INSTI?s_rr sw SDFRECHERCf?ES AGRICOLES (I.S.R.A.) ...
INSTI?s_rr sw SDFRECHERCf?ES
AGRICOLES (I.S.R.A.)
---w---w---
LdBORATOIRE NATIONAL DF L'ELEVAr-E
ETDERFCHERCHES VETERINAIRES
DAKAR-MM
DTW?STIE?ILITE IN VITRO ;ELON
TILLBY ET TERRY
REF.
No llO/PHYSIO
Décembre 1983
DIGESTIBILJTE IN VITRO S
La méthode de digestibilité in vitro util:
1'EIlevage de Dakar est celle de TTLLEY et
difiée pcw la rendre plus rapide et pour
des rGkultats.
PRINCIPE
La méthode de TILLEY et TFRRY a été mise c.
LAND RESEARCH INSTlTT.LL'E. File comprend 2 t
organismes du rumen suivie d'une digestion
cette digestion pepsique complète la diges
rumerl.
- 2 fioles jaugGes de 2 litres
- 1 éprouvette ,grad&e de 2 litres
- 1 système d?aspiration du jus de rumen (
- 2 bacs + 8 portoirs en altuglas
- 2 agitzteurs thermostat&
- ltherwmètre
- Béchers gradues de 59 ou 193 cm'
- 64 tubes de digestion (hauteur : 12Omm
- 64 bouchons un mu
pour tube ci--,dessl
plastique fendu à la lme de rasoir)
- 1 bouteille de paz carbonique
- 1 balance au l/lO mg
- 28 capsules en silice (diamètre : 55 mm *
- 1 étuve,
- 1 four à calcination,
- 64 creusets en alundum porosité large (di
- 1 pince à creuset
- 1 pinceau 2 balance
- 1 m3.k pou.32 pesée
- 2 dessicateurs
- 8 fioles à vide avec bouchon, allonge et tcollerette en caoutchouc
-- 1 pompe à vide,
.
I
..O / ..,
Le jour de lyemploi, il faut ajouter 1 cm3 de la solution E à 1.000 cm3
de la solution R.
1
%ifier le pY qui doit être situé entre 6,8 et 7,O.
2) Solution de pepsine
Cette solution doit ê.t~e I+$arée au mom#nt de lîemploi :
Pepsine 1 : 10,000
/
. d . . D a D <,
D * . 0 } . . l D . a i D i II
aO1DOD.Oa.O
12
fz
ccmp16te.r à 500 cm3‘avec de lieau distil@e.
3) Solution d'acide chlorhydrique dilué i
--- -/
- Acide chlorhydrique concentti 2 37 % i: 2@0 cm3
- Comp@ter à 1.000 cm3 avec de l'eau bi-distillge.
i
ZODE Ol?EBATOIT?F:
1
I
1) Faire barbotter un volume l@kement s-$&ieur C 4 litres de la sol.~-.
tion P précédente avec du gaz carbonic~e pendant au moins Xl knutes à
39T 0
2) F'r@lèvement de jus de rumen
Sur 2 ou 3 bovins Fistu& du rumen, p+lever environ i litre de jus de
rumen, Les bovins fistulés doivent recelToir une ration ccnstante Mi-
ment LD du moulin). L'abreuvement et l'/alimentation des donneurs doivent
être interrompus au moins 1 heure avanti le prflèverrent de jus de rumen,
Le jus de rumen ne doit pas être prélevé trop bas dans le rwmen. k jus
de rumen wS?levG est fi.16 sur 4 couch s de Eaze. Dans 2 fioles de 2
litres, placer 400 cm'
Ii
de jus de rumen /ans chaque fiole * ajouter 2 ml
de la solution R 2 chacune des fioles et compl"ter à 2 litres avec la
solution A. Faire barbotter le contenu ies 2 fioles avec du raz carbo-
nique pendant un minimw do 30 minutes
. .
$ 39*C. Vérifier le $! qui doit
!*
se situer entre 6,8 et 7,0,
rnQ@E : s'il est imp-xsible d'utilisp tidiatement le jus de rumen,
il faut conserver ce jus à 39*C dans un]flaccn bouchg.
I
3) Digestion avec le jus de rumen
Après séchaFe! les échantillons à teste+ sont broyés au broyeur GOK!W?D
(grille de 1 mm). lks déterminations deila matière sèche et de la matière
orpaniaue
_ I
sont effectuées sur ces ikhan ilions.
if1
Placer environ 0,5 p exactement pes& dans les tubes 2 dicestion. Ajouter
rapidement 50 KJ. du &lange salive + jus de rumen, boucher et mettre à
!
incuber pendant 48 heures 3 39*C, 8 tubes ne contenant pas dvGchantillon
mka'seulemnt le r&larwe jus de rumen + salive artificielle sont r&ar-
tis dans les 2 bacs thermxtatés. Veiller, pendant ces 48 heures? 2 ce que
des particules d'échantillons ne se collent pas aux parois. &iter douce-
i. r
ment Chaque tube deux fois pa2? jour (-une foi+ le mtin. une fois le soir).
