Tests d’innocuité du vaccin vivant atténué ...
Tests d’innocuité du vaccin vivant atténué horotogue
contre la Peste des Petits Ruminants (P.P.R).
1 t INTRODUCTION :
1.1. Caractéristique de la souche:
la souche d'origine du vaccin homologue anti PPR est le virus PPR
75/1 isolé au Nigeria en 1975(Réf.). Ce virus a été atténué in
vitro sur des cellules V&o au CIRAD-EMVT(Réf.). La souche fournie
pour la production de vaccin est au 70" passage sur ce'llules véro.
Le lot de vaccin est considéré satisfaisant lorsque te titre de
virus est supérieur au minimum requis (102~s par dose). Le contrôle
de qualité du lot de vaccin tient compte également des résultats
des tests d'identité,
de stérilité bactérienne, fongique et
mycoptasmique, d'innocuité et d'efficacité,
Le vaccin homologue anti PPR, produit pour la Premiere fois au
LNERV-ISRA, doit être utilisé à Za place du vaccin hétérologue anti
PB dans les campagnes de vaccination contre la PPR au Sénégal. Ce
contr01e vise a vérifier t'innocuitk de ces premiers lots de vaccin
anti PPR fabriqués au LNERV sur des petits ruminants Locaux.
1.2. Définition du test d’innocuité:
L'innocuité d'un vaccin est L'absence d'effets toxiques sur des
espèces cibles Cou innocuité spécifique sur les ovins et les
caprins pour le vaccin contre la peste des petits ruminantsj et sur
des espèces non cibles (ou innocuite non spécifique sur les souris
blanches). L'innocuité est Le contraire de la toxici+&.
En pratique, une inoculation de vaccin effectuée chez des moutons
et des chévres est uivie d'un examen clinique (recherche de signes
de la PPR) et sérologique (recherche d'anticorps )
II.WATÉRIELS 8 MÉTHODES:
2.1. LE LOT DE VACCIN testé:
Le Lot du vaccin PPR N" R037 (ou 3" Lot du vaccin PPR fabriqué i
Dakar le 13/1X1997), de 290200 doses vaccinales réparties dans
5304 flacons de 50 doses. Le titre contrôlé le 24/12/1997 est de
103,l Doses Cytopatogènes 50% (DCP50) par dose vaccinale (norme
admise est de 10295 DCP50 par dose vaccinale). Ce Lot est apparu
conforme aux tests de contrôle de stérilité bactérienne (milieu
bouillon Trypticase soja enrichi
de sérum),
mycoplasmique
(bouillons Thioglycolate et Gourlay) et fongique (milieu de
Sabouraud).
2,2. LES ANIMAUX:
Les tests d'innocuité specifique ont éte réalisés sur des moutons
et des chèvres alors que Les tests d'innocuité non spécifique L'ont
été sur des souris blanches.
2.2.1. Les montons:
Six (6) moutons locaux de race Warale {issu de croisement du mouton
peul-peu1 et du mouton maure} âgés d'un (1) an environ avec des
poids variant de 15 à 23 Kg.
2,2.2, Les chèvres:
Sept (7) chèvres locales de race sahélienne agées d'un (1) an avec
des poids variant de 13 à 15 Kg.
2.2.3. Les souris blanches:
40 souris blanches d'un poids moyen de 18 grammes
2.3. LE PROTOCOLE DE CONTROLE:
2.3.1 Période d'observation ou d'acclamation:
Les petits ruminants, mis en observation pendant une periode de dix
neuf (19) jours, ont reçu un traitement à base de vitamine (STRESS
ViTM&) d'antibiotique (LONGICINEB) et de déparasitant (IVOMEC@)~
L'alimentation est constituée de paille d'arachide, de concentré
(sous forme de tourteau d'arachide) et de l'eau à volonté.
Pendant cette période, La température corporel1e est prise tous les
matins à 9 heures.
Des recherches d'hémoparasites et de parasites gastro-intestinaux,
respectivement sur des frottis de sang et des fèces, ont donné des
résultats négatifs.
