INSTITUT D’ELEVAGE ET DE MEDECINE VETERINAIRE DES...
INSTITUT D’ELEVAGE ET DE MEDECINE
VETERINAIRE DES PAYS TROPICAUX
REVUE D’ÉLEVAGE
ET DE
MÉDECINE VÉTÉRINAIRE
DES PAYS TROPICAUX
Etude immunoélectrophorétique du sérum
de zébu Gobra au Sénégal
Possibilité de variations saisonnières
qualitatives
par J. ROUMEGOUX et M. P. DOUTRE
Tome XXIV (nouvelle série)
No 2 - 1971
tit
VIGOT FRERES, EDITEURS
23, rue de I’Ecole-de-Médecine, Paris-VI”
Rev. Elev. Méd. vét. Pays trop., 3971, 24 (2): 203-13
Étude immunoélectrophorétique du sérum
de zébu Gobra au Sénégal
Possibilité de variations saisonnières qualitatives
par J. ROUMEGOUX et M. P. DOUTRE (*)
RESUME
Après avoir fourni une description des techniques employées : immu-
noélectrophorèse et gel-filtration sur colonne de Sephadex G 200., les
auteurs présentent l’image immunoélectrophorétique du sérum de zébu
Gobra, en précisant la nature des 35 4ignes de précipitation obtenues.
L’étude se termine par des considérations sur la possibilité d’éventuelles
variations saisonnières des protéines sériques. Les résultats ne laissent
apparaître aucune différence d’ordre qualitatif entre des prélèvements
recueillis en fin de saison humide et ceux récoltés en fin de saison sèche.
En particulier, les trois immunoglobulines : IgG, IgM et IgA se retrouvent
sur toutes les images immunoélectrophorétiques de l’ensemble des sérums
utilisés au cours du présent travail. Par contre, sur le plan quantitatif, on
note une diminution significative du taux des protéines totales pour les
sérums obtenus en fin de saison sèche. Cette dernière observation est
confirmée par une étude électrophorétique qui doit faire l’objet d’une
publication prochaine.
En 1965, au Tchad, PROVOST, BORRE-
l’étude qualitative ont été rapportés dans la
DON et QUEVAL mettent en évidence une
présente publication.
hypogammaglobulinémie essentielle chez des
En 1968, I.S.WARD-COX, en Afrique du
zébus d’Afrique centrale (15).
Sud, montre l’apparition progressive des immu-
A la suite de ces observations, une étude
noglobulines chez le veau nouveau-né (19). Le
a été effectuée au Sénégal sur le zébu Gobra.
même auteur, en 1969, révèle par immunoélec-
trophorèse une agammaglobulinémie chez quel-
Ce travail a été réalisé en deux temps :
ques bovins (20).
1. Qualitativement : en utilisant conjointement
En 1969, W. PENHALE et G. CHRISTIE
la chromatographie sur colonne de Sephadex
comparent au cours d’une étude quantitative
G 200 et l’immunoélectrophorèse.
le taux des immunoglobulines sériques chez les
2. Quantitativement : par l’analyse électropho-
bovins d’Europe (races : Ayrshire, Frisonne,
rétique sur acétate de cellulose.
Jersey, Guernesey et Shorthorn) et chez le zébu.
Ce dernier travail fera l’objet d’une note
Les résultats obtenus montrent une augmenta-
séparée. Seuls les résultats obtenus lors de
tion appréciable de l’IgG et de l’IgM chez le
bétail d’origine africaine (l) (12).
A notre connaissance, il n’existe pas de tra-
(*) Institut dElevage et de Médecine Vétérinaire
vaux donnant un diagramme complet de déter-
des Pays Tropicaux, Maisons-Alfort. - Laboratoire
national de 1’Elevage et de Recherches vétérinaires,
Dakar-Hann (Sénégal).
(1) Nous utilisons la nomenclature officielle.
- 203 -
mination des différentes lignes de précipitation
Les injections sont faites au rythme de 2 par
constituant l’image immunoélectrophorétique
semaine :
d’un sérum de bovin. Nous avons donc tenté
-- 1“’ semaine : 0,.5 ml et 1 ml;
dans un premier temps d’identifier les différents
arcs afin d’éviter par la suite toute erreur
- 2” semaine :
2 ml et 4 ml;
*
d’interprétation. Dans un deuxième temps, nous
- 3” semaine :
8 ml et 16 ml.
avons entrepris une étude comparative de
Le premier prélèvement de sang est effectué
sérums récoltés, dans le Ferlo, en fin de saison
,
10 jours après la dernière injection. Pour pal-
des pluies et en fin de saison sèche, afin de
lier aux accidents anaphylactiques éventuels,
rechercher d’éventuelles variations liées à l’état
chaque injection d’antigène est précédée d’un
d’entretien des animaux.
traitement au phénergan (I.M.).
5
En principe, l’animal continue à produire des
1. MATERIEL ET METHODES
anticorps pendant plusieurs mois. Cette mé-
thode permet d’obtenir un sérum d’âne anti-
zébu qui révèle parfaitement les immunoglo-
A. Récolte des sérums objet de l’étude
bulines.
Le sang est prélevé aseptiquement à la jugu-
laire. Après coagulation, le sérum est centri-
r>) Lapins
fugé et réparti dans des ampoules à sceller à
Première méthode
raison de 3 ml par ampoule.
Une technique identique d’immunisation a
Les sérums ainsi conditionnés sont stockés
été utilisée.
à -200 c.
- Première injection : quantité pour deux
B. Préparation des an&sérums
lapins :
- Sérum de zébus . . . . . .
0,s ml
Plusieurs techniques ont été utilisées avec des
résultats différents :
- P.B.S. . . . . . . . .
1,5 ml
a) Ane
- Adjuvant complet de Freud . .
2,0 ml
‘c
Une émulsion est préparée avec les consti-
On injecte 0,l ml de l’émulsion sous chaque
tuants suivants :
coussinet plantaire. Le reste est inoculé dans
chaque cuisse par voie intramusculaire.
0
- Sérum de zébu . . . . . .
20 ml
- P.B.S. . . . . . . . . .
10 ml
- Injections ultérieures : 25 jours plus tard,
par voie intraveineuse de la préparation anti-
- Adjuvant complet de Freud . .
20 ml
génique suivante :
Tout d’abord, 20 ml de cette émulsion sont
- 0,3 ml de sérum;
injectés par voie intramusculaire profonde en
- 4,7 ml de P.B.S.
répartissant la dose en 4 points différents (enco-
lure et cuisses). Ensuite, 2.5 jours après, débute
On ajoute 2,3 ml de bicarbonate de soude N.
une série de 6 injections intraveineuses d’anti-
puis goutte à goutte en agitant 5 ml d’une solu-
gène. Ce dernier est préparé de la façon sui-
tion à 10 p. 100 d’alun de potassium. La solu-
vante :
tion est abandonnée à 4) C pendant une nuit,
- 3 ml de sérum;
puis centrifugée. Le précipité est repris dans
- 47
8
ml de PBS.
ml de P.B.S.