VSrifier ~&uS2ren?cnt la te&ra-ture gui do$.-t rester fixée j 390 k O,ZOC.
Kgestion par la pepsine en solution acide !
a.--e-- /
Apr& les 48 heures de digestion par le &ldge salive + jus de mn,
ajouter directement dans chaque tubc 4 cm" de la solution d'acide chlo-
phy&ique dilue DOW bloquer l?activité bactérienne (laisser couler le
10; du tube pour r!ettoyer les parois). Ajoufer ensuite 5 ml de solution
de pepsine par tube. Reboucher les tubes et laisser à 39OC pendant 48
heures o Agiter doucement chaque tube deux fo+ par jour (une fois le ma-
tin et une fois le soir),
l
?iJtration
#
-.--
.+Y-& les 43 heures de dicrestion pepsique, filtrer le contenu des tubes
sur des creusets en alundum mont& sur des fioles à vide reliees 2 une
pomx à vide (les creusets auront pr&lablem&t été ta&s après calcina-
tion et refroidissement dans un dessicateur).i 1
TAS creusets f -&sidu sec sont s@ch& une nu& ?! lO3OC. Laisser refroidir
d?ms un dzssicateur et peser. Calciner le crelset + &sidu sec pendant
au mins deux heures. Laisser re.fmidir dans un dessicateur et peser.
m-tière sèche de l'échantillon m p/kp: brut
/
matière or,mniaue de l'&hantillon en cbkp sec
prise d'essai en F brut (= (capsule + 6ihantillon)-capsule vide)
&sidu sec en ,a = (creuset + r&idu sec\\ - (creuset + r&idu sec
-&mir?)
&siclu sec témoin en F (identique à R S\\mis concerne les tubes ne
contenant aue le n-&lanFe jus de rumen +:Salive artificielle)
Ssidu orp;aniquc en p = (creuset + ~sic/u sec) - (creuset + cendres)
résidu omanique t&min en g (identique 2 R 0 mais concerne les
tubes ne contenant que le m%nge jus de runien f salive Lar$ificielle)
digestibilite de la matière sache en %
digestibilité de la mati&e organique en %
. .
“.
5
100
-b.I_d
??EYA?OWS :
-.-
3.) Calendrier des onérations
..--
I
Lundi
: 8 h 30
: _,~$1 de la salive : batbottage 2 39OC sous CO2 de
la salive I
9 h 30 : +%v~nt du jus d/z rumen 0 pH de ce jus :
~r¶tion du rklan~e salive + jus de rumen ;
10 h u1 1.1, h 30 : pr$zation des tube$ ex$rixtentaux et mise en
i,ncubztion 3 ~qcT
L,.
4) * '
&ification de la t&&Wure (matin et soir) :
i
witaticn
c'
des tubes (une fois le n-Min., une fois
l
le soir) Q
peser Les creusets + ksidus calcin& de la se.-
maine ?r&6dente.
- Pkrdi
: Grification de la tempbratu~ (matin et soir) ;
aqitation des tubes (une fois [le matin, une fcis le soir).;
-- krcredi : Ajouter FIc.1 9 pepsine ;
I
v&ification de la temp&zture~ et a.@tation des tubes
(cf. ci-dessus)
-= Jeudi :
VGrification de la te~érature\\ et agitation des tubes.
=h. Vendredi :
Filtration des creitisets et mise à 1'6tuve de ces creusets ;
d6t&nation des rratières sèches et organiques des &~XI-
tillons de Za prochaine serie.'z1
.co / . . .
-,
- Samedi : Pes& des creusets + &sidu sec :;
pesée des &hantillons de la proc@xCne série y
calcination des creusets + &sidG sec..
2) F~hantillons-r&x%itions
-_--
/
Chaque série comprend 64 tuks r+artis en 2 FS themostatés soit 32
tubes ?ar bac se rtrpartissafit de la rmni&e s/Avante :
es 4 tubes t&-xCns !salive + ius de rum)
-. '28 tubes exp&$mmtaux pur $4 &hantillons~ (soit 2 tubes/&hantillon/
bac).
SI..T l.es 14 échantillons, il est forkant souhaitable dzinclure un &&an-
I
tillon témin au'on Dlacera dCans chaque skie 3 tout au long de lyan&e ;
ceci Derme-t de vkifier la rqmductibilit6 dfs r&ulta-ts drme s&pie à
une autre ; on peut ainsi C%xiner les sikiesidont les r&ultats du
fourrage tkmin s'&icment des &sultats habituels+
TES II+ khcantillons ci-dessus sont test& in +itro sur au moins 2 semai-
nes cons&utives : un 6chLantillon est ainsi testé sur 8 tubes (2 tubesx
2 bacs x 2 semines).
