* T\EfWBLI QUE DU SENEGAL ----I--m.- .a ...
*
T\\EfWBLI QUE DU SENEGAL
----I--m.-
.a
MINISTERE DE LA RECHERCHE
XI ENTI FIQUF ET TECHNIQUE
I----M-..-
I NSTI TUT SENEGALAIS DE RECHE?CHES
d
AGRICCLES (1 .S.T;.A. 1
4
m.------..-
LABOFIATnl KE NATIONAL DE Lv ELEVAGE
1
i
ET DE RECHERCHES VETERINAIRES
DAKAR-HANN
T E C H N I Q U E D’ I NOCULRTI c)N D E S
I9EUFS EMP.RY r)NNES
S T A G E FA3 S U R L A PFODUCTI ‘2N D E V A C C I N S
D A K A R , D U 17 ‘CTOBf\\E A U 5 NOVEMBPE 1 9 8 3
Par J . SARR
R E F . No 65/VIRO.
SEPTEMBPE 1 9 8 3
Lioeuf de poule fertile, incub6. pr&ente beaucoup dgavantages par rapport
àl'anhalservant àlaculture d'un virus x
-. facilitÊ. d'approvisionnement et de coût ;
e
- les maladies spontanées oui nuisent à la multiplication virale sont exclues.
t
Le ma-t&iel de l"oeuf et l'embrycn lui-m$.ma sont bact&ioloe;iquement st&i-
les, les liquides sont clairs à l'exception du sac vitellin et l'oeuf renferme
peu dvimpuretés g&antes.
- Les oeufs fertiles perrwttent des fortes r6coltes avec unvirus adapté ;
- le virus adapté en ovoculture ~~arde génér&zment des qualités constantes apr&
une s6ri.e de passygesO Il est ainsi possible de conserver des souches virales
par p&saEes pendant 'des dizaines d'années scans que ces souches perdent leur
structure antigénique.
L'oeuf embryon& reste donc, malgr6 le développement de la culture de tissus
in vitro, un excellent outil de production de virus.
Tkemple T Parfois, l'embryon de poulet se révèle dans les essais d'infection, 1-2-m
ceptif à 1'AW isolé alors que le virus entier est incapable de se mol-a
tiplier dans l'oeuf. (virus nolio) e
Nous aborderons successive33ent :
- l'incubation des oeufsj
- la structure de l'oeuf embryon&,
-m les t'alités d'utilisation de l'oeuf embryon&, pour la culturede virus,
- les diff6rentes voies d'ir-oculationS
- les méthodes de prélèvement des différentes parties de l'oeuf embryon&,
-. et enfin, nous evoquemns les diff&ents facteurs aui peuvent influencer la
croissance des virus dans l'oeuf embryonné.
3
‘- i.
R - gRlJm IIE L’O?UF ?3w?Yo?J!x
- - - - -
Nous avons &ris 1 Y or&32 :
- la coquille,
- Il.a mz3ribrme externe qui tarisse tout Il'int&iep de la coquille au sommet c?e
l'oeuf-, le sac d'air,
la rnmkmme ~~@rio-allar?toîdi.p~~. est s$ar& de 1.'mmios p2r une cavil.35
dite allzrb.%.dier q,ui contient 5 à 10 ml de liquide;
- la mmb~ane amktiquc qui cnfem e l'embxym &ns une cavit6 cjui. con-tient envi-
ron 3. ml de l.igl@deG
- le sac, viite~l.in .est rattachi; 3 l'embryon et ccntient tcutes les substamks nu-
tritives,
-. 3
.=c -' MODALITXS D~IflYLfSATION DE L'OEW EKBRY&NE POUR LA CULXURE DE VIRUS
-
-
\\
1) Choix du site drinoculation dans l'oeuf embryon&
- - - -
Localisation de la multiplication ".
Cavité
S?E
Sac'
Souche virale
fiTCA
tll~mtoîdierm mniotiqye Gteilin
---...
1-M-1
-II_
- Variole de la mule et des oiseux
+
A Lzyngctrachéitc infectieuse
t
t
m Xewcastle
t
t
- Variole hermine
t
-Herpès
t
t
- Myxomtose
t
- Stcmatite v6siculeuse
t
-Grippe A etB
t
t
t
t
- Ornithose-mittacose
t
t
t
-' Fièvre vall6e du Rlft
t
t
.
