REPUBLIQUE DU SEIVEGAL lW/N/S7-RE DE...
REPUBLIQUE DU SEIVEGAL
lW/N/S7-RE DE L’AGRl&lLTURE
Institut Sénégalais de RECHERCHES
AGRICOLES
RAPPORT DE STAGE
F:ormation théorique et pratique aux techniques de mesure de la biomasse
microbienne et de la caractérisation de la matière organique du sol.
SALIOU FAYE / CNRA / BAMBEY
f&rier-,mars 1998
OREGON STATE UNIVERSITY
ISRAINRBAR
OSU/USA
t
I
1,’
sommaire
I.Introchction
- - -
ILBiomasse
-
-
microbienne
1)lntroduction
L!)Matériel
3)
M é t h o d e s
3-l fumiaation -incubation
3-2Standard curve
5-3Utilisation appareil CARLE
III. MATIERE ORGANIQUE PARTICULAIRE:
1)lntroduction
L:)Matériel3Méthodes
Ci-l)Préparation échantillons
3-2)Agitations-tamissage
3-3)Séchage -broyage
S-4)Carbon Analyser DOHRMAN
3-5) Tableau de résultats
IV. ENZ:YMES
1) Introduction
2)Matériel
3)Méthodes
Cf condusions
2
- Gas chromatographe ~
- Bouteille de CO* - Hélidm -Argon
3- Méthodes
3-I
- Fum&ation
-
- Incubation
La biomasse microbienne C est mesu’ée par la méthode fumigation-incubation. On
T
pèsera pour chaque échantillon I!I 10 g! de sol tamisé (2 mm) en deux répétitions. Le
premier sera fumigé et le second non fbmigé. II peut faire en même temps l’humidité
de chaque échantillon.
Les échantillons à fumiger seront miss dans des flacons en verre (bouteilles de 25
ml) et sont installés dans un dessiccatvur. On met au milieu un becher contenant du
boiling stone et 30 ml de chloroform$. Le couvercle sera mis sur le becher pour
empêcher le chloroforme de toucher I$ sol au moment de l’aspiration. On ferme le
dessiccateur hermétiquement. Par la P~ompe, on fait bouillir le chloroforme 1 fois, on
vide, on répète une 2è fois sans vider. ~La fumigation doit durer 24 heures.
L.es échantillons non fumigés sont mi! dans des tubes d’incubation pendant 24 h .
L.es tubes restent ouvertes. II faut notlr que le chloroforme doit être bouilli pendant
une minute.
Après 24 h, les échantillons fumigés sbnt transvasés dans des tubes d’incubation et
flrrmés de même que les tubes non-fuligés. II faut faire coucher le tube pour étaler
le sol sur la longueur. Les tubes soit mis dans un portoir et installées dans un
incubateur à 25°C pour 10 jours.
~
~Prélèvement de CO2 plus mesure
Aussit6t après incubation, des prélèveinents de 5 ml de CO2 sont faits pour chaque
kchantillon (F + NF). II faut bien mélanger le gaz à l’intérieur du tube en pompant 3
fois.
%2Standard curve
I faut calculer le standard curve à padtir du CO2 et I’Argon. Deux flacons de 160 ml
sont remplis avec ses deux gaz. On prélève 5 ml de CO* que l’on met dans le flacon
contenant I’Argon. Une aliquote 0,5 mllCOZ est prise pour chaque échantillon. II faut
sortir du flacon contenant l’argon 5 ml hvant d’y mettre 5 ml de C02.
Coefficieni
If Standard curve
E3ottle 160 ml
CO* %
0.2 m
0.4
0.5
0.6
0.8
0.3 ml
0.19
0.186
0.371
0.464
0.557
0.742
3.5 ml
0.31
0.309
0.618
0.772
0.927
1.236
1.5 ml
0.99
0.921
1.842
2.303
2.743
3.684
2 ml
1.84
1.825
3.651
4.563
5.476
7.301
51 ml
3.03
3.005
6.011
6.513
9.016
12.021
10 ml
5.88
5.835
11.667
14.584
17.501
23.335
15 ml
8.57
8.501
17.001
21.251
25.502
34.002
20 ml
11.11
ll.Ol!
22.039
27.548
33.058
44.077
25 ml
13.51
13.40:
26.804
33.505
40.205
53.607
flO ml
15.79
15.65!
31.318
39.147
46.977
62.636
fs5 ml
17.95
17.801
35.601
44.501
53.401
71.202
4.0 ml
20.00
19.83:
39.669
49.587
59.504
79.339
50 ml
23.81
23.61:
47.226
59.032
70.838
94.451
3-3 Comment fonctionne I’apparei!
ON : (pour démarrer)
1) Changer Septa
;!) Alimenter en hélium
3) Tourner « Power » sur ON
4) Mettre la température à 85” C
5) Mettre Inlet à la position « OFF »
6) Laisser la machine chauffer pendan 30 mn
5
7) Tourner thermos sur ON
Soyez sûr que le gaz est ouvert (hélium)
OFF : (pour arrêter)
’ ) Tourner thermos sur OFF
2) Tourner « Power » OFF
3) Attendre 30 mn
4) Fermer l’hélium
FormuLes
-I- calcul: ug CO2 = GC Reading : Coef~of S.C
(ug CO2/g de sol )= [(Fg CO2 - blan
ug C02) (72 ml-sample wt / 2,65 )] / (Soi1
Weight g x Aliquote)
-I- 72 ml = volume des tubes d’incubation
blanc= se fera à partir des tubes vides qu’on ferme
Biomasse=dégagement CO2 (ug CO2/g de sol / K
Biomasse C = ug CO2/g soi1 : 0.41
~
Soil respiration = unf (ug C02/G/F) . diomass C
- 2,651 := densité du sol
- aliquote = 0,5 ml
111 - JVIJTIERE ORGANIQUE PARTIClJtmAlE
1 .- Introduction
L.a matière organique du sol est une source importante pour les substances
nutritives de la plante necessaire à clne bonne production. La matière organique
particulaire représente une fraction importante de cette matière organique.
L.a méthode que nous utilisons consiiste à disperser le sol et isoler la matière
l
6
organique par l’emploi du Hexamétaphbsphate de sodium.
2- Matériel
- 10 g de sol / échantillons
- 1 tamis de 2 mm
- Flacons de 100 ml avec couvercle
~
- Balance
- 1 agitateur
- Bocaux en verre
- Tamis de 53 um
- Etuve
- Tamis de 0,250
- Ballon de 1 I - 2 I ;
- Mortier f pilon
- 1 appareil carbon analyser (Dohrmad)
- Sodium hexométaphosphab ou polyphosphate (5 g/l)
- Seringue graduée 50 uml
3- Méthode
3-l préparation
Le sol prélevé sur le terrain est br’oyé Gu laboratoire à la main et tamisé (2 mm). Les
gros morceaux et racines qui passen au tamis seront enlevés à la main. Le sol
t.amisé passera à l’étuve pendant 24 h Pour enlever l’humidité à 50 “C.
3-2 Agitation + tamisage
On pèsera pour chaque échantillon l@ g de sol. On ajoutera 30 ml de solution de
hexamétaphosphate desodium (5 g/l). ~Le tout sera mis dans des flacons de 100 ml
pour agitation ; cette opération doit durbr 15 h.
L.a solution passera au tamis de 53 u~rn ; il faut bien rincer les flacons et le tamis
avec environ 100 ml d’eau distillée.
