Rev. Elev. Méd. vét. Pays trop., 1978, 31 (1) :...
Rev. Elev. Méd. vét. Pays trop., 1978, 31 (1) : 27-31.
Note sur la microflore bactérienne intestinale
d’un nématode : Thelazia rhodesi
par J. BLANCOU (*), G. VASSILIADES (*) et X. MATTEI (**)
R É S U M É
L’intestin de Theluziu rhodesi récolté au Sénégal, et observé au microscope
électronique, contient une population bactérienne importante. Ces bactéries,
ensemencées sur milieu gélosé, se révèlent généralement être des cultures pures,
monospécifiques (genres Corynebacterium et Aeromonas en particulier). Leur
pouvoir pathogène, faible in vitro, pourrait devenir important in vivo où ils
vivent soustraits à l’action des substances bactériostatiques de l’œil.
INTRODUCTION
L’étude systématique de la microflore bacté-
rienne des nématodes parasites est rarement
entreprise. Cela tient à la difficulté d’une telle
étude, ces helminthes vivant généralement dans
des cavités naturelles où pullule déjà une micro-
flore abondante.
Toutefois, lorsqu’elle est réalisée, elle révèle
que la microflore propre au nématode est sou-
vent beaucoup plus réduite que celle de son
environnement, comme l’ont récemment démon-
tré les travaux de E. M. DUNNING (1) dans le
cas des oxyures de la souris.
Nous avons donc tenté un tel travail avec Thé-
luziu rhodesi, DESMARET, 1827 (Spirurida ;
Thelazioidea) encouragés en cela par deux cons-
tatations préliminaires :
1. L’environnement de ce nématode est très
peu contaminé, puisqu’il est constitué par le cul
du sac conjonctival de l’œil des bovins où sont
sécrétées des substances bactériostatiques d’ori-
gine lacrymale.
2. L’observation de coupes de Thelazia rho-
desi au microscope électronique (photo no 1)
(*) Laboratoire national de I’Elevage et de Recherches
vétérinaires, B. P. 2057, Dakar, République du Sénégal.
Photo no 1. Bactéries in situ dans l’intestin de The-
(**) Département de Biologie animale, Faculté des
luziu rhodesi. Coupe photographiée au microscope élec-
Sciences, Université de Dakar, République du Sénégal.
tronique (X 3 600).
- 27 -
révèle la présence d’assez nombreuses bactéries
détacher le maximum de bactéries extérieures
(1,s x 0,6 u environ) de morphologie très
éventuellement adsorbées sur la cuticule du
uniforme.
nématode. Après le dernier rinçage les Thelazia
C’est le résultat de nos essais d’isolement de ces
sont placées dans un mortier stérile et broyés au
bactéries qui fait l’objet de la présente note.
pilon en présence d’eau physiologique (1 ml pour
10 Thelazia) : c’est ce broyat, une fois parfaite-
ment homogénéisé, qui constitue l’inoculum à
MATÉRIEL ET MÉTHODES
analyser.
MATÉRIEL
l
Analyse bactériologique
Six prélèvements de 0,l ml sont ensemencés à
l Le matériel d’étude est constitué par des
exemplaires vivants de Thelazia rhodesi, prélevés
la surface de 6 géloses : 2 géloses nutritives
à l’aide d’une pince fine dans le cul-de-sac
ordinaires, 2 géloses additionnées de 10 p. 100
conjonctival des bovins tués à l’abattoir de
de sang de mouton, 2 géloses additionnées de
Dakar.
10 p. 100 de sérum de cheval. Chaque gélose
reçoit donc, en moyenne, l’inoculum corres-
l Le matériel bactériologique est le matériel
pondant à la totalité d’un Thelazia.
habituel d’un laboratoire de bactériologie ana-
lytique.
Une partie des 6 géloses est incubée à 37” en
aérobiose, l’autre en anaérobiose (jarre anaérobie
saturée de CO, + HZ), à 37” également.
MÉTHODES
Soixante-douze heures plus tard, les colonies
bactériennes sont dénombrées, et chaque colonie
0 Préparation de l’inoculum
différente fait l’objet d’un repiquage en vue de son
identification ultérieure.