Une recherche d'anticorps neutralisant le virus de la PPR s'est
révélée négative chez l'ensemble des petits ruminants.
2.3.2 Protocole expérimental:
L'expérimentation consiste à inoculer aux animaux diverses doses du
vaccin contre la PPR et à vérifier la présence ou l'absence
d'effets néfastes (maladie, mauvais état général, mort, >. Ces
animaux inoculés sont misen contact avec des témoins non vaccinés
pour vérifier la diffusion eventuelle du vaccin qui se traduit par
une séroconversion (animal négatif devenant positif),
A cet effet, Les petrts rutnrnants ont Pté répartis dans quatre
groupes A, E, C, D :
L.lr4.E.R.V B.P. 2057 Dakar-Hann Tel (221) 832 36 78 Fax (221) 832 21 18
Pour les 6 moutons:
Groupe A:
- 3 moutons: 1 inoculé à 100 doses (N” 18534) et 2 témoins contact
non inoculés (N” 42190 et 44502)
Groupe B:
- 3 moutons: 2 inoculés à 0,l dose (N" 42192 et 42195) et 1 témoin
contact non inoculé (42191).
Tableau N”i: Répartition des ovins.
,
.
Pour les 7 chèvres:
Groupe C:
- 4 chèvres: 2 inoculés bl00 doses (No 44522 et 44526) et 2 témoins
contact non inoculé (N" 44527 et 44528) .
Groupe D:
- 3 chèvres: 2 inoculées à 0,l dose (N" 44520 et 44594) et 1 témoin
contact non inoculé (N" 44595).
Tableau N”2:
Répartition des caprins.
Groupe / N’ C a p r i n s
P o i d s (Kg)
D o s e injectee
______-__--_---_________
---_--------------------
----_---------_---------
lJr,juce t: : i+&sLi
l?
Id0 dùSPS
les injections de vaccin ont été réalisées par la voie sous cutanée
a raison de 1 ml par animal. Ils sont examinés tous les jours
ciiniquement (prise de température, examen cliniquej jusqu'au 21"
jour. Des prises de sang ont été effectuées avant Yinoculation
et
au 21' jour aprés I'inoculation.
Pour Zes souris;
Deux groupes E, F ont été constitués en :
Groupe E:
10 souris recevant une {l) dose vaccinale par ta voie péritonéale.
Groupe F:
10 souris témoins non inoculés.
les souris ont été suivies pendant 30 jours et des autopsies ont
été réalisées sur toutes les souris 6 la fin de Za période
d’observation.
5
I N F R U R P Xi!i7 lhitar-Hann T e l 1231\\ 8 3 2 3 6 W F a x Q21) 332 2 1 18
2.4. LES TESTS RÉALISÉS:
2.4-l. Les tests virologiques:
Des titrages et des isolements de virus ont été tentés sur Les
cultures de cellules Véro à partir des flacons de vaccin et du sang
hépariné prélevé chez les petits ruminants vaccinés.
2.4.2. Les tests sérologiques:
Le test utilisé est celui de Za séroneutralisation
(sérum variable,
virus constant) sur culture de cellules véro. La lecture est faite
au 5" jour et la dilution est considérée comme positive lorsque Ies
effets cytopathogènes sont absents.
Un sérum animal est positif Lorsqu'il contient un titre d'anticorps
neutralisant le virus PPR supérieur ou égal à 8.
2.4.3, Les tests bactériologiques & fongiques
Le sang prélevé est inoculé à différents milieux comme les
bouillons Trypticase soja enrichi de sérum et de Thioglycolate
(présence ou absence de bactéries), le milieu de Sabouraud
(présence ou absence de champignons),
2.4.4. Les tests parasitologiques
Des frottis de sang sont réalises pour vérifier, après co‘toration
de Giemsa, la présence ou l'absence d'hémoparasites tels que les
trypanosomes, les anaplasmes.