~
L.es échantillons tamisés sont mis danp des bocaux et après on les amène à l’étuve
pour séchage ( 24 h à 50 “C).
~
l
3-3Séchage + broyage
AussitGt à la sortie de l’étuve, on pro’ ède au broyage à la main au mortier et au
tamisage (0,250 mm). C’est une partie qui demande un grand soin et il est
souhaitable de souffler le matériel
I
ent,e deux échantillons. L’échantillon tamisé est
mis dans de petits sachets et la fraction supérieur à 0.25 mm est jetée.
3-4 Carbon analvser
On dose ensuite le carbon contenu dans la fraction tamisée avec le carbon Analyser
7
- Allumer l’appareil 24 avant le début de travail
- La bouteille d’oxygène est réglée à 20 PSI ; elle est ouverte 1 h avant démarrage.
- Proceder au calibrage avec une solution standard 2000 ppmC
- Nettoyer le boat ou platinum (2 mm)
- Injecter dans le boat 40 j-11 de la Soluti~on standard.
- Ne pas toucher le bouton calibrage
i
- Lire 2000 rt
Il
50, sinon reprendre 1 sta, dard
- Passer deux échantillons de référent
e
- Peser l’échantillon qui doit passer à l’appareil (2-4 mg)
- Faire une référence après chaque 20~échantillons
- On lit sur l’appareil le total organic carbon (TOC)
- Laisser I”échantillon dans le furnace tant que le bouton « ready » n’est pas allumé
- Si le Toc est > 5 % par la prise d’essai < 2 mg.
tx en PPm = C. Ready x 40 x 10T6
Sample weigh (mg) x 10;
TOC dans la fraction < 53um
IV - LES ENZYMES
1- Introduction
l
Les enzymes sont des catalyseurs. Un caltalyseur est une substance qui accélère la
ilitesse d’une réaction chimique sans pour autant la changer de sa nature. La plupart
des catalyseurs biologiques sont des enzymes. L’étude des enzymes est de
connaître leur activité. Le toluène Util~isé dans cette étude joue le rôle d’un agent
antiseptique. II arrête les futurs synthèbes des enzymes par des cellules vivantes et
prévient une assimilation des
de la réaction enzymatique durant
I incubation. II libère aussi des
intercellulaires et bloque les enzymes
présents dans les cellules vivantes.
1
2- Matériels
- Réactifs :
- NaOH
0,5 M + 20 g/l
- NaOH
1 M + 40 g/l
- HCI
0,l N -+ 8,3 mIIl
- CaCI
0,5 M + 73,5 g/l
-THAM 0,l M
pH 12 + 12,2 g/\\
- MUB
Stock
- MUB
PH 6
- PNG
0,377 g/50 ml de MUB pH 6
- Toluène
- PNG
standard solution
~
MUB Stock = pour 1 litre à garder auIf réfrigirateur
‘2,l g Tham
’ 1,6 g Maleic acide
4,0 g Acide citrique
??
6,3 g Acide borique
448 ml de NaoH 1 N
+ ( 40 g/l)
+ H*O distillée pour avoir 1 litre
* à garder au réfrigérateur
l
MUB pH 6: à garder au réfrioirateur
~
- 200 ml de MUB stock
- Ajuster le pH à 6 en utilisant le HCI O,~l N
- Ramener le volume à 1 I avec de I’ea U distillée à garder au réfrigérateur
Matériels
- Pipette 1000 ul et 5000 ul et cones corespondants.
- Entonnoirs à tuyau
- Bechers de 50 ml - 100 ml
- 1 balance de précision
- Erlens de 50 ml
l
9
l
----
..
..*1”1”---111
- 1 incubateur
- 1 tamis de 2 mm
- 1 spectrophotomètre
3 - Méthodes
Le sol prélevé au champ doit être tamisé (12 mm) puis séché à l’air au moins pendant
48 heures. On pèsera 1 g k 0,005 g qu’on mettra dans des erlens de 50 ml. Pour
chaque échantillon, on utilise 2à3 répetitions et un témoin standart .
-4mldeMUB pH6
- 1 ml de PNG sauf les témoins
- 0,25 ml de toluène
- Agiter un peu à la main le portoir contenant les erlens
- Incubler à 37 “C pendant 1 heure
1
Après incubation
l
Qn ajoute dans les erlens :
- 1 ml de CaCI
- 4 ml de Tham
- 1 ml de PNG seul dans contrôle
~
- Agiter le plateau pour mélanger les solutions
Qn passe après au filtre (Whatman 2) ~
Ns : Quand on met le toluène et au moment du filtrage, il faut aller à la hotte.
L.es échantillons seront passés après au s’pectrophotomètre.
&olaoe de l’appareil
- Allumer l’appareil
-Afficher 420 puis Entrer
- Pour avoir zéro sur ABS, appuyer Sur~ 100% T, OABS
- Si le zéro n’est pas obtenu, passe HZ0 distillée.
I est conseillé d’allumer
utilisation.
Calcul :
ug.p-NitrophénoVg Soil = (sample abs) dilution rate) /(Slope x Sample weight) -
(control abs x dilution rate) / Slope x control weigh).
l
1 0
--.-
._---
.a--..-
-111-
--
‘- Slope = abs/pg p-Nitrophénol
1 1
-
--
--
I__--. ..”
~--
Préparation de la solution
(
standa@
P-galactosidase
Standards ~
Solution
l
p mol/ml
ml sTd
ml M~UB
ml CaCI
ml Tham
ml TOI
sta
l
1
0
0.e
5.0
1.0
4.0
0.25
2
0.1
0.1
4.g
1.0
4.0
0.25
3
0.2
0.2
4.8
1.0
4.0
0.25
4
0.3
0.3
4.
1.0
4.0
0.25
5
0.4
0.4
4.
1.0
4.0
0.25
6
0.5
0.5
4. 6
1.0
4.0
0.25
7
0.6
0.6
4.4
1.0
4.0
0.25
8
0.7
0.7
4.3
1.0
4.0
0.25
9
0.8
0.8
4.
1.0
4.0
0.25
1 0
0.9
0.9
1
4.
1.0
4.0
0.25
11
1.0
1.0
4.
1.0
4.0
0.25
0
p- nitrophénol standard solution,
il faut 1 ml + 9 ml de MUB pH 6
12
Somment faire une dilution ?
3n prend 1 ml de la solution de I’écr ia ntillon et on ajoute 2 ml de Tham pH 10. Dans
‘ce cas, dilution rate = 2. II faut diluer qluand I’ABS > 1.3.
.ABS die la solution St
1) 0.001
7) 0.197
0.005
0.8200
0.008
0.004
2) 0.144
8) 0.884
0.149
0.890
0.148
0.152
3) 0.287
9) 1.091
0.288
1.029
0.218
0.246
4) 0.481
10) 1.157
0.517
1.160
0.521
0.480
5) 0.622
II) 1.275
0.606
1.276
0.630
0.605
6) 0.791
0.765
0.784
0.670
1 3
8.