Le produit à analyser bactériologiquement
(inoculum) est préparé selon la technique sui-
vante :
RÉSULTATS
- les exemplaires vivants de Thelazia (formes
immatures, ou adultes 6 et Q) sont extraits à
Nos observations ont porté sur 68 Thelazia.
l’aide d’une pince histologique flambée, égouttés
Leurs résultats sont les suivants :
sur papier filtre stérilisé et aussitôt placés dans
de l’eau physiologique stérile.
1. Cultures positives
Ils séjournent 5 mn dans ce bain agité réguliè-
Toutes les cultures aérobies ont été positives
rement. Après ce délai, l’opération est recom-
comme le montre le tableau ci-dessous, c’est-à-
mencée dans un nouveau bain, 3 fois consécu-
dire que le corps des Thelazia contient bien des
tives.
bactéries (vues au microscope électronique), et
Cette série de bains stériles a pour but de
qu’elles sont vivantes.
,.
A v r i l
15
1
-
/
-
/
-
j
+
+
( a d u l t e s )
+
+
+
(inmatures)
I
-
I
LX = GElose n u t r i t i v e crdinaire ; G S E = Gélose a u sérurr. ; G S G = GClose au s a n g .
- = absence d e c u l t u r e ; + = pr&sence d e c u l t u r e .
- 28 -
2. Nombre de bactéries vivantes
d’une identification (*) de genre, la seule souche
anaérobie isolée n’ayant pas pu être repiquée.
Si l’on admet que chaque bactérie revivifiable
donne naissance à une colonie sur gélose, la
moyenne calculée sur les 68 Thelazia est de
12 bactéries environ par nématode. Compte tenu
de la densité plus élevée visible au microscope
électronique,
on peut penser, soit que les
bactéries visibles sont presque toutes mortes,
soit que leur nombre varie beaucoup d’un sujet
à l’autre (peut-être même nul pour certains
sujets).
3. MorphoIogie des colonies
L’examen des colonies révèle un fait assez sur-
prenant : la microflore intestinale est constituée
par une culture presque pure de la même bactérie
(photos nos 2 et 3). Ainsi, selon nos essais, la
proportion des colonies différentes de l’espèce
dominante observée est de 1 p. 100 (essai A) ;
0 p. 100 (essai B) ; 2,3 p. 100 (essai C) ; 1,2 p. 100
(essai D) ; 0,5 p. 100 (essai E) et 1 p. 100 (essai
F), taux «normal » pour un inoculum de cette
origine,
Il y a donc homogénéité de la microflore pour
l’ensemble des Thelazia provenant du même
prélèvement.
Photo no 2. Bactéries isolées sur gélose. Coupe pho-
tographiée au microscope électronique ( x 18 000).
4. Identification des bactéries
(*) Nous remercions vivement le Dr J. L. CARTEL, de
l’Institut Pasteur de Dakar, pour l’aide qu’il nous a
Seules les bactéries aérobies ont fait l’objet
apportée dans ces identifications.
Photo no 3. - Culture sur gélose-sérum (72 h à 379
du broyat de 14 Thelazia rhodesi.
- 29 -
Elles se classent toutes dans 3 genres ou
On sait que les bactéries associées à certains
espèces :
nématodes peuvent avoir un pouvoir pathogène
pour l’hôte de l’helminthe : cette « bactério-
l GafSkya tetragena (non sérophile à I’isole-
ment),
nématodose » est un fait bien établi, dans deux
cas, chez les insectes (2, 3). Les bactéries isolées
l Corynebacterium (sérophile à l’isolement),
des Thelazia pourraient-elles aussi être patho-
a Aeromonas hydrophila (non sérophile à
gènes pour I’œil de leur ruminant-hôte ? On
l’isolement).
pourrait le penser, d’autant plus que les Thelazia
Ces deux dernières espèces pourraient corres-
effectuent une partie de leur cycle de développe-
pondre, en dimensions et morphologie, à celles
ment chez des insectes diptères (muscidae).
visibles in situ au microscope électronique.
Nos tentatives infructueuses de reproduire . .