III. RÉSULTATS & DISCUSSIONS:
3.1 TITRE RU LOT:
k Le titre contrôlé du lot est de 10391 Doses Cytopatogènes 5096
(DCP50) par dose vaccinale par Ia méthode de Reedet Nuench (norme
admise est de 10295 DCP50 par dose vaccinale). Ce tot est apparu
conforme aux tests de contr6le de stérilité bactérienne (milieu
bouillon Trypticase sola enrichi de sérum), mycopIasmique
(bouillons Thioglycolate et Gourlay) et fongique {milieu de
Sabouraud).
Les quantités virales inocul6es sont de 10211 DCP50 (125,8 DCP50)à
0,l dose et de 105t1 DCP50 (125892,5 DCP50) à 100 doses.virales.
3 . 1 . &~LUTI~N cmrQuk
3.1.1. la température des animaux:
L'examen des courbes thermiques des animaux vaccinés et non
vaccinés
ne montre pas de différence significative. Aucune
hyperthermie n'a été notée chez les animaux(voir
courbes de
température en annexe).
L.N.E.f?.V B.P. 2057 Dakar-Hann Tel (221) 832 36 78 Fax (221) 832 21 18
3.1.2, Les symptômes & 'lesions.
Aucun syrnpt&ne de maladie n'a été décelé chez 'Les animaux (ovins et
caprins) vaccinés et non vaccinés.
l'autopsie n'a révélé aucune Zésion spécifique de peste des petits
ruminants.
Chez les souris blanches, aucune mortalité n’a été notée et
l’autopsie n'a révélée aucune lésion.
3.2. ÉVOLUTION VIROLOGIQUE ET SÉROL06IQUE:
Aucun isolement de virus PPR n'a pu être obtenu des prélèvements de
sang effectués durant les trois jours après la vaccination des
petits ruminants (ovins et caprins).
Chez les ovins, les résultats sérologiques sont présentés dans le
tableau N"3.
Au 2le jour,
les anticorps neutralisants sont
présents, à des titres supérieurs à 40, chez tous les animaux
vaccinés (No 18534, 42192 et 42195) mais ils sont absents chez Zes
Témoins non vaccinés (No 42190, 44502 et 42191).
Les titres en antcorps anti virus PPR, Zes plus élevés (titre 6
320), sont observés chez l’ovin N" 42192, ayant reçu 0,l dose
vacci nal e .
Chez les caprins, les résultats sont présentés dans le tableau N04.
Au 21e jour, tous les quatre (4) animaux vaccinés sont apparus
positifs en anticorps neutralisants le virus de la PPR. Au
contraire, les animaux contact non vaccinés, au nombre de trois,
sont restés négatifs.
IV. CONCLUSIONS:
4.1, INNOCUITÉ NON SPECIFIQUE:
Le test d'innocuité non spécifique est satisfaisant.
Les résultats obtenus chez les soutw blanches montrent que le lot
de vaccin teste est parfaitement inoffensif.
4.2.INNOCUITÉ SPÉCIFIQUE:
Le test d’innocuité spécifique est satisfaisant.
Le lot testé est satisfaisant car il n’a pas provoqué de signes
néfastes chez Zes petits ruminants (ovins et caprins) et a entrainé
une forte réponse sérotogique à toutes les doses vacciales
utilisées c'est à dire à 0,l dose et à 100 doses* Cette forte
réponse anticorps anti virus PPR est due aux quantités de virus
présentes aux doses utilisées c’est à dire 125,8 DCP50 a 0,l dose
vaccinale et 125892,5 DCP50 à 100 doses,vaccinales. Ces quantités
L.N.E.R.V B.P. 2057 CIakar-Hann Tel (221) 832 36 78 Fax (221) 832 21 18
d’antigènes sont suffisamment importantes pour provoquer une
réaction sérologique positive chez les petits ruminants.
8
LP4.E.R.V B.P. 2057 Dakar-Hann Te! (221) 832 36 78 Fax (221) 832 21 18
Tableau N-3: Résultats des tests de s4roneutralisation chez les
ovins vaccinés et non vaccinés:
ililutlon de
Sérun
__--__-____---
Pur
1110
1 A?0
1/40
1/80
11160
1 a?0
+
f
+
t
+
+
f
+
t
c
contre la Peste des Petits Ruminants (P.P.R).