~Conclusion:
!Je dirai que le stage a été très bénéfi ue pour I’ISRA et pour moi. J’ai accédé à de
louvelles techniques d’analyses nécessaires pour la recherche concernant l’évolution du
statut organique des sols. Mes compéte!nces
en matière de mesure au laboratoire de la
oiomasse microbienne C, de la matière 0rganique particulaire et de l’activité des enzymes
se sont améliorées.
l
Je trouve que ses genres de stage Son:t très utiles pour les techniciens car la recherche
demande une formation continue. La d rée du stage est cependant un peu courte pour
éxécuter l’ensemble du programme
”
Je souhaiterai très vivement dans l’avenir retourner dans les laboratoires de M. DICK
OSU pour poursuivre cette formation trè utile pour moi et necessaire pour les techniciens
1
d’un laboratoire de biochimie des sols.
~
trop
Delpth (Cm>~ (mg)
TOC
wm
IA PR
0
1 o-10
2,3
1560 27130,4348
2A PR
0
11020
3,86
2062 21367,8756
3A PR
0
1 2040
2439 15735,483Q
I
62
4A PR
0
1 40t80
5,62
1214
8640,5694
5A PR
0
2 O-10
1,49
956 25664,4295
6A PR
0
2,21
1345 24343,8914
7A PR
0
; :q40
5,05
2777 21996,0396
8A PR
0
2 40 80
3,18
875,3 11010,0629
QA PR
0
3 o- i0
2,33
1698 29150,2146
IOA PR
0
3 lOt20
2,77
1296 18714,8014
IIA PR
0
3 20.40
3,62
1159 12806,6298
12A PR
0
3 40180
4,14
980,2
9470,5314
13A PR
1
1 o- 0
3,62
2903 32077,3481
14A PR
1
11020
2,17
1010 18617,5115
15A PR
1
1 2040
23
1079 18765,2174
16A PR
1
1
I
40 80
5,05
1500 11881,1881
17A PR
1
2 040
3,74
2283 24417,1123
18A PR
1
2 10/20
4,23
1764 16680,8511
IQA PR
1
3 o-10
4,48
2445 21830,3571
20A PR
1
31020
2,77
891,7 12876,5343
21A PR
1
3 2040
5,18
1594 12308,8803
22A PR
1
1
3 40~80
3,ll
1128 14508,0386
23A PR
1
4 o-!o
1,93
1167 24186,5285
24A PR
1
1
4 lOt20
2,43
587,l 9664,19753
25A PR
1
5 O-40
2,28
1224 21473,6842
26A PR
1
5 IOC20
3
1197,5 15966,6667
27A PR
2
1 ojo
2,63
1438 21870,7224
28A PR
2
1 IOC20
2,17
618 11391,7051
29A PR
2
1 20.40
2,OQ
629,2 12042,1053
30A PR
2
1 4OC80
1,54
255,4 6633,76623
31A PR
2
2 o- 0
1,78
874,5 19651,6854
32A PR
2
'I
21020
2,39
751 12569,0377
33A PR
2
3 o-,lo
2,87
1372 19121,9512
34A PR
2
3 11-20
4,51
1578 13995,5654
35A PR
2
3 24-40
1,97
534,2 10846,7005
36A PR
2
3 4&80
1,35
304,4 9019,25926
37A PR
2
4 o- 0
2,QQ
1522
20361,204
38A PR
2
41 -20
2,96
1238 16729,7297
39A PR
2
5 1
O-10
3
1691 22546,6667
40A PR
2
5 Id-20
2,QQ
1100 14715,7191
41A PR
3
1 o-40
1,49
897,6 24096,6443
42A PR
3
1 Id-20
1,67
777,8 18629,9401
43A PR
3
1 2 -40
2,65
788,5 11901,8868
44A PR
3
1 4 -80
1,41
284,7 8076,59574
45A PR
3
2 8
o-,0
3,03
1641 21663,3663
46A PR
3
2 ICI-20
1,74
647,9 14894,2529
47A PR
3
3 o-j0
2,78
1844 26532,3741
48A PR
3
3 10-20
2,69
1023 15211,8959
- 49A PR
3
32 -40
2,51
715,8 11407,1713
50A PR
3
34 -80
3,56
706,9 7942,69663
51A PR
3
?
4 o- 0
337
2177 23535,135l
52A PR
3
4 Icj-20
3,81
1418 14887,1391
53A PR
3
5 o-10
4,87
2805 23039,0144
54A PR
3
51020
4,93
1939 15732,2515
55 M
PR
0
!
1 0-1~0
2,91
2152
29580,756
56 M
P R
0
1 10120
4,21
2869 27258,9074
57 M
PR
0
1 2Oj40
4,09
2212 21633,2518
58 M
PR
0
1 40 80
2,36
779,3
13208,4746
59 M
PR
0
1
2 o-10
3,91
2298 23508,9514
60M PR
0
2 10-I 0
2,3
983,7
17107,8261
61 M
P R
0
220- z 0
2
687
13740
62 M
P R
0
2 40-~ 0
2,52
669
10619,0476
63 M
P R
0
3 O-l E
2,91
1933 26570,4467
64 M
PR
0
3 1o-i 0
2,53
1381
21833,9921
65
e
M
PR
0
3 20-po
3,41
1656
19425,2199
66 M
PR
0
3 40-80
2,66
775,8
11666,1654
67 M
PR
1
1 0-1'0
2,56
1167
18234,375
68 M
PR
1
1 IO-A20
1,98
705 14242,4242
69 M
=R
1
1 20-ho
2,76
726,4
10527,5362
70 M
I'R
1
140- 0
28
583,2
8331,42857
71 M
PR
1
2 O-l 1
3,55
1854 20890,1408
72 M
I’R
1
2 IO-+o
3,68
1472
16000
73 M
PR
1
3 0-Q
3,04
1713 22539,4737
74 M
PR
1
3 10-20
2,08
727,l
13982,6923
75 M
PR
1
320- 0
2,68
747,6
II 158,209
76 M
P R
1
340- 0
3,03
569,4
7516,83168
77 M
P R
1
4 O-l
6,19
2997
19366,7205
78 M
f’R
1
4
1
IO-,o
3,16
918,5
11626,5823
79 M
f’R
1
5 O-10
3,99
2127 21323,3083
80 M
P R
1
5 10-z
2,68
968,8 14459,7015
81 M
PR
2
1 o-IC
2,92
2133 29219,178l
82 M
P R
2
‘1 10-z
2,34
860,8 14714,5299
83 M
P R
2
‘1 20-4
2,56
701,3 10957,8125
84 M
P R
2
1 40-E
2,58
540,7 8382,94574
85 M
PR
2
2 o-IC
1,98
1140
23030,303
86 M
PR
2
2 10-i
2,63
1026 15604,5627
87 M
PR
2
3 o-IC
1,76
953,3 21665,9091
88 M
F’R
2
3 10-i
2,67
912,2 13665,9176
89 M
PR
2
3 20-4
3,46
831,5 9612,71676
90 M
F’R
2
3 40-a
2,37
496‘6
8381,4346
91 M
F’R
2
4 o-IC
3,84
2105 21927,0833
92 M
F’R
2
4 10-2
2,69
1013
15063,197
93 M
P R
2
5 o-IC
2,83
1589
22459,364
94 M
F’R
2
5 10-2
3,22
999 12409,9379
95M PR
3
I 0-10
3,06
2151 28117,647l
96M PR
3
1 10-2
3,08
1318 17116,8831
97 M
P R
3
1 20-4
2,93
814,8 11123,5495
98M PR
3
1 40-8
2,7
583,5 8644,44444
99 M
P R
3
2 o-10
3,02
1916 25377,4834
###M P
R
3
2 10-2
495
1651 14675,5556
101 M
P R
3
3 o-10
3,63
1951 21498,6226
lQ2 M PR
3
3 10-2
3,68
1288
14000
pn
1’ R
3
;F-b
I u 3 '7 +
104 M PR
3
3 40-80
3.47
707.9
8160
105 M PR
3
4 O-10
2.61
1483
22728
106 M PR
3
4 10-20
3.95
1385
14025
107 M PR
3
5 O-10
3.81
1849
19412
108 M PR
3
5 10-20
2.57
806.6
12554
sample
traitements
net W
toc
PPm
mg
IM
CPI-1
O-10
2.35
1193 20306.38
2 M
CPI-1
10-20
2.62
972.7 14850.38
3 M
CPI-1
20-40
2.23
599.4 10751.56
4N
CPl-1
40-80
1.6
307.5
7687.5
5 N'
CPI-2
O-l 0
2.48
1420 22902.22
6 Ni
CPl-2
10-20
3.36
1149 13678.57
7 NI
CPl-3
o-10
2.3
1283 22313.04
8 NI
CPI-3
10-20
2.04
947.5 18578.43
9 NI
CPI-3
20-40
2.27
638.9 11258.14
10 M
CPI-3
40-80
1.41
217.1 6158.86
11 M
CPI -4
o-10
2.3
1358 23617.39
12 lb1
CF'l-4
10-20
1.87
742.6 15864.49
13 fkl
CPI-5
o-1 0
3.73
2038 21855.23
14 hl
CPI-5
10-20
4.92
1751 14235.77
15 hl
CP2-1
O-10
3.21
1724 21482.87
16 h'l
CP2-1
10-20
3.2
1345 16812.5
17 h!
