REPUBLIQUE DU SENEf%L ------m---- ...
REPUBLIQUE DU SENEf%L
------m----
MINI%?.XDELARECHFRCHE
SCIXN'TIFIQUEETTECHNIQUE
--1-------w
INSTITUT SlZNEGALAIS DE RECHERCHES
AGRICGLEZ (I.S.R.A.)
-----m----w
LABGRA'IOIRE NATIONAL DE L'ELEVAGF,
EI'DEREamXHESVEmRINXRES
fI
f.
PREPARATION DU VACCIN ANTIPERIPNEUMONIQUE
LYOPHILISE Tl/ 44
ms.-.---
Par M.P. DOUTRE
Chef du Service de Bactériologie
LlNERV / ISRA
REF. No 32/MICROBIG.
MAI 1983
?
en lmuillon de la souche vaccinale '?Y./44 de 1Qcop3.am ~cldes.
..I" II<. -... - .-_-
- - -
.'
'.
,-,
- FBc&wtion du coe~
-,1_1_.....- -I---,II_
On pmvoq~e la zmhxttim pendant une he?x?e dan
.
s 10 litres d'eau distill& $ 5CPC '.
de 5 ky de hachis de coeur dé boeuf dégx-&j& (achat des coeurs à l'a&ttck):. -zi.s
:
on porte à éhulli&n, Filtration à chaud su2 pa;iIe~.
Le pI-1 est amené 2 8.,1 avec une solution de srxde 10 M. L'acidc ~&Que est &lmç:é
2 50 ml de soude 0,l Y. Le gel For& est dissout pzr agitation rrqnétique.
oc,* /
*RC
- Fr%$ar&ion de l'extmit de levure utilisé.
--_ _-.__. -e.-*--.-.
L'extrait de lwwe pr$m& exter~mn&m-tt @kente des qualités supérieures mx
produits comes~ndants C$E l'on -lzrwve dcans le ccxmerce. La tecknique de pr&p--
ration retenue.'est la sui.var& ,(lETWTj Service de PGzrobiologie) :
.
.,
I.
Mettre en sus~ension'hoG&?~e 1 kg de levure fmfche de boulangerie dans un li-
.
tre d'eau distillée en pr&ence de 8 ;nl de chlomfome ;
D laisser au bain-mie 24'heuzxs~.à 50°C en &tant de temps en't&s ; centr?ifu-s
PUY et recuelllti Un mernier surnageant que l'on conserve au froid ;
.
. repmdre ies culots dani'h liir& d'eau distill.Ge et les soume% à quatre
cycles qel-, déFe t
1 centrifugez-de nouveau ct.~recueilli.r IIe dcuxikx 'surna~eznt ;
.'
.
. r&langer les deux surna~eants ;
'.'I
. filtrer sm filtre Seitz EKS 1 (une ckzificztion préala3le sur rnebrane As
peut faciliter la fil-tratiori finale) ;
conserver à -2cPc.
l
II-
La stérilisation de 3.9 liwes de milieu est pratiquée pa~,filtration sur filtre Seiz.
EKS I dz 10 litres, a&s une clarZication ~r&lzble.sur-membrane As.
Le branchement filtre-ballon est effectué \\gr&ce à fYemploi,,sous k flame, des 'w-
bes de jonction nomlis& r&le-femUe SOVIREL (14/23) (voix utilisation de l'ap-
pareil de Sterne dans la préparation dss vaccins contre les pasteurelloses).
III - INOCUUJM
2) R&i$ent :
IJn Erlen-Meyer de 2 li.-Wes à la kse duquel 2 é-t6 soudée une tubulure de 6 cm
(travail du verre dans un atelier s&$alisé).
Sur la tubulure est errkoît<i un tube souple en rhodorsil (0 8 mn, &sistance 2 la
tmp&wtwe d'au-tcxlava~e) ter&.né par un.tube en ver& obtu& par u& ëffilure.
Ihe pince cl- 3 lmes pxmllèles de 6 cm est'$acÊe au nikati du tube souple.
'
- 3
h) Milieu :
C'est le milieu-d&rit ci-dessusp sous un velums de 1 litrx.
c> Stér++tion :.
Filtration dans les r&mes conditions que celles décrites ci-dessus.
'
d) Fnserwnc&nt
‘.
-
-
-
La scüche vaccitile Tl/44 'de ILiycoplasma mycoTdes est conservée sous forme di-.
