INSTITUT SENEGALAIS DE RECHERCHES AGRICOLES ...
INSTITUT SENEGALAIS DE RECHERCHES
AGRICOLES (I.S.R.A.)
- - - - - - - - - - - - - - - -
LABORATOIRE NATIONAL DE L’ELEVAGE
!
ET DE RECHERCHES VETERINAIRES
DAKAR-HANN
PREMIER ISOLEMENT DE MYCOPLASMA
OVIPNEUMONIAE
AU SENEGAL
R E F . No 92/MICROBIO.
DECEMBRE 1986
PREMIER ISOLEMENT DE MYCOPLkSMA
OVIPNEUMONIAE AU SENEGAL
Par- M. K0NT.E (1) et’ A. BREARD (2) .
-.
*
Avec la collaboration technique de E. WAZ FERNANDEZ (1) et A.B. MBENCUE (1)
(1) - Service de Bactériologie, LNERV/ISRA, BP 2057, DAKAR, Sénégal
(2) - Service de Pathologie infectieuse “Laboratoire Pierre PERREAU” , I EMVT/CI RAD
10, rue Pierre Curie, 94704 - MAISONS-ALFO?T
CEDEX France.
R E S U M E
Mycoplasma ovipneumoniae est isolé pour la première fois au Sénégal à partir
de poumons pneumoniques prélevés sur le cadavre d’un vouton d’expérience nourri
avec du tourteau d’arachide contaminé par I’aflatoxine.
Les caractères bactériologiques du germe sont donnés. Les facteurs ayant
favorisé cette mise en évidence sont recherchés et discutés.
L’élevage des Petits Ruminants connait un regain d’intérêt eu égard à la
demande sans cesse croissante en “moutons de Tabaski” essentiellement, mais aussi en
viande, plus généralement.
L’une des contraintes majeures liées à cette spéculation est d’ordre pathologique
et relève des affections respiratoires, tant chez les ovins que chez les caprins.
Le service de Bactériologie du Laboratoire National de IlElevage et de Recherches
Vétérinaires de Dakar travaille depuis 1979 à l’identification des agents bactériens
impliqués dans ces pneumopathies, à partir de lésions du parenchyme pulmonaire, mais
aussi à l’étude du portage de Pasteurella et Mycoplasma chez des animaux sains
sacrifiés à l’abattoir de Dakar (3 ; 4). Au total, les germes suivants ont été isolés :
Pasteurella (P. multocida et P. haemolytica) , Diplococcus pneumoniae, Streptococcus SP.,
Pseudomonas aeruginosa, des Entérobactéries, Haemophilus SP., Neisseria SP.,
Salmonnella typhi-murium, etc.. . et une espèce de mycoplasme : Mycoplasma arginini.
-
..* /. . .
-2-
Mycoplasma ovipneumoniae, reconnu pathogène par ailleurs (l), n’a pas été
mis en évidence au cours de ces recherches, ce qui a justifié la poursuite de cette
opération en mettant l’accent sur l’isolement et l’identification systématiques de tous
les mycoplasmes rencontrés.
Les prélèvements provenaient soit des abattoirs de Dakar, soit de cadavres en-
voyés depuis Dakar ou de ses environs immédiats ‘et parfois, de lieux d’essais d’élevage
encadré (PRODELOV de Kaolack) ou de recherche (Service de Nutrition-Alimentation du
LNERV).
-<
_
La présente publication se propose de rapporter le premier cas d’isolement de
M. ovipneumoniae au Sénégal.
I - MATERIEL ET METHODES
A- MATERI EL
10) - Les prélèvements
- - - - - - - - - - - - - - - -
En juin 1986, un fragment de poumon pneumonique est prélevé sur le
cadavre d’un mouton du Service d’Alimentation-Nutrition du Laboratoire de Dakar. Cet
animal faisait partie d’un lot soumis à une expérience, celle de l’ingestion de tourteau
d’arachide contaminé par I’aflatoxine aux fins de suivi et de dépistage de la toxine
d’AspergiIIus flavus dans les résidus de viandes. Un seul cas de mortalité a été cons-
taté sur 24 sujets après deux mois d’expérience.
2O) - Les milieux de culture
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Le laboratoire de Dakar utilise pour la recherche et l’identification des
mycoplasmes deux milieux courants répondant à la composition suivante :
-
- milieu solide (base) :
Heart Infusion Broth Difco :
25
g
Neopeptone Difco :
2,s g
Bacto-casitone Difco :
2,s g
Glucose :
2
cl
AgHr Noble Difco :
‘0
cl
Eau distillée
700 g
-3-
Dissolution par chauffage à 80°C, puis stérilisation à la chaleur;ajustc.ment dü, pH
à 7,6.