1 t INTRODUCTION :
1.1. Caractéristique de la souche:
la souche d'origine du vaccin homologue anti PPR est le virus PPR
75/1 isolé au Nigeria en 1975(Réf.). Ce virus a été atténué in
vitro sur des cellules V&o au CIRAD-EMVT(Réf.). La souche fournie
pour la production de vaccin est au 70" passage sur ce'llules véro.
Le lot de vaccin est considéré satisfaisant lorsque te titre de
virus est supérieur au minimum requis (102~s par dose). Le contrôle
de qualité du lot de vaccin tient compte également des résultats
des tests d'identité,
de stérilité bactérienne, fongique et
mycoptasmique, d'innocuité et d'efficacité,
Le vaccin homologue anti PPR, produit pour la Premiere fois au
LNERV-ISRA, doit être utilisé à Za place du vaccin hétérologue anti
PB dans les campagnes de vaccination contre la PPR au Sénégal. Ce
contr01e vise a vérifier t'innocuitk de ces premiers lots de vaccin
anti PPR fabriqués au LNERV sur des petits ruminants Locaux.
1.2. Définition du test d’innocuité:
L'innocuité d'un vaccin est L'absence d'effets toxiques sur des
espèces cibles Cou innocuité spécifique sur les ovins et les
caprins pour le vaccin contre la peste des petits ruminantsj et sur
des espèces non cibles (ou innocuite non spécifique sur les souris
blanches). L'innocuité est Le contraire de la toxici+&.
En pratique, une inoculation de vaccin effectuée chez des moutons
et des chévres est uivie d'un examen clinique (recherche de signes
de la PPR) et sérologique (recherche d'anticorps )
II.WATÉRIELS 8 MÉTHODES:
2.1. LE LOT DE VACCIN testé:
Le Lot du vaccin PPR N" R037 (ou 3" Lot du vaccin PPR fabriqué i
Dakar le 13/1X1997), de 290200 doses vaccinales réparties dans
5304 flacons de 50 doses. Le titre contrôlé le 24/12/1997 est de
103,l Doses Cytopatogènes 50% (DCP50) par dose vaccinale (norme
admise est de 10295 DCP50 par dose vaccinale). Ce Lot est apparu
conforme aux tests de contrôle de stérilité bactérienne (milieu
bouillon Trypticase soja enrichi
de sérum),
mycoplasmique
(bouillons Thioglycolate et Gourlay) et fongique (milieu de
Sabouraud).
2,2. LES ANIMAUX:
Les tests d'innocuité specifique ont éte réalisés sur des moutons
et des chèvres alors que Les tests d'innocuité non spécifique L'ont
été sur des souris blanches.
2.2.1. Les montons:
Six (6) moutons locaux de race Warale {issu de croisement du mouton
peul-peu1 et du mouton maure} âgés d'un (1) an environ avec des
poids variant de 15 à 23 Kg.
2,2.2, Les chèvres:
Sept (7) chèvres locales de race sahélienne agées d'un (1) an avec
des poids variant de 13 à 15 Kg.
2.2.3. Les souris blanches:
40 souris blanches d'un poids moyen de 18 grammes
2.3. LE PROTOCOLE DE CONTROLE:
2.3.1 Période d'observation ou d'acclamation:
Les petits ruminants, mis en observation pendant une periode de dix
neuf (19) jours, ont reçu un traitement à base de vitamine (STRESS
ViTM&) d'antibiotique (LONGICINEB) et de déparasitant (IVOMEC@)~
L'alimentation est constituée de paille d'arachide, de concentré
(sous forme de tourteau d'arachide) et de l'eau à volonté.
Pendant cette période, La température corporel1e est prise tous les
matins à 9 heures.
Des recherches d'hémoparasites et de parasites gastro-intestinaux,
respectivement sur des frottis de sang et des fèces, ont donné des
résultats négatifs.