---.----
banque lyo@ilisée cl/3 de culture en bouilkn, 2/3 de sémm de cheval d&compIL~~.
ment6 ou tout autre milieu de lyophilisation : lait &tim&, mist-dessicans, etc..,,)
A part& d'une ampule de la banaue, une séri e de 5 t&es mn-t ensemencés et mis
à ~~IC&T à'g7*C. &Y& 4 jours de cultures les cultures en tubes servent 2 ense
mencer lpErlen-kkyer contenant le milleu de I'inoculum~ Ce dernier est mis' 3 ‘in-
CL&& 3 ~~LIPS à 37*C amt d'être u-kil&& pur enserwncer le.ballon de 12 iltres';'
-<
de milieu.
! - DEXOULEVENT DE I& CilJLTIJRE
- - - -
--.
F'our la prépsration du vacc-ù1, on utilise une culture de 72 heures à 37*C, Au &urs
des dernibes 24 heures, les Mlons sont portés sur agitateur magnétiq,ue (a&aticfl
par vortex).
- LYoFHILrsATIoN ET EWLOI
- "...".,-
- 520 p de lait écr& sec sont ajoutes stérilement à la culture (environ 13 J.l-&reS :
1'2 litres de milieu + 1 litre dDinocuJ.um) :
- la'r6partition se fait sous un VOJNRE de 5 ml par fJacon -type penicilline de 20 ml.
à l'aide d'une serirpue automatique Cornwall :
- lyophi~isateur
:USIFROID~SPER G'rocéde RJXUTORD)
: temps de lyzphilisation 2E heu-
yp,s* .. :
-'.. y.:. . j
' Cassacrc du vide sous azote,
Exchage,
,‘.
.I
:
Au moment ‘de l'emploi, le contenu de chaque flacon est reconstitué avec 40 ~~1 d'eau.
distiGe froide (40 doses vaccinales).
-4
VI - ComoLEs
a) Inmnité
La valeur de lvkumnité cor&&e par le vaccin antip&ipneunmnique lyophilisé ps-.
pa& à l'aide de la souche Tl a Gté dkxmtrée~ dans diff&ents laboratoires, A
Dakar, au cours des annges 1968 et 1969, la méthode dite de contact? mise au
point par les chercheurs australiensj a permis d'ittablir que 3 mis et 7 mis et ~.
demi après la vaccina&oti\\~ l'inmkiteest totale : 14 mis aprk lvi.mmni sation!,
.
elle est encore de 90 p.100. %.ns ces conditions, une période de protection mi- . . ‘
nimle de l.an peut être garantie CLXKJTRE, M.P. ; CHAHBRON J, z Rev. Elev. Ved.
v&. Pays trop., 1970, 23: (2) : 163 - 179ji;
..'
-
Il est évident qu'il est absolument in-&ossible d'effectuer une expérience contact
pour chaque lot de vaccin produit. La valeur de lPi.mmnité de la souche T1/44
ayant été prouvée une fcis pour toutes pow? un vaccin titrant au mir-&wn 107 Tni-
<
,'
cr~organismes viables par dose vaccinale (1 ml), pour chaq,ue lot, le contrôle
se r&ne donc à un titraFe du nombre de micrcmganismes viables par ml, Ce nom
bre doit être épal (au minimm) ou supkieur à 107 (valeur retenue par les Experts
Pkipneumnie bovine FAO/OIE/OA1J).
Titrage *
-...w-- Y
Au laboratoire de IBkar, on utilise la méthode de kCR(DY (CADIEXTF, POCQUET &
NEGRE : 1948) a
- J. dose vaccinale est mise en culture dans un tube à essais contenant 9 ml de
milieu liquide (dilution 10"" 3, par la métJmde des dilutions successives5 on
prépare ces dernières de 10a 2 10m'lo (ler potioir).
- Avec chacune des dilutions 10r“, lO"‘".; 10S9, on ensemence 5 tubes de bouillon
de 9 ml avec 1 ml de dilution (Zèle portou?). Ilzeste donc dans chacun des tu-
bes originaux 10m7, 10-', lO-', 4 ml de milieu (ler port~ir)~
Lvensemble des tubes est pmt~ 2 lYétuve à 37*C et le développemnt des cultu-
res observé et note tous les jours jusqulau @me jour, alm s'effectue la
lecture finale,
Lx1 développement des cultures sur le second portoir on déduit le nombre carat;.
g
téristique (utilisation de la table), leauel permet de déterminer la quantité
de microorgmimes viables contenus dans une dose vaccinale.
/
0.. 0..
.-. 5
b) -+-muitE ._
C'est celle de la souche T1/44,
(hn sait que des r&xti,ons post-vaccinales sont toujours à cmindke sur des a&>
mux (taurins surtout) viwmt dzns des zones & la vacctition ripa pas CM pr@
tiqu& r%kemment. Dms ce cas. il est bien sûr ccnseil7é de vacciner e.q&imerkz-
.
