R é p u b l i q u e d u S é n é g a l M I N...
R é p u b l i q u e d u S é n é g a l
M I N I S T E R E D U D E V E L O P P E M E N T
INSTITUT SENEGALAIS
R U R A L E T D E L’BYDRAULIQUE
DE RECHERCHES AGRICOLES
I S O L E M E N T E 1 C A R A C T E R I S A T I O N
D E S O U C H E S D E R H I Z O B I U M D E P R O S O P I S
P R O V E N A N T D E D I F F E R E N T E S Z O N E S E C O L O G I Q U E S
-
RAPPORT CHERCHEURS ASSOCIES ORSTOM
O u s m a n e D I A G N E
C h e r c h e u r DRPF/ISRA
DIRECTION DES RECHERCHES SUR LES PRODUCTIONS FORESTIERES
- 1 -
1.
INTRODUCTION
L ’ o b j e c t i f d u p r o j e t e s t d e c o n t r i b u e r à l ’ a m é l i o r a t i o n d e
l a p r o d u c t i v i t é d e s P r o s o p i s p a r l a v o i e s y m b i o t i q u e c’est-à-
d i r e e n u t i l i s a n t l e s p r o p r i é t é s d e s m i c r o o r g a n i s m e s a s s o c i é s à
ces
a r b r e s .
P o u r c e l a ,
i 1
e s t n é c e s s a i r e d e connaitre l ’ é t a t
s y m b i o t i q u e d e s e s p è c e s é t u d i é e s d a n s d i f f é r e n t e s c o n d i t i o n s . L e
p r o j e t
e s t
focal i sé
s u r
l ’ é t u d e d e s R h i z o b i u m a s s o c i é s a u x
P r o s o p i s m a i s l ’ a s s o c i a t i o n d e c e s d e r n i e r s a v e c l e s c h a m p i g n o n s
e n d o m y c o r h i z i e n s e s t é g a l e m e n t p r i s e e n c o m p t e .
I l s ’ a g i t ,
d a n s c e t r a v a i l , d ’ i s o l e r , d e c a r a c t é r i s e r e t
d e s é l e c t i o n n e r d e s
s o u c h e s d e R h i z o b i u m ( s e n s l a r g e ) e t d e
c h a m p i g n o n s e n d o m y c o r h i z i e n s s u s c e p t i b l e s d ’ ê t r e u t i l i s é e s a v e c
s u c c è s
d a n s l e s c o n d i t i o n s é d a p h o - c l imatiques d u S é n é g a l . L e s
e f f e t s d e c e s m i c r o o r g a n i s m e s ( c a p a c i t é à f o r m e r d e s s y m b i o s e s ,
a u g m e n t a t i o n d e l a p r o d u c t i v i t é d e s a r b r e s ) s o n t d é t e r m i n é s e n
c o m p a r a n t l e s p e r f o r m a n c e s d e s p l a n t s i n o c u l é s e t n o n i n o c u l é s
o u f e r t i l i s é s e n
u t i 1 i s a n t p l u s i e u r s
m é t h o d e s :
r é d u c t i o n d e
1 ‘acétylène,
m é t h o d e d e d o s a g e K j e l d a h l ,
m é t h o d e i s o t o p i q u e d e
d o s a g e d ’ a z o t e .
Ces
e f f e t s
s o n t
éva’l ués au
l a b o r a t o i r e , e n
p é p i n i è r e e t a u c h a m p .
II. MATERIEL ET METHODES
2 . 1 . O b s e r v a t i o n d e l a n o d u l a t i o n
A c a u s e d e l a d i f f i c u l t é d ’ o b t e n i r d e s n o d u l e s d i r e c t e m e n t
s u r d e s a r b r e s a d u l t e s ,
c e t t e é t u d e a é t é s o u v e n t c o n d u i t e e n
p é p i n i è r e s u r d e j e u n e s p l a n t s e n u t i l i s a n t l a m é t h o d e d i t e d e
p i é g e a g e d e R h i z o b i u m .
P l u s i e u r s t o u r n é e s o n t é t é e f f e c t u é e s
p o u r c o l l e c t e r d e s é c h a n t i l l o n s d e s o l p r o v e n a n t d e d i f f é r e n t e s
l o c a l i t é s d u S é n é g a l .
L e s é c h a n t i l l o n s o n t é t é p r é l e v é s e n t r e 5
e t 1 5 c m d e p r o f o n d e u r
e t p r é f é r e n t i e l l e m e n t
s o u s d e s e s p è c e s
f i x a t r i c e s d ’ a z o t e .
D e s s a c h e t s e n p l a s t i q u e d e 1 0 c m x 2 2 c m d e d i m e n s i o n s ,
o n t é t é r e m p l i s d e s é c h a n t i l l o n s d e s o l . A v a n t l e s s e m i s , l e s
. . . / . . .
- 2 -
g r a i n e s o n t é t é l a v é e s à l ’ e a u c o u r a n t e p u i s s t é r i l i s é e s a v e c d e
l ’ a c i d e s u l f u r i q u e c o n c e n t r é (H2S04) p e n d a n t u n e p é r i o d e d e 1 5
mn à 2 h selon les espèces. Après
3
iir 4 mois de culture, les
s a c h e t s o n t é t é c o u p é s d a n s
le sens de la longueur et le sol
d é g a g é d e s r a c i n e s . L a n o d u l a t i o n a
iité e x a m i n é e e t q u e l q u e s
n o d u l e s p r é l e v é s p o u r d e f u t u r s i s o l e m e n t s d e R h i z o b i u m .
2 . 2 .
I s o l e m e n t e t testage d e s o u c h e s d e R h z o b i u m
L e s n o d u l e s p r é l e v é s o n t é t é
l a v é s à l ’ e a u c o u r a n t e p u i s
s t é r i l i s é s
s u p e r f i c i e l l e m e n t
par
immersion
dans
0,l % de
c h l o r u r e m e r c u r i q u e (HgC12) p e n d a n t 3 m n .