Cf'2-1
20-40
4.19
1074 10252.98
18 h4
CP2-1
40-80
3.61
663.5
7351.8
19 h4
CP2-2
O-l 0
2.81
1499 21338.07
20 nn
CP2-2
10-20
3.49
1195 13696.27
21 kil
CP2-3
o-10
3.66
2021 22087.43
' 22Fh
CP2-3
10-20
2.66
1003 15082.71
23 Fh
CP2-3
20-40
3.29
902.4 10971.43
24 Fh
Cp2-3
40-80
3.9
558.8 5731.28
25 Fh
CP2-4
O-10
4.53
1936 17094.92
26 M
CP2-4
10-20
2.22
809.3 14581.98
27 FA
CP2-5
o-10
2.44
1245 20409.84
28 FA
CP2-5
10-20
4.91
1335 10875.76
29 M
CP3-1
o-10
3
1979 26386.67
30 FA
CP3-1
10-20
3.18
1256 15798.74
31 FA
CP3-1
20-40
3.21
878 10940.81
32 I'A
CP3-1
40-80
3.98
767.5 7713.57
33 rn
CP3-2
O-l 0
4.81
2483 20648.64
34 FA
CP3-2
10-20
3.4
1086 12776.47
35 rn
CP3-3
O-10
4.2
7855 17666.67
36 !A
CP3-3
10-20
2.3
619.2 10768.69
37 tJI
CP3-3
20-40
3.68
829.5
9016.3
38 tvl
CP3-3
40-80
3.8
626.7 6596.84
39 IA
CP3-4
o-1 0
3.56
1598 17955.06
a
40 M
CP3-4
10-20
3.76
1152 12253.32
41 IA
CP3-5
O-l 0
4.95
2377 19208.08
42 M
CP3-5
10-20
4.92
1603 13032.52
43 A
CPI -1
O-l 0
2.88
2015 27986.11
44 A
CPI-1
1 O-20
2.4
1130 18833.33
45 A
CPl-1
:20-40
3.03
1062 14019.8
46 A
CPI-1
40-80
3.03
673.3 8888.45
47 A
CPI-2
o-10
4.52
2764 24460.38
48 A
CPI-2
1 O-20
4.39
1702 15507.97
49 A
CPI-3
10-10
3.48
1666 19149.42
50 A
CPI-3
1 O-20
3.29
1225 14893.62
51 A
CPI-3
20-40
4.8
1361 11341.67
52 A
CPI-3
,40-80
3.31
563.7 7053.78
53 A
CPI-4
o-10
3.01
1501 19946.84
54 A
CPI-4
1 O-20
4.7
1797 15293.62
55 A
CPl-5
O-10
1.56
829.8 21276.92
56 A
CPI-5
1 O-20
2.56
1050 16406.25
57 A
CPZ-1
o-10
3.24
2052 25333.33
58 A
CP2-1
1 O-20
2.86
1085 15174.83
59 A
CP2-1
20-40
3.25
1041 12812.31
60 A
CP2-1
40-80
2.67
547 8194.76
61 A
CP2-2
O-l 0
3.22
1889 23465.83
62 A
CP2-2
1 O-20
4.24
1991 18783.02
63 A
CP2-3
O-10
3.29
1711 20802.43
6 4 A
CP2-3
1 O-20
3.38
1353 16011.83
65 A
CP2-3
20-40
2.39
716.3 11988.28
66 A
CP2-3
40-80
2.41
500 8298.75
67 A
CP2-4
O-l 0
4.25
2082 19595.29
68 A
CP2-4
1 O-20
2.93
1099 15003.41
69 A
CP2-5
O-l 0
3.44
1872 21767.44
70 A
CP2-5
1 O-20
5.45
1987 14583.48
71 A
CP3-1
o-1 0
3.22
2132 26472.02
72 A
CP3-1
1 O-20
4.74
1673 14118.14
73 A
CP3-1
20-40
2.67
698.4 10462.92
74 A
CP3-1
40-80
2.19
332.9 6080.36
75 A
CP3-2
o-10
2.51
1380 21992.03
F 76 A
CP3-2
1 O-20
1.57
609.8 15536.31
77 A
CP3-3
o-10
1.88
914.7 19461.7
78 A
CP3-3
1 O-20
2.75
108i 15781.82
79 A
CP3-3
20-40
1.93
694 14383.41
80 A
CP3-3
40-80
2.5
548
8768
81 A
CP3-4
o-10
3.34
1694 20287.42
82 A
CP3-4
1 O-20
2.9
1200 16551.72
83 A
CP3-5
o-1 0
1 .a5
972.7 21031.35
84 A
CP3-5
1 O-20
2
768.46 15369.2
Standard curve O-glucosidase activity
jpl
pmol/p-nitrophenol
pg p-nitrophenol absorbante pg p-nitrophenol
Mean/absorbance
0
0
0.006
0
0.005
0
0
O.QO4
13.911
0.141
0 . 1
13.911
0.139
27.822
0.2635
0 . 1
13.911
0.143
41.733
0.4165
0.2
27.822
0.26
55.644
0.5265
0.2
27.822
0.267
69.555
0.661
0.3
41.733
0.41
83.466
0.8085
0.3
41.733
0.423
97.377
0.887
0.4
55.644
0.528
111.288
1.055
0.4
55.644
0.525
125.199
1.1585
0.5
69.555
0.647
139.11
1.2755
0.5
69.555
0.675
0.6
83.466
0.797
0.6
83.466
0.82
Regression Output:
0.7
97.377
0.884
Constant
0
0.7
97.377
0.89
Std Err of Y Est
0.018216
0.8
111.288
1.091
R Squared
0.998145
~~-~ 0.8
11 1~.288
1.019
No. of Observations
11
0.9
125.199
1.157
Degrees of Freedom
10
0.9
125.199
1.16
1
139.11
1.275
X Coefficient(s)
1
139.11
1.276
Std Err of Coef.