1emmtu.n Fetit nc,mb~ d'anir~~~ et dsohsemw (10 ~CLIPS à 3 semaines) 1'a~~~'.i.-~
tion pssible d'un oedème 2 tendance envaI-6ssante de tyge W&nsien~ toute e:c'
tensirm jugée dangereuse yxzmmnt être $muk~
*;a pm le reccurs 2 un Cantibiotiaue
antimycop3asmique CT?ylosi.ne, Sp?rmrycine, Terraiycine, êtc, .,>. IA mn c7bsemaL.
tion du lieu diinoculation C*L/3 supkieur de la côte) est tien souvent une cause
favorisant 14q-parition d'une r6actim pst-vaccinale &endue.
Si Qmr ce37tains trwpeaux, la souche TV'44 s'avère par tm~ dcm,Fewuse, alors
s'iqx~~ la. vaccination à l'aide de la souche ?SH 'J 2xaucoup mins virulente, mis
dont la quali-t$ de l'immnit6 conf&êe est nettement i.r&rieure 2 celle de T1/44,
c> St&ilit6
LE conmle de stérilit6 est classique, 1.1 s sefC,ctue SUT milieu liquide a6mbie
et anaérobie,
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MINI%?.XDELARECHFRCHE
SCIXN'TIFIQUEETTECHNIQUE
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INSTITUT SlZNEGALAIS DE RECHERCHES
AGRICGLEZ (I.S.R.A.)
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EI'DEREamXHESVEmRINXRES
fI
f.
PREPARATION DU VACCIN ANTIPERIPNEUMONIQUE
LYOPHILISE Tl/ 44
ms.-.---
Par M.P. DOUTRE
Chef du Service de Bactériologie
LlNERV / ISRA
REF. No 32/MICROBIG.
MAI 1983
?
en lmuillon de la souche vaccinale '?Y./44 de 1Qcop3.am ~cldes.
..I" II<. -... - .-_-
- - -
.'
'.
,-,
- FBc&wtion du coe~
-,1_1_.....- -I---,II_
On pmvoq~e la zmhxttim pendant une he?x?e dan
.
s 10 litres d'eau distill& $ 5CPC '.
de 5 ky de hachis de coeur dé boeuf dégx-&j& (achat des coeurs à l'a&ttck):. -zi.s
:
on porte à éhulli&n, Filtration à chaud su2 pa;iIe~.
Le pI-1 est amené 2 8.,1 avec une solution de srxde 10 M. L'acidc ~&Que est &lmç:é
2 50 ml de soude 0,l Y. Le gel For& est dissout pzr agitation rrqnétique.
oc,* /
*RC
- Fr%$ar&ion de l'extmit de levure utilisé.
--_ _-.__. -e.-*--.-.
L'extrait de lwwe pr$m& exter~mn&m-tt @kente des qualités supérieures mx
produits comes~ndants C$E l'on -lzrwve dcans le ccxmerce. La tecknique de pr&p--
ration retenue.'est la sui.var& ,(lETWTj Service de PGzrobiologie) :
.
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I.
Mettre en sus~ension'hoG&?~e 1 kg de levure fmfche de boulangerie dans un li-
.
tre d'eau distillée en pr&ence de 8 ;nl de chlomfome ;
D laisser au bain-mie 24'heuzxs~.à 50°C en &tant de temps en't&s ; centr?ifu-s
PUY et recuelllti Un mernier surnageant que l'on conserve au froid ;
.
. repmdre ies culots dani'h liir& d'eau distill.Ge et les soume% à quatre
cycles qel-, déFe t
1 centrifugez-de nouveau ct.~recueilli.r IIe dcuxikx 'surna~eznt ;
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.
. r&langer les deux surna~eants ;
'.'I
. filtrer sm filtre Seitz EKS 1 (une ckzificztion préala3le sur rnebrane As
peut faciliter la fil-tratiori finale) ;
conserver à -2cPc.
l
II-
La stérilisation de 3.9 liwes de milieu est pratiquée pa~,filtration sur filtre Seiz.
EKS I dz 10 litres, a&s une clarZication ~r&lzble.sur-membrane As.
Le branchement filtre-ballon est effectué \\gr&ce à fYemploi,,sous k flame, des 'w-
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III - INOCUUJM
2) R&i$ent :
IJn Erlen-Meyer de 2 li.-Wes à la kse duquel 2 é-t6 soudée une tubulure de 6 cm
(travail du verre dans un atelier s&$alisé).
Sur la tubulure est errkoît<i un tube souple en rhodorsil (0 8 mn, &sistance 2 la
tmp&wtwe d'au-tcxlava~e) ter&.né par un.tube en ver& obtu& par u& ëffilure.