/
,
AGRICOLES (I.S.R.A.)
---w---w---
LdBORATOIRE NATIONAL DF L'ELEVAr-E
ETDERFCHERCHES VETERINAIRES
DAKAR-MM
DTW?STIE?ILITE IN VITRO ;ELON
TILLBY ET TERRY
REF.
No llO/PHYSIO
Décembre 1983
DIGESTIBILJTE IN VITRO S
La méthode de digestibilité in vitro util:
1'EIlevage de Dakar est celle de TTLLEY et
difiée pcw la rendre plus rapide et pour
des rGkultats.
PRINCIPE
La méthode de TILLEY et TFRRY a été mise c.
LAND RESEARCH INSTlTT.LL'E. File comprend 2 t
organismes du rumen suivie d'une digestion
cette digestion pepsique complète la diges
rumerl.
- 2 fioles jaugGes de 2 litres
- 1 éprouvette ,grad&e de 2 litres
- 1 système d?aspiration du jus de rumen (
- 2 bacs + 8 portoirs en altuglas
- 2 agitzteurs thermostat&
- ltherwmètre
- Béchers gradues de 59 ou 193 cm'
- 64 tubes de digestion (hauteur : 12Omm
- 64 bouchons un mu
pour tube ci--,dessl
plastique fendu à la lme de rasoir)
- 1 bouteille de paz carbonique
- 1 balance au l/lO mg
- 28 capsules en silice (diamètre : 55 mm *
- 1 étuve,
- 1 four à calcination,
- 64 creusets en alundum porosité large (di
- 1 pince à creuset
- 1 pinceau 2 balance
- 1 m3.k pou.32 pesée
- 2 dessicateurs
- 8 fioles à vide avec bouchon, allonge et tcollerette en caoutchouc
-- 1 pompe à vide,
.
I
..O / ..,
Le jour de lyemploi, il faut ajouter 1 cm3 de la solution E à 1.000 cm3
de la solution R.
1
%ifier le pY qui doit être situé entre 6,8 et 7,O.
2) Solution de pepsine
Cette solution doit ê.t~e I+$arée au mom#nt de lîemploi :
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/
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D * . 0 } . . l D . a i D i II
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3) Solution d'acide chlorhydrique dilué i
--- -/
- Acide chlorhydrique concentti 2 37 % i: 2@0 cm3
- Comp@ter à 1.000 cm3 avec de l'eau bi-distillge.
i
ZODE Ol?EBATOIT?F:
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I
1) Faire barbotter un volume l@kement s-$&ieur C 4 litres de la sol.~-.
tion P précédente avec du gaz carbonic~e pendant au moins Xl knutes à
39T 0
2) F'r@lèvement de jus de rumen
Sur 2 ou 3 bovins Fistu& du rumen, p+lever environ i litre de jus de
rumen, Les bovins fistulés doivent recelToir une ration ccnstante Mi-
ment LD du moulin). L'abreuvement et l'/alimentation des donneurs doivent
être interrompus au moins 1 heure avanti le prflèverrent de jus de rumen,
Le jus de rumen ne doit pas être prélevé trop bas dans le rwmen. k jus
de rumen wS?levG est fi.16 sur 4 couch s de Eaze. Dans 2 fioles de 2
litres, placer 400 cm'
Ii
de jus de rumen /ans chaque fiole * ajouter 2 ml
de la solution R 2 chacune des fioles et compl"ter à 2 litres avec la
solution A. Faire barbotter le contenu ies 2 fioles avec du raz carbo-
nique pendant un minimw do 30 minutes
. .
$ 39*C. Vérifier le $! qui doit
!*
se situer entre 6,8 et 7,0,
rnQ@E : s'il est imp-xsible d'utilisp tidiatement le jus de rumen,
il faut conserver ce jus à 39*C dans un]flaccn bouchg.
I
3) Digestion avec le jus de rumen
Après séchaFe! les échantillons à teste+ sont broyés au broyeur GOK!W?D
(grille de 1 mm). lks déterminations deila matière sèche et de la matière
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_ I
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if1
Placer environ 0,5 p exactement pes& dans les tubes 2 dicestion. Ajouter
rapidement 50 KJ. du &lange salive + jus de rumen, boucher et mettre à
!
incuber pendant 48 heures 3 39*C, 8 tubes ne contenant pas dvGchantillon
mka'seulemnt le r&larwe jus de rumen + salive artificielle sont r&ar-
tis dans les 2 bacs thermxtatés. Veiller, pendant ces 48 heures? 2 ce que
des particules d'échantillons ne se collent pas aux parois. &iter douce-
i. r
ment Chaque tube deux fois pa2? jour (-une foi+ le mtin. une fois le soir).