Ensui t e
i 1s ont été
é c r a s é s d a n s u n e g o u t t e d ’ e a u s t é r i l e e t l a s u s p e n s i o n o b t e n u e
é t a l é e s u r u n m i l i e u c o m p o s é à b a s e d e m a n n i t o l e t d ’ e x t r a i t d e
l e v u r e (YEMA). A p r è s u n e c r o i s s a n c e a p p r o p r i é e d a n s u n e é t u v e à
30°C, u n e
c o l o n i e a
é t é p r é l e v é e e t
réétalée
s u r u n
nouveau
m i l i e u
pour
v é r i f i e r s a
p u r e t é
a v a n t
d ’ ê t r e
f i n a l e m e n t
t r a n s f é r é e d a n s u n t u b e c o n t e n a n t
l e Imême m i 1 i e u Y E M A j u s q u ’ à
l ’ u t i l i s a t i o n d e l ’ i s o l a t .
L e s s o u c h e s d e c o l l e c t i o n o n t é t é
s t o c k é e s à -8OOC d a n s 5 0 % d e g l y c é r o l m é l a n g é a u m i l i e u l i q u i d e
YEM.
L e s d i f f é r e n t s
i s o l a t s
i n o c u l é s
à p l u s i e u r s h ô t e s p o u r
d é t e r m i n e r l e u r i n f e c t i v i t é e t effectivité. L e s p l a n t s o n t é t é
c u l t i v é s s o i t e n t u b e s G I B S O N s o i t s u r s o l
s t é r i l i s é d a n s d e s
p o t s
a v e c d u m i l i e u J E N S E N c o m m e s o u r c e d ’ é l é m e n t s n u t r i t i f s .
C h a q u e p l a n t a é t é i n o c u l é a v e c 1 m l d e s u s p e n s i o n b a c t é r i e n n e à
l ’ e x c e p t i o n d e s t é m o i n s . A p r è s 3 à 4 m o i s d e c u l t u r e ,
1 es
n o d u l e s e t l e s d i f f é r e n t e s p a r t i e s d e s p l a n t s o n t é t é s é p a r é s ,
s é c h é s à 60°C e t p e s é s a v a n t l e s a n a l y s e s u l t é r i e u r e s .
2 . 3 .
C a r a c t é r i s a t i o n d e s s o u c h e s i s o l é e s
2 . 3 . 1 .
G a l e r i e s “API”
a ) - P r i n c i p e d e s g a l e r i e s
L e s s o u c h e s i s o l é e s o n t é t é
caractér i sées
par
l ’ u t i l i s a t i o n d e s g a l e r i e s “API” C e t t e m é t h o d e a é t é m i s e a u
. . /. ..,
- 3 -
p o i n t
p o u r
l ’ é t u d e d e s c a r a c t é r i s t i q u e s n u t r i t i o n n e l l e s
d e s
b a c t é r i e s
Gram
n é g a t i v e s e n
g é n é r a l .
L e s
t u b e s
o u g a l e r i e s
uti 1 isés
cent i ennent,
s o u s
f o r m e d é s h y d r a t é e ,
d e s
s u b s t r a t s
d i f f é r e n t s e n
c o n c e n t r a t i o n d é t e r m i n é e .
Pour
c e s
s u b s t r a t s ,
l ’ a p p a r i t i o n
d ’ u n e
c r o i s s a n c e
v i s i b l e à
l ’ o e i l n u ,
e s t
r e c h e r c h é e .
D a n s l e c a s , p a r e x e m p l e , d e l ’ é t u d e d u m é t a b o l i s m e
d e s h y d r a t e s d e c a r b o n e d e s m i c r o o r g a n i s m e s , l a g a l e r i e A P 1 5 0
C H e s t c o n s t i t u é e d e 5 0 m i c r o t u b e s AP1 c o m p o r t a n t c h a c u n u n e
z o n e d ’ a n a é r o b i o s e ( l e t u b e ) ,
p o u r l e s é t u d e s d e f e r m e n t a t i o n e t
u n e z o n e d ’ a é r o b i o s e ( l a c u p u l e ) ,
p o u r l e s é t u d e s d ’ o x y d a t i o n e t
d ’ a s s i m i l a t i o n .
L e p r e m i e r t u b e , s a n s p r i n c i p e a c t i f , s e r t d e
t é m o i n
n é g a t i f .
L e s
t u b e s
s u i v a n t s
c o n t i e n n e n t
chacun
une
q u a n t i t é
d é f i n i e d e
s u b s t r a t
d é s h y d r a t é ,
a p p a r t e n a n t à l a
f a m i l l e
d e s
h y d r a t e s d e c a r b o n e e t
d é r i v é s .
Ces
s u b s t r a t s
p e u v e n t ê t r e m é t a b o l i s é s d a n s p l u s i e u r s v o i e s : l ’ a s s i m i l a t i o n ,
l ’ o x y d a t i o n e t l a f e r m e n t a t i o n .
b)- Mode opératoi re
.
P r é p a r a t i o n d e
1 ’ i n o c u l u m :
1 es
s o u c h e s d e
R h i z o b i u m s o n t c u l t i v é e s s u r u n m i l i e u a p p r o p r i é (YEMA). A p r è s
u n e b o n n e c r o i s s a n c e , u n e c o l o n i e i s o l é e ,
p u r e e s t p r é l e v é e e t
r e m i s e e n c u l t u r e s u r u n m i l i e u n e u f c o n t e n u d a n s u n t u b e .
.
