r”c. w-F, KEPUBLIQUE DU SENEGAL MINISTERE...
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w-F,
KEPUBLIQUE DU SENEGAL
MINISTERE DU DEVELOPPEMENT RURAL
DEPARTEMENT DE RECHERCHES SUR LES
PRODUCTIONS ET LA SANTE ANIMALES
INSTITUT SENEGALAIS DE RECHERCHES
AGRICOLES (I.S.R.A.)
LABORATOIRE NATIONAL DE L’ELEVAGE
ET DE RECHERCHES VETERINAIRES
B.P. 2057
DAKAR - HANN
DIAGNOSTIC DE LA PERIPNEUMONIE
CONTAGIEUSE BOVINE (PPCB)
SEMINAIRE FAO SUR IA PRODUCTION DE
VACCINS CONTRE IA PPCB
Bamako, Mali, du 19 au 24 septembre 1988
Par M. KONTE
R E F . No 057,‘MIBROBlO.
SEPTEMBRE 1988.

SEMINAIRE SUR LA PRODUCTION DE VACCINS
____________________------------------
CONTRE LA PERIPNEUMONIE BOVINE (PPCB)
___--___-----__-__--------------------
19 - 24 SEPTEMBRE 1988 - LCV BAMAKO
------------__----------------------
LA PERIPNEUMONIE CONTAGIEUSE BOVINE (PPCB)
-----_-__---___---------------------------
D I A G N O S T I C
--__----------------
1 - DIAGNOSTIC CLINIQUE
_____-___------- --
- En pays indemne
: diffic ile et délicat
- En terr itoire endémique : penser à la PPCB lors
d'un processus contagieux chez les bovins, évoluant lentement dans l'effec-
tif avec manifestation fébrile, de la pleuropneunonie exsudative.
Le syndrome complet est reconstitué par l'examen
de plusieurs malades d'un même foyer et non sur un seul animal.
II- DIAGNOSTIC NECROPSIQUE
------------------- --
- Lésions pathogneumoniques :.type d'hépatisation
très particulière des lobules pulmonaires : aspect marbré évoluant en
aspect "fromage de tête" selon une progression centripète, lorsque diffé-
rents stades d'infection cohabitent.
. . . / . . .

- 2 -
. La pleurésie exsudative (jusqu'à 30 1) et les
"omelettes" de fibrine.
- Dans les cas chroniques :
. présence de séquestres
. à la place de l'exsudat sérofibrimeux un
tissu fibreux provoquant des adhérences entre feuillets pleuraux.
III- DIAGNOSTIC EXPERIMENTAL
-----------------------
'.'isolement et l'identification de Mycoplasma
nlycoides subsp. mycoides SC est relativement facile.
A) - PRELEVEMENTS
1”) - -------------------
Sur l'animal vivant
- Mucus nasal ou liquide de jetage, plus ou moins
riche en germes en fonction du stade lésionnel.
- Liquide pleural prélevé par ponction thoracique
(P.G t A.TH.).
- Sang pour prélèvement de sérum.
2”) - --------------
Sur le cadavre
- Fragment de poumon hépatisé
- Lymphe thoracique
- Exsudat bronchique
- Ganglions lymphatiques broncho-pulmonaires
- Serum du caillot sanguin intracardiaque.
Envoyer tous les prélèvements sous froid (0 à 4°C) ;
si envoi différé savoir qu'a +4"C, conservation de quelques jours ;
à -20 ou à -25°C : plusieurs semaines à plusieurs mois ; à +4"C ou mieux
à -20°C : survie de plusieurs années pour des lyophilisats.
. . ./ . . .

-3-
B) - DIAGNOSTIC MICROBIOLOGIQUE
1”) - ------------------
Milieux de culture
a) - Constituants obligatoires
___-------------- -------
- Un milieu de base : constitué par un extrait
de viande (infusion de coeur de boeuf, par exemple) ou une peptone
(tryptose difco, tryptone difco ou Oxoid) ou les deux.
- Un extrait ou un autolysat de levure de bière
(frais ou du commerce (apporte les facteurs de croissance : vitamines du
groupe B, précurseur des acides nucléiques).
- Un sérum à 10 % (concentration finale recomman-
dée favorable à l'apparition de comètes), décomplémenté 30 minutes à
56°C dépourvu d'anticorps et de substances inhibitrices; de préférence
choisir le sérum d'un vieux cheval.
b) - Constituants conseillés
~-----~~--~~-----__---~
- Glucose : 1 à 2 g/l
- Un système tampon (phosphate par exemple)
- Du glycërol
- De 1'ADN.
c) - Inhibitions bactériens : Obligatoires au moment de
----------------------
l'isolement.
- Pénicilline G : 250 à 1000 UI/ML
- Acétate de thallium
: 1/5000 - l/lO 000
S'il existe des risques de contaminations fongi-
ques, ajouter de la fungizone.
Les milieux utilisés sont soit liquides soit
solides (par adjonction de gëlose : 15g/l ou d'agarose).
Les milieux liquides sont stérilisés par filtra-
tion, les milieux solides seront autoclavës.
. . . / . . .