Au moment de l’emploi, on ajoute,pour 700 ml de milieu :
Extrait de levure fraîche à 25 p 100
100 ml
Sérum de cheval décomplémenté
‘200 ml
(Fraction stérilisée par filtration)
Pénicilline
200 000 U.I.
- milieu liquide
Bouillon au tryptose, glucosé et tamponné, additionné de pénicilline à raison
de 1 000 U. 1. par ml (BTP), enrichi avec de l’extrait de levure à 25 p 100 et du
sérum de cheval décomplémenté, dans les proportions ci-dessus.
. Ces deux milieux sont rendus, cette fois, encore plus sélectifs par adjonction
d’une solution d’acétate de thallium à 10 p 100 pour une concentration finale de
#
1 p 8 000.
B- METHODES
Le milieu solide est directement ensemencé,par application,2 partir du
fragment de poumon lésé puis incubé en atmosphère enrichie en C02. Le clonage est
effectué en bouillon tryptose pénicilline.
Les souches de mycoplasmes isolées sont alors envoyées pour diagnose d’espèce au
‘. ‘. “Laboratoire Pierre PERREAU” de l’l .E.M.V.T. Ce travail met en oeuvre le protocole
suivant :
- morphologie
- étude des caractères culturaux et biochimiques
- sérologie à l’aide d’anti-sérums de référence
- analyse électrophorétique.
- 4 -
R E S U L T A T S
Notre souche, baptisée MNP/LNERV est identifiée comme étant :
Mycoplasma ovipneumoniae par les caractères suivants :
. croissance (notée 0 à 4+) : 2+
. aspect des colonies : type M. ovipneumoniae, petite colonie à centre diffus,
vacuolée et granuleuse
. sensibilité à la digitonine : + (9 mm)
. hydrolyse du glucose : +
. hydrolyse de I’arginine : - (après 12 jours)
. réduction du chlorure de tétrazolium : -/2+ (aérobie/anaérobie)
. recherche des phosphatases : -
. digestion du sérum coagulé : -
. tests d’inhibition de croissance :
- sérum anti-M. ovipneumoniae Y-98 : +6 mm nets
- sérum anti-Mycoplasma sp. Pg 50, Mycoplasma sp.
F. 38, Mycoplasma mycoides subsp. mycoides SC 10114
Mycoplasma mycoides subsp. capri Pg 3, Mycoplasma bovirhinis
Pg 43, MYcoplasma mycoides subsp. mycoides (LC) Y-Goat
Mycoplasma capricolum C. Kid : - (tous négatifs)
* Immunofluorescence directe sur bouillon de culture :
- sérum témoin négatif
anti F. 38
anti D 3
anti Pg 50
anti Pg 3
anti VC 2 (M. ovipneumoniae) .: 3 à 4+
. analyse électrophorétique : le schéma de l’antigène de la souche MNP
montre un profil très proche de celui obtenu à partir de l’antigène M. ovipneumoniae
Y-98.
.
II faut noter qu’à côté de M. ovipneumoniae ont été isolés Diplococcus
pneumoniae et Pasteurella multocida. M. arginini n’a pas été mis en évidence.
D I S C U S S I O N
II est maintenant établi que M. ovipneumoniae existe au Sénégal.
Quel concours de circonstances a permis cet isolement, quand on sait que
des poumons pneumoniques autant que des prélèvements effectués sur des animaux
sains à l’abattoir, ont fait l’objet d’analyses systématiques qui se sont révélés toutes
négatives.
/
. . . . . .
-5-
M. ovipneumoniae est mis en évidence à la faveur d’une agression de
l’organisme par une mycotoxine ; il peut donc être un germe de sortie, ce qui
supposerait un portage préalable au niveau du tractus respiratoire.
Malheureusement, l’opportunité ne nous a pas été donnée d’effectuer une
recherche systématique du germe à partir d’écouvillonnages nasaux pratiqués chez
tous les animaux concernés par l’expérience.
G. IONAS et al. (5) ont émis l’idée que la colonisation secondaire du
parenchyme pulmonaire se ferait à partir d’un portage nasal préalable du germe
sans pour autant que celui-ci fasse partie intégrante de la flore normale ; du reste,
cette aptitude n’est pas reconnue à toutes les souches de M. ovipneumoniae.