On ajoute 23 ml de bicarbonate de sodium N,
Injections renouvelées 2 fois par semaine
puis goutte à goutte, en agitant 50 ml d’une
suivant le rythme :
solution à 10 p. 300 d’alun de potassium (AlK
- 1°C semaine : 0,05 ml et 0,l ml;
(SO,) 2, 12 HzO). La suspension est aban-
- 2” semaine : 0,15 ml et 0,3 ml;
donnée à 40 C pendant une nuit, puis centri-
- 3” semaine : 0,4 ml et 0,8 ml.
fugée à froid 30 mn à 3.000 t/mn. Le précipité
est enfin remis en suspension dans 80 ml de
Le sang des lapins est récolté 15 jours après
PBS.
la dernière injection.
- 204 -
Cette méthode couramment utilisée pour
C. Géloses-tampons
l’obtention de sérums lapin ami-humains n’a
a> Immuno-électrophorèse
donné que des résultats médiocres dans la pré-
Les gels sont préparés soit avec le Special
paration de sérum anti-zébu. Il semble que les
Agar Noble (Difco) soit avec l’agarose. Le
mauvais résultats obtenus soient dus à une trop
Special Agar Noble (Difco) est constitué par
faible quantité de sérum de zébu dans la consti-
un mélange d’agarose et d’agaropectine.
tution du mélange antigénique.
L’agaropectine porte des groupements acides
Deuxième méthode
sulfoniques responsables d’une partie des pro-
Le meilleur sérum anti-bovin total a été pro-
priétés du gel d’agar. Ainsi l’IgG, l’IgA et
duit par injections par voie intraveineuse de
I’IgM, soumis à un fort courant d’électro-
sérum de zébu non traité à des lapins.
endosmose, migrent vers le pôle négatif. L’aga-
Rythme des injections :
rose, au contraire, n’ayant pas ces groupements
7 injections de 2 ml de sérum de zébus à acides, possède une inertie chimique relative
2 jours d’intervalle dans la veine marginale de
et donne lieu à un faible courant d’électro-
l’oreille. La saignée est pratiquée 1.5 jours après
endosmose au cours de l’électrophorèse, ce qui
la dernière injection. Chaque lapin fournit en
peut présenter un avantage notamment dans
moyenne 50 ml de sérum anti.
l’étude des immunoglobulines (9). Si l’agarose
donne des lignes de précipitation plus nettes,
De cette façon, un excellent sérum anti don-
plus nombreuses et mieux réparties, la présence
nant 15 lignes de précipitation a été obtenu.
du puits de départ dans la concavité de l’arc
Remarque
de I’IgM peut être gênante pour l’étude parti-
L’utilisation d’un sérum de zébu normal pour
culière de cette globuline.
l’hyperimmunisation des lapins ne permet pas
De plus, la multiplication des arcs est aussi
d’obtenir une bonne ligne de précipitation de
un facteur de complication. En fait, le choix
l’IgM.
de l’un ou l’autre des deux gels sera fonction
C’est la raison pour laquelle ont été utilisés
des fractions auxquelles on s’intéresse.
soit des sérums d’animaux trypanosomés riches
Le tampon utilisé, qui a donné les meilleurs
en IgM, soit un sérum de zébu hyperimmunisé
résultats, répond à la composition suivante :
au préalable au moyen d’une culture de Salmo-
1
- Véronal acide
nella typhimurium formolée. L’injection de
l’antigène 0 des salmonelles provoque en effet
(0,Ol M) . . . 1,842 g
une forte élévation de 1’IgM.
- Véronal sodé
i
(0,05 M) . . . 10,309 g pH 8,6
Pour ce faire, le processus suivant a été
- Acétate de sodium,
adopté : 2 inoculations par semaine par voie
3 Hz0 (0,05 M) .
6,804 g
intraveineuse à doses progressivement crois-
- Eau distillée q.s.p.
1.000 ml /
santes : 5 ml, 10, 15, 20, . . . 75, 80 pendant
2 mois (récolte du sérum 15 jours après la der-
Le gel, support de l’immuno-électrophorèse,
nière injection).
est préparé dans les proportions suivantes :
Le sérum ainsi obtenu, inoculé à des lapins,
- Agar noble . . . . . . . 1 g
a permis de préparer un sérum lapin anti-
- Tampon . . . . . . . .
25 ml
zébu total révélant particulièrement bien 1’IgM.
- Eau distillée . . . . . . .
75 ml
Troisième méthode
Ces proportions sont les mêmes si on utilise
L’hyperimmunisation de lapin au moyen des
l’agarose. Le gel, ainsi préparé, est réparti en
fractions 1 (IgM) et IV (IgG) obtenues par
tubes de 20 ml, conservés à + 4” C.
chromatographie sur colonne de Sephadex
b) Chromatographie
G 200 a permis de préparer des immunsérums
Elle est réalisée sur colonne de Sephadex
qui, après épuisement par un sérum de fœtus
ci 200 (“).
de veau, révèlent exclusivement I’IgG et
l’IgM (‘).
L’éluant est une solution tampon dont la
composition est la suivante :
(‘) Industrie Biologie Française, S.A., 92-Genne-
Villiers.
(:‘) Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala, Suède.
- 205 -
- Tris . . . . .
7% g
L’éluant est envoyé sur la colonne par une
- NaCI . . . . . 58,45 g
i PH 850 pompe électrique.
- HC1 (0,033 N) q.s.p.
1 .OOO ml !
A la sortie de la colonne, un absorptiomètre
à UV (280 m$, couplé à un enregistreur, per-
D. Techniques
met de détecter les différentes fractions qui sont
a) Immunoélectrophorèse
ensuite réparties en tubes de 5 ml par le col-
Ont été utilisées la microméthode sur lames
lecteur de fractions Beckman muni d’un comp-
de 2,5 X 7,s cm et la macrométhode sur
teur de gouttes.
lames de 16 X 4 cm (21).