- Fièvre jaune .'
t
=- Rage
t
t
- Rkkettsic-s
t
- Peste aviaim classique
t
t
+
- Ence~halomyélite équine
Cuest, Est, et Venezuela
t
t
t
- Blue tangue
t
.-
--..--
.
.
La plupart des ar3mi.vus Teuvent &J?e cultiv& sur oeuf, Pour cela, il est re-
. . 2
ccxrrrkndé d'utiliser la voie intraveineuse et/ou intrac&6brai+z,
2) Stades de d&elop?em.ent erb~yxnaire choisis nour lDinoculation
- - - -
- - ~ . . - - -
-*
-..-
y-
Icc
--
Voie dvinoculation
.&e des wibryons
.-...-
---
knbme chorio-~?llantoldienne
3.c -- 3.2 jours
Cavit6.&3niotioue
7 "' 14 jm?,
CauitE allanto~dienne
7 - 41
L -. jows
Sac vitellin
I;
-'.
7 jQurS
Vvia veineuse
8 -., 11 jours
Vc+ &&krale
8 -- 13 jours
-.
---
---.-1-11-
D 9," DI~S VOIES D'INOCUL4Tl'i
,Y--IU_--I-U_--e-.-I.
Il faut mxquer sur la lampe de mkage, avant l'inoculation, les pints p?&
vus' pur les injections,
Ce rmr-cpqe Joit se fai3x 3 l'aide d'un crayon dont les caract~rês ne s'ef-
facent pas au cours de la d&:i.nfection ultérieure de la coquille. La teinture ci'-
iode est u?Ti.?isée de ririjf&ence C~MW désinfectant, s:wf pur l'inoculation de la
MCA, où la &n&ration de 19îode 2 travers la cocxlille peut pxxxgue~ des Xsions
non sp&iFiques. Ilne siqlc &G.n.fection de la ccqui.lle est Lwqe9nel;t suffisante,
1) Inoculation de ?.a MCA
1_-
----
Deux nrc?c&!6s simules yeuve& &-x-e u.t.i.lisRsw Tls 3nt S'c?vanta,ye de ne -s
~=rovocjuer des l.&ions non spkifiques suscewptibles de ~~&xr 1~ dkynostic 3
a> line zone situ& au4W33.~s ?!e l'embryon sst m3xy&2 l'aide de la Lme
de mirage. Cet-k zone est ensuite soirmeusement désinfect&. puis un t&x&e est
déccuy?é dans la wquille 3 lSaide d'un -Fraise de dentiste OU d'une .lime*à wule,
sans endoniwqer la membrane cLoquili&e sous-jacente.
Eviter auW.nt que mssible que la I$X ne se dgtache et ne s '.?ffaisse,
1~s oeu.% ~r6sentant des hé&xrwie-3 au cours de cette opération sont à
U,miner.
-5
re est fendue au milieu de la goutte qui geut alors s'infiltrer par capillarité
entre la coquill&?e et la MCA. Le reste'de l'inoculum peu-t alors être tis goutte3
.
goutte et ne doit jamais d&asser 0,2 I.CL,
1
Le triangle est replacé et fix<l sur la fente JET de la paraffine..
Les oeufs peuvent alcrs Fcre remis à lcincubateur avec le lieu d9inocula-
tion dirigé vers le 3xwt.
b) A@s marquage (zone d'imculaticn et lxx-d de la chambre à air) et de-
sinfection, un ovale est d&oupé au-dessus de l'embryon sans endomger la cm@.-
l&e, On enlève le fm,@nent ovale et l'on fait un trou au niveau de la cwre 3,.
air.
là nxmbrane coquill&e est vexée avec une pince de dentiste pxr que lyair
extérieur puisse appuyer sur la FIW. La membrane est ainsi décollée, Avec la pin-
ce de dentiste, toute la rrmlxane mquillère est enleke'de la zone cuvwte et
l'inoculum peut être déyxé dans la &pression. Le trou de la chambre à air peut
être rebcuch~ avec de la paraffine et l'ovale par un film,
2) Injection dans la cavit6 allantoîdienne
-
- - -
a) &xyage SUT la lampe de mirjageI du bxd de la charbe, dans la zone des
~-0s vaisseaux de la NCA &t du lieu d'inoculation près des vaisseaux et de la
chambre. Evitex les lésions du vaisseau au COUTS de l'injection-
Ltoeuf est plac6 en position hcrim-kale sur un suppmt approprié,.