Habituellement trouvées dans le milieu extérieur,
expérimentalement un pouvoir pathogène net
ces trois bactéries ne sont considérées que comme
avec les bactéries isolées, sembleraient infirmer
« pathogènes occasionnels » pour les mammi-
cette hypothèse.
fères.
Toutefois, ces essais ne peuvent exclure une
action pathogène des bactéries in vivo, dans
5. Pouvoir pathogène
Thelazia parasité, par excrétion permanente des
métabolites toxiques sensibilisants. Le Thelazia,
Le pouvoir pathogène des 3 genres bactériens
en protégeant les bactéries des substances bac-
a été recherché sur souris (inoculation conjoncti-
tériostatiques sécrétées par l’œil, leur permet en
vale,
sous-cutanée,
intra-péritonéale) et sur
effet de se multiplier et d’exercer impunément
moutons et bovins (instillation dans le cul-de-sac
leur action toxique éventuelle.
conjonctival), sans aucun succès, du moins
lorsqu’on utilise les corps bactériens récoltés sur
gélose. Par contre la culture en bouillon d’dero-
monas, qui contient donc les métabolites excrétés
CONCLUSION
par les corps bactériens, peut provoquer une
conjonctivite transitoire chez le bovin.
L’intestin du nématode Thelazia rhodesi
contient généralement une population bacté-
rienne en culture pure, monospécifique.
DISCUSSION
Les bactéries en cause (genres Gaffkya, Cory-
nebacterium et Aeromonas dans nos essais au
L’intestin de Tflelazia rhodesi renferme donc
Sénégal) varient selon l’origine de la population
une microflore bactérienne de caractère très
des nématodes, mais non selon les individus.
particulier. Cette microflore est constituée par
une population comprenant un nombre très
Il n’a pas toujours été possible de démontrer
réduit d’espèces, qui se multiplient en culture
une action pathogène directe de ces bactéries,
pure dans cet intestin.
isolées in vitro, vis-à-vis de l’œil des bovins.
Les espèces hébergées semblent ne pas varier
Mais une action pathogène in vivo, par action
d’un individu à l’autre, mais d’un prélèvement
toxique ou hypersensibilisation progressive,
(c’est-à-dire d’une population donnée) à l’autre :
n’est pas exclue puisque les bactéries intestinales
tous les individus issus d’une même population
de Thelazia sont soustraites à l’action bactérie-
auraient la même microflore intestinale.
statique des sécrétions oculaires.
S U M M A R Y
A note on intestinal microflora of a round-worm :
Thelazia rhodesi
The digestive tract of Thelazia rhode$i, in Senegal, as seen on electron
micrographs, contains numerous bacteria.
These bacteria, grown on agar medium, are usualy pure culture of mono-
specific population (particularly genus Corynebacterium and Aeromonas).
Their pathogenicity, weak in vitro, could increase in vivo where growing bac-
teria may be protected from ocular bacteriostasis.
- 30 -
RESUMEN
Nota sobre la microflora bacteriana intestinal de un nemhtodo :
Thelazia rhodesi
El intestino de Theluziu rhodesi recogido en Senegal, y observado con el
microscope electrCmico, contiene una poblacion bacteriana importante.
Dichas bacterias,sembradas sobre medio gelosado, generalmente son cul-
tivos puros, monoespecificos (particularmente generos Corynebacferium y
Aeromonas).
Su poder patogeno, mediano in vitro, podria hacerse importante in vivo
donde viven substraidos a la action de las substancias bacterioestaticas del
ojo.
BIBLIOGRAPHIE
1. DUNNING (E. M.), WRIGHT (K. A.). Isolation of
pathogenicity of the complex for Galleria Mellonela
bacteria from the intestines of the mouse pinwornus
larvae. J. Znvertebrute Puth., 1974, 24 (3) : 233-236.
and from their hosts. Can. J. ZOO~., 1970 (6) : 1443-
3. POINAR (G. 0.). Description and biology of a new
1444.
insect parasitic rhabditoid Heterorhabdites bacterio-
2. LYSENKO (O.), WEISER (J.). Bacteria associated
phora n. gen. n. s. p. (Rhabditida : Heterorhabditidae
with the nematode Neoplecfana carpocapsae and the
n. fam.). Nematologica, 1975, 21 (4) : 463-478.