A la fin de la chromatographie, l’enregistreur
L’appareillage Celman pour immunoélectro-
a inscrit sur bande de papier une courbe à
phorèse a été employé tout au long du présent
3 pics (voir schéma 1) qui matérialise la s&pa-
travail (générateur de courant continu donnant
ration des différentes fractions sériques. Ainsi,
une tension de 0 à 500 V).
dans l’exemple choisi, la courbe montre que
la totalité du sérum a filtré entre les tubes 17
Les différents stades de la méthode corres-
et 61 du collecteur. Dans cet intervalle, les
pondent à la description classique : dégraissage
tubes ont été regroupés en 7 fractions :
des lames, coulage de la gélose, découpage à
- 1”’ fraction : tubes 17 à 3 9;
l’emporte-pièce des puits de départ et de la
gouttière des immun-sérums (portoir de 6 la-
- 2” fraction : tubes 20 à 27;
mes), dépôt du sérum à étudier. L’électropho-
- 3” fraction : tubes 27 à 36;
rèse est menée sous 220 V pendant 60 mn pour
- 41’ fraction : tubes 37 à 44;
la microméthode et 140 mn pour la macromé-
thode. On procède ensuite à l’application de
- Y’ fraction : tubes 45 à 48;
l’immunsérum. L’incubation se fait en cham-
- @ fraction : tubes 49 à 52;
bre humide pendant 24 à 36 h. Après lavage
- 7’! fraction : tubes 53 à 61.
(24 h en sérum physiologique, 1 h en eau distil-
lée) et séchage (à l’étuve à 370 C), la coloration
Chaque fraction est ensuite dialysée contre de
est réalisée au noir-amide en solution méthanol-
l’eau distillée à + 4’) C, pour éliminer les sels
acétique pendant 5 mn. L’excès de colorant est
du tampon, puis lyophilisée.
éliminé par une solution de rinçage. Les lames
La dialyse et la concentration des fractions
sont enfin lavées à l’eau courante et séchées.
obtenues par la chromatographie peuvent être
Solution de rinçage :
réalisées plus rapidement en un seul temps par
la technique de dialyse sous vide (schéma 2).
- Alcool méthylique . . . .
5 vol.
En 12 h. à + 41’ C, la concentration est environ
- Acide acétique . . . . .
1 vol.
de 10 fois.
- Eau distillée . . . . . .
5 vol.
Solution de coloration :
II. IMAGE
- Noir amide . . . . . .
6g
IMMUNO-ELECTROPHORETIQUE
- Solution de rinçage . . . . 1.000 ml
DU SERUM DE ZEBU GOBRA
b) Chromatographie
L’immuno-électrophorèse d’un sérum de
Conduite selon les indications de HOGMAN
zébu Cobra réalisée dans les conditions décrites
et KILLANDER (10).
ci-dessus a permis d’obtenir 15 lignes de préci-
pitation.
Le fractionnement des sérums de zébu a été
effectué sur colonne de Sephadex Ci 200 (gel
de dextrane).
1. Identification des différents arcs
Le gel de Sephadex est placé dans une a) Fractionnemrnt d’un sr’rum
colonne de 800 mm de hauteur et 30 mm de
La filtration sur gel de dextrane (Sephadex
diamètre. Après s’être assuré de la verticalité
G 200) sépare les protéines sériques selon leur
rigoureuse de la colonne, le sérum est déposé
taille, leur vitesse de migration dans le gel
uniformément à la partie supérieure du gel à
étant pour partie directement proportionnelle
raison de 3 ml.
à la grosseur de la molécule.
- 206 -
Schéma I - Courbe de fractionnement d’un Jrum de zt%u sur Sephadex 6.200.
Chaque fraction obtenue par chromatogra-
La photographie de l’image immunoélectro-
phie est comparée sur la même préparation
phorétique de chacune des 7 fractions est repro-
avec le sérum total. Quelques lignes parfaite-
duite dans les clichés no 1 à 7 avec indication
ment visibles sur les lames sont difficilement des différents constituants dont la position a
rendues par les photographies.
pu être figurée.
Photo 2
1. IgM
2 . (Y 2 macroglobuline
3 . Transférine
4 . fi-lipoprotéine
5 . Céruloplasmine
- 207 -
c
‘.
l
b) Préparation de l’lgM
On centrifuge pendant 10 mn à 2.000 g,
La préparation de 1’IgM pure par filtration
après une demi-heure de repos.
sur Sephadex implique l’élimination de l’a 2-
Le précipité est lavé 2 fois avec la solution
macroglobuline ainsi que de la lj-lipopro-
d’acide borique puis il est repris dans 3 à 4 ml
téine (10).
du tampon Tris-H Cl-Na Cl de pH = 8,O.
- Précipitation de la lipoprotéine :
A 10 ml d’un sérum normal, on ajoute 0,4 ml
La filtration est enfin réalisée sur la colonne
d’un solution de sulfate de dextrane à 10 p. 100,
de Sephadex G 200.
puis 1 ml d’une solution de Ca Cla,M. On agite
c) Autres immunoglobulines
et après 15 mn de repos, on centrifuge 10 mn
à 6.000 g. On recueille le surnageant. L’excès
Les autres immunoglobulines ont été pré-
de Ca Cl- est éliminé par dialyse contre de
parées par épuisements successifs des sérums
l’eau distillée.
de zébus par un sérum de lapin hyperimmunisé
avec un sérum de fœtus de veau dépourvu
- Précipitation des euglobulines :
d’IgG et d’IgM. La photo 8 montre l’image
On ajuste le volume de ce surnageant à
immunoélectrophorétique d’un sérum d’em-
200 ml à l’aide d’une solution d’acide borique
bryon de veau à terme manifestement dépourvu
à 7,5 g/litre.
d’IgG et d’IgM (19).
c
d) Colorations spr’cifiques
crite par URIEL (18) pour mettre en évidence
l’action oxydative de la céruloplasmine permet-
Pour la mise en évidence des lipoprotéines,
tent de préciser certaines lignes de précipitation.
on peut utiliser des colorants spécifiques : Oil
Red 0 ou Soudan B.
Seules les colorations spécifiques des lipopro-
téines qui n’offrent pas de difficulté majeure
Des colorations spéciales, comme celle dé-
ont été réalisées dans le présent travail.
- 209 -
2. Lecture d’une lame
- Un antigène est d’autant plus abondant
d’immunoélectrophorèse
que sa ligne de précipitation est moins courbe.
- La ligne de précipitation est floue du côté
Avant d’envisager la lecture d’une lame,
opposé au réactif en excès. Pour avoir des lignes
quatre critères sont à retenir :
nettes, il convient d’ajuster les concentrations
- Un antigène est d’autant plus abondant
respectives d’antisérum et de sérum à étudier.
que sa ligne de précipitation est plus proche
11 est à noter que l’albumine apparaît rare-
de la gouttière des immunsérums.
ment sur les préparations. En réalité, au cours
- L’abondance d’un antigène peut être éva-
du développement, elle est la première à se
luée d’après l’intensité de son précipité, à con-
former, mais elle disparaît ensuite, le précipité
dition que le rapport antigène-anticorps ait une
étant dissout par l’excès d’antigène. Des photo-
valeur bien déterminée. Lorsque l’antigène se
graphies prises en cours d’incubation, sans colo-
trouve en grande quantité, l’excès peut dissou-
ration, montrent très nettement la ligne de pré-
dre le précipité.
cipitation de l’albumine (photo 9).