I n o c u l a t i o n d e l a
galerie : la
s u s p e n s i o n
b a c t é r i e n n e e s t
r é p a r t i e d a n s
les 50 tubes de la galerie à
1 ‘aide
d ’ u n e
p i p e t t e
s t é r i l e . A l a
suite de la
d e r n i è r e
i n o c u l a t i o n ,
deux
g o u t t e s d e
l a s u s p e n s i o n b a c t é r i e n n e
s o n t
d é p o s é e s s u r u n e b o i t e d e P é t r i
c o n t e n a n t d u m i 1 i e u Y E M A p o u r
c o n t r ô l e r l a v i a b i l i t é d e l a s o u c h e t e s t é e .
.
L e c t u r e d e l a g a l e r i e :
a p r è s 1 , 2 ,
4 et 7 jours
d ’ i n c u b a t i o n à
3o”c,
deux
p a r a m è t r e s
s o n t
e s t i m é s
p o u r l a
l e c t u r e d e s r é a c t i o n s o b s e r v é e s :
l ’ i n t e n s i t é
( c r o i s s a n c e d e s
b a c t é r i e s ) e t l a v i t e s s e d ’ a p p a r i t i o n d e s r é a c t i o n s .
. . . / . . .
- 4 -
2 . 3 . 2 .
E l e c t r o p h o r è s e S D S - P A G E
L e s y s t è m e
é l e c t r o p h o r é t i q u e d i s c o n t i n u e n p r é s e n c e
d e S D S p e r m e t d e c o n c e n t r e r
l e s p r o t é i n e s p r é a l a b l e m e n t d i l u é e s
dans
1 es
é c h a n t i l l o n s e n
d e s z o n e s
e x t r ê m e m e n t f i x e s , a v a n t
q u ’ e l l e s s o i e n t s é p a r é e s e n f o n c t i o n d e l e u r t a i l l e d a n s l e g e l
r é s o l u t i f .
Le
tampon
d e g e l
d e c o n c e n t r a t i o n
d i l u é a u
1/4
a d d i t i o n n é d e O,l % S D S ,
e s t é l i m i n é d e s p u i t s e t r e m p l a c é p a r
une
s o l u t i o n d e
tampon
d ’ é l e c t r o d e
T r i s (0,024M) G l y c i n e
C0,19M),
PH
8,6.
Tous
1 es
p u i t s
s o n t
n u m é r o t é s e t
1 es
échant i 11 ons
s o n t
déposés
dans
1 es
p u i t s à
l ’ a i d e
d ’ u n e
s e r i n g u e c o m b i n é e à u n a p p a r e i l d e m e s u r e .
L e v o l u m e a j o u t é a v e c
ce même tampon,
c o n t e n a n t 0,OOOl
% d e b l e u d e Eromophénol e t d e
2 % d e S D S v e r s u n v o l u m e f i n a l d e 1 0 m l .
L e r é s e r v o i r d u t a m p o n
d ’ é l e c t r o d e s u p é r i e u r e e s t f i x é à l a c a s s e t t e e t
r e m p l i d e
t a m p o n d ’ é l e c t r o d e T r i s - G l y c i n e - S D S f r a i c h e m e n t p r é p a r é .
L ’ é l e c t r o p h o r è s e s e
f a i t l a n u i t s o u s u n e i n t e n s i t é
d e 6 mA p o u r c h a q u e g e l .
A l a f i n d e l ’ é l e c t r o p h o r è s e , l e g e l
r é s o l u t i f e s t r é c u p é r é e t i m m é d i a t e m e n t m i s d a n s u n e s o l u t i o n d e
f i x a t i o n p e n d a n t a u m o i n s 6 0 m i n u t e s .
L a f i x a t i o n e s t s u i v i e p a r
l a c o l o r a t i o n d e s p r o t é i n e s .
2 . 4 . E t u d e d e s e n d o m y c o r h i z e s
P l u s i e u r s é c h a n t i l l o n s d e r a c i n e s d e s P r o s o p i s é t u d i é s o n t
é t é c o l l e c t é s à p a r t i r
d e d i f f é r e n t s
s o l s o u a p r è s p i é g e a g e .
E l l e s o n t é t é é c l a i r c i e s e t c o l o r é e s p a r l a m é t h o d e d e P H I L L I P S
e t H A Y M A N (1970).
L ’ é t a t m y c o r h i z i e n d e s a r b r e s a é t é d é t e r m i n é
a p r è s
v i s u a l i s a t i o n
d e s
s t r u c t u r e s
r a c i n a i r e s e t
s e l o n l e
p o u r c e n t a g e d e s r a c i n e s i n f e c t é e s ( G I O V A N N E T T I e t M O S S E , 1 9 8 0 ) .
S i x
s o u c h e s
d ’ e n d o m y c o r h i z e s
r e ç u e s d e
l a b o r a t o i r e s
é t r a n g è r e s
o n t
é t é
m u l t i p l i é e s e n
u t i l i s a n t
1 es
r a c i n e s d e
p l a n t e s
m a r a î c h è r e s .
Ces
s o u c h e s
s o n t
Glomus
mosseae,
G.
f a s c i c u l a t u m , G . m a r g a r i t a , G . e t u n i c a t u m , G . m i c r o c a r p u m e t
. . . / . . .
- 5 -
Scutel la heterogama. A p r è s d e u x m o i s d e c u l t u r e ,
l e s r a c i n e s
d e s p l a n t e s h ô t e s i n f e c t é e s o n t é t é s t o c k é e s d a n s d e s s a c h e t s
p l a s t i q u e s à 4OC p o u r u n e u t i l i s a t i o n u l t é r i e u r e .
2 . 5 . T e s t d ’ i n o c u l a t i o n
C e t e s t d ’ i n o c u l a t i o n a é t é f a i t s u r p l u s i e u r s p r o v e n a n c e s
d e P r o s o p i s s p . c u l t i v é e s s u r u n s o l
d e p é p i n i è r e .