F'ercm la coquille au lieu dvincculation indiqué avec une fraise de dentisa-
te sans lésem la merrbrsxe ccquillère. L'irioculum est injecté avec une aiguille de
16 ou 18 mn dont la pinte est enfoncée de 2 mn, vetiicalement~ dans la cavi-t$
allantoîdienne située sous le trou de la coquille, Le trou de la chambre 3 air et
le lieu d'injection sont ensuite k-Juchés 2 la paraffine.
h) IJne autre variante de cette technique est une inoculation sous le con-s
tri3le de l'appareil à m%eT.
. . c
3) $jectîon dans la cavi-tÉ amnioti~ue~
- -
L'i9ocukki.m de 1 Oom? s 'e.ffectue sous la lcam3e de mimge y L,~utilisatio~
du bleu de &thylène peut p~mettre un c~ontrôle efficace de la zone inoculée.
Le trou de la coquille se.fait au niveau de la chaambm à envk-m 13,s cm
dubord delachm-bre 2 air.
L'aig?uille est enfonc& vmtimlment et perce la mmbEne coquill&e, la
MCA et la membrane amniotique,
La &mtité dvin~~ulm ne doit jamais dépasser O,? ml.
Inoculation dans le sac vitellin
-------l-r-l_---Y-.--------~~---"--
- Percer un trou dam la coquille au @le de l'oeuf.
- Incliner l'oeuf'de 20 à 25O pm rapport 2 la verticale,
h 0,5 cm de cet orifice. on perce un autre.
- Injecter l'inoculum en intmduiscmt enti&wmmt une aiguille de 7/30,
Imculation intraveineuse
-I~---.~wa.--y--u--.* ---- A.,.,
Rep&w une veine sul%.sament Fgmsse et droite ?,part-ti du tronc comun si-
tut5 au voisinace de la chambre 2 ail?. Dessine~ son trace au mayon.
Bkouper d'un volet de coquille au-dessus de la veine sans endommqer la
menùxane ccquillère.
E$OSer UnP goutte de vaseline st6rile pour 233&F? ~~~~sp~e~te la. m&xane
cQquillè~ r
Fep&er le sens du courant sanguin.
Induire l'&uil?e de 4./15 2 biseau cowt montee S~T une sekqx dans le
; _
sens du cowxmt smguin : inoculer ap& l&&x onction O,i)U à C,5 fi.
- .
Inoculation intra&r&rale
-..,L31a.gcI.ne x--.--- ---.-- ----- ."--L.
,
OpG.rer corne pow la cavit6. amniotique.
Saisir la tête avec une pince fine
et la tenir par la paupi&e ou le bac.
Enfoncer l'aiguille (4/10) de 2 mn et injecter lpirOculu~ (0,02 ml e3-wimn)
?
FI-
.
.- Pipettes Pasteur et pipette0c à 'bule d9une contenance de 5 à 15 MI avec un
L
orifice lat&al,
- des tubes de 18 stériles ou des .flacons,
-* des tubes de milieu de culture pour contr6le de la sterilité (milieux pou..
a&obies et anakmbies) ,
. .
-' des pinces fines sans rmrs,
-a des petits ciseaux droits et courbes.,
- des pinces fines 2 mors,
2) Prél&ement des liquides
F+ou~ kiteT lPouverh~e des vaisseaux au cours des diff&ents pr&kments,
OI-I placera les oeu% au moins une nuit de 0 à + 4OC ou quelques heures dans une
chambre à fj?lace avant l'ouver%m?. Eviter autant que possible la comélation.
a> Licyide miotime
-..y ,.."-e..'t...w..m--C*-."
Le lic@k amniotique est Clair (eau de roche>, 2 à 3 ml dansunoeuf
normal incubé 12 jours. Ap&s inoculation, ce volume est gén6ralement Lnf&ieur
et peut se r&!uixe 4 quelq.ues gouttes. Le liquide peut égale&& devenir trmble.
Pour le recueillir, aprk ouvex?ture de l'oeuf, vider le IE@idë'allanto1~~~
que, saisir avec une pince fine 2 mm la poche amiotiqueI intmduire l'extrê~-
mité d'une pipette à boule et as-$rer.
b) Liquide allanto.?gue
-------...-------- --
L'oeuf est @a& verticalement,
on enlève délicaterrent la me&rane co-
quillère et la MCA sans léser les vaisseaux.