Photo ?
Photo réalisée en cours d’incubation, sans coloration,
l’arc correspondant à l’albumine est nettement visible.
En conclusion, l’application des différentes
ralement pas sur une même lame, les concen-
techniques décrites ci-dessus ont donc permis
trations respectives de sérum et d’antisérum
d’identifier 15 lignes (photo 10).
doivent être ajustées en fonction des globulines
A noter que les lignes n’apparaissent géné-
à étudier.
Photo 10
1 . IgG lente
4 . IgA
7 . Haptoglobine
10. n. 2-lipoprotéine
13. CI 1 séromucoïde
2 . IgG rapide
5 . Transférine
8 . a 2-macroglobuline
Il. 15 1 A-globuline
14. (1. 1 X-glycoprotéine (?)
3 . IgM
6 . fi-lipoprotéine
9 . Céruloplasmine
12. c1 1 -glycoprotéine
15. Albumine
- 210 -
III. ETUDE DES VARIATIONS
IgG, IgA et IgM sont parfaitement visibles,
SAISONNIERES QUALITATIVES
comme sur la photo 11 par exemple.
c
DES PROTEINES SERIQUES
Sur le plan quantitatif, autant que l’on puisse
DU ZEBU GOBRA
en juger en immunoélectrophorèse, il semble
qu’il y ait quelques légères variations indivi-
duelles principalement au niveau des immuno-
1. 115 sérums ont été prélevés au mois de
globulines. Par exemple on voit que le sérum
novembre 1969, en fin de saison des pluies, sur
de la photo 11 est moins riche en IgM. 11 faut
des zébus du Ferlo (Dara). Les animaux, clini-
préciser que le même immunsérum a été utilisé
quement sains, étaient en parfait état d’en-
pour toute la série. De plus, les quantités de
tretien.
sérum et d’immunsérum appliquées au moyen
de micro-pipettes graduées étaient connues et
Du point de vue qualitatif, les images immu-
identiques. Les conditions de travail étant
noélectrophorétiques se sont révélées être par-
rigoureusement définies et reproduites, il est
faitement identiques pour tous les sérums ana-
donc parfaitement possible de faire des compa-
lysés. Dans tous les cas, les immunoglobulines
raisons d’ordre quantitatif.
2. Au mois de mai 1970, 72 sérums ont été
son a été faite avec un même sérum de zébu
recueillis sur des zébus de la même région
prélevé en fin de saison des pluies. Les résultats
(forage de Tatki). A cette époque de l’année,
montrent qu’aucune des immunoglobulines n’a
les animaux présentent un amaigrissement sai-
disparu mais que, par contre, toutes les frac-
sonnier maximal du fait des conditions d’ali-
tions apparaissent moins abondantes. De façon
mentation de semaine en semaine plus difficiles.
constante, la ligne de précipitation de 1’IgG est
moins marquée et plus courte que sur le
L’analyse
immunoélectrophorétique de ces
sérum témoin (ainsi qu’on peut le voir sur la
sérums a été effectuée avec le même immun-
photo 12). De même, l’IgM est beaucoup moins
sérum de lapin. Pour chaque lame, la comparai-
visible. Pour toutes les autres fractions, les arcs
de précipitation sont plus courbes et moins nets,
tuants étant intéressé. Par contre, en aucun
ce qui indique une diminution du taux de la
cas, la disparition complète d’une quelconque
protéine en cause.
fraction n’a été observée, immunoglobulines
L’étude quantitative menée conjointement
comprises.
par la méthode d’électrophorèse sur acétate de
Remerciements
cellulose a permis de confirmer et de chiffrer
c
ce résultat.
Nous tenons à remercier le Professeur MAS-
SEYEFF et ses collaborateurs de la Faculté
En conclusion, le sérum des bovins, en fin
de Médecine de Dakar pour l’aide technique
de saison sèche, présente un abaissement signi-
qu’ils nous ont apportée tout au long de la
ficatif des protéines totales, chacun des consti-
présente étude.
SUMMARY
Immunoelectrophoretic study of Gobra zebu serum in Senegal.
Possibility of qualitative seasonal variation
In a first step, the authors describe the technics and methods which Will
be used a11 along the present work : immunoelectrophoresis and gel fil-
tration chromatography on Sephadex G 200. An immunoelectroohoretic
pattern of Gobra ze’bu serum ;s given with the nomenclature of Bach of
the 1.5 precipitation lines obtained. The studv is achieved with conside-
rations on ahy possible seasonal variation of -serum proteins. The results
show no qualitative difference between samples collected at the end of
the rainy season and those gathered at the end of the dry season. In
particular, the three immunoglobulins are present on the immunoelectro-
phoretic patterns of a11 the sera used alo8g tbe present study. On the other
hand, ors quantitative basis, a significant decrease of total proteins rate is
demonstrated for the sera collected at the end of the dry season. This
last observation is confirmed by an electrophoresis study which Will be
published separately in a further paper.
RESUMEN
Estudio inmunoelectroforetico
del suero de cebh Gobra en Senegal.
Posibilidad de variaciones cualitativas de estaci6n
Los autores describen las técnicas utilizadas : inmunoelectroforesis
y gelosa-filtration sobre columna de Sephadex G 200. Luego, presentan
la imagen inmunoelectroforetica del suero de cebu Gobra, a1 precisar la
es&cia de las 15 Iineas de precipitacion obtenidas. Se acaba e1 estudio
por consideraciones sobre la posibilidad de eventuales variaciones de
estacion de las proteinas sericas. Segtin 10s resultados, no existe ningun
diferencia de orden cualitativo entre las muestras recogidas a1 fin de la
estacion htimeda y las recogidas a1 fin de la estacion seca. Particularmente,
las tres ïnmunoglobulinas : IgG, IgM e IgA se encuentran en todas las
imagenes inmunoelectroforeticas del conjunto de 10s sueros utilizados
durante este estudio. En cambio, desde el punto de vista cuantitativo, se
nota una disminucion significativa de la tasa de las proteinas totales en
10s sueros obtenidos a1 fin de la estacion seca. Se confirma la tiltima
observation por un estudio electroforetico que se publicara proximamente.