L e s o l
u t i l i s é
é t a i t u n m é l a n g e d e d e u x v o l u m e s d e s a b l e p o u r t r o i s
v o l u m e s d e s o l
h u m i f è r e
p r é l e v é s à M b a o ,
d a n s l a R é g i o n d e
D a k a r . I l
s ’ a g i s s a i t
d ’ u n
mé 1 ange
e s s e n t i e l l e m e n t
s a b l e u x ,
pauvre
e n a z o t e e t e n p h o s p h o r e e t
l é g è r e m e n t a l c a l i n ( t a b l e a u
1).
L e s l o t s d e g r a i n e s d e P r o s o p i s s p . u t i l i s é s p r o v i e n n e n t
d e d i f f é r e n t e s
l o c a l i t é s d e
l ’ E q u a t e u r e t o n t é t é n u m é r o t é s
c o m m e s u i t
: 89/2361 (Chongon),
89/2362 CGomez Rendon), 89/2363
( A g n a Blanca),
89/2364 (Zapotillo),
89/2371 ( R i o
Chico), 89/2372
(Roca Fuerte),
89/2373 ( S a n t a Ana).
U n e p r o v e n a n c e d u S é n é g a l d e
P . juliflora (86/1516 Thiès) a é t é é g a l e m e n t u t i l i s é e c o m m e b a s e
d e c o m p a r a i s o n a v e c l e s p r o v e n a n c e s é q u a t o r i e n n e s . L e s g r a i n e s
o n t
é t é
s t é r i l i s é e s
s u p e r f i c i e l l e m e n t à
l ’ a c i d e
s u l f u r i q u e
c o n c e n t r é p u i s p r é g e r m é e s s u r d u c o t o n h y d r o p h i l e à 30°C.
A p r è s g e r m i n a t i o n ,
l e s g r a i n e s o n t é t é r e p i q u é e s d a n s d e s
s a c h e t s c o n t e n a n t l e s o l d e p é p i n i è r e . A p r è s d e u x s e m a i n e s d e
c u l t u r e ,
l e s j e u n e s p l a n t s o n t é t é
i n o c u l é s a v e c u n e s o u c h e d e
R h i z o b i u m , à r a i s o n d e 1 0 p l a n t s i n o c u l é s
e t 1 0 p l a n t s n o n
i n o c u l é s p a r p r o v e n a n c e .
l ’ a r r o s a g e é t a i t
f a i t d e u x f o i s p a r
j o u r a v e c l ’ e a u d e r o b i n e t .
L ’ e x p é r i e n c e a
duré 14
s e m a i n e s .
La
r é p o n s e a
l ’ i n o c u l a t i o n a é t é e s t i m é e e n c o m p a r a n t
l e s p l a n t s i n o c u l é s e t
l e s p l a n t s n o n
i n o c u l é s a u n i v e a u d e c h a q u e p r o v e n a n c e . A l a f i n
d e 1 ‘ e x p é r i e n c e ,
l e s p l a n t s o n t é t é d é p o t é s . L e s n o d u l e s o n t é t é
pré1 evés,
l a v é s e t s é c h é s à l ’ é t u v e à 65OC p e n d a n t 4 8 h . L e s
p a r t i e s a é r i e n n e s e t l e s r a c i n e s o n t é t é s é p a r é e s p u i s s é c h é e s à
65OC p e n d a n t 7 2 h .
l e s v a r i a b l e s s u i v a n t e s o n t é t é é v a l u é e s :
Tableau 1 : Caractéristiques physiques et chimiques du sol de pépinière
Sable grossier (%)
54,3
GIN
975
Sable fin (%)
38,9
P,O, total (%o)
0,21
Limon (%)
20
P,O, assimilable (%o)
0,ll
Argile (%)
4,3
Ca++ (Yo)
9,97
Matiére organique (Oh)
03
Mg++ (Oh)
0,53
PH (KW
78
K+ (%)
0,09
c (%o)
3,5
Na+ (%)
0,08
N (%o)
0,37
- 7 -
h a u t e u r d e s p l a n t s ,
p o i d s
s e c d e s p a r t i e s a é r i e n n e s e t d e s
r a c i n e s ,
n o m b r e e t p o i d s s e c d e s n o d u l e s .
2 . 6 . E s s a i a u c h a m p
U n
e s s a i
i n t i t u l é
C o m p o r t e m e n t d e
Prosop i s
j u l i f l o r a
i n o c u l é a v e c u n e c u l t u r e m i x t e R h i z o b i u m - M A V , a é t é i n s t a l l é à
l a s t a t i o n e x p é r i m e n t a l e I S R A d e S a n g a l k a m , s i t u é e à 3 0 k m d e
D a k a r . I l
s ’ a g i t d ’ u n e s s a i
d e 3 0 0 p l a n t s d o n t
1 5 0 p l a n t s
i n o c u l é s
a v e c d u
R h i z o b i u m e t
une
c u l t u r e d e
champignons
e n d o m y c o r h i z i e n s e t
1 5 0 n o n i n o c u l é s ( t é m o i n s ) .
Il c o m p r e n d 6
r é p é t i t i o n s e t 7 4 a r b r e s d e b o r d u r e .
Il a été mis en place ‘en
1 9 9 1 .
I I I . RESULTATS
3 . 1 . S y m b i o s e P r o s o p i s - m i c r o o r g a n i s m e s
U n e
s e u l e
e x p é r i e n c e d e p i é g e a g e d e
R h i z o b i u m e t d e
champignons
e n d o m y c o r h i z i e n s a
é t é
e f f e c t u é e p o u r l e m o m e n t .
Elle a été faite à
p a r t i r d u s o l d e H a n n a v e c l e s e s p è c e s
s u i v a n t e s :
P r o s o p i s a f r i c a n a , P . j u l i f l o r a , P . c h i l e n s i s , P .
s p i c i g e r a e t P . t a m a r u g o .