L’aflatoxine aurait-elle eu une action favorisante sur la colonisation du
tractus respiratoire par M. ovipneumoniae, nous le pensons.
De plus, l’usage de l’acétate de thallium pourrait avoir eu un effet favorable
sur son développement in vitro, soit en modulant l’interférence microbienne en
faveur de M. ovipneumoniae au détriment de germes saprophytes, soit en minimisant
un éventuel effet inhibiteur de la pénicelline G parfois observé sur certaines espèces
de Mycoplasmes.
Quant au rôle exact joué par M. ovipneumoniae dans l’apparition des
symptômes observés, l’étude du pouvoir pathogène par la reproduction expérimentale
de la maladie chez les Petits Ruminants sera menée ultérieurement, avec implication
ou non de facteurs stressants notamment, l’usage de toxines d’Aspergillus de
diverses espèces.
?‘
*4 D
.F -
B I B L I O G R A P H I E
1 - ALLEY (M.R.), QUILAN (J.R.) and CLARKE (J.K.) - The prevalence of Mycoplasma
ovipneumoniae and Mycoplasma arginini in the respiratory tract of
sheep.
W.Z. Vet. J., 1975, 23 : 137-141
-
2 - ANONYME : Mycoplasmes et Mycoplasmoses des Ruminants. Documents techniques
Service de Pathologie infectieuse, IEMVT/CIRAD ; 10, Rue Pierre
Curie, 94704 - MAISONS-ALFORT, Juin 1985, 82 pages.
3 - DOUTRE (M. P. ) et PERREAU (P. ) - Le portage de Pasteurella sp. et de Mycoplasma
arginini chez les moutons sains au Sénégal.
Rev. Elev. Méd. vét. Pays trop., 1981, 34 (4) : 365-368.
-
DOUTRE (M. P. ) et PERREAU (P. ) - Le portage de Pasteurella sp. et de Mycoplasma
arginini chez la chèvre au Sénégal.
Rev. Elev. Méd. vét. Pays trop., 1983 36 (1) : 11-14.
-
IONAS ( G . ) , M E W ( A . J . ) , A L L E Y ( M . R . ) , C L A R K E ( J . K . ) , R O B I N S O N (A-J.)
a n d MARSHALL ( R . B . ) - Colonization of the respiratory tract of lambs by strains
of Mycoplasma ovipneumoniae. Veterinary Microbiology , Vol. 10,
no 6, Déc. 1985 ; 533-539.
AGRICOLES (I.S.R.A.)
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LABORATOIRE NATIONAL DE L’ELEVAGE
!
ET DE RECHERCHES VETERINAIRES
DAKAR-HANN
PREMIER ISOLEMENT DE MYCOPLASMA
OVIPNEUMONIAE
AU SENEGAL
R E F . No 92/MICROBIO.
DECEMBRE 1986
PREMIER ISOLEMENT DE MYCOPLkSMA
OVIPNEUMONIAE AU SENEGAL
Par- M. K0NT.E (1) et’ A. BREARD (2) .
-.
*
Avec la collaboration technique de E. WAZ FERNANDEZ (1) et A.B. MBENCUE (1)
(1) - Service de Bactériologie, LNERV/ISRA, BP 2057, DAKAR, Sénégal
(2) - Service de Pathologie infectieuse “Laboratoire Pierre PERREAU” , I EMVT/CI RAD
10, rue Pierre Curie, 94704 - MAISONS-ALFO?T
CEDEX France.
R E S U M E
Mycoplasma ovipneumoniae est isolé pour la première fois au Sénégal à partir
de poumons pneumoniques prélevés sur le cadavre d’un vouton d’expérience nourri
avec du tourteau d’arachide contaminé par I’aflatoxine.
Les caractères bactériologiques du germe sont donnés. Les facteurs ayant
favorisé cette mise en évidence sont recherchés et discutés.
L’élevage des Petits Ruminants connait un regain d’intérêt eu égard à la
demande sans cesse croissante en “moutons de Tabaski” essentiellement, mais aussi en
viande, plus généralement.
L’une des contraintes majeures liées à cette spéculation est d’ordre pathologique
et relève des affections respiratoires, tant chez les ovins que chez les caprins.
