/5
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L.P.B.
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: mort avec lésions péripneurnoniques
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Tableau 9 a-- Evolution sérologique des animaux intubés du deuxième lot
(Antigène circulant décelé par prkipito-diffusion
en boîte dc Pétri)
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Piombre de jours
après intubation
0
7
10
16
2 4
31
38
45
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L >
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L.P*B,
+
; mort avec lésions phipneumoniques
20
Sur 27 bovins infect& par voie endobronchique, 23 ont succombé
en présentant & l'autopsie des lesions p&ipneumoniques
et 4 ont été sacrifies
en fin dfexpéri.encc, Le maximum des mortalitG$s dûes & la maladie expérimen-
tale se situe vers le 2Oèmc jour qui suit l'intubation, Chez les survivants,
la pr&ence de sequestres encapsulés a été constatee chez 2 sujets (76 et
724). Le poumon gtait totalement indemne chez les deux autres (13 et 36).
le 36 fixait le comp&nent à un taux élevé, de plus l'antigène circulant a
été décelé entre le 35ème et le 75eme jour, Ces deux animaux sérologiquement
négatifs au départ pr&entaient une immunité certaine. Dans ce cas l'évolu-
tion sérologique ne semble traduire que la réaction de 10organisme'à
l'intro-
duction d'une substance antigènique étrang& en quantitg importante.
2 - Evolution des temoins
-_le.aUOerIUIPYïIL.Ic ,Iu~~.~~~~*~~...
L'évolution s&ologique fait l'objet des tableaux 10 et 11. (Dé==
vi.ation du complément, recherche de l'antigène circulant),
Sur 15 témoins, 11 sont morts de péripneumonie bovine entre le
35ème et 63ème jour qui suivirent 10 mise en contact. Les 4 survivants ont
éte sacrifiés au 95ème jour, 3 (43, 38 et 40) montraient des séquestres
.
encapsulés, 1 (38) une lésion évolutive englobant la totalitg d'un lobe
pulmonaire.
3 - Evolution des animaux vaccinés
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L'évolution sérologique (déviation du complGment)fait l'objet du
tableau 12.
Sur 15 animaux vaccin&, 3 (n"9, 42, 93) ont succombé en cours d'ex-
périence sans que lQexcamen post-mortem ne révèle la moindre lésion pulmonaire,
La mort de ces animaux peut s'expliquer par le fait que, dans les conditions
difficiles imposées par le confinement, des différences de taille et de vita-
litg empêchent certains sujets d'atteindre les mangeoires et de s'alimenter
normalement. La cachexie svinstallc et la mort survient par épuisement.
Les 12 bovins vaccinés surviwants ont été sacrifiés 95 jours après
la mise en contact avec les animaux infectants. Aucun de ces individus ne
présentait la moindre atteinte pulmonaire et M.mycoides n'a pu être isolé
d9aucun ganglion trachée-bronchique.
Sur le plan sérologique, la presque totalité des animaux vaccinés
a présenté une montge dPanticorps fixant le complément au cours du contact
avec les animaux infectés expérimentalement et les témoins en cours dlinfec-
tion, Cette évolution traduit l'existence d'un stimulus antigénique certain
qui ne vas pas, grâce à lqimmunité existante , jusquPau développement de
lésion pulmonaire.
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Tableau 10 - Evolution sérologique des animaux témoins apr8s la mise en contact
(Déviation du complément Kolmer)
-
Flombre de jours
après la mise
7
14
21
28
35
42
49
56
63
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en contact
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Tableau 12 1 Evolution sérologique des animaux vaccinés après la
mise en contact (Déviation du complément Kolmer)
Nombre de jours
après la mise
0
4 2
49
56
6 3
70
77
7
14 21
95
27
35
en contact
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24
CONCLUSIO>T
A la suite doune expérience contact réalisée 3 mois apr& la vacci-
nation avec 15 bovins vaccinés & l'aide d'un vaccin lyophilisé préparé avec
la souche Tl (41ème passage), 3 bovins ont succombe pour des raisons &rangè-
res & la péripneumonie bovine, les 12 survivants, sacrifies 95 jours après
le début de la mise en contact, ont présenté à lPautopsie un appareil pulmo-
naire indemne de toute atteinte p&ipneumonique.
Ce résultat a et6 observé
à la fois chez des animaux qui avaient offert une réaction locale post-vacci-
nale au point dvinoculation et chez des individus où aucune réaction locale
n'avait été enregistree.
Cette expérience souligne la valeur de l'immunit6 développée à la
suite de la vaccination à l'aide de la souche Tl (44ème passage).
u
25
L
d
I
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Y
4
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