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15. PROVOST (A.), BORREDON (C.) et QUE-
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P
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reur dans les enquêtes sérologiques », Rev. Elev.
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Bull. Mém. Fac. mixte Méd. Phurm. D a k u r ,
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New York, London, Academic Press, 1967, 1 et II.
- 213 -
VETERINAIRE DES PAYS TROPICAUX
REVUE D’ÉLEVAGE
ET DE
MÉDECINE VÉTÉRINAIRE
DES PAYS TROPICAUX
Etude immunoélectrophorétique du sérum
de zébu Gobra au Sénégal
Possibilité de variations saisonnières
qualitatives
par J. ROUMEGOUX et M. P. DOUTRE
Tome XXIV (nouvelle série)
No 2 - 1971
tit
VIGOT FRERES, EDITEURS
23, rue de I’Ecole-de-Médecine, Paris-VI”
Rev. Elev. Méd. vét. Pays trop., 3971, 24 (2): 203-13
Étude immunoélectrophorétique du sérum
de zébu Gobra au Sénégal
Possibilité de variations saisonnières qualitatives
par J. ROUMEGOUX et M. P. DOUTRE (*)
RESUME
Après avoir fourni une description des techniques employées : immu-
noélectrophorèse et gel-filtration sur colonne de Sephadex G 200., les
auteurs présentent l’image immunoélectrophorétique du sérum de zébu
Gobra, en précisant la nature des 35 4ignes de précipitation obtenues.
L’étude se termine par des considérations sur la possibilité d’éventuelles
variations saisonnières des protéines sériques. Les résultats ne laissent
apparaître aucune différence d’ordre qualitatif entre des prélèvements
recueillis en fin de saison humide et ceux récoltés en fin de saison sèche.
En particulier, les trois immunoglobulines : IgG, IgM et IgA se retrouvent
sur toutes les images immunoélectrophorétiques de l’ensemble des sérums
utilisés au cours du présent travail. Par contre, sur le plan quantitatif, on
note une diminution significative du taux des protéines totales pour les
sérums obtenus en fin de saison sèche. Cette dernière observation est
confirmée par une étude électrophorétique qui doit faire l’objet d’une
publication prochaine.
En 1965, au Tchad, PROVOST, BORRE-
l’étude qualitative ont été rapportés dans la
DON et QUEVAL mettent en évidence une
présente publication.
hypogammaglobulinémie essentielle chez des
En 1968, I.S.WARD-COX, en Afrique du
zébus d’Afrique centrale (15).
Sud, montre l’apparition progressive des immu-
A la suite de ces observations, une étude
noglobulines chez le veau nouveau-né (19). Le
a été effectuée au Sénégal sur le zébu Gobra.
même auteur, en 1969, révèle par immunoélec-
trophorèse une agammaglobulinémie chez quel-
Ce travail a été réalisé en deux temps :
ques bovins (20).
1. Qualitativement : en utilisant conjointement
En 1969, W. PENHALE et G. CHRISTIE
la chromatographie sur colonne de Sephadex
comparent au cours d’une étude quantitative
G 200 et l’immunoélectrophorèse.
le taux des immunoglobulines sériques chez les
2. Quantitativement : par l’analyse électropho-
bovins d’Europe (races : Ayrshire, Frisonne,
rétique sur acétate de cellulose.
Jersey, Guernesey et Shorthorn) et chez le zébu.
Ce dernier travail fera l’objet d’une note
Les résultats obtenus montrent une augmenta-
séparée. Seuls les résultats obtenus lors de
tion appréciable de l’IgG et de l’IgM chez le
bétail d’origine africaine (l) (12).
A notre connaissance, il n’existe pas de tra-
(*) Institut dElevage et de Médecine Vétérinaire
vaux donnant un diagramme complet de déter-
des Pays Tropicaux, Maisons-Alfort. - Laboratoire
national de 1’Elevage et de Recherches vétérinaires,
Dakar-Hann (Sénégal).
(1) Nous utilisons la nomenclature officielle.
- 203 -
mination des différentes lignes de précipitation
Les injections sont faites au rythme de 2 par
constituant l’image immunoélectrophorétique
semaine :
d’un sérum de bovin. Nous avons donc tenté
-- 1“’ semaine : 0,.5 ml et 1 ml;
dans un premier temps d’identifier les différents
arcs afin d’éviter par la suite toute erreur
- 2” semaine :
2 ml et 4 ml;
*
d’interprétation. Dans un deuxième temps, nous
- 3” semaine :
8 ml et 16 ml.
avons entrepris une étude comparative de
Le premier prélèvement de sang est effectué
sérums récoltés, dans le Ferlo, en fin de saison
,
10 jours après la dernière injection. Pour pal-
des pluies et en fin de saison sèche, afin de
lier aux accidents anaphylactiques éventuels,
rechercher d’éventuelles variations liées à l’état
chaque injection d’antigène est précédée d’un
d’entretien des animaux.
traitement au phénergan (I.M.).
5
En principe, l’animal continue à produire des
1. MATERIEL ET METHODES
anticorps pendant plusieurs mois. Cette mé-
thode permet d’obtenir un sérum d’âne anti-
zébu qui révèle parfaitement les immunoglo-
A. Récolte des sérums objet de l’étude
bulines.
Le sang est prélevé aseptiquement à la jugu-
laire. Après coagulation, le sérum est centri-
r>) Lapins
fugé et réparti dans des ampoules à sceller à
Première méthode
raison de 3 ml par ampoule.
Une technique identique d’immunisation a
Les sérums ainsi conditionnés sont stockés
été utilisée.
à -200 c.
- Première injection : quantité pour deux
B. Préparation des an&sérums
lapins :
- Sérum de zébus . . . . . .
0,s ml
Plusieurs techniques ont été utilisées avec des
résultats différents :
- P.B.S. . . . . . . . .
1,5 ml
a) Ane
- Adjuvant complet de Freud . .
2,0 ml
‘c
Une émulsion est préparée avec les consti-
On injecte 0,l ml de l’émulsion sous chaque
tuants suivants :
coussinet plantaire. Le reste est inoculé dans
chaque cuisse par voie intramusculaire.
0
- Sérum de zébu . . . . . .
20 ml
- P.B.S. . . . . . . . . .
10 ml
- Injections ultérieures : 25 jours plus tard,
par voie intraveineuse de la préparation anti-
- Adjuvant complet de Freud . .