T o u t e s c e s e s p è c e s o n t n o d u l é e t f o r m é d e s e n d o m y c o r h i z e s
à p a r t i r d u s o l u t i l i s é . C e p e n d a n t , l e t a u x d e n o d u l a t i o n e t
d ’ e n d o m y c o r h i z a t i o n s e m b l e l i é à
l ’ e s p è c e c o n s i d é r é e c o m m e l e
m o n t r e l e t a b l e a u 2 .
3 . 2 . Testage d e s o u c h e s
U n e v i n g t a i n e d e s o u c h e s d e R h i z o b i u m e s t e n t r a i n d ’ ê t r e
t e s t é e
s u r
P r o s o p i s j u l i f l o r a e s s e n t i e l l e m e n t .
L e t a b l e a u 3
m o n t r e
1 es
r é s u l t a t s
o b t e n u s
a p r è s
testage d e 7
s o u c h e s d e
R h i z o b i u m s u r P. j u l i f l o r a .
C e s s o u c h e s o n t t o u t e s n o d u l é l e u r
p l a n t e h ô t e .
L a n o d u l a t i o n a v a r i é s e l o n
1 e s s o u c h e s .
C ’ e s t
a i n s i
q u e d e s s o u c h e s c o r n e P j 4 7 ,
Pj 46 et Pj 48 ont donné une
m a s s e d e n o d u l e s d e u x à c i n q f o i s p l u s é l e v é e q u e l e s s o u c h e s P c
. . . / . . .
TABLEAU 2 : T a u x d e n o d u l a t i o n e t d ’ e n d o m y c o r h i z a t i o n d e 5 e s p è c e s d e P r o s o p i s
E S
P E C E S
TAUX
P. a f r i c a n a
P. chi lensis
P. j u l i f l o r a
P. spec i gera
P. tamarugo
Nombre de
n o d u l e s
1 0
8
6
6
p a r p l a n t
2
I
CO
P o u r c e n t a g e
d e r a c i n e s
84
9 8
100
94
88
endomy-
corhizces
- 9 -
TABLEAU 3
: Testage d e s o u c h e s d e R h i z o b i u m
P o i d s s e c
iaut . moy.
P o i d s s e c
Nbre de
P o i d s s e c
Souches
nodules/pl
p l a n t s p a r t i e s a é
n o d u l e s / p l
d e s
r a c i n e s
(mg>
( cm>
riennescmg)
(mg)
,.o
P c 45
10
7,5
Pj
47
16
16,25
10,7
166,5
90
Pj 48
14
13,6
11,2
133
70
Pj
46
17
l
14,8
13
280
100
Pj
34
26
Pj
35
----A
8,7
121
55
-
620
8,7
133
55
s_
T
- 10 -
45,
P j 3 5 e t 6 2 0 ( s o u c h e d e c o l l e c t i o n ) .
B i e n q u e d e s c a l c u l s
s t a t i s t i q u e s
n ’ o n t
pas
encore
é t é
f a i t s ,
i 1
semble
que la
h a u t e u r d e s p l a n t s
i n o c u l é s n e
s o i e n t
pas
s i g n i f i c a t i v e m e n t
d i f f é r e n t e d e c e l l e d e s p l a n t s n o n i n o c u l é s . P a r a i l l e u r s , l a
d i f f é r e n c e d e p o i d s s e c d e s p a r t i e s a é r i e n n e s e t d e p o i d s s e c
d e s
r a c i n e s
e n t r e
1 es
p l a n t s
i n o c u l é s e t
1 es
p l a n t s
non
i n o c u l é s ,
v a r i e s e l o n l e s s o u c h e s c o n s i d é r é e s .
3.3. Caractéristiques des souches de Rhizobium
L e s d o n n é e s r e c u e i l l i e s s u r l ’ é l e c t r o p h o r è s e S D S - P A G E e t
l e s g a l e r i e s A P 1 d e s s o u c h e s d e R h i z o b i u m d e P r o s o p i s s o n t e n
t r a i n d’êre a n a l y s é e s à G a n d ( B e l g i q u e ) p a r P h i l i p p e D E L A J U D I E ,
c h e r c h e u r à
1 ‘ORSTOM.
P o u r l e m o m e n t ,
l e s p r e m i e r s r é s u l t a t s
o b t e n u s
m o n t r e n t q u e
1 es
s o u c h e s
t e s t é e s
s o n t
c l a s s é e s d a n s
p l u s i e u r s
groupes
d i f f é r e n t s p a r r a p p o r t a u x R h i z o b i u m d é j à
c o n n u s .
3.4. Testaqe d’inoculation de 8 provenances de Prosopis sp. et
P . j u l i f l o r a
L e s
r é s u l t a t s d e
c e t t e
e x p é r i e n c e
o n t
m o n t r é
que
l ’ i n o c u l a t i o n a v e c u n e s o u c h e d e R h i z o b i u m a p e r m i s d ’ a u g m e n t e r
1 a h a u t e u r ,
l a b i o m a s s e a é r i e n n e ,
l a b i o m a s s e r a c i n a i r e s ; l e
n o m b r e d e n o d u l e s e t
l e p o i d s
s e c d e s n o d u l e s d e p l u s i e u r s
p r o v e n a n c e s d e P r o s o p i s SP. e t d e P . j u l i f l o r a c u l t i v é e s e n
c o n d i t i o n s n o r m a l e s
s u r u n
s o l
non
s t é r i 1 i s é .
C e p e n d a n t ,
l e s
p r o v e n a n c e s o n t r é p o n d u d i f f é r e m m e n t à l ’ i n o c u l a t i o n .