Weight
Absorbante
Fg p-nitrophenol
name
sample 1
sample 2
control
sample 1 sample 2 control
samplel sample2 Average
1
0.997
1.005
1.005
0.204
0.203
0.056 15.88497 15.60399 15.74448
2
0.995
0.997
1.005
0.378
0.35
0.063 33.90282 30.81368 32.35825
3
0.999
0.997
0.995
0.202
0.17
0.043 17.07188 13.67815 15.37501
4
1.001
0.995
1.005
0.114
0.12
0.038 8.106245 8.825553 8.465899
5
0.997
1
1.003
0.77
0.78
0.08 74.11404 74.93682 74.52543
6
0.998
1.001
1.004
0.391
0.411
0.068 34.64463 36.65854 35.65158
7
0.995
0.999
0.995
0.27
0.275
0.057 22.98584 23.40547 23.19566
8
0.999
0.996
1
0.427
0.395
0.054 39.99009 36.68734 38.33871
9
0.998
0.995
1
1.027
1.055
0.12 97.35041 100.6962 99.02333
10
1
0.999
0.999
0.278
0.272
0.07 22.28207 21.66869 21.97538
lW/N/S7-RE DE L’AGRl&lLTURE
Institut Sénégalais de RECHERCHES
AGRICOLES
RAPPORT DE STAGE
F:ormation théorique et pratique aux techniques de mesure de la biomasse
microbienne et de la caractérisation de la matière organique du sol.
SALIOU FAYE / CNRA / BAMBEY
f&rier-,mars 1998
OREGON STATE UNIVERSITY
ISRAINRBAR
OSU/USA
t
I
1,’
sommaire
I.Introchction
- - -
ILBiomasse
-
-
microbienne
1)lntroduction
L!)Matériel
3)
M é t h o d e s
3-l fumiaation -incubation
3-2Standard curve
5-3Utilisation appareil CARLE
III. MATIERE ORGANIQUE PARTICULAIRE:
1)lntroduction
L:)Matériel3Méthodes
Ci-l)Préparation échantillons
3-2)Agitations-tamissage
3-3)Séchage -broyage
S-4)Carbon Analyser DOHRMAN
3-5) Tableau de résultats
IV. ENZ:YMES
1) Introduction
2)Matériel
3)Méthodes
Cf condusions
2
- Gas chromatographe ~
- Bouteille de CO* - Hélidm -Argon
3- Méthodes
3-I
- Fum&ation
-
- Incubation
La biomasse microbienne C est mesu’ée par la méthode fumigation-incubation. On
T
pèsera pour chaque échantillon I!I 10 g! de sol tamisé (2 mm) en deux répétitions. Le
premier sera fumigé et le second non fbmigé. II peut faire en même temps l’humidité
de chaque échantillon.
Les échantillons à fumiger seront miss dans des flacons en verre (bouteilles de 25
ml) et sont installés dans un dessiccatvur. On met au milieu un becher contenant du
boiling stone et 30 ml de chloroform$. Le couvercle sera mis sur le becher pour
empêcher le chloroforme de toucher I$ sol au moment de l’aspiration. On ferme le
dessiccateur hermétiquement. Par la P~ompe, on fait bouillir le chloroforme 1 fois, on
vide, on répète une 2è fois sans vider. ~La fumigation doit durer 24 heures.
L.es échantillons non fumigés sont mi! dans des tubes d’incubation pendant 24 h .
L.es tubes restent ouvertes. II faut notlr que le chloroforme doit être bouilli pendant
une minute.
Après 24 h, les échantillons fumigés sbnt transvasés dans des tubes d’incubation et
flrrmés de même que les tubes non-fuligés. II faut faire coucher le tube pour étaler
le sol sur la longueur. Les tubes soit mis dans un portoir et installées dans un
incubateur à 25°C pour 10 jours.
~
~Prélèvement de CO2 plus mesure
Aussit6t après incubation, des prélèveinents de 5 ml de CO2 sont faits pour chaque
kchantillon (F + NF). II faut bien mélanger le gaz à l’intérieur du tube en pompant 3
fois.
%2Standard curve
I faut calculer le standard curve à padtir du CO2 et I’Argon. Deux flacons de 160 ml
sont remplis avec ses deux gaz. On prélève 5 ml de CO* que l’on met dans le flacon
contenant I’Argon. Une aliquote 0,5 mllCOZ est prise pour chaque échantillon. II faut
sortir du flacon contenant l’argon 5 ml hvant d’y mettre 5 ml de C02.
Coefficieni
If Standard curve
E3ottle 160 ml
CO* %
0.2 m
0.4
0.5
0.6
0.8
0.3 ml
0.19
0.186
0.371
0.464
0.557
0.742
3.5 ml
0.31
0.309
0.618
0.772
0.927
1.236
1.5 ml
0.99
0.921
1.842
2.303
2.743
3.684
2 ml
1.84
1.825
3.651
4.563
5.476
7.301
51 ml
3.03
3.005
6.011
6.513
9.016
12.021
10 ml
5.88
5.835
11.667
14.584
17.501
23.335
15 ml
8.57
8.501
17.001
21.251
25.502
34.002
20 ml
11.11
ll.Ol!
22.039
27.548
33.058
44.077
25 ml
13.51
13.40:
26.804
33.505
40.205
53.607
flO ml
15.79
15.65!
31.318
39.147
46.977
62.636
fs5 ml
17.95
17.801
35.601
44.501
53.401
71.202
4.0 ml
20.00
19.83:
39.669
49.587
59.504
79.339
50 ml
23.81
23.61:
47.226
59.032
70.838
94.451
3-3 Comment fonctionne I’apparei!
ON : (pour démarrer)
1) Changer Septa
;!) Alimenter en hélium
3) Tourner « Power » sur ON
4) Mettre la température à 85” C
5) Mettre Inlet à la position « OFF »
6) Laisser la machine chauffer pendan 30 mn
5
7) Tourner thermos sur ON
Soyez sûr que le gaz est ouvert (hélium)
OFF : (pour arrêter)
’ ) Tourner thermos sur OFF
2) Tourner « Power » OFF
3) Attendre 30 mn
4) Fermer l’hélium
FormuLes
-I- calcul: ug CO2 = GC Reading : Coef~of S.C
(ug CO2/g de sol )= [(Fg CO2 - blan
ug C02) (72 ml-sample wt / 2,65 )] / (Soi1
Weight g x Aliquote)
-I- 72 ml = volume des tubes d’incubation
blanc= se fera à partir des tubes vides qu’on ferme
Biomasse=dégagement CO2 (ug CO2/g de sol / K
Biomasse C = ug CO2/g soi1 : 0.41
~
Soil respiration = unf (ug C02/G/F) . diomass C
- 2,651 := densité du sol
- aliquote = 0,5 ml
111 - JVIJTIERE ORGANIQUE PARTIClJtmAlE
1 .- Introduction
L.a matière organique du sol est une source importante pour les substances
nutritives de la plante necessaire à clne bonne production. La matière organique
particulaire représente une fraction importante de cette matière organique.
L.a méthode que nous utilisons consiiste à disperser le sol et isoler la matière
l
6
organique par l’emploi du Hexamétaphbsphate de sodium.