20 ml
génique suivante :
Tout d’abord, 20 ml de cette émulsion sont
- 0,3 ml de sérum;
injectés par voie intramusculaire profonde en
- 4,7 ml de P.B.S.
répartissant la dose en 4 points différents (enco-
lure et cuisses). Ensuite, 2.5 jours après, débute
On ajoute 2,3 ml de bicarbonate de soude N.
une série de 6 injections intraveineuses d’anti-
puis goutte à goutte en agitant 5 ml d’une solu-
gène. Ce dernier est préparé de la façon sui-
tion à 10 p. 100 d’alun de potassium. La solu-
vante :
tion est abandonnée à 4) C pendant une nuit,
- 3 ml de sérum;
puis centrifugée. Le précipité est repris dans
- 47
8
ml de PBS.
ml de P.B.S.
On ajoute 23 ml de bicarbonate de sodium N,
Injections renouvelées 2 fois par semaine
puis goutte à goutte, en agitant 50 ml d’une
suivant le rythme :
solution à 10 p. 300 d’alun de potassium (AlK
- 1°C semaine : 0,05 ml et 0,l ml;
(SO,) 2, 12 HzO). La suspension est aban-
- 2” semaine : 0,15 ml et 0,3 ml;
donnée à 40 C pendant une nuit, puis centri-
- 3” semaine : 0,4 ml et 0,8 ml.
fugée à froid 30 mn à 3.000 t/mn. Le précipité
est enfin remis en suspension dans 80 ml de
Le sang des lapins est récolté 15 jours après
PBS.
la dernière injection.
- 204 -
Cette méthode couramment utilisée pour
C. Géloses-tampons
l’obtention de sérums lapin ami-humains n’a
a> Immuno-électrophorèse
donné que des résultats médiocres dans la pré-
Les gels sont préparés soit avec le Special
paration de sérum anti-zébu. Il semble que les
Agar Noble (Difco) soit avec l’agarose. Le
mauvais résultats obtenus soient dus à une trop
Special Agar Noble (Difco) est constitué par
faible quantité de sérum de zébu dans la consti-
un mélange d’agarose et d’agaropectine.
tution du mélange antigénique.
L’agaropectine porte des groupements acides
Deuxième méthode
sulfoniques responsables d’une partie des pro-
Le meilleur sérum anti-bovin total a été pro-
priétés du gel d’agar. Ainsi l’IgG, l’IgA et
duit par injections par voie intraveineuse de
I’IgM, soumis à un fort courant d’électro-
sérum de zébu non traité à des lapins.
endosmose, migrent vers le pôle négatif. L’aga-
Rythme des injections :
rose, au contraire, n’ayant pas ces groupements
7 injections de 2 ml de sérum de zébus à acides, possède une inertie chimique relative
2 jours d’intervalle dans la veine marginale de
et donne lieu à un faible courant d’électro-
l’oreille. La saignée est pratiquée 1.5 jours après
endosmose au cours de l’électrophorèse, ce qui
la dernière injection. Chaque lapin fournit en
peut présenter un avantage notamment dans
moyenne 50 ml de sérum anti.
l’étude des immunoglobulines (9). Si l’agarose
donne des lignes de précipitation plus nettes,
De cette façon, un excellent sérum anti don-
plus nombreuses et mieux réparties, la présence
nant 15 lignes de précipitation a été obtenu.
du puits de départ dans la concavité de l’arc
Remarque
de I’IgM peut être gênante pour l’étude parti-
L’utilisation d’un sérum de zébu normal pour
culière de cette globuline.
l’hyperimmunisation des lapins ne permet pas
De plus, la multiplication des arcs est aussi
d’obtenir une bonne ligne de précipitation de
un facteur de complication. En fait, le choix
l’IgM.
de l’un ou l’autre des deux gels sera fonction
C’est la raison pour laquelle ont été utilisés
des fractions auxquelles on s’intéresse.
soit des sérums d’animaux trypanosomés riches
Le tampon utilisé, qui a donné les meilleurs
en IgM, soit un sérum de zébu hyperimmunisé
résultats, répond à la composition suivante :
au préalable au moyen d’une culture de Salmo-
1
- Véronal acide
nella typhimurium formolée. L’injection de
l’antigène 0 des salmonelles provoque en effet
(0,Ol M) . . . 1,842 g
une forte élévation de 1’IgM.
- Véronal sodé
i
(0,05 M) . . . 10,309 g pH 8,6
Pour ce faire, le processus suivant a été
- Acétate de sodium,
adopté : 2 inoculations par semaine par voie
3 Hz0 (0,05 M) .
6,804 g
intraveineuse à doses progressivement crois-
- Eau distillée q.s.p.
1.000 ml /
santes : 5 ml, 10, 15, 20, . . . 75, 80 pendant
2 mois (récolte du sérum 15 jours après la der-
Le gel, support de l’immuno-électrophorèse,
nière injection).
est préparé dans les proportions suivantes :
Le sérum ainsi obtenu, inoculé à des lapins,
- Agar noble . . . . . . . 1 g
a permis de préparer un sérum lapin anti-
- Tampon . . . . . . . .
25 ml
zébu total révélant particulièrement bien 1’IgM.
- Eau distillée . . . . . . .
75 ml
Troisième méthode
Ces proportions sont les mêmes si on utilise
L’hyperimmunisation de lapin au moyen des
l’agarose. Le gel, ainsi préparé, est réparti en
fractions 1 (IgM) et IV (IgG) obtenues par
tubes de 20 ml, conservés à + 4” C.
chromatographie sur colonne de Sephadex
b) Chromatographie
G 200 a permis de préparer des immunsérums
Elle est réalisée sur colonne de Sephadex
qui, après épuisement par un sérum de fœtus
ci 200 (“).
de veau, révèlent exclusivement I’IgG et
l’IgM (‘).
L’éluant est une solution tampon dont la
composition est la suivante :
(‘) Industrie Biologie Française, S.A., 92-Genne-
Villiers.
(:‘) Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala, Suède.
- 205 -
- Tris . . . . .
7% g
L’éluant est envoyé sur la colonne par une
- NaCI . . . . . 58,45 g
i PH 850 pompe électrique.
- HC1 (0,033 N) q.s.p.
1 .OOO ml !
A la sortie de la colonne, un absorptiomètre
à UV (280 m$, couplé à un enregistreur, per-
D. Techniques
met de détecter les différentes fractions qui sont
a) Immunoélectrophorèse
ensuite réparties en tubes de 5 ml par le col-
Ont été utilisées la microméthode sur lames
lecteur de fractions Beckman muni d’un comp-
de 2,5 X 7,s cm et la macrométhode sur
teur de gouttes.
lames de 16 X 4 cm (21).
