a ESSAIS DE CULTTJRE DE TRYPAi‘JOS0M.k ...
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ESSAIS DE CULTTJRE DE TRYPAi‘JOS0M.k (NAIJNOIIO;3AS >
COIJGOLENSE DA:Y:S DU LAIT DL: COCOS ZJUCIFERA
par S.?!. TOURE (9) et N, SEYE (*>
Les essais rapportés dans la présente note rkultent incidemment
d'une tentative d'utiliser le lait de noix de cocotier (Cocos nucifer- L.,Palmiers)
comme milieu biologique dans les &tudes de routine sur les trypanosomes, à la place
des tampons classiques 2 base de phosphates et de sel (TPS). idous avons recueilli,
à cette fin, le lait de noix immatures de coco, telles qu'on en trouve sur le
march6.
1 - Vis en contact avec des trypanosomes ('ï'xypanosoma brucei brucei et T.congolense)
le lait de coco utilisé a entraîné la mort de ces Flagellés par lyse spontanée
en quelques minutes ou tout au plus un quart d'heure, tandis que dans les mi-
lieux t&rkns TPS la survie dépasse 2l: heures. Trypanosome viwx semble plus
r6sistantepuisquvelle
survit plusieurs heurs dans le lait de coco m&s avec
des mouvements tr& ralentis, et en tout cas la lyse est compl&e au bout de
quelques heures. LFeffet trypcmol>7-tique nsL semble pas lié à un principe actif
contenu dans ce liquide mais plutôt 3 une acidité du milieu. Le pi3 zwuré de
plusieurs m&langes de lait de coco est le plus souvent égal 3 5. En vue d'une
utilisation pratique nous avons procéde 2 l'ajustement à un p? compatible avec
la survie des trypanosomes.
(*> Institut sénégalais de Recherches a~gricoles -' Laboratoire national de 1'Elevage
et de Recherches &térinaires - B.F. 2057 ad D~.KAR--~~~~~I (Sénégal>.
_. 2
T&ins un premier essai, le pH a été porté à 7,8 par h%tnge de 10 ml. de tris
(hydrwyr&thyl>-aminokthane 0,3 M, soit 360 mg, et de 250 ml dz lait de
de coco à pH 5,O. Ce milieu ne permet l-1 survie des trypanosomes qu'une
soixantaine de minutes.
Dans un autre essai, la neutralisation est réalisée par un rklange dc: phos-
phates comme suit :
- solution A, équilibrée à 0,427 M de di--Sodium hydrogkophosphate, 2I!20, soit:
-
(di-Sodium h‘;drog&ophosphate, 2H20 .~,~~YO~OY.JII.~O.‘~~
19 .g
Eau distillée ~.00..~..3.~....~.O..~~~~~~....~..l...~~.
250 !riL
-. solution B, équilibrée 2 0,407 ?q de Sodium dihyckogénophosphate, 1 X20, soit:
cSodium dihydrogénophosphatte, 1 H20 ~~"*~.o.o.,..0......Y
1,755 2
Eau distillée 00~*00~.*.~~.*~..~0..~.~~~~~~,~~".".*..,~.
31,25 ml
- solution C = m&nge de 250 ml de A et 13,s ml de B.
- neutralisation du kit de coco à pH5 /> raison de 540 ml pour 210 ml. de la
solution C 1: le pH obtenu est égal 2 7,3.
La dufie de survie des tryprnnosomes &U~S ce milieu à pH 7,3 va de 48
à 72 heures et il y a transformation en formes culturales. Une dutie plus longue
n'a pas ét6 observée, s?ns doute (2 cause du d&eloppement parallèle d'organismes
levuriformes.
4- Ces résultats ont semblé assez prometteurs pour qu'il soit envis@ de prépare
des milieux de culture. Un milieu diphasiqu-G a été &alisé uniquemnt Zi base
de gélose à 2 p.100 et de lait de coco à pH 7,3. La &Ose est fondue, stéri-
lisée et &!Partie en tubes 2 raison de 10 ml, puis additionnée d'une égale
quantité de lait de coco. Apr& homogén6isation,
les tubes sont inclin&.
L'ensemz~cer~~~nt intéresse la phase liquide du milieu qui se forme> après con-
densation. %U-G ce milieu, Trypanosome congolense a wussé pendant six jours,
avec apparition de formes culturales 24 heures après l'ensemencement. Un IX-
piquage pratiq& <au 3O jour est Egalemnt -sitif.
.0. / 0.0
-3
La p1up~ax-t des forms culturales obserkes sont trypomastigotes ou
épimastigotes et leur ta.ilT~t. est nettement plus grade que celle des Tryp anosoxl
congolense nannomrphes du sang pCarasit&ique.
L'absence d'antibiotiques et d'ultrafiltration du lait de coco avant
utilisation a conduit à un d&eloppement de levures comprmettCmt la survie dCans
ce rrilieu au delà du 6' jow?. Nous en somnes actuellemnt à l'étape de culture
ax&ique,
5 .-- L'utilisation cm-me milieu de routine dans les études sur les trypanosows
nécessite des préparations complémm!xires et, de ce fait, le l-ait de coco ne
semble pas présenter dPavantages sur les tampons classiques. Par contre il
appCamît qu'il est assez riche pour servir de milieu de culture. Un tel
nxilieu, d'oy$gine
végétale 9 et dPCautres qui pourraient en dériver, m-
raient l'avmtage dPêtre plus éconctiques que les bilieux contenant du sang
et, surtout, ils devraient permettre des études comparatives intéressantes
sur la physiologie cellulaire des trypca.nosoms in vitro.