P&everp.% aspiration,
3) ?L?t$lèvement des tissus
a> La MT&\\,
e---m-
- Ouvrir 1 'oeuf au niveau de la chambre 2 air ;
- dégager soigneusemnt la rnmbrane Coquill&e ;
- faire une ?-&che sur la MCA ;
- vider le omtenu de l'oeuf.
La MCA reste collée si~r la pami de l'oeuf.
.
c) Le sac vitellin
----.,.---------1
- ouvrir lvoeuf comne pour le liquide allantolque -
- faire une brêche dans la K%. et cxttir 1 'enïbryon avec une pime
et couper le p&iicule ombilical.,
- pren&e le pédicule: sortir le sac et le placer dans une bof-te de
&ri u
4) Conh?Gle de stérilité
--"
Il est F6alise sur chaque type de &xAte TEW l'enswncer~ent de milieux
appropriés.
F -' PA-S PCUVfW I>JPLI,~ICEl? TA CF.OISS/W!J' LES VIR'JS UNS L"OEUF E?E%Y'3ï?E
--
----, .--.---
-
el"-.-
- - - - - -
Parmi les facteurs pouvant influencer la cmissance des virus dans l'oe~ti
embryonné, nous pcuvons miter; 0
a) la voie d'inocula:tion
s.--w
Si pur un virus d6j$ identifik, on peut choisjr la partie de l'oeuf p.3
mettant un dévelmpement qkixnm., il n'en est pas de X%%E POUY, les pmduits con-
terkant UT! virus dont on ne comaÉt pas la nature, ni par conséquent les pmpriG-
-5%.
17) Les contaminations ?xct&ienn~et ~cop1asmiq-E~
_--_.. -. . .--<- -.--.
Elles peuvent E-tTe limitées par la cent&fu,gatior des susperisicns et
- 1
l'utilif3ation d'a~-~Ctiotiques. Me ~32s oubliw que certains antibïotim2es peuvent
@ner à forte ccnceHxx&m le pmcess~m de multiplication virale, alms Que d'au-
.
tres sont sans effet, f--'xqle,. le Virus de la grippe se dkeloppe dans 1'0eu.f CT'
présence de 12,N30 UI de Penicilline ~alom qy.‘m ne dispose gu$re 500 à 1.000 UI.
c) La t0xici-G pour l'embryon des inoculums
-_--_-----
-= bmyats d'orgae
--
antïbiotimm3.
d) La solution pmr la dilution des virms à inoculer
- - - - - - -
La sclution peut contenir des inhihiteurs naturels du V&~S (solution
serum humain, serm de lapin: sem de cheval, etc.,,),
La stabiIit6 du virus dans ces solutions constitue g6nklmnt une étape
délicate,
Compte tenu de tous ces facteurs pouvant influencer la cr6iSsance du Vimx
dans l'oeuf embqonné, chaque rkthode retenue représente en fait un compromis
entre les avantages et les inconvénients pcssibles.
.
- 10
Pom EN SAVOIR mius Y
_-
1 c IXNTS LTr, et PFIXZIE .,, 1'. , 1.362
In-fluema of chick embq70 aze on assay of poliovirus ~?N;"i in &ryonated
epgs, Vi.ml.. t 17 216 .i 217,
4. rnGIN l-l,, LiI3WTTE atid I4!CMALIE J, XEWE - 1769
Eamostic ~mcedums of vîml and Rickettsial ir,fectinus. Am. 32).
Health Associat. Inc‘ FoTurth FB.
5, ROT.JmER FI, - 1969
Trait~ des mladies 2 virus des animaux =. Vi,@ D&E)S F?i0
6, cox H,R, - ?Cl52
Facteurspc-:vx-? %-E.uex:ei? 1.3 crrissmc2.e des virus dans l'oeuf exbxyon-
n&. fkln, hT,Y, fKmd., sci, SS, 236,
,
/
1
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MINISTERE DE LA RECHERCHE
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DAKAR-HANN
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Par J . SARR
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Lioeuf de poule fertile, incub6. pr&ente beaucoup dgavantages par rapport
àl'anhalservant àlaculture d'un virus x
-. facilitÊ. d'approvisionnement et de coût ;
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- les maladies spontanées oui nuisent à la multiplication virale sont exclues.
t
Le ma-t&iel de l"oeuf et l'embrycn lui-m$.ma sont bact&ioloe;iquement st&i-
les, les liquides sont clairs à l'exception du sac vitellin et l'oeuf renferme
peu dvimpuretés g&antes.