A la fin de la chromatographie, l’enregistreur
L’appareillage Celman pour immunoélectro-
a inscrit sur bande de papier une courbe à
phorèse a été employé tout au long du présent
3 pics (voir schéma 1) qui matérialise la s&pa-
travail (générateur de courant continu donnant
ration des différentes fractions sériques. Ainsi,
une tension de 0 à 500 V).
dans l’exemple choisi, la courbe montre que
la totalité du sérum a filtré entre les tubes 17
Les différents stades de la méthode corres-
et 61 du collecteur. Dans cet intervalle, les
pondent à la description classique : dégraissage
tubes ont été regroupés en 7 fractions :
des lames, coulage de la gélose, découpage à
- 1”’ fraction : tubes 17 à 3 9;
l’emporte-pièce des puits de départ et de la
gouttière des immun-sérums (portoir de 6 la-
- 2” fraction : tubes 20 à 27;
mes), dépôt du sérum à étudier. L’électropho-
- 3” fraction : tubes 27 à 36;
rèse est menée sous 220 V pendant 60 mn pour
- 41’ fraction : tubes 37 à 44;
la microméthode et 140 mn pour la macromé-
thode. On procède ensuite à l’application de
- Y’ fraction : tubes 45 à 48;
l’immunsérum. L’incubation se fait en cham-
- @ fraction : tubes 49 à 52;
bre humide pendant 24 à 36 h. Après lavage
- 7’! fraction : tubes 53 à 61.
(24 h en sérum physiologique, 1 h en eau distil-
lée) et séchage (à l’étuve à 370 C), la coloration
Chaque fraction est ensuite dialysée contre de
est réalisée au noir-amide en solution méthanol-
l’eau distillée à + 4’) C, pour éliminer les sels
acétique pendant 5 mn. L’excès de colorant est
du tampon, puis lyophilisée.
éliminé par une solution de rinçage. Les lames
La dialyse et la concentration des fractions
sont enfin lavées à l’eau courante et séchées.
obtenues par la chromatographie peuvent être
Solution de rinçage :
réalisées plus rapidement en un seul temps par
la technique de dialyse sous vide (schéma 2).
- Alcool méthylique . . . .
5 vol.
En 12 h. à + 41’ C, la concentration est environ
- Acide acétique . . . . .
1 vol.
de 10 fois.
- Eau distillée . . . . . .
5 vol.
Solution de coloration :
II. IMAGE
- Noir amide . . . . . .
6g
IMMUNO-ELECTROPHORETIQUE
- Solution de rinçage . . . . 1.000 ml
DU SERUM DE ZEBU GOBRA
b) Chromatographie
L’immuno-électrophorèse d’un sérum de
Conduite selon les indications de HOGMAN
zébu Cobra réalisée dans les conditions décrites
et KILLANDER (10).
ci-dessus a permis d’obtenir 15 lignes de préci-
pitation.
Le fractionnement des sérums de zébu a été
effectué sur colonne de Sephadex Ci 200 (gel
de dextrane).
1. Identification des différents arcs
Le gel de Sephadex est placé dans une a) Fractionnemrnt d’un sr’rum
colonne de 800 mm de hauteur et 30 mm de
La filtration sur gel de dextrane (Sephadex
diamètre. Après s’être assuré de la verticalité
G 200) sépare les protéines sériques selon leur
rigoureuse de la colonne, le sérum est déposé
taille, leur vitesse de migration dans le gel
uniformément à la partie supérieure du gel à
étant pour partie directement proportionnelle
raison de 3 ml.
à la grosseur de la molécule.
- 206 -
Schéma I - Courbe de fractionnement d’un Jrum de zt%u sur Sephadex 6.200.
Chaque fraction obtenue par chromatogra-
La photographie de l’image immunoélectro-
phie est comparée sur la même préparation
phorétique de chacune des 7 fractions est repro-
avec le sérum total. Quelques lignes parfaite-
duite dans les clichés no 1 à 7 avec indication
ment visibles sur les lames sont difficilement des différents constituants dont la position a
rendues par les photographies.
pu être figurée.
Photo 2
1. IgM
2 . (Y 2 macroglobuline
3 . Transférine
4 . fi-lipoprotéine
5 . Céruloplasmine
- 207 -
c
‘.
l
b) Préparation de l’lgM
On centrifuge pendant 10 mn à 2.000 g,
La préparation de 1’IgM pure par filtration
après une demi-heure de repos.
sur Sephadex implique l’élimination de l’a 2-
Le précipité est lavé 2 fois avec la solution
macroglobuline ainsi que de la lj-lipopro-
d’acide borique puis il est repris dans 3 à 4 ml
téine (10).
du tampon Tris-H Cl-Na Cl de pH = 8,O.
- Précipitation de la lipoprotéine :
A 10 ml d’un sérum normal, on ajoute 0,4 ml
La filtration est enfin réalisée sur la colonne
d’un solution de sulfate de dextrane à 10 p. 100,
de Sephadex G 200.
puis 1 ml d’une solution de Ca Cla,M. On agite
c) Autres immunoglobulines
et après 15 mn de repos, on centrifuge 10 mn
à 6.000 g. On recueille le surnageant. L’excès
Les autres immunoglobulines ont été pré-
de Ca Cl- est éliminé par dialyse contre de
parées par épuisements successifs des sérums
l’eau distillée.
de zébus par un sérum de lapin hyperimmunisé
avec un sérum de fœtus de veau dépourvu
- Précipitation des euglobulines :
d’IgG et d’IgM. La photo 8 montre l’image
On ajuste le volume de ce surnageant à
immunoélectrophorétique d’un sérum d’em-
200 ml à l’aide d’une solution d’acide borique
bryon de veau à terme manifestement dépourvu
à 7,5 g/litre.
d’IgG et d’IgM (19).
c
d) Colorations spr’cifiques
crite par URIEL (18) pour mettre en évidence
l’action oxydative de la céruloplasmine permet-
Pour la mise en évidence des lipoprotéines,
tent de préciser certaines lignes de précipitation.
on peut utiliser des colorants spécifiques : Oil
Red 0 ou Soudan B.
Seules les colorations spécifiques des lipopro-
téines qui n’offrent pas de difficulté majeure
Des colorations spéciales, comme celle dé-
ont été réalisées dans le présent travail.
- 209 -
2. Lecture d’une lame
- Un antigène est d’autant plus abondant
d’immunoélectrophorèse
que sa ligne de précipitation est moins courbe.