2- Matériel
- 10 g de sol / échantillons
- 1 tamis de 2 mm
- Flacons de 100 ml avec couvercle
~
- Balance
- 1 agitateur
- Bocaux en verre
- Tamis de 53 um
- Etuve
- Tamis de 0,250
- Ballon de 1 I - 2 I ;
- Mortier f pilon
- 1 appareil carbon analyser (Dohrmad)
- Sodium hexométaphosphab ou polyphosphate (5 g/l)
- Seringue graduée 50 uml
3- Méthode
3-l préparation
Le sol prélevé sur le terrain est br’oyé Gu laboratoire à la main et tamisé (2 mm). Les
gros morceaux et racines qui passen au tamis seront enlevés à la main. Le sol
t.amisé passera à l’étuve pendant 24 h Pour enlever l’humidité à 50 “C.
3-2 Agitation + tamisage
On pèsera pour chaque échantillon l@ g de sol. On ajoutera 30 ml de solution de
hexamétaphosphate desodium (5 g/l). ~Le tout sera mis dans des flacons de 100 ml
pour agitation ; cette opération doit durbr 15 h.
L.a solution passera au tamis de 53 u~rn ; il faut bien rincer les flacons et le tamis
avec environ 100 ml d’eau distillée.
~
L.es échantillons tamisés sont mis danp des bocaux et après on les amène à l’étuve
pour séchage ( 24 h à 50 “C).
~
l
3-3Séchage + broyage
AussitGt à la sortie de l’étuve, on pro’ ède au broyage à la main au mortier et au
tamisage (0,250 mm). C’est une partie qui demande un grand soin et il est
souhaitable de souffler le matériel
I
ent,e deux échantillons. L’échantillon tamisé est
mis dans de petits sachets et la fraction supérieur à 0.25 mm est jetée.
3-4 Carbon analvser
On dose ensuite le carbon contenu dans la fraction tamisée avec le carbon Analyser
7
- Allumer l’appareil 24 avant le début de travail
- La bouteille d’oxygène est réglée à 20 PSI ; elle est ouverte 1 h avant démarrage.
- Proceder au calibrage avec une solution standard 2000 ppmC
- Nettoyer le boat ou platinum (2 mm)
- Injecter dans le boat 40 j-11 de la Soluti~on standard.
- Ne pas toucher le bouton calibrage
i
- Lire 2000 rt
Il
50, sinon reprendre 1 sta, dard
- Passer deux échantillons de référent
e
- Peser l’échantillon qui doit passer à l’appareil (2-4 mg)
- Faire une référence après chaque 20~échantillons
- On lit sur l’appareil le total organic carbon (TOC)
- Laisser I”échantillon dans le furnace tant que le bouton « ready » n’est pas allumé
- Si le Toc est > 5 % par la prise d’essai < 2 mg.
tx en PPm = C. Ready x 40 x 10T6
Sample weigh (mg) x 10;
TOC dans la fraction < 53um
IV - LES ENZYMES
1- Introduction
l
Les enzymes sont des catalyseurs. Un caltalyseur est une substance qui accélère la
ilitesse d’une réaction chimique sans pour autant la changer de sa nature. La plupart
des catalyseurs biologiques sont des enzymes. L’étude des enzymes est de
connaître leur activité. Le toluène Util~isé dans cette étude joue le rôle d’un agent
antiseptique. II arrête les futurs synthèbes des enzymes par des cellules vivantes et
prévient une assimilation des
de la réaction enzymatique durant
I incubation. II libère aussi des
intercellulaires et bloque les enzymes
présents dans les cellules vivantes.
1
2- Matériels
- Réactifs :
- NaOH
0,5 M + 20 g/l
- NaOH
1 M + 40 g/l
- HCI
0,l N -+ 8,3 mIIl
- CaCI
0,5 M + 73,5 g/l
-THAM 0,l M
pH 12 + 12,2 g/\\
- MUB
Stock
- MUB
PH 6
- PNG
0,377 g/50 ml de MUB pH 6
- Toluène
- PNG
standard solution
~
MUB Stock = pour 1 litre à garder auIf réfrigirateur
‘2,l g Tham
’ 1,6 g Maleic acide
4,0 g Acide citrique
??
6,3 g Acide borique
448 ml de NaoH 1 N
+ ( 40 g/l)
+ H*O distillée pour avoir 1 litre
* à garder au réfrigérateur
l
MUB pH 6: à garder au réfrioirateur
~
- 200 ml de MUB stock
- Ajuster le pH à 6 en utilisant le HCI O,~l N
- Ramener le volume à 1 I avec de I’ea U distillée à garder au réfrigérateur
Matériels
- Pipette 1000 ul et 5000 ul et cones corespondants.
- Entonnoirs à tuyau
- Bechers de 50 ml - 100 ml
- 1 balance de précision
- Erlens de 50 ml
l
9
l
----
..
..*1”1”---111
- 1 incubateur
- 1 tamis de 2 mm
- 1 spectrophotomètre
3 - Méthodes
Le sol prélevé au champ doit être tamisé (12 mm) puis séché à l’air au moins pendant
48 heures. On pèsera 1 g k 0,005 g qu’on mettra dans des erlens de 50 ml. Pour
chaque échantillon, on utilise 2à3 répetitions et un témoin standart .
-4mldeMUB pH6
- 1 ml de PNG sauf les témoins
- 0,25 ml de toluène
- Agiter un peu à la main le portoir contenant les erlens
- Incubler à 37 “C pendant 1 heure
1
Après incubation
l
Qn ajoute dans les erlens :
- 1 ml de CaCI
- 4 ml de Tham
- 1 ml de PNG seul dans contrôle
~
- Agiter le plateau pour mélanger les solutions
Qn passe après au filtre (Whatman 2) ~
Ns : Quand on met le toluène et au moment du filtrage, il faut aller à la hotte.
L.es échantillons seront passés après au s’pectrophotomètre.
&olaoe de l’appareil
- Allumer l’appareil
-Afficher 420 puis Entrer
- Pour avoir zéro sur ABS, appuyer Sur~ 100% T, OABS
- Si le zéro n’est pas obtenu, passe HZ0 distillée.
I est conseillé d’allumer
utilisation.
Calcul :
ug.p-NitrophénoVg Soil = (sample abs) dilution rate) /(Slope x Sample weight) -
(control abs x dilution rate) / Slope x control weigh).
l
1 0
--.-
._---
.a--..-
-111-
--
‘- Slope = abs/pg p-Nitrophénol
1 1
-
--
--
I__--. ..”
~--
Préparation de la solution
(
standa@
P-galactosidase
Standards ~
Solution
l
p mol/ml
ml sTd
ml M~UB
ml CaCI
ml Tham
ml TOI
sta
l
1
0
0.e
5.0
1.0
4.0
0.25
2
0.1
0.1
4.g
1.0
4.0
0.25
3
0.2
0.2
4.8
1.0
4.0
0.25
4
0.3
0.3
4.
1.0
4.0
0.25
5
0.4
0.4
4.
1.0
4.0
0.25
6
0.5
0.5
4. 6
1.0
4.0
0.25
7
0.6
0.6
4.4
1.0
4.0
0.25
8
0.7
0.7
4.3
1.0
4.0
0.25
9
0.8
0.8
4.
1.0
4.0
0.25
1 0
0.9
0.9
1
4.