A p r è s t r o i s m o i s d e c r o i s s a n c e ,
l a h a u t e u r d e s p l a n t s
i n o c u l é s a
augmenté de 31 %
( p r o v e n a n c e 2 3 6 1 ) à 1 4 7 %
( p r o v e n a n c e
2371),
l e p o i d s s e c d e s t i g e s d e 1 5 % ( p r o v e n a n c e
2363), à 2 1 3
% ( p r o v e n a n c e 2 3 7 1 ) e t l e p o i d s s e c d e s r a c i n e s d e
12 % ( p r o v e n a n c e 1 5 1 6 ) à 2 3 1 % ( p r o v e n a n c e 2 3 7 1 ) ( f i g . 1 à 3 ) .
L e s r é s u l t a t s o b t e n u s s u r l a n o d u l a t i o n s u g g è r e n t q u e l a s o u c h e
de
Rhizobium
i n t r o d u i t e
d a n s l e
s o l
d e p é p i n i è r e e s t p l u s
e f f i c a c e
que la
(ou
1 es>
s o u c h e ( s )
a u t o c h t o n e ( s ) .
E l l e a
a u g m e n t é l e n o m b r e e t l e p o i d s s e c d e s n o d u l e s d e p l u s d e h u i t
f o i s d a n s l e c a s d e s m e i l l e u r e s p r o v e n a n c e s ( f i g u r e 4 e t 5 ) .
..* / . . .
35
30
25
20
15
10
5
0 L
P. sp
P. sp
P. sp.
p SP
P. sp.
p SP
P sp
uliflora 2364
2373
2371 2372 2363
2361
2362
Figure 1 : Hauteur des plants (cm)
0 . . Plants inoculés
cl Plants non i nocu It’s
1 Intervalle de confiance
1200
:.
1000
;:
800
600
1’ sp
1’. sp
1’ sp
1’ sp
1’ c..:..:jj,:::..’/.::
sp
1) .”
400
200
n L
sp
P. sp
1’
2373
2364
2372
2361
23?1
2363
2362
~~1111’10l-a
Figure 2 :Poids sec des parties aériennes(mg)
q Plants inoculés
0
Plants non inoculés
I Intervalle de confiance
P. sp.
P. sp
P. sp.
P. sp
P. sp
P. sp
Psp
P
2364
2361
2371
2373
2372
2363
2362 juliflora
Figure 3 : Poids sec des racines (mg)
q Plants inoculés
Cl Plants non inoculés
I Intervalle de confiance
P. sp. P
P. sp.
P sp
1’ sp
P. sp
1’ SJI P SP
2372 juliflora 2371
2364
2 3 6 1
236.3
2.i’i
2362
Figure 4 : Nom.bre de nodules
g-j
Plants inoculés
c l Plants non inocules
140
1 2 0
1 0 0
80
60
40
20
Y
p SP
P. sp.
p SP
P. sp.
P. sp
1’ sp
P .
p SP
2361
2363
2372
2371
2362
2364
juliflora
2373
Figure 5 :Poids sec des nodules (mg)
cl. . Plants in0 culks
cl Plants non inocules
- 14 -
3 . 5 . E s s a i a u c h a m p
L e s p r e m i è r e s d o n n é e s d e l ’ e s s a i a u c h a m p s o n t e n t r a i n
d ’ ê t r e e x p l o i t é e s .
I l s ’ a g i t d e m e n s u r a t i o n s d e l a h a u t e u r d e s
p l a n t s â g é s d e 3 ,
8 et 12 mois ainsi
q u e d e s t a u x d e s u r v i e
a p r è s 1 a n d e p l a n t a t i o n .
IV. CONCLUSIONS
L ’ é t u d e e n t r e p r i s e d a n s
l e c a d r e d e c e p r o j e t a p e r m i s d e
connaÎtre l ’ é t a t
s y m b i o t i q u e d e p l u s i e u r s e s p è c e s d e P r o s o p i s
c u l t i v é e s d a n s c e r t a i n s s o l s d u S é n é g a l . C e s d e r n i e r s r e n f e r m e n t
d e s R h i z o b i u m ( s e n s l a r g e ) e t d e s c h a m p i g n o n s e n d o m y c o r h i z i e n s
c a p a b l e s d ’ i n f e c t e r l e s r a c i n e s d e P r o s o p i s a f r i c a n a , l a s e u l e
espèce 1 ocal e ,
e t d ’ a u t r e s e s p è c e s i n t r o d u i t e s t e l l e s q u e P .
jul iflot-a,
P
.
c h i l e n s i s , P .
s p i c i g e r a e t P .
t a m a r u g o .
L e s
i n o c u l a t i o n s d e R h i z o b i u m o n t m o n t r é q u ’ i l
e s t p o s s i b l e ,
dans
d e s c o n d i t i o n s n o r m a l e s d e p é p i n i è r e , d e t r o u v e r d e s s o u c h e s
c a p a b l e s
d ’ a u g m e n t e r l a
h a u t e u r , 1 a
biomasse
a é r i e n n e e t
r a c i n a i r e e t d e l a n o d u l a t i o n d e j e u n e s p l a n t s d e P r o s o p i s . U n e
c o l l e c t i o n d e c e s s o u c h e s e s t a c t u e l l e m e n t d i s p o n i b l e .
L e s
r é s u l t a t s r e l a t i f s à l a c a r a c t é r i s a t i o n d e s s o u c h e s d e R h i z o b i u m
s o n t e n c o r e f r a g m e n t a i r e s .
L e s p r e m i è r e s d o n n é e s o b t e n u e s a p r è s
l ’ é l e c t r o p h o r è s e S D S - P A G E s e m b l e n t m o n t r e r q u e l e s R h i z o b i u m d e
P r o s o p i s n ’ o n t p a s u n e p l a c e b i e n d é f i n i e p a r r a p p o r t a u x a u t r e s
g r o u p e s d e R h i z o b i u m c o n n u s .