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c> Stér++tion :.
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-
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ment6 ou tout autre milieu de lyophilisation : lait &tim&, mist-dessicans, etc..,,)
A part& d'une ampule de la banaue, une séri e de 5 t&es mn-t ensemencés et mis
à ~~IC&T à'g7*C. &Y& 4 jours de cultures les cultures en tubes servent 2 ense
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! - DEXOULEVENT DE I& CilJLTIJRE
- - - -
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F'our la prépsration du vacc-ù1, on utilise une culture de 72 heures à 37*C, Au &urs
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par vortex).
- LYoFHILrsATIoN ET EWLOI
- "...".,-
- 520 p de lait écr& sec sont ajoutes stérilement à la culture (environ 13 J.l-&reS :
1'2 litres de milieu + 1 litre dDinocuJ.um) :
- la'r6partition se fait sous un VOJNRE de 5 ml par fJacon -type penicilline de 20 ml.
à l'aide d'une serirpue automatique Cornwall :
- lyophi~isateur
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Au moment ‘de l'emploi, le contenu de chaque flacon est reconstitué avec 40 ~~1 d'eau.
distiGe froide (40 doses vaccinales).
-4
VI - ComoLEs
a) Inmnité
La valeur de lvkumnité cor&&e par le vaccin antip&ipneunmnique lyophilisé ps-.
pa& à l'aide de la souche Tl a Gté dkxmtrée~ dans diff&ents laboratoires, A
Dakar, au cours des annges 1968 et 1969, la méthode dite de contact? mise au
point par les chercheurs australiensj a permis d'ittablir que 3 mis et 7 mis et ~.
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nimle de l.an peut être garantie CLXKJTRE, M.P. ; CHAHBRON J, z Rev. Elev. Ved.
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Il est évident qu'il est absolument in-&ossible d'effectuer une expérience contact
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se r&ne donc à un titraFe du nombre de micrcmganismes viables par ml, Ce nom
bre doit être épal (au minimm) ou supkieur à 107 (valeur retenue par les Experts
Pkipneumnie bovine FAO/OIE/OA1J).
Titrage *
-...w-- Y
Au laboratoire de IBkar, on utilise la méthode de kCR(DY (CADIEXTF, POCQUET &
NEGRE : 1948) a
- J. dose vaccinale est mise en culture dans un tube à essais contenant 9 ml de
milieu liquide (dilution 10"" 3, par la métJmde des dilutions successives5 on
prépare ces dernières de 10a 2 10m'lo (ler potioir).
- Avec chacune des dilutions 10r“, lO"‘".; 10S9, on ensemence 5 tubes de bouillon
de 9 ml avec 1 ml de dilution (Zèle portou?). Ilzeste donc dans chacun des tu-
bes originaux 10m7, 10-', lO-', 4 ml de milieu (ler port~ir)~
Lvensemble des tubes est pmt~ 2 lYétuve à 37*C et le développemnt des cultu-
res observé et note tous les jours jusqulau @me jour, alm s'effectue la
lecture finale,
Lx1 développement des cultures sur le second portoir on déduit le nombre carat;.
g
téristique (utilisation de la table), leauel permet de déterminer la quantité
de microorgmimes viables contenus dans une dose vaccinale.
/
0.. 0..
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b) -+-muitE ._
C'est celle de la souche T1/44,
(hn sait que des r&xti,ons post-vaccinales sont toujours à cmindke sur des a&>
mux (taurins surtout) viwmt dzns des zones & la vacctition ripa pas CM pr@
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tion pssible d'un oedème 2 tendance envaI-6ssante de tyge W&nsien~ toute e:c'
tensirm jugée dangereuse yxzmmnt être $muk~
*;a pm le reccurs 2 un Cantibiotiaue
antimycop3asmique CT?ylosi.ne, Sp?rmrycine, Terraiycine, êtc, .,>. IA mn c7bsemaL.
tion du lieu diinoculation C*L/3 supkieur de la côte) est tien souvent une cause
favorisant 14q-parition d'une r6actim pst-vaccinale &endue.
Si Qmr ce37tains trwpeaux, la souche TV'44 s'avère par tm~ dcm,Fewuse, alors
s'iqx~~ la. vaccination à l'aide de la souche ?SH 'J 2xaucoup mins virulente, mis
dont la quali-t$ de l'immnit6 conf&êe est nettement i.r&rieure 2 celle de T1/44,
c> St&ilit6
LE conmle de stérilit6 est classique, 1.1 s sefC,ctue SUT milieu liquide a6mbie
et anaérobie,