- 31 -
Note sur la microflore bactérienne intestinale
d’un nématode : Thelazia rhodesi
par J. BLANCOU (*), G. VASSILIADES (*) et X. MATTEI (**)
R É S U M É
L’intestin de Theluziu rhodesi récolté au Sénégal, et observé au microscope
électronique, contient une population bactérienne importante. Ces bactéries,
ensemencées sur milieu gélosé, se révèlent généralement être des cultures pures,
monospécifiques (genres Corynebacterium et Aeromonas en particulier). Leur
pouvoir pathogène, faible in vitro, pourrait devenir important in vivo où ils
vivent soustraits à l’action des substances bactériostatiques de l’œil.
INTRODUCTION
L’étude systématique de la microflore bacté-
rienne des nématodes parasites est rarement
entreprise. Cela tient à la difficulté d’une telle
étude, ces helminthes vivant généralement dans
des cavités naturelles où pullule déjà une micro-
flore abondante.
Toutefois, lorsqu’elle est réalisée, elle révèle
que la microflore propre au nématode est sou-
vent beaucoup plus réduite que celle de son
environnement, comme l’ont récemment démon-
tré les travaux de E. M. DUNNING (1) dans le
cas des oxyures de la souris.
Nous avons donc tenté un tel travail avec Thé-
luziu rhodesi, DESMARET, 1827 (Spirurida ;
Thelazioidea) encouragés en cela par deux cons-
tatations préliminaires :
1. L’environnement de ce nématode est très
peu contaminé, puisqu’il est constitué par le cul
du sac conjonctival de l’œil des bovins où sont
sécrétées des substances bactériostatiques d’ori-
gine lacrymale.
2. L’observation de coupes de Thelazia rho-
desi au microscope électronique (photo no 1)
(*) Laboratoire national de I’Elevage et de Recherches
vétérinaires, B. P. 2057, Dakar, République du Sénégal.
Photo no 1. Bactéries in situ dans l’intestin de The-
(**) Département de Biologie animale, Faculté des
luziu rhodesi. Coupe photographiée au microscope élec-
Sciences, Université de Dakar, République du Sénégal.
tronique (X 3 600).
- 27 -
révèle la présence d’assez nombreuses bactéries
détacher le maximum de bactéries extérieures
(1,s x 0,6 u environ) de morphologie très
éventuellement adsorbées sur la cuticule du
uniforme.
nématode. Après le dernier rinçage les Thelazia
C’est le résultat de nos essais d’isolement de ces
sont placées dans un mortier stérile et broyés au
bactéries qui fait l’objet de la présente note.
pilon en présence d’eau physiologique (1 ml pour
10 Thelazia) : c’est ce broyat, une fois parfaite-
ment homogénéisé, qui constitue l’inoculum à
MATÉRIEL ET MÉTHODES
analyser.
MATÉRIEL
l
Analyse bactériologique
Six prélèvements de 0,l ml sont ensemencés à
l Le matériel d’étude est constitué par des
exemplaires vivants de Thelazia rhodesi, prélevés
la surface de 6 géloses : 2 géloses nutritives
à l’aide d’une pince fine dans le cul-de-sac
ordinaires, 2 géloses additionnées de 10 p. 100
conjonctival des bovins tués à l’abattoir de
de sang de mouton, 2 géloses additionnées de
Dakar.
10 p. 100 de sérum de cheval. Chaque gélose
reçoit donc, en moyenne, l’inoculum corres-
l Le matériel bactériologique est le matériel
pondant à la totalité d’un Thelazia.
habituel d’un laboratoire de bactériologie ana-
lytique.
Une partie des 6 géloses est incubée à 37” en
aérobiose, l’autre en anaérobiose (jarre anaérobie
saturée de CO, + HZ), à 37” également.
MÉTHODES
Soixante-douze heures plus tard, les colonies
bactériennes sont dénombrées, et chaque colonie
0 Préparation de l’inoculum
différente fait l’objet d’un repiquage en vue de son
identification ultérieure.