- Les oeufs fertiles perrwttent des fortes r6coltes avec unvirus adapté ;
- le virus adapté en ovoculture ~~arde génér&zment des qualités constantes apr&
une s6ri.e de passygesO Il est ainsi possible de conserver des souches virales
par p&saEes pendant 'des dizaines d'années scans que ces souches perdent leur
structure antigénique.
L'oeuf embryon& reste donc, malgr6 le développement de la culture de tissus
in vitro, un excellent outil de production de virus.
Tkemple T Parfois, l'embryon de poulet se révèle dans les essais d'infection, 1-2-m
ceptif à 1'AW isolé alors que le virus entier est incapable de se mol-a
tiplier dans l'oeuf. (virus nolio) e
Nous aborderons successive33ent :
- l'incubation des oeufsj
- la structure de l'oeuf embryon&,
-m les t'alités d'utilisation de l'oeuf embryon&, pour la culturede virus,
- les diff6rentes voies d'ir-oculationS
- les méthodes de prélèvement des différentes parties de l'oeuf embryon&,
-. et enfin, nous evoquemns les diff&ents facteurs aui peuvent influencer la
croissance des virus dans l'oeuf embryonné.
3
‘- i.
R - gRlJm IIE L’O?UF ?3w?Yo?J!x
- - - - -
Nous avons &ris 1 Y or&32 :
- la coquille,
- Il.a mz3ribrme externe qui tarisse tout Il'int&iep de la coquille au sommet c?e
l'oeuf-, le sac d'air,
la rnmkmme ~~@rio-allar?toîdi.p~~. est s$ar& de 1.'mmios p2r une cavil.35
dite allzrb.%.dier q,ui contient 5 à 10 ml de liquide;
- la mmb~ane amktiquc qui cnfem e l'embxym &ns une cavit6 cjui. con-tient envi-
ron 3. ml de l.igl@deG
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tritives,
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.=c -' MODALITXS D~IflYLfSATION DE L'OEW EKBRY&NE POUR LA CULXURE DE VIRUS
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1) Choix du site drinoculation dans l'oeuf embryon&
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Localisation de la multiplication ".
Cavité
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Souche virale
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t
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La plupart des ar3mi.vus Teuvent &J?e cultiv& sur oeuf, Pour cela, il est re-
. . 2
ccxrrrkndé d'utiliser la voie intraveineuse et/ou intrac&6brai+z,
2) Stades de d&elop?em.ent erb~yxnaire choisis nour lDinoculation
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- - ~ . . - - -
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,Y--IU_--I-U_--e-.-I.
Il faut mxquer sur la lampe de mkage, avant l'inoculation, les pints p?&
vus' pur les injections,
Ce rmr-cpqe Joit se fai3x 3 l'aide d'un crayon dont les caract~rês ne s'ef-
facent pas au cours de la d&:i.nfection ultérieure de la coquille. La teinture ci'-
iode est u?Ti.?isée de ririjf&ence C~MW désinfectant, s:wf pur l'inoculation de la
MCA, où la &n&ration de 19îode 2 travers la cocxlille peut pxxxgue~ des Xsions
non sp&iFiques. Ilne siqlc &G.n.fection de la ccqui.lle est Lwqe9nel;t suffisante,
1) Inoculation de ?.a MCA
1_-
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Deux nrc?c&!6s simules yeuve& &-x-e u.t.i.lisRsw Tls 3nt S'c?vanta,ye de ne -s
~=rovocjuer des l.&ions non spkifiques suscewptibles de ~~&xr 1~ dkynostic 3
a> line zone situ& au4W33.~s ?!e l'embryon sst m3xy&2 l'aide de la Lme
de mirage. Cet-k zone est ensuite soirmeusement désinfect&. puis un t&x&e est
déccuy?é dans la wquille 3 lSaide d'un -Fraise de dentiste OU d'une .lime*à wule,
sans endoniwqer la membrane cLoquili&e sous-jacente.
Eviter auW.nt que mssible que la I$X ne se dgtache et ne s '.?ffaisse,
1~s oeu.% ~r6sentant des hé&xrwie-3 au cours de cette opération sont à
U,miner.