C e r t a i n e s
a c t i v i t é s
p r é v u e s
l e s d e u x
p r e m i è r e s
a n n é e s
n ’ o n t p u
ê t r e m e n é e s
à t e m p s à c a u s e d e q u e l q u e s d i f f i c u l t é s
t e c h n i q u e s e t f i n a n c i è r e s : a r r i v é e t a r d i v e d e m a t é r i e l c o m m a n d é
( p i è c e s p o u r l y o p h i l i s a t e u r , g a l e r i e s API),
v e r s e m e n t t a r d i f d e s
c r é d i t s . . . C ’ e s t l a r a i s o n p o u r l a q u e l l e j e s o u h a i t e c o n t i n u e r
c e r t a i n e s o p é r a t i o n s ,
s u r t o u t l a c a r a c t é r i s a t i o n d e s s o u c h e s d e
R h i z o b i u m e n c o l l a b o r a t i o n
avec MM.
M a r c N E Y R A e t P h i 1 i p p e D E
L A J U D I E d u l a b o r a t o i r e d e M icrobiologie d e
1’ORSTOM.
:: :: ::
RAPPORT FINANCIER
Septembre
1990 - septembre 1992
1 Relevé des dépenses
M a t é r i e l e t f o u r n i t u r e s
1 5 0 9 3 4 9
M a i n - d ’ o e u v r e t e m p o r a i r e
542 909
Déplacements
1 2 2 4 0 0
E n t r e t i e n v é h i c u l e
9 1 5 0 0
C a r b u r a n t - l u b r i f i a n t
364 000
A n a l y s e s
149 454
T 0 T A L
2 779 612
2 . B a l a n c e
Une somme
d e 3 4 5 7 5 8 6 F é t a i t d é l é g u é e a u p r o j e t . L e s
dépenses
s ’ é l è v e n t à
2 . 7 7 9 . 6 1 2 .
E n c e m o m e n t l e d i s p o n i b l e e s t
d e 6 7 7 . 9 7 4 F .
N o t e
I l e s t p r é v u , a v e c l e d i s p o n i b l e , d e f a i r e d e s v i s i t e s s u r
l e l i e u o ù l ’ e s s a i a u c h a m p a é t é i n s t a l l é ,
d ’ e n t r e t e n i r l a
parce1 1 e
e x p é r i m e n t a l e e t d e
r e c r u t e r d e l a
m a i n - d ’ o e u v r e
t e m p o r a i r e p o u r l e s p r e m i è r e s m e s u r e s à f a i r e .
- 16 -
PLAN POUR LA PROCHAINE
PERIODE DE RECHERCHE
1 . E t u d e d e s R h i z o b i u m d e P r o s o p i s
L e s
s é l e c t i o n s d e
s o u c h e s d e
R h i z o b i u m
n o d u l a n t
P r o s o p i s
v o n t ê t r e p o u r s u i v i e s
e n m e t t a n t c e t t e f o i s 1 ‘ a c c e n t
s u r l e s r e l a t i o n s R h i z o b i u m - e s p è c e s d e
P r o s o p i s .d’une p a r t e t
R h i z o b i u m - p r o v e n a n c e s
de
P rosop i s
d ’ a u t r e
p a r t .
L a
c a r a c t é r i s a t i o n e t
l ’ i d e n t i f i c a t i o n
d e s
nouve 11 es
s o u c h e s
i s o l é e s v a ê t r e c o n d u i t e e n m ê m e t e m p s q u e 1 ’ i n t e r p r é t a t i o n d e s
r é c e n t e s d o n n é e s d e c a r a c t é r i s a t i o n .
2 . E t u d e s u r l e s e n d o m y c o r h i z e s
L e s s o u c h e s d ’ e n d o m y c o r h i z e s e n c o l l e c t i o n s e r o n t t e s t é e s
s u r l e s d i f f é r e n t e s e s p è c e s d e P r o s o p i s p o u r v o i r l e u r s e f f e t s
s u r l a c r o i s s a n c e e t l a p r o d u c t i o n d e b i o m a s s e
d e c e s d e r n i è r e s .
E l l e s
s e r o n t
comparées
a v e c
u n
échant i 1 lon de
s o u c h e s
a u t o c h t o n e s .
L ’ i n o c u l a t i o n
d ’ e n d o m y c o r h i z e s
s e r a
c o u p l é e à
l ’ i n o c u l a t i o n a v e c u n e o u p l u s i e u r s s o u c h e s cie R h i z o b i u m p o u r
t e s t e r s o n e f f i c a c i t é s u r l a f i x a t i o n d ’ a z o t e d e P r o s o p i s .
3 . E s s a i a u c h a m p
L e s p r e m i è r e s d o n n é e s d e l ’ e s s a i a u c h a m p d é j à i n s t a l l é
s e r o n t e x p l o i t é e s p o u r e s t i m e r
l ’ e f f e t d e s s o u c h e s i n t r o d u i t e s
d a n s l e s o l s u r l a c r o i s s a n c e d e s p l a n t s e t l e u r t a u x d e s u r v i e .
- 17 -
BUDGET PREVISIONNEL
POUR LA TROISIEME ANNEE DU PROJET
R u b r i q u e s
M o n t a n t (F C F A )
F o u r n i t u r e s e t p e t i t m a t é r i e l
600
000
D o c u m e n t a t i o n
50 000
F r a i s d ’ a n a l y s e
100
000
F r a i s d e d é p l a c e m e n t
200
000
M a i n t e n a n c e v é h i c u l e
1 0 0
000
C a r b u r a n t ,
l u b r i f i a n t
210 000
Personne 1 tempora i re
240
000
T 0
1; A L
1 5 0 0 000
M I N I S T E R E D U D E V E L O P P E M E N T
INSTITUT SENEGALAIS
R U R A L E T D E L’BYDRAULIQUE
DE RECHERCHES AGRICOLES
I S O L E M E N T E 1 C A R A C T E R I S A T I O N
D E S O U C H E S D E R H I Z O B I U M D E P R O S O P I S
P R O V E N A N T D E D I F F E R E N T E S Z O N E S E C O L O G I Q U E S
-
RAPPORT CHERCHEURS ASSOCIES ORSTOM
O u s m a n e D I A G N E
C h e r c h e u r DRPF/ISRA
DIRECTION DES RECHERCHES SUR LES PRODUCTIONS FORESTIERES
- 1 -
1.