ESSAIS DE CULTTJRE DE TRYPAi‘JOS0M.k (NAIJNOIIO;3AS >
COIJGOLENSE DA:Y:S DU LAIT DL: COCOS ZJUCIFERA
par S.?!. TOURE (9) et N, SEYE (*>
Les essais rapportés dans la présente note rkultent incidemment
d'une tentative d'utiliser le lait de noix de cocotier (Cocos nucifer- L.,Palmiers)
comme milieu biologique dans les &tudes de routine sur les trypanosomes, à la place
des tampons classiques 2 base de phosphates et de sel (TPS). idous avons recueilli,
à cette fin, le lait de noix immatures de coco, telles qu'on en trouve sur le
march6.
1 - Vis en contact avec des trypanosomes ('ï'xypanosoma brucei brucei et T.congolense)
le lait de coco utilisé a entraîné la mort de ces Flagellés par lyse spontanée
en quelques minutes ou tout au plus un quart d'heure, tandis que dans les mi-
lieux t&rkns TPS la survie dépasse 2l: heures. Trypanosome viwx semble plus
r6sistantepuisquvelle
survit plusieurs heurs dans le lait de coco m&s avec
des mouvements tr& ralentis, et en tout cas la lyse est compl&e au bout de
quelques heures. LFeffet trypcmol>7-tique nsL semble pas lié à un principe actif
contenu dans ce liquide mais plutôt 3 une acidité du milieu. Le pi3 zwuré de
plusieurs m&langes de lait de coco est le plus souvent égal 3 5. En vue d'une
utilisation pratique nous avons procéde 2 l'ajustement à un p? compatible avec
la survie des trypanosomes.
(*> Institut sénégalais de Recherches a~gricoles -' Laboratoire national de 1'Elevage
et de Recherches &térinaires - B.F. 2057 ad D~.KAR--~~~~~I (Sénégal>.
_. 2
T&ins un premier essai, le pH a été porté à 7,8 par h%tnge de 10 ml. de tris
(hydrwyr&thyl>-aminokthane 0,3 M, soit 360 mg, et de 250 ml dz lait de
de coco à pH 5,O. Ce milieu ne permet l-1 survie des trypanosomes qu'une
soixantaine de minutes.
Dans un autre essai, la neutralisation est réalisée par un rklange dc: phos-
phates comme suit :
- solution A, équilibrée à 0,427 M de di--Sodium hydrogkophosphate, 2I!20, soit:
-
(di-Sodium h‘;drog&ophosphate, 2H20 .~,~~YO~OY.JII.~O.‘~~
19 .g
Eau distillée ~.00..~..3.~....~.O..~~~~~~....~..l...~~.
250 !riL
-. solution B, équilibrée 2 0,407 ?q de Sodium dihyckogénophosphate, 1 X20, soit:
cSodium dihydrogénophosphatte, 1 H20 ~~"*~.o.o.,..0......Y
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Eau distillée 00~*00~.*.~~.*~..~0..~.~~~~~~,~~".".*..,~.
31,25 ml
- solution C = m&nge de 250 ml de A et 13,s ml de B.
- neutralisation du kit de coco à pH5 /> raison de 540 ml pour 210 ml. de la
solution C 1: le pH obtenu est égal 2 7,3.
La dufie de survie des tryprnnosomes &U~S ce milieu à pH 7,3 va de 48
à 72 heures et il y a transformation en formes culturales. Une dutie plus longue
n'a pas ét6 observée, s?ns doute (2 cause du d&eloppement parallèle d'organismes
levuriformes.
4- Ces résultats ont semblé assez prometteurs pour qu'il soit envis@ de prépare
des milieux de culture. Un milieu diphasiqu-G a été &alisé uniquemnt Zi base
de gélose à 2 p.100 et de lait de coco à pH 7,3. La &Ose est fondue, stéri-
lisée et &!Partie en tubes 2 raison de 10 ml, puis additionnée d'une égale
quantité de lait de coco. Apr& homogén6isation,
les tubes sont inclin&.
L'ensemz~cer~~~nt intéresse la phase liquide du milieu qui se forme> après con-
densation. %U-G ce milieu, Trypanosome congolense a wussé pendant six jours,
avec apparition de formes culturales 24 heures après l'ensemencement. Un IX-
piquage pratiq& <au 3O jour est Egalemnt -sitif.
.0. / 0.0
-3
La p1up~ax-t des forms culturales obserkes sont trypomastigotes ou
épimastigotes et leur ta.ilT~t. est nettement plus grade que celle des Tryp anosoxl
congolense nannomrphes du sang pCarasit&ique.
L'absence d'antibiotiques et d'ultrafiltration du lait de coco avant
utilisation a conduit à un d&eloppement de levures comprmettCmt la survie dCans
ce rrilieu au delà du 6' jow?. Nous en somnes actuellemnt à l'étape de culture
ax&ique,
5 .-- L'utilisation cm-me milieu de routine dans les études sur les trypanosows
nécessite des préparations complémm!xires et, de ce fait, le l-ait de coco ne
semble pas présenter dPavantages sur les tampons classiques. Par contre il
appCamît qu'il est assez riche pour servir de milieu de culture. Un tel
nxilieu, d'oy$gine
végétale 9 et dPCautres qui pourraient en dériver, m-
raient l'avmtage dPêtre plus éconctiques que les bilieux contenant du sang
et, surtout, ils devraient permettre des études comparatives intéressantes
sur la physiologie cellulaire des trypca.nosoms in vitro.