- La ligne de précipitation est floue du côté
Avant d’envisager la lecture d’une lame,
opposé au réactif en excès. Pour avoir des lignes
quatre critères sont à retenir :
nettes, il convient d’ajuster les concentrations
- Un antigène est d’autant plus abondant
respectives d’antisérum et de sérum à étudier.
que sa ligne de précipitation est plus proche
11 est à noter que l’albumine apparaît rare-
de la gouttière des immunsérums.
ment sur les préparations. En réalité, au cours
- L’abondance d’un antigène peut être éva-
du développement, elle est la première à se
luée d’après l’intensité de son précipité, à con-
former, mais elle disparaît ensuite, le précipité
dition que le rapport antigène-anticorps ait une
étant dissout par l’excès d’antigène. Des photo-
valeur bien déterminée. Lorsque l’antigène se
graphies prises en cours d’incubation, sans colo-
trouve en grande quantité, l’excès peut dissou-
ration, montrent très nettement la ligne de pré-
dre le précipité.
cipitation de l’albumine (photo 9).
Photo ?
Photo réalisée en cours d’incubation, sans coloration,
l’arc correspondant à l’albumine est nettement visible.
En conclusion, l’application des différentes
ralement pas sur une même lame, les concen-
techniques décrites ci-dessus ont donc permis
trations respectives de sérum et d’antisérum
d’identifier 15 lignes (photo 10).
doivent être ajustées en fonction des globulines
A noter que les lignes n’apparaissent géné-
à étudier.
Photo 10
1 . IgG lente
4 . IgA
7 . Haptoglobine
10. n. 2-lipoprotéine
13. CI 1 séromucoïde
2 . IgG rapide
5 . Transférine
8 . a 2-macroglobuline
Il. 15 1 A-globuline
14. (1. 1 X-glycoprotéine (?)
3 . IgM
6 . fi-lipoprotéine
9 . Céruloplasmine
12. c1 1 -glycoprotéine
15. Albumine
- 210 -
III. ETUDE DES VARIATIONS
IgG, IgA et IgM sont parfaitement visibles,
SAISONNIERES QUALITATIVES
comme sur la photo 11 par exemple.
c
DES PROTEINES SERIQUES
Sur le plan quantitatif, autant que l’on puisse
DU ZEBU GOBRA
en juger en immunoélectrophorèse, il semble
qu’il y ait quelques légères variations indivi-
duelles principalement au niveau des immuno-
1. 115 sérums ont été prélevés au mois de
globulines. Par exemple on voit que le sérum
novembre 1969, en fin de saison des pluies, sur
de la photo 11 est moins riche en IgM. 11 faut
des zébus du Ferlo (Dara). Les animaux, clini-
préciser que le même immunsérum a été utilisé
quement sains, étaient en parfait état d’en-
pour toute la série. De plus, les quantités de
tretien.
sérum et d’immunsérum appliquées au moyen
de micro-pipettes graduées étaient connues et
Du point de vue qualitatif, les images immu-
identiques. Les conditions de travail étant
noélectrophorétiques se sont révélées être par-
rigoureusement définies et reproduites, il est
faitement identiques pour tous les sérums ana-
donc parfaitement possible de faire des compa-
lysés. Dans tous les cas, les immunoglobulines
raisons d’ordre quantitatif.
2. Au mois de mai 1970, 72 sérums ont été
son a été faite avec un même sérum de zébu
recueillis sur des zébus de la même région
prélevé en fin de saison des pluies. Les résultats
(forage de Tatki). A cette époque de l’année,
montrent qu’aucune des immunoglobulines n’a
les animaux présentent un amaigrissement sai-
disparu mais que, par contre, toutes les frac-
sonnier maximal du fait des conditions d’ali-
tions apparaissent moins abondantes. De façon
mentation de semaine en semaine plus difficiles.
constante, la ligne de précipitation de 1’IgG est
moins marquée et plus courte que sur le
L’analyse
immunoélectrophorétique de ces
sérum témoin (ainsi qu’on peut le voir sur la
sérums a été effectuée avec le même immun-
photo 12). De même, l’IgM est beaucoup moins
sérum de lapin. Pour chaque lame, la comparai-
visible. Pour toutes les autres fractions, les arcs
de précipitation sont plus courbes et moins nets,
tuants étant intéressé. Par contre, en aucun
ce qui indique une diminution du taux de la
cas, la disparition complète d’une quelconque
protéine en cause.
fraction n’a été observée, immunoglobulines
L’étude quantitative menée conjointement
comprises.
par la méthode d’électrophorèse sur acétate de
Remerciements
cellulose a permis de confirmer et de chiffrer
c
ce résultat.
Nous tenons à remercier le Professeur MAS-
SEYEFF et ses collaborateurs de la Faculté
En conclusion, le sérum des bovins, en fin
de Médecine de Dakar pour l’aide technique
de saison sèche, présente un abaissement signi-
qu’ils nous ont apportée tout au long de la
ficatif des protéines totales, chacun des consti-
présente étude.
SUMMARY
Immunoelectrophoretic study of Gobra zebu serum in Senegal.
Possibility of qualitative seasonal variation
In a first step, the authors describe the technics and methods which Will
be used a11 along the present work : immunoelectrophoresis and gel fil-
tration chromatography on Sephadex G 200. An immunoelectroohoretic
pattern of Gobra ze’bu serum ;s given with the nomenclature of Bach of
the 1.5 precipitation lines obtained. The studv is achieved with conside-
rations on ahy possible seasonal variation of -serum proteins. The results
show no qualitative difference between samples collected at the end of
the rainy season and those gathered at the end of the dry season. In
particular, the three immunoglobulins are present on the immunoelectro-
phoretic patterns of a11 the sera used alo8g tbe present study. On the other
hand, ors quantitative basis, a significant decrease of total proteins rate is
demonstrated for the sera collected at the end of the dry season. This
last observation is confirmed by an electrophoresis study which Will be
published separately in a further paper.
RESUMEN
Estudio inmunoelectroforetico
del suero de cebh Gobra en Senegal.
Posibilidad de variaciones cualitativas de estaci6n
Los autores describen las técnicas utilizadas : inmunoelectroforesis
y gelosa-filtration sobre columna de Sephadex G 200. Luego, presentan
la imagen inmunoelectroforetica del suero de cebu Gobra, a1 precisar la
es&cia de las 15 Iineas de precipitacion obtenidas. Se acaba e1 estudio
por consideraciones sobre la posibilidad de eventuales variaciones de
estacion de las proteinas sericas. Segtin 10s resultados, no existe ningun
diferencia de orden cualitativo entre las muestras recogidas a1 fin de la
estacion htimeda y las recogidas a1 fin de la estacion seca. Particularmente,
las tres ïnmunoglobulinas : IgG, IgM e IgA se encuentran en todas las
imagenes inmunoelectroforeticas del conjunto de 10s sueros utilizados
durante este estudio. En cambio, desde el punto de vista cuantitativo, se
nota una disminucion significativa de la tasa de las proteinas totales en
10s sueros obtenidos a1 fin de la estacion seca. Se confirma la tiltima
observation por un estudio electroforetico que se publicara proximamente.
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