-5
re est fendue au milieu de la goutte qui geut alors s'infiltrer par capillarité
entre la coquill&?e et la MCA. Le reste'de l'inoculum peu-t alors être tis goutte3
.
goutte et ne doit jamais d&asser 0,2 I.CL,
1
Le triangle est replacé et fix<l sur la fente JET de la paraffine..
Les oeufs peuvent alcrs Fcre remis à lcincubateur avec le lieu d9inocula-
tion dirigé vers le 3xwt.
b) A@s marquage (zone d'imculaticn et lxx-d de la chambre à air) et de-
sinfection, un ovale est d&oupé au-dessus de l'embryon sans endomger la cm@.-
l&e, On enlève le fm,@nent ovale et l'on fait un trou au niveau de la cwre 3,.
air.
là nxmbrane coquill&e est vexée avec une pince de dentiste pxr que lyair
extérieur puisse appuyer sur la FIW. La membrane est ainsi décollée, Avec la pin-
ce de dentiste, toute la rrmlxane mquillère est enleke'de la zone cuvwte et
l'inoculum peut être déyxé dans la &pression. Le trou de la chambre à air peut
être rebcuch~ avec de la paraffine et l'ovale par un film,
2) Injection dans la cavit6 allantoîdienne
-
- - -
a) &xyage SUT la lampe de mirjageI du bxd de la charbe, dans la zone des
~-0s vaisseaux de la NCA &t du lieu d'inoculation près des vaisseaux et de la
chambre. Evitex les lésions du vaisseau au COUTS de l'injection-
Ltoeuf est plac6 en position hcrim-kale sur un suppmt approprié,.
F'ercm la coquille au lieu dvincculation indiqué avec une fraise de dentisa-
te sans lésem la merrbrsxe ccquillère. L'irioculum est injecté avec une aiguille de
16 ou 18 mn dont la pinte est enfoncée de 2 mn, vetiicalement~ dans la cavi-t$
allantoîdienne située sous le trou de la coquille, Le trou de la chambre 3 air et
le lieu d'injection sont ensuite k-Juchés 2 la paraffine.
h) IJne autre variante de cette technique est une inoculation sous le con-s
tri3le de l'appareil à m%eT.
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3) $jectîon dans la cavi-tÉ amnioti~ue~
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L'i9ocukki.m de 1 Oom? s 'e.ffectue sous la lcam3e de mimge y L,~utilisatio~
du bleu de &thylène peut p~mettre un c~ontrôle efficace de la zone inoculée.
Le trou de la coquille se.fait au niveau de la chaambm à envk-m 13,s cm
dubord delachm-bre 2 air.
L'aig?uille est enfonc& vmtimlment et perce la mmbEne coquill&e, la
MCA et la membrane amniotique,
La &mtité dvin~~ulm ne doit jamais dépasser O,? ml.
Inoculation dans le sac vitellin
-------l-r-l_---Y-.--------~~---"--
- Percer un trou dam la coquille au @le de l'oeuf.
- Incliner l'oeuf'de 20 à 25O pm rapport 2 la verticale,
h 0,5 cm de cet orifice. on perce un autre.
- Injecter l'inoculum en intmduiscmt enti&wmmt une aiguille de 7/30,
Imculation intraveineuse
-I~---.~wa.--y--u--.* ---- A.,.,
Rep&w une veine sul%.sament Fgmsse et droite ?,part-ti du tronc comun si-
tut5 au voisinace de la chambre 2 ail?. Dessine~ son trace au mayon.
Bkouper d'un volet de coquille au-dessus de la veine sans endommqer la
menùxane ccquillère.
E$OSer UnP goutte de vaseline st6rile pour 233&F? ~~~~sp~e~te la. m&xane
cQquillè~ r
Fep&er le sens du courant sanguin.
Induire l'&uil?e de 4./15 2 biseau cowt montee S~T une sekqx dans le
; _
sens du cowxmt smguin : inoculer ap& l&&x onction O,i)U à C,5 fi.
- .
Inoculation intra&r&rale
-..,L31a.gcI.ne x--.--- ---.-- ----- ."--L.
,
OpG.rer corne pow la cavit6. amniotique.
Saisir la tête avec une pince fine
et la tenir par la paupi&e ou le bac.
Enfoncer l'aiguille (4/10) de 2 mn et injecter lpirOculu~ (0,02 ml e3-wimn)
?
FI-
.