1.0
4.0
0.25
11
1.0
1.0
4.
1.0
4.0
0.25
0
p- nitrophénol standard solution,
il faut 1 ml + 9 ml de MUB pH 6
12
Somment faire une dilution ?
3n prend 1 ml de la solution de I’écr ia ntillon et on ajoute 2 ml de Tham pH 10. Dans
‘ce cas, dilution rate = 2. II faut diluer qluand I’ABS > 1.3.
.ABS die la solution St
1) 0.001
7) 0.197
0.005
0.8200
0.008
0.004
2) 0.144
8) 0.884
0.149
0.890
0.148
0.152
3) 0.287
9) 1.091
0.288
1.029
0.218
0.246
4) 0.481
10) 1.157
0.517
1.160
0.521
0.480
5) 0.622
II) 1.275
0.606
1.276
0.630
0.605
6) 0.791
0.765
0.784
0.670
1 3
8.
~Conclusion:
!Je dirai que le stage a été très bénéfi ue pour I’ISRA et pour moi. J’ai accédé à de
louvelles techniques d’analyses nécessaires pour la recherche concernant l’évolution du
statut organique des sols. Mes compéte!nces
en matière de mesure au laboratoire de la
oiomasse microbienne C, de la matière 0rganique particulaire et de l’activité des enzymes
se sont améliorées.
l
Je trouve que ses genres de stage Son:t très utiles pour les techniciens car la recherche
demande une formation continue. La d rée du stage est cependant un peu courte pour
éxécuter l’ensemble du programme
”
Je souhaiterai très vivement dans l’avenir retourner dans les laboratoires de M. DICK
OSU pour poursuivre cette formation trè utile pour moi et necessaire pour les techniciens
1
d’un laboratoire de biochimie des sols.
~
trop
Delpth (Cm>~ (mg)
TOC
wm
IA PR
0
1 o-10
2,3
1560 27130,4348
2A PR
0
11020
3,86
2062 21367,8756
3A PR
0
1 2040
2439 15735,483Q
I
62
4A PR
0
1 40t80
5,62
1214
8640,5694
5A PR
0
2 O-10
1,49
956 25664,4295
6A PR
0
2,21
1345 24343,8914
7A PR
0
; :q40
5,05
2777 21996,0396
8A PR
0
2 40 80
3,18
875,3 11010,0629
QA PR
0
3 o- i0
2,33
1698 29150,2146
IOA PR
0
3 lOt20
2,77
1296 18714,8014
IIA PR
0
3 20.40
3,62
1159 12806,6298
12A PR
0
3 40180
4,14
980,2
9470,5314
13A PR
1
1 o- 0
3,62
2903 32077,3481
14A PR
1
11020
2,17
1010 18617,5115
15A PR
1
1 2040
23
1079 18765,2174
16A PR
1
1
I
40 80
5,05
1500 11881,1881
17A PR
1
2 040
3,74
2283 24417,1123
18A PR
1
2 10/20
4,23
1764 16680,8511
IQA PR
1
3 o-10
4,48
2445 21830,3571
20A PR
1
31020
2,77
891,7 12876,5343
21A PR
1
3 2040
5,18
1594 12308,8803
22A PR
1
1
3 40~80
3,ll
1128 14508,0386
23A PR
1
4 o-!o
1,93
1167 24186,5285
24A PR
1
1
4 lOt20
2,43
587,l 9664,19753
25A PR
1
5 O-40
2,28
1224 21473,6842
26A PR
1
5 IOC20
3
1197,5 15966,6667
27A PR
2
1 ojo
2,63
1438 21870,7224
28A PR
2
1 IOC20
2,17
618 11391,7051
29A PR
2
1 20.40
2,OQ
629,2 12042,1053
30A PR
2
1 4OC80
1,54
255,4 6633,76623
31A PR
2
2 o- 0
1,78
874,5 19651,6854
32A PR
2
'I
21020
2,39
751 12569,0377
33A PR
2
3 o-,lo
2,87
1372 19121,9512
34A PR
2
3 11-20
4,51
1578 13995,5654
35A PR
2
3 24-40
1,97
534,2 10846,7005
36A PR
2
3 4&80
1,35
304,4 9019,25926
37A PR
2
4 o- 0
2,QQ
1522
20361,204
38A PR
2
41 -20
2,96
1238 16729,7297
39A PR
2
5 1
O-10
3
1691 22546,6667
40A PR
2
5 Id-20
2,QQ
1100 14715,7191
41A PR
3
1 o-40
1,49
897,6 24096,6443
42A PR
3
1 Id-20
1,67
777,8 18629,9401
43A PR
3
1 2 -40
2,65
788,5 11901,8868
44A PR
3
1 4 -80
1,41
284,7 8076,59574
45A PR
3
2 8
o-,0
3,03
1641 21663,3663
46A PR
3
2 ICI-20
1,74
647,9 14894,2529
47A PR
3
3 o-j0
2,78
1844 26532,3741
48A PR
3
3 10-20
2,69
1023 15211,8959
- 49A PR
3
32 -40
2,51
715,8 11407,1713
50A PR
3
34 -80
3,56
706,9 7942,69663
51A PR
3
?
4 o- 0
337
2177 23535,135l
52A PR
3
4 Icj-20
3,81
1418 14887,1391
53A PR
3
5 o-10
4,87
2805 23039,0144
54A PR
3
51020
4,93
1939 15732,2515
55 M
PR
0
!