Le produit à analyser bactériologiquement
(inoculum) est préparé selon la technique sui-
vante :
RÉSULTATS
- les exemplaires vivants de Thelazia (formes
immatures, ou adultes 6 et Q) sont extraits à
Nos observations ont porté sur 68 Thelazia.
l’aide d’une pince histologique flambée, égouttés
Leurs résultats sont les suivants :
sur papier filtre stérilisé et aussitôt placés dans
de l’eau physiologique stérile.
1. Cultures positives
Ils séjournent 5 mn dans ce bain agité réguliè-
Toutes les cultures aérobies ont été positives
rement. Après ce délai, l’opération est recom-
comme le montre le tableau ci-dessous, c’est-à-
mencée dans un nouveau bain, 3 fois consécu-
dire que le corps des Thelazia contient bien des
tives.
bactéries (vues au microscope électronique), et
Cette série de bains stériles a pour but de
qu’elles sont vivantes.
,.
A v r i l
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j
+
+
( a d u l t e s )
+
+
+
(inmatures)
I
-
I
LX = GElose n u t r i t i v e crdinaire ; G S E = Gélose a u sérurr. ; G S G = GClose au s a n g .
- = absence d e c u l t u r e ; + = pr&sence d e c u l t u r e .
- 28 -
2. Nombre de bactéries vivantes
d’une identification (*) de genre, la seule souche
anaérobie isolée n’ayant pas pu être repiquée.
Si l’on admet que chaque bactérie revivifiable
donne naissance à une colonie sur gélose, la
moyenne calculée sur les 68 Thelazia est de
12 bactéries environ par nématode. Compte tenu
de la densité plus élevée visible au microscope
électronique,
on peut penser, soit que les
bactéries visibles sont presque toutes mortes,
soit que leur nombre varie beaucoup d’un sujet
à l’autre (peut-être même nul pour certains
sujets).
3. MorphoIogie des colonies
L’examen des colonies révèle un fait assez sur-
prenant : la microflore intestinale est constituée
par une culture presque pure de la même bactérie
(photos nos 2 et 3). Ainsi, selon nos essais, la
proportion des colonies différentes de l’espèce
dominante observée est de 1 p. 100 (essai A) ;
0 p. 100 (essai B) ; 2,3 p. 100 (essai C) ; 1,2 p. 100
(essai D) ; 0,5 p. 100 (essai E) et 1 p. 100 (essai
F), taux «normal » pour un inoculum de cette
origine,
Il y a donc homogénéité de la microflore pour
l’ensemble des Thelazia provenant du même
prélèvement.
Photo no 2. Bactéries isolées sur gélose. Coupe pho-
tographiée au microscope électronique ( x 18 000).
4. Identification des bactéries
(*) Nous remercions vivement le Dr J. L. CARTEL, de
l’Institut Pasteur de Dakar, pour l’aide qu’il nous a
Seules les bactéries aérobies ont fait l’objet
apportée dans ces identifications.
Photo no 3. - Culture sur gélose-sérum (72 h à 379
du broyat de 14 Thelazia rhodesi.
- 29 -
Elles se classent toutes dans 3 genres ou
On sait que les bactéries associées à certains
espèces :
nématodes peuvent avoir un pouvoir pathogène
pour l’hôte de l’helminthe : cette « bactério-
l GafSkya tetragena (non sérophile à I’isole-
ment),
nématodose » est un fait bien établi, dans deux
cas, chez les insectes (2, 3). Les bactéries isolées
l Corynebacterium (sérophile à l’isolement),
des Thelazia pourraient-elles aussi être patho-
a Aeromonas hydrophila (non sérophile à
gènes pour I’œil de leur ruminant-hôte ? On
l’isolement).
pourrait le penser, d’autant plus que les Thelazia
Ces deux dernières espèces pourraient corres-
effectuent une partie de leur cycle de développe-
pondre, en dimensions et morphologie, à celles
ment chez des insectes diptères (muscidae).
visibles in situ au microscope électronique.
Nos tentatives infructueuses de reproduire . .
Habituellement trouvées dans le milieu extérieur,
expérimentalement un pouvoir pathogène net
ces trois bactéries ne sont considérées que comme
avec les bactéries isolées, sembleraient infirmer
« pathogènes occasionnels » pour les mammi-
cette hypothèse.
fères.