.- Pipettes Pasteur et pipette0c à 'bule d9une contenance de 5 à 15 MI avec un
L
orifice lat&al,
- des tubes de 18 stériles ou des .flacons,
-* des tubes de milieu de culture pour contr6le de la sterilité (milieux pou..
a&obies et anakmbies) ,
. .
-' des pinces fines sans rmrs,
-a des petits ciseaux droits et courbes.,
- des pinces fines 2 mors,
2) Prél&ement des liquides
F+ou~ kiteT lPouverh~e des vaisseaux au cours des diff&ents pr&kments,
OI-I placera les oeu% au moins une nuit de 0 à + 4OC ou quelques heures dans une
chambre à fj?lace avant l'ouver%m?. Eviter autant que possible la comélation.
a> Licyide miotime
-..y ,.."-e..'t...w..m--C*-."
Le lic@k amniotique est Clair (eau de roche>, 2 à 3 ml dansunoeuf
normal incubé 12 jours. Ap&s inoculation, ce volume est gén6ralement Lnf&ieur
et peut se r&!uixe 4 quelq.ues gouttes. Le liquide peut égale&& devenir trmble.
Pour le recueillir, aprk ouvex?ture de l'oeuf, vider le IE@idë'allanto1~~~
que, saisir avec une pince fine 2 mm la poche amiotiqueI intmduire l'extrê~-
mité d'une pipette à boule et as-$rer.
b) Liquide allanto.?gue
-------...-------- --
L'oeuf est @a& verticalement,
on enlève délicaterrent la me&rane co-
quillère et la MCA sans léser les vaisseaux.
P&everp.% aspiration,
3) ?L?t$lèvement des tissus
a> La MT&\\,
e---m-
- Ouvrir 1 'oeuf au niveau de la chambre 2 air ;
- dégager soigneusemnt la rnmbrane Coquill&e ;
- faire une ?-&che sur la MCA ;
- vider le omtenu de l'oeuf.
La MCA reste collée si~r la pami de l'oeuf.
.
c) Le sac vitellin
----.,.---------1
- ouvrir lvoeuf comne pour le liquide allantolque -
- faire une brêche dans la K%. et cxttir 1 'enïbryon avec une pime
et couper le p&iicule ombilical.,
- pren&e le pédicule: sortir le sac et le placer dans une bof-te de
&ri u
4) Conh?Gle de stérilité
--"
Il est F6alise sur chaque type de &xAte TEW l'enswncer~ent de milieux
appropriés.
F -' PA-S PCUVfW I>JPLI,~ICEl? TA CF.OISS/W!J' LES VIR'JS UNS L"OEUF E?E%Y'3ï?E
--
----, .--.---
-
el"-.-
- - - - - -
Parmi les facteurs pouvant influencer la cmissance des virus dans l'oe~ti
embryonné, nous pcuvons miter; 0
a) la voie d'inocula:tion
s.--w
Si pur un virus d6j$ identifik, on peut choisjr la partie de l'oeuf p.3
mettant un dévelmpement qkixnm., il n'en est pas de X%%E POUY, les pmduits con-
terkant UT! virus dont on ne comaÉt pas la nature, ni par conséquent les pmpriG-
-5%.
17) Les contaminations ?xct&ienn~et ~cop1asmiq-E~
_--_.. -. . .--<- -.--.
Elles peuvent E-tTe limitées par la cent&fu,gatior des susperisicns et
- 1
l'utilif3ation d'a~-~Ctiotiques. Me ~32s oubliw que certains antibïotim2es peuvent
@ner à forte ccnceHxx&m le pmcess~m de multiplication virale, alms Que d'au-
.
tres sont sans effet, f--'xqle,. le Virus de la grippe se dkeloppe dans 1'0eu.f CT'
présence de 12,N30 UI de Penicilline ~alom qy.‘m ne dispose gu$re 500 à 1.000 UI.
c) La t0xici-G pour l'embryon des inoculums
-_--_-----
-= bmyats d'orgae
--
antïbiotimm3.
d) La solution pmr la dilution des virms à inoculer
- - - - - - -
La sclution peut contenir des inhihiteurs naturels du V&~S (solution
serum humain, serm de lapin: sem de cheval, etc.,,),
La stabiIit6 du virus dans ces solutions constitue g6nklmnt une étape
délicate,
Compte tenu de tous ces facteurs pouvant influencer la cr6iSsance du Vimx
dans l'oeuf embqonné, chaque rkthode retenue représente en fait un compromis
entre les avantages et les inconvénients pcssibles.
.
- 10
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