- 4 -
2") - Isolement
---------
a) - Sur milieu solide (avec les inhibiteurs bactériens
-----------------
1.
- Dépot et étalement de quelques gouttes de
lymphe pulmonaire, liquide pleural ou broyat de poumon.
- Empreinte directe sur la gélose, avec ou sans
étalement,
à partir de poumon lésé ou section de ganglion.
- Incubation 3 à 5 jours à 37°C en atmosphère
humide. CO2 inutile.
- Résultats : une culture positive montre des
colonies caractéristiques en "oeuf sur le plat", d'un mm au plus, à centre
dense incrusté dans la gélose. Observation directe au stéréomicroscope
ou après coloration soit au May - Grünwald - Gimsa,
soit mieux à l'aide
du colorant de Dienes.
b) - ____-______- ----
En milieu liquide (avec les inhibiteurs bactériens).
- la meilleure méthode reste celle de la dilution
pastorienne.
C'est l'exemple de l'action de deux systèmes : les dilutions
jointes à l'action des inhibiteurs pour éliminer les contaminations.
Résultats : en 3 à 5 jours de culture, apparais-
sent un trouble léger et homogène, avec souvent, mais pas toujours, des
"comètes"
(milieu pauvre en sérum = 10 % favorable). Puis opacité uniforme
avec onde moirée (gangue de galactane).
L'état frais montre des particules ni cocci, ni
bacille, de taille très inférieure à des bactéries, en petits points
grappes et longs filaments greles, agités d'un fort mouvement brownien
(culture jeune).
Procéder à une purification préalable de la
colonie observée par clonage. L'idéal est de réaliser 3 purifications
consécutives. Si bouillon contaminé, filtrer sur disque à 0,45 u ou à
0,22 u de porosité.
. . ./ . . .

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a) - -_----------------------
Elimination des formes L
Par suppression des inhibiteurs bactériens après
3 subcultures, en l'occurence la pénicilline, la bactérie d'origine re-
prend sa forme et est aisément détectée.
b) - -----L--I
Test a la :-i--
dlgltonlne
Permet de différencier les mycoplasmes sensibles
des acholéplasmes indifférents à la digitonine.
c) - Caractères biochimigues
____--------------- ---
Mycoplasma mycoides subsp. mycoides (SC biotype
bovin) répond aux caractères suivants :
- film et tâches : -
- hydrolyse du glucose : +
- hydrolyse de l'arginine : -
- hydrolyse des phosphates : -
- réduction des sels de tétrazolium : t/t
- pouvoir protéolytique : -(ou faible)
Ces caractères métaboliques sont communs avec
' d'autres mycoplasmes. L'identification définitive utilise des moyens
sérologiques
: l'inhibition de croissance (ou inhibition du métabolisme
du glucose avec un immunsérum de référence), l'immunofluorescence directe
ou indirect.
dl - Inhibition de croissance
_______-___-------------
Technique de Clyde. Lecture entre 48 et 72 h,
test pos itif si zone d'inhibition supérieure ou égale à Zmm. Limites :
problème de distinct on entre les souches de mycoplasma mycoides subsp.
mycoides byotipe bov n (SC, PPCB) et mycoplasma mycoides subsp. mycoides
(biotype caprin (LC)
rarement pathogène pour les bovins.
Les souches LC sont caractérisées par :
- très grande vitesse de croissance
- diamètre des colonies supérieur à Zmm apparais-
sant en 24 h.
. . . / . . .