Le service de Bactériologie du Laboratoire National de IlElevage et de Recherches
Vétérinaires de Dakar travaille depuis 1979 à l’identification des agents bactériens
impliqués dans ces pneumopathies, à partir de lésions du parenchyme pulmonaire, mais
aussi à l’étude du portage de Pasteurella et Mycoplasma chez des animaux sains
sacrifiés à l’abattoir de Dakar (3 ; 4). Au total, les germes suivants ont été isolés :
Pasteurella (P. multocida et P. haemolytica) , Diplococcus pneumoniae, Streptococcus SP.,
Pseudomonas aeruginosa, des Entérobactéries, Haemophilus SP., Neisseria SP.,
Salmonnella typhi-murium, etc.. . et une espèce de mycoplasme : Mycoplasma arginini.
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..* /. . .
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Mycoplasma ovipneumoniae, reconnu pathogène par ailleurs (l), n’a pas été
mis en évidence au cours de ces recherches, ce qui a justifié la poursuite de cette
opération en mettant l’accent sur l’isolement et l’identification systématiques de tous
les mycoplasmes rencontrés.
Les prélèvements provenaient soit des abattoirs de Dakar, soit de cadavres en-
voyés depuis Dakar ou de ses environs immédiats ‘et parfois, de lieux d’essais d’élevage
encadré (PRODELOV de Kaolack) ou de recherche (Service de Nutrition-Alimentation du
LNERV).
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La présente publication se propose de rapporter le premier cas d’isolement de
M. ovipneumoniae au Sénégal.
I - MATERIEL ET METHODES
A- MATERI EL
10) - Les prélèvements
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En juin 1986, un fragment de poumon pneumonique est prélevé sur le
cadavre d’un mouton du Service d’Alimentation-Nutrition du Laboratoire de Dakar. Cet
animal faisait partie d’un lot soumis à une expérience, celle de l’ingestion de tourteau
d’arachide contaminé par I’aflatoxine aux fins de suivi et de dépistage de la toxine
d’AspergiIIus flavus dans les résidus de viandes. Un seul cas de mortalité a été cons-
taté sur 24 sujets après deux mois d’expérience.
2O) - Les milieux de culture
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Le laboratoire de Dakar utilise pour la recherche et l’identification des
mycoplasmes deux milieux courants répondant à la composition suivante :
-
- milieu solide (base) :
Heart Infusion Broth Difco :
25
g
Neopeptone Difco :
2,s g
Bacto-casitone Difco :
2,s g
Glucose :
2
cl
AgHr Noble Difco :
‘0
cl
Eau distillée
700 g
-3-
Dissolution par chauffage à 80°C, puis stérilisation à la chaleur;ajustc.ment dü, pH
à 7,6.
Au moment de l’emploi, on ajoute,pour 700 ml de milieu :
Extrait de levure fraîche à 25 p 100
100 ml
Sérum de cheval décomplémenté
‘200 ml
(Fraction stérilisée par filtration)
Pénicilline
200 000 U.I.
- milieu liquide
Bouillon au tryptose, glucosé et tamponné, additionné de pénicilline à raison
de 1 000 U. 1. par ml (BTP), enrichi avec de l’extrait de levure à 25 p 100 et du
sérum de cheval décomplémenté, dans les proportions ci-dessus.
. Ces deux milieux sont rendus, cette fois, encore plus sélectifs par adjonction
d’une solution d’acétate de thallium à 10 p 100 pour une concentration finale de
#
1 p 8 000.
B- METHODES
Le milieu solide est directement ensemencé,par application,2 partir du
fragment de poumon lésé puis incubé en atmosphère enrichie en C02. Le clonage est
effectué en bouillon tryptose pénicilline.
Les souches de mycoplasmes isolées sont alors envoyées pour diagnose d’espèce au
‘. ‘. “Laboratoire Pierre PERREAU” de l’l .E.M.V.T. Ce travail met en oeuvre le protocole
suivant :
- morphologie
- étude des caractères culturaux et biochimiques
- sérologie à l’aide d’anti-sérums de référence
- analyse électrophorétique.
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R E S U L T A T S
Notre souche, baptisée MNP/LNERV est identifiée comme étant :
Mycoplasma ovipneumoniae par les caractères suivants :
. croissance (notée 0 à 4+) : 2+
. aspect des colonies : type M. ovipneumoniae, petite colonie à centre diffus,
vacuolée et granuleuse
. sensibilité à la digitonine : + (9 mm)
. hydrolyse du glucose : +
. hydrolyse de I’arginine : - (après 12 jours)
. réduction du chlorure de tétrazolium : -/2+ (aérobie/anaérobie)
. recherche des phosphatases : -
. digestion du sérum coagulé : -
. tests d’inhibition de croissance :
- sérum anti-M. ovipneumoniae Y-98 : +6 mm nets
- sérum anti-Mycoplasma sp. Pg 50, Mycoplasma sp.