1 0-1~0
2,91
2152
29580,756
56 M
P R
0
1 10120
4,21
2869 27258,9074
57 M
PR
0
1 2Oj40
4,09
2212 21633,2518
58 M
PR
0
1 40 80
2,36
779,3
13208,4746
59 M
PR
0
1
2 o-10
3,91
2298 23508,9514
60M PR
0
2 10-I 0
2,3
983,7
17107,8261
61 M
P R
0
220- z 0
2
687
13740
62 M
P R
0
2 40-~ 0
2,52
669
10619,0476
63 M
P R
0
3 O-l E
2,91
1933 26570,4467
64 M
PR
0
3 1o-i 0
2,53
1381
21833,9921
65
e
M
PR
0
3 20-po
3,41
1656
19425,2199
66 M
PR
0
3 40-80
2,66
775,8
11666,1654
67 M
PR
1
1 0-1'0
2,56
1167
18234,375
68 M
PR
1
1 IO-A20
1,98
705 14242,4242
69 M
=R
1
1 20-ho
2,76
726,4
10527,5362
70 M
I'R
1
140- 0
28
583,2
8331,42857
71 M
PR
1
2 O-l 1
3,55
1854 20890,1408
72 M
I’R
1
2 IO-+o
3,68
1472
16000
73 M
PR
1
3 0-Q
3,04
1713 22539,4737
74 M
PR
1
3 10-20
2,08
727,l
13982,6923
75 M
PR
1
320- 0
2,68
747,6
II 158,209
76 M
P R
1
340- 0
3,03
569,4
7516,83168
77 M
P R
1
4 O-l
6,19
2997
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78 M
f’R
1
4
1
IO-,o
3,16
918,5
11626,5823
79 M
f’R
1
5 O-10
3,99
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80 M
P R
1
5 10-z
2,68
968,8 14459,7015
81 M
PR
2
1 o-IC
2,92
2133 29219,178l
82 M
P R
2
‘1 10-z
2,34
860,8 14714,5299
83 M
P R
2
‘1 20-4
2,56
701,3 10957,8125
84 M
P R
2
1 40-E
2,58
540,7 8382,94574
85 M
PR
2
2 o-IC
1,98
1140
23030,303
86 M
PR
2
2 10-i
2,63
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87 M
PR
2
3 o-IC
1,76
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88 M
F’R
2
3 10-i
2,67
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89 M
PR
2
3 20-4
3,46
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90 M
F’R
2
3 40-a
2,37
496‘6
8381,4346
91 M
F’R
2
4 o-IC
3,84
2105 21927,0833
92 M
F’R
2
4 10-2
2,69
1013
15063,197
93 M
P R
2
5 o-IC
2,83
1589
22459,364
94 M
F’R
2
5 10-2
3,22
999 12409,9379
95M PR
3
I 0-10
3,06
2151 28117,647l
96M PR
3
1 10-2
3,08
1318 17116,8831
97 M
P R
3
1 20-4
2,93
814,8 11123,5495
98M PR
3
1 40-8
2,7
583,5 8644,44444
99 M
P R
3
2 o-10
3,02
1916 25377,4834
###M P
R
3
2 10-2
495
1651 14675,5556
101 M
P R
3
3 o-10
3,63
1951 21498,6226
lQ2 M PR
3
3 10-2
3,68
1288
14000
pn
1’ R
3
;F-b
I u 3 '7 +
104 M PR
3
3 40-80
3.47
707.9
8160
105 M PR
3
4 O-10
2.61
1483
22728
106 M PR
3
4 10-20
3.95
1385
14025
107 M PR
3
5 O-10
3.81
1849
19412
108 M PR
3
5 10-20
2.57
806.6
12554
sample
traitements
net W
toc
PPm
mg
IM
CPI-1
O-10
2.35
1193 20306.38
2 M
CPI-1
10-20
2.62
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3 M
CPI-1
20-40
2.23
599.4 10751.56
4N
CPl-1
40-80
1.6
307.5
7687.5
5 N'
CPI-2
O-l 0
2.48
1420 22902.22
6 Ni
CPl-2
10-20
3.36
1149 13678.57
7 NI
CPl-3
o-10
2.3
1283 22313.04
8 NI
CPI-3
10-20
2.04
947.5 18578.43
9 NI
CPI-3
20-40
2.27
638.9 11258.14
10 M
CPI-3
40-80
1.41
217.1 6158.86
11 M
CPI -4
o-10
2.3
1358 23617.39
12 lb1
CF'l-4
10-20
1.87
742.6 15864.49
13 fkl
CPI-5
o-1 0
3.73
2038 21855.23
14 hl
CPI-5
10-20
4.92
1751 14235.77
15 hl
CP2-1
O-10
3.21
1724 21482.87
16 h'l
CP2-1
10-20
3.2
1345 16812.5
17 h!
Cf'2-1
20-40
4.19
1074 10252.98
18 h4
CP2-1
40-80
3.61
663.5
7351.8
19 h4
CP2-2
O-l 0
2.81
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20 nn
CP2-2
10-20
3.49
1195 13696.27
21 kil
CP2-3
o-10
3.66
2021 22087.43
' 22Fh
CP2-3
10-20
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1003 15082.71
23 Fh
CP2-3
20-40
3.29
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24 Fh
Cp2-3
40-80
3.9
558.8 5731.28
25 Fh
CP2-4
O-10
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26 M
CP2-4
10-20
2.22
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CP2-5
o-10
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28 FA
CP2-5
10-20
4.91
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29 M
CP3-1
o-10
3
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30 FA
CP3-1
10-20
3.18
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31 FA
CP3-1
20-40
3.21
878 10940.81
32 I'A
CP3-1
40-80
3.98
767.5 7713.57
33 rn
CP3-2
O-l 0
4.81
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34 FA
CP3-2
10-20
3.4
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35 rn
CP3-3
O-10
4.2
7855 17666.67
36 !A
CP3-3
10-20
2.3
619.2 10768.69
37 tJI
CP3-3
20-40
3.68
829.5
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CP3-3
40-80
3.8
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39 IA
CP3-4
o-1 0
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1598 17955.06
a
40 M
CP3-4
10-20
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41 IA
CP3-5
O-l 0
4.95
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42 M
CP3-5
10-20
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43 A
CPI -1
O-l 0
2.88
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44 A
CPI-1
1 O-20
2.4
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45 A
CPl-1
:20-40
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46 A
CPI-1
40-80
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CPI-2
o-10
4.52
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48 A
CPI-2
1 O-20
4.39
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49 A
CPI-3
10-10
3.48
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50 A
CPI-3
1 O-20
3.29
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51 A
CPI-3
20-40
4.8
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52 A
CPI-3
,40-80
3.31
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53 A
CPI-4
o-10
3.01
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54 A
CPI-4
1 O-20
4.7
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55 A
CPl-5
O-10
1.56
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56 A
CPI-5
1 O-20
2.56
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57 A
CPZ-1
o-10
3.24
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58 A
CP2-1
1 O-20
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59 A
CP2-1
20-40
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CP2-1
40-80
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61 A
CP2-2
O-l 0
3.22
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CP2-2
1 O-20
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CP2-3
O-10
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6 4 A
CP2-3
1 O-20
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65 A
CP2-3
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CP2-3
40-80
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CP2-4
O-l 0
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2082 19595.29
68 A
CP2-4
1 O-20
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1099 15003.41
69 A
CP2-5
O-l 0
3.44
1872 21767.44
70 A
CP2-5
1 O-20
5.45
1987 14583.48
71 A
CP3-1
o-1 0
3.22
2132 26472.02
72 A
CP3-1
1 O-20
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73 A
CP3-1
20-40
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74 A
CP3-1
40-80
2.19
332.9 6080.36
75 A
CP3-2
o-10
2.51
1380 21992.03
F 76 A
CP3-2
1 O-20
1.57
609.8 15536.31
77 A
CP3-3
o-10
1.88
914.7 19461.7
78 A
CP3-3
1 O-20
2.75
108i 15781.82
79 A
CP3-3
20-40
1.93
694 14383.41
80 A
CP3-3
40-80
2.5
548
8768
81 A
CP3-4
o-10
3.34
1694 20287.42
82 A
CP3-4
1 O-20
2.9
1200 16551.72
83 A
CP3-5
o-1 0
1 .a5
972.7 21031.35
84 A
CP3-5
1 O-20
2
768.46 15369.2
Standard curve O-glucosidase activity
jpl
pmol/p-nitrophenol
pg p-nitrophenol absorbante pg p-nitrophenol
Mean/absorbance
0
0
0.006
0
0.005
0
0
O.QO4
13.911
0.141
0 . 1
13.911
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0.2635
0 . 1
13.911
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0.4165
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27.822
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27.822
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55.644
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0.5
69.555
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69.555
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0.797
0.6
83.466
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Regression Output:
0.7
97.377
0.884
Constant
0
0.7
97.377
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Std Err of Y Est
0.018216
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111.288
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0.998145
~~-~ 0.8
11 1~.288
1.019
No. of Observations
11
0.9
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1.157
Degrees of Freedom
10
0.9
125.199
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1
139.11
1.276
Std Err of Coef.
Weight
Absorbante
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name
sample 1
sample 2
control
sample 1 sample 2 control
samplel sample2 Average
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1.005
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0.997
0.995
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1.001
0.995
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0.78
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1.004
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