Une recherche d'anticorps neutralisant le virus de la PPR s'est
révélée négative chez l'ensemble des petits ruminants.
2.3.2 Protocole expérimental:
L'expérimentation consiste à inoculer aux animaux diverses doses du
vaccin contre la PPR et à vérifier la présence ou l'absence
d'effets néfastes (maladie, mauvais état général, mort, >. Ces
animaux inoculés sont misen contact avec des témoins non vaccinés
pour vérifier la diffusion eventuelle du vaccin qui se traduit par
une séroconversion (animal négatif devenant positif),
A cet effet, Les petrts rutnrnants ont Pté répartis dans quatre
groupes A, E, C, D :
L.lr4.E.R.V B.P. 2057 Dakar-Hann Tel (221) 832 36 78 Fax (221) 832 21 18
Pour les 6 moutons:
Groupe A:
- 3 moutons: 1 inoculé à 100 doses (N” 18534) et 2 témoins contact
non inoculés (N” 42190 et 44502)
Groupe B:
- 3 moutons: 2 inoculés à 0,l dose (N" 42192 et 42195) et 1 témoin
contact non inoculé (42191).
Tableau N”i: Répartition des ovins.
,
.
Pour les 7 chèvres:
Groupe C:
- 4 chèvres: 2 inoculés bl00 doses (No 44522 et 44526) et 2 témoins
contact non inoculé (N" 44527 et 44528) .
Groupe D:
- 3 chèvres: 2 inoculées à 0,l dose (N" 44520 et 44594) et 1 témoin
contact non inoculé (N" 44595).
Tableau N”2:
Répartition des caprins.
Groupe / N’ C a p r i n s
P o i d s (Kg)
D o s e injectee
______-__--_---_________
---_--------------------
----_---------_---------
lJr,juce t: : i+&sLi
l?
Id0 dùSPS
les injections de vaccin ont été réalisées par la voie sous cutanée
a raison de 1 ml par animal. Ils sont examinés tous les jours
ciiniquement (prise de température, examen cliniquej jusqu'au 21"
jour. Des prises de sang ont été effectuées avant Yinoculation
et
au 21' jour aprés I'inoculation.
Pour Zes souris;
Deux groupes E, F ont été constitués en :
Groupe E:
10 souris recevant une {l) dose vaccinale par ta voie péritonéale.
Groupe F:
10 souris témoins non inoculés.
les souris ont été suivies pendant 30 jours et des autopsies ont
été réalisées sur toutes les souris 6 la fin de Za période
d’observation.
5
I N F R U R P Xi!i7 lhitar-Hann T e l 1231\\ 8 3 2 3 6 W F a x Q21) 332 2 1 18
2.4. LES TESTS RÉALISÉS:
2.4-l. Les tests virologiques:
Des titrages et des isolements de virus ont été tentés sur Les
cultures de cellules Véro à partir des flacons de vaccin et du sang
hépariné prélevé chez les petits ruminants vaccinés.
2.4.2. Les tests sérologiques:
Le test utilisé est celui de Za séroneutralisation
(sérum variable,
virus constant) sur culture de cellules véro. La lecture est faite
au 5" jour et la dilution est considérée comme positive lorsque Ies
effets cytopathogènes sont absents.
Un sérum animal est positif Lorsqu'il contient un titre d'anticorps
neutralisant le virus PPR supérieur ou égal à 8.
2.4.3, Les tests bactériologiques & fongiques
Le sang prélevé est inoculé à différents milieux comme les
bouillons Trypticase soja enrichi de sérum et de Thioglycolate
(présence ou absence de bactéries), le milieu de Sabouraud
(présence ou absence de champignons),
2.4.4. Les tests parasitologiques
Des frottis de sang sont réalises pour vérifier, après co‘toration
de Giemsa, la présence ou l'absence d'hémoparasites tels que les
trypanosomes, les anaplasmes.