F. 38, Mycoplasma mycoides subsp. mycoides SC 10114
Mycoplasma mycoides subsp. capri Pg 3, Mycoplasma bovirhinis
Pg 43, MYcoplasma mycoides subsp. mycoides (LC) Y-Goat
Mycoplasma capricolum C. Kid : - (tous négatifs)
* Immunofluorescence directe sur bouillon de culture :
- sérum témoin négatif
anti F. 38
anti D 3
anti Pg 50
anti Pg 3
anti VC 2 (M. ovipneumoniae) .: 3 à 4+
. analyse électrophorétique : le schéma de l’antigène de la souche MNP
montre un profil très proche de celui obtenu à partir de l’antigène M. ovipneumoniae
Y-98.
.
II faut noter qu’à côté de M. ovipneumoniae ont été isolés Diplococcus
pneumoniae et Pasteurella multocida. M. arginini n’a pas été mis en évidence.
D I S C U S S I O N
II est maintenant établi que M. ovipneumoniae existe au Sénégal.
Quel concours de circonstances a permis cet isolement, quand on sait que
des poumons pneumoniques autant que des prélèvements effectués sur des animaux
sains à l’abattoir, ont fait l’objet d’analyses systématiques qui se sont révélés toutes
négatives.
/
. . . . . .
-5-
M. ovipneumoniae est mis en évidence à la faveur d’une agression de
l’organisme par une mycotoxine ; il peut donc être un germe de sortie, ce qui
supposerait un portage préalable au niveau du tractus respiratoire.
Malheureusement, l’opportunité ne nous a pas été donnée d’effectuer une
recherche systématique du germe à partir d’écouvillonnages nasaux pratiqués chez
tous les animaux concernés par l’expérience.
G. IONAS et al. (5) ont émis l’idée que la colonisation secondaire du
parenchyme pulmonaire se ferait à partir d’un portage nasal préalable du germe
sans pour autant que celui-ci fasse partie intégrante de la flore normale ; du reste,
cette aptitude n’est pas reconnue à toutes les souches de M. ovipneumoniae.
L’aflatoxine aurait-elle eu une action favorisante sur la colonisation du
tractus respiratoire par M. ovipneumoniae, nous le pensons.
De plus, l’usage de l’acétate de thallium pourrait avoir eu un effet favorable
sur son développement in vitro, soit en modulant l’interférence microbienne en
faveur de M. ovipneumoniae au détriment de germes saprophytes, soit en minimisant
un éventuel effet inhibiteur de la pénicelline G parfois observé sur certaines espèces
de Mycoplasmes.
Quant au rôle exact joué par M. ovipneumoniae dans l’apparition des
symptômes observés, l’étude du pouvoir pathogène par la reproduction expérimentale
de la maladie chez les Petits Ruminants sera menée ultérieurement, avec implication
ou non de facteurs stressants notamment, l’usage de toxines d’Aspergillus de
diverses espèces.
?‘
*4 D
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B I B L I O G R A P H I E
1 - ALLEY (M.R.), QUILAN (J.R.) and CLARKE (J.K.) - The prevalence of Mycoplasma
ovipneumoniae and Mycoplasma arginini in the respiratory tract of
sheep.
W.Z. Vet. J., 1975, 23 : 137-141
-
2 - ANONYME : Mycoplasmes et Mycoplasmoses des Ruminants. Documents techniques
Service de Pathologie infectieuse, IEMVT/CIRAD ; 10, Rue Pierre
Curie, 94704 - MAISONS-ALFORT, Juin 1985, 82 pages.
3 - DOUTRE (M. P. ) et PERREAU (P. ) - Le portage de Pasteurella sp. et de Mycoplasma
arginini chez les moutons sains au Sénégal.
Rev. Elev. Méd. vét. Pays trop., 1981, 34 (4) : 365-368.
-
DOUTRE (M. P. ) et PERREAU (P. ) - Le portage de Pasteurella sp. et de Mycoplasma
arginini chez la chèvre au Sénégal.
Rev. Elev. Méd. vét. Pays trop., 1983 36 (1) : 11-14.
-
IONAS ( G . ) , M E W ( A . J . ) , A L L E Y ( M . R . ) , C L A R K E ( J . K . ) , R O B I N S O N (A-J.)
a n d MARSHALL ( R . B . ) - Colonization of the respiratory tract of lambs by strains
of Mycoplasma ovipneumoniae. Veterinary Microbiology , Vol. 10,
no 6, Déc. 1985 ; 533-539.