- 6 -
- pouvoir protéolytique considérable
- thermorésistance : survie de 48 h à 45"
- il n'y a jamais de comètes
- différence SC-LC par emploi de sérum d e bovin
naturellement infecté.
- le complément de cobaye ne freine ni n inhibe
la croissance du biotype caprin/SC bov i n.
e) - Imnunofluorescence
------------------
Complète le test d'inhibition. Travailler de
préférence sur des colonies entières sur blocs de gélose, mais fixées.
La méthode indirecte, plus longue, permet une meilleure spécificité.
Utiliser un sérum témoin négatif.
B) - ------_------------ --
DIAGNOSTIC SEROLOGIQUE
1") - Recherche de l'antigène circulant
----------------_-- -----------_-
L'antigène spécifique, la galactane est faci-
lement mis en évidence pendant la période d'état dans l'organisme, en
particulier dans le sérum, les liquides lymphatiques, pulmonaire et
péricardique,
et dans l'urine. La recherche de la galactane dans le
torrent circulatoire met en oeuvre deux tests immunologiques :
a) - Le test de précipitation interfaciale en milieu
--s------e- ---- ---------------_--------------
Kguide :
----
Analogue à la réaction d'Ascoli pour le diagnos-
tic du charbon bactéridien. Lecture en 2 à 10 minutes.
b) - L'imnunodiffusion double en gélose :
---------------------------- -----
En particulier la méthode simplifiée.
Les deux protocoles sont faciles d'exécution et
trës fiables, à condition de posséder un bon sérum précipitant. Une
réaction positive a valeur de certitude.
. . ./ . . .

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Les chances maximales de mise en évidence de
l'antigène circulant chez un malade se situent aux alentours de un mois
et demi à deux mois et demi après le début de la maladie.
2") - Recherche des anticorps spécifigues
--------------------- --- ----- ---
a) - ~~~~~~~I~~~~~~---~-
figglutination sur lame
Ce test utilise un antigène coloré. Résultat
obtenu en mo ns de 2 minutes ; il est qualitatif ou semi-quantitatif.
Le sang tota
est utilisable, mais préférer le sérum. Retenir : une
bonne fiabil té des résultats pendant la phase aigu5 décroissant rap i-
dement à mesure qu'on entre dans la phase chronique du fait d'une quantité
grande d'imnuncoeplexes circulants.
Le test garde toute sa valeur si utilisé à
l'échelle du troupeau, ne doit jamais être un test individuel.
b) - ~~~~I~~~.L-----
La fixation du L--
complement
Reste la méthode sérologique de base pour le
diagnostic de la PPCB. Deux variantes existent :
- Méthode de Campbell et Turner : c'est la
technique recommandée par 1'0. 1. E. Elle est peu sensible (ce qui élimi-
ne les sérums à titre douteux et d'interprétation délicate). Par contre
elle est très spécifique : les fausses réactions positives sont extrême-
ment rares.
- Méthode de Kolmer : C'est la méthode à froid,
ayant la faveur de beaucoup d'utilisateurs francophones d'Afrique.
. En tous les cas, les anticorps spécifiques
ont une longue persistance dans le sang des animaux infectés, même après
la guérison clinique (porteur de séquestre).
. Les anticorps vaccinaux rendent positive la
fixation du complément pendant un certain temps mais à des titres assez
faibles. S'abstenir de procéder à tout dépistage sérologique dans les 3
mois qui suivent une vaccination.
. . ./ . . .

- 8-
. Les bovins vaccinés et immuns peuvent devenir
positifs lors de contacts infectants sans être malades pour autant.
. Certains cas de fausses réactions négatives
peuvent exister lors de PPCB grave par suite d'envahissement du torrent
circulatoire par l'antigène circulant. Les fausses réactions positives,
très rares, sont le fait d'antigènes communs
avec d'autres germes.
c) - -‘L.- _--------_- -.i--
L hemagglutination passive
Utilise des globules rouges sensibilisés par la
galactane. Elle révèle les mêmes anticorps que la séro-agglutination.
Elle est quantitative et très sensible.
d) - ----~~1~~~~~~~~ ,--I ~~-~~~~~~~~~~2
Le test imunoenzymatigue (EL~SA
Très sensible par nature, révèle l'ensemble des
anticorps antipéripneumoniques lorsque l'antigène employé est un lysat de
Mycoplasma mycoides.
Le seuil de positivité est à déterminer ou à
moduler ce qui constitue une entrave à la standardisation de la méthode.

B I B L I O G R A P H I E
- CHANTAL (J.) - La péripneumonie contagieuse bovine. Cours magistral.
E . I . S . M . V . D a k a r . 1 9 7 6 .
- H U D S O N ( J . R . ) - La péripneumonie contagieuse des bovidés. FAO. Rome.
1972.
- I.E.M.V.T./CIRAD : Mycoplasmes et mycoplasmoses des ruminants.
Document technique du service de Pathologie infectieuse. Juin 1985.
- O.I.E. - Les mycoplasmoses des ruminants. h : Revue scientifique et
technique de I’O.I.E., 1987, 6 (3).