Toutefois, ces essais ne peuvent exclure une
action pathogène des bactéries in vivo, dans
5. Pouvoir pathogène
Thelazia parasité, par excrétion permanente des
métabolites toxiques sensibilisants. Le Thelazia,
Le pouvoir pathogène des 3 genres bactériens
en protégeant les bactéries des substances bac-
a été recherché sur souris (inoculation conjoncti-
tériostatiques sécrétées par l’œil, leur permet en
vale,
sous-cutanée,
intra-péritonéale) et sur
effet de se multiplier et d’exercer impunément
moutons et bovins (instillation dans le cul-de-sac
leur action toxique éventuelle.
conjonctival), sans aucun succès, du moins
lorsqu’on utilise les corps bactériens récoltés sur
gélose. Par contre la culture en bouillon d’dero-
monas, qui contient donc les métabolites excrétés
CONCLUSION
par les corps bactériens, peut provoquer une
conjonctivite transitoire chez le bovin.
L’intestin du nématode Thelazia rhodesi
contient généralement une population bacté-
rienne en culture pure, monospécifique.
DISCUSSION
Les bactéries en cause (genres Gaffkya, Cory-
nebacterium et Aeromonas dans nos essais au
L’intestin de Tflelazia rhodesi renferme donc
Sénégal) varient selon l’origine de la population
une microflore bactérienne de caractère très
des nématodes, mais non selon les individus.
particulier. Cette microflore est constituée par
une population comprenant un nombre très
Il n’a pas toujours été possible de démontrer
réduit d’espèces, qui se multiplient en culture
une action pathogène directe de ces bactéries,
pure dans cet intestin.
isolées in vitro, vis-à-vis de l’œil des bovins.
Les espèces hébergées semblent ne pas varier
Mais une action pathogène in vivo, par action
d’un individu à l’autre, mais d’un prélèvement
toxique ou hypersensibilisation progressive,
(c’est-à-dire d’une population donnée) à l’autre :
n’est pas exclue puisque les bactéries intestinales
tous les individus issus d’une même population
de Thelazia sont soustraites à l’action bactérie-
auraient la même microflore intestinale.
statique des sécrétions oculaires.
S U M M A R Y
A note on intestinal microflora of a round-worm :
Thelazia rhodesi
The digestive tract of Thelazia rhode$i, in Senegal, as seen on electron
micrographs, contains numerous bacteria.
These bacteria, grown on agar medium, are usualy pure culture of mono-
specific population (particularly genus Corynebacterium and Aeromonas).
Their pathogenicity, weak in vitro, could increase in vivo where growing bac-
teria may be protected from ocular bacteriostasis.
- 30 -
RESUMEN
Nota sobre la microflora bacteriana intestinal de un nemhtodo :
Thelazia rhodesi
El intestino de Theluziu rhodesi recogido en Senegal, y observado con el
microscope electrCmico, contiene una poblacion bacteriana importante.
Dichas bacterias,sembradas sobre medio gelosado, generalmente son cul-
tivos puros, monoespecificos (particularmente generos Corynebacferium y
Aeromonas).
Su poder patogeno, mediano in vitro, podria hacerse importante in vivo
donde viven substraidos a la action de las substancias bacterioestaticas del
ojo.
BIBLIOGRAPHIE
1. DUNNING (E. M.), WRIGHT (K. A.). Isolation of
pathogenicity of the complex for Galleria Mellonela
bacteria from the intestines of the mouse pinwornus
larvae. J. Znvertebrute Puth., 1974, 24 (3) : 233-236.
and from their hosts. Can. J. ZOO~., 1970 (6) : 1443-
3. POINAR (G. 0.). Description and biology of a new
1444.
insect parasitic rhabditoid Heterorhabdites bacterio-
2. LYSENKO (O.), WEISER (J.). Bacteria associated
phora n. gen. n. s. p. (Rhabditida : Heterorhabditidae
with the nematode Neoplecfana carpocapsae and the
n. fam.). Nematologica, 1975, 21 (4) : 463-478.
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