VSrifier ~&uS2ren?cnt la te&ra-ture gui do$.-t rester fixée j 390 k O,ZOC.
Kgestion par la pepsine en solution acide !
a.--e-- /
Apr& les 48 heures de digestion par le &ldge salive + jus de mn,
ajouter directement dans chaque tubc 4 cm" de la solution d'acide chlo-
phy&ique dilue DOW bloquer l?activité bactérienne (laisser couler le
10; du tube pour r!ettoyer les parois). Ajoufer ensuite 5 ml de solution
de pepsine par tube. Reboucher les tubes et laisser à 39OC pendant 48
heures o Agiter doucement chaque tube deux fo+ par jour (une fois le ma-
tin et une fois le soir),
l
?iJtration
#
-.--
.+Y-& les 43 heures de dicrestion pepsique, filtrer le contenu des tubes
sur des creusets en alundum mont& sur des fioles à vide reliees 2 une
pomx à vide (les creusets auront pr&lablem&t été ta&s après calcina-
tion et refroidissement dans un dessicateur).i 1
TAS creusets f -&sidu sec sont s@ch& une nu& ?! lO3OC. Laisser refroidir
d?ms un dzssicateur et peser. Calciner le crelset + &sidu sec pendant
au mins deux heures. Laisser re.fmidir dans un dessicateur et peser.
m-tière sèche de l'échantillon m p/kp: brut
/
matière or,mniaue de l'&hantillon en cbkp sec
prise d'essai en F brut (= (capsule + 6ihantillon)-capsule vide)
&sidu sec en ,a = (creuset + r&idu sec\\ - (creuset + r&idu sec
-&mir?)
&siclu sec témoin en F (identique à R S\\mis concerne les tubes ne
contenant aue le n-&lanFe jus de rumen +:Salive artificielle)
Ssidu orp;aniquc en p = (creuset + ~sic/u sec) - (creuset + cendres)
résidu omanique t&min en g (identique 2 R 0 mais concerne les
tubes ne contenant que le m%nge jus de runien f salive Lar$ificielle)
digestibilite de la matière sache en %
digestibilité de la mati&e organique en %
. .
“.
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??EYA?OWS :
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3.) Calendrier des onérations
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I
Lundi
: 8 h 30
: _,~$1 de la salive : batbottage 2 39OC sous CO2 de
la salive I
9 h 30 : +%v~nt du jus d/z rumen 0 pH de ce jus :
~r¶tion du rklan~e salive + jus de rumen ;
10 h u1 1.1, h 30 : pr$zation des tube$ ex$rixtentaux et mise en
i,ncubztion 3 ~qcT
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4) * '
&ification de la t&&Wure (matin et soir) :
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des tubes (une fois le n-Min., une fois
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peser Les creusets + ksidus calcin& de la se.-
maine ?r&6dente.
- Pkrdi
: Grification de la tempbratu~ (matin et soir) ;
aqitation des tubes (une fois [le matin, une fcis le soir).;
-- krcredi : Ajouter FIc.1 9 pepsine ;
I
v&ification de la temp&zture~ et a.@tation des tubes
(cf. ci-dessus)
-= Jeudi :
VGrification de la te~érature\\ et agitation des tubes.
=h. Vendredi :
Filtration des creitisets et mise à 1'6tuve de ces creusets ;
d6t&nation des rratières sèches et organiques des &~XI-
tillons de Za prochaine serie.'z1
.co / . . .
-,
- Samedi : Pes& des creusets + &sidu sec :;
pesée des &hantillons de la proc@xCne série y
calcination des creusets + &sidG sec..
2) F~hantillons-r&x%itions
-_--
/
Chaque série comprend 64 tuks r+artis en 2 FS themostatés soit 32
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es 4 tubes t&-xCns !salive + ius de rum)
-. '28 tubes exp&$mmtaux pur $4 &hantillons~ (soit 2 tubes/&hantillon/
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SI..T l.es 14 échantillons, il est forkant souhaitable dzinclure un &&an-
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tillon témin au'on Dlacera dCans chaque skie 3 tout au long de lyan&e ;
ceci Derme-t de vkifier la rqmductibilit6 dfs r&ulta-ts drme s&pie à
une autre ; on peut ainsi C%xiner les sikiesidont les r&ultats du
fourrage tkmin s'&icment des &sultats habituels+
TES II+ khcantillons ci-dessus sont test& in +itro sur au moins 2 semai-
nes cons&utives : un 6chLantillon est ainsi testé sur 8 tubes (2 tubesx
2 bacs x 2 semines).
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