III. RÉSULTATS & DISCUSSIONS:
3.1 TITRE RU LOT:
k Le titre contrôlé du lot est de 10391 Doses Cytopatogènes 5096
(DCP50) par dose vaccinale par Ia méthode de Reedet Nuench (norme
admise est de 10295 DCP50 par dose vaccinale). Ce tot est apparu
conforme aux tests de contr6le de stérilité bactérienne (milieu
bouillon Trypticase sola enrichi de sérum), mycopIasmique
(bouillons Thioglycolate et Gourlay) et fongique {milieu de
Sabouraud).
Les quantités virales inocul6es sont de 10211 DCP50 (125,8 DCP50)à
0,l dose et de 105t1 DCP50 (125892,5 DCP50) à 100 doses.virales.
3 . 1 . &~LUTI~N cmrQuk
3.1.1. la température des animaux:
L'examen des courbes thermiques des animaux vaccinés et non
vaccinés
ne montre pas de différence significative. Aucune
hyperthermie n'a été notée chez les animaux(voir
courbes de
température en annexe).
L.N.E.f?.V B.P. 2057 Dakar-Hann Tel (221) 832 36 78 Fax (221) 832 21 18
3.1.2, Les symptômes & 'lesions.
Aucun syrnpt&ne de maladie n'a été décelé chez 'Les animaux (ovins et
caprins) vaccinés et non vaccinés.
l'autopsie n'a révélé aucune Zésion spécifique de peste des petits
ruminants.
Chez les souris blanches, aucune mortalité n’a été notée et
l’autopsie n'a révélée aucune lésion.
3.2. ÉVOLUTION VIROLOGIQUE ET SÉROL06IQUE:
Aucun isolement de virus PPR n'a pu être obtenu des prélèvements de
sang effectués durant les trois jours après la vaccination des
petits ruminants (ovins et caprins).
Chez les ovins, les résultats sérologiques sont présentés dans le
tableau N"3.
Au 2le jour,
les anticorps neutralisants sont
présents, à des titres supérieurs à 40, chez tous les animaux
vaccinés (No 18534, 42192 et 42195) mais ils sont absents chez Zes
Témoins non vaccinés (No 42190, 44502 et 42191).
Les titres en antcorps anti virus PPR, Zes plus élevés (titre 6
320), sont observés chez l’ovin N" 42192, ayant reçu 0,l dose
vacci nal e .
Chez les caprins, les résultats sont présentés dans le tableau N04.
Au 21e jour, tous les quatre (4) animaux vaccinés sont apparus
positifs en anticorps neutralisants le virus de la PPR. Au
contraire, les animaux contact non vaccinés, au nombre de trois,
sont restés négatifs.
IV. CONCLUSIONS:
4.1, INNOCUITÉ NON SPECIFIQUE:
Le test d'innocuité non spécifique est satisfaisant.
Les résultats obtenus chez les soutw blanches montrent que le lot
de vaccin teste est parfaitement inoffensif.
4.2.INNOCUITÉ SPÉCIFIQUE:
Le test d’innocuité spécifique est satisfaisant.
Le lot testé est satisfaisant car il n’a pas provoqué de signes
néfastes chez Zes petits ruminants (ovins et caprins) et a entrainé
une forte réponse sérotogique à toutes les doses vacciales
utilisées c'est à dire à 0,l dose et à 100 doses* Cette forte
réponse anticorps anti virus PPR est due aux quantités de virus
présentes aux doses utilisées c’est à dire 125,8 DCP50 a 0,l dose
vaccinale et 125892,5 DCP50 à 100 doses,vaccinales. Ces quantités
L.N.E.R.V B.P. 2057 CIakar-Hann Tel (221) 832 36 78 Fax (221) 832 21 18
d’antigènes sont suffisamment importantes pour provoquer une
réaction sérologique positive chez les petits ruminants.
8
LP4.E.R.V B.P. 2057 Dakar-Hann Te! (221) 832 36 78 Fax (221) 832 21 18
Tableau N-3: Résultats des tests de s4roneutralisation chez les
ovins vaccinés et non vaccinés:
ililutlon de
Sérun
__--__-____---
Pur
1110
1 A?0
1/40
1/80
11160
1 a?0
+
f
+
t
+
+
f
+
t
c