INTRODUCTION
L ’ o b j e c t i f d u p r o j e t e s t d e c o n t r i b u e r à l ’ a m é l i o r a t i o n d e
l a p r o d u c t i v i t é d e s P r o s o p i s p a r l a v o i e s y m b i o t i q u e c’est-à-
d i r e e n u t i l i s a n t l e s p r o p r i é t é s d e s m i c r o o r g a n i s m e s a s s o c i é s à
ces
a r b r e s .
P o u r c e l a ,
i 1
e s t n é c e s s a i r e d e connaitre l ’ é t a t
s y m b i o t i q u e d e s e s p è c e s é t u d i é e s d a n s d i f f é r e n t e s c o n d i t i o n s . L e
p r o j e t
e s t
focal i sé
s u r
l ’ é t u d e d e s R h i z o b i u m a s s o c i é s a u x
P r o s o p i s m a i s l ’ a s s o c i a t i o n d e c e s d e r n i e r s a v e c l e s c h a m p i g n o n s
e n d o m y c o r h i z i e n s e s t é g a l e m e n t p r i s e e n c o m p t e .
I l s ’ a g i t ,
d a n s c e t r a v a i l , d ’ i s o l e r , d e c a r a c t é r i s e r e t
d e s é l e c t i o n n e r d e s
s o u c h e s d e R h i z o b i u m ( s e n s l a r g e ) e t d e
c h a m p i g n o n s e n d o m y c o r h i z i e n s s u s c e p t i b l e s d ’ ê t r e u t i l i s é e s a v e c
s u c c è s
d a n s l e s c o n d i t i o n s é d a p h o - c l imatiques d u S é n é g a l . L e s
e f f e t s d e c e s m i c r o o r g a n i s m e s ( c a p a c i t é à f o r m e r d e s s y m b i o s e s ,
a u g m e n t a t i o n d e l a p r o d u c t i v i t é d e s a r b r e s ) s o n t d é t e r m i n é s e n
c o m p a r a n t l e s p e r f o r m a n c e s d e s p l a n t s i n o c u l é s e t n o n i n o c u l é s
o u f e r t i l i s é s e n
u t i 1 i s a n t p l u s i e u r s
m é t h o d e s :
r é d u c t i o n d e
1 ‘acétylène,
m é t h o d e d e d o s a g e K j e l d a h l ,
m é t h o d e i s o t o p i q u e d e
d o s a g e d ’ a z o t e .
Ces
e f f e t s
s o n t
éva’l ués au
l a b o r a t o i r e , e n
p é p i n i è r e e t a u c h a m p .
II. MATERIEL ET METHODES
2 . 1 . O b s e r v a t i o n d e l a n o d u l a t i o n
A c a u s e d e l a d i f f i c u l t é d ’ o b t e n i r d e s n o d u l e s d i r e c t e m e n t
s u r d e s a r b r e s a d u l t e s ,
c e t t e é t u d e a é t é s o u v e n t c o n d u i t e e n
p é p i n i è r e s u r d e j e u n e s p l a n t s e n u t i l i s a n t l a m é t h o d e d i t e d e
p i é g e a g e d e R h i z o b i u m .
P l u s i e u r s t o u r n é e s o n t é t é e f f e c t u é e s
p o u r c o l l e c t e r d e s é c h a n t i l l o n s d e s o l p r o v e n a n t d e d i f f é r e n t e s
l o c a l i t é s d u S é n é g a l .
L e s é c h a n t i l l o n s o n t é t é p r é l e v é s e n t r e 5
e t 1 5 c m d e p r o f o n d e u r
e t p r é f é r e n t i e l l e m e n t
s o u s d e s e s p è c e s
f i x a t r i c e s d ’ a z o t e .
D e s s a c h e t s e n p l a s t i q u e d e 1 0 c m x 2 2 c m d e d i m e n s i o n s ,
o n t é t é r e m p l i s d e s é c h a n t i l l o n s d e s o l . A v a n t l e s s e m i s , l e s
. . . / . . .
- 2 -
g r a i n e s o n t é t é l a v é e s à l ’ e a u c o u r a n t e p u i s s t é r i l i s é e s a v e c d e
l ’ a c i d e s u l f u r i q u e c o n c e n t r é (H2S04) p e n d a n t u n e p é r i o d e d e 1 5
mn à 2 h selon les espèces. Après
3
iir 4 mois de culture, les
s a c h e t s o n t é t é c o u p é s d a n s
le sens de la longueur et le sol
d é g a g é d e s r a c i n e s . L a n o d u l a t i o n a
iité e x a m i n é e e t q u e l q u e s
n o d u l e s p r é l e v é s p o u r d e f u t u r s i s o l e m e n t s d e R h i z o b i u m .
2 . 2 .
I s o l e m e n t e t testage d e s o u c h e s d e R h z o b i u m
L e s n o d u l e s p r é l e v é s o n t é t é
l a v é s à l ’ e a u c o u r a n t e p u i s
s t é r i l i s é s
s u p e r f i c i e l l e m e n t
par
immersion
dans
0,l % de
c h l o r u r e m e r c u r i q u e (HgC12) p e n d a n t 3 m n .
Ensui t e
i 1s ont été
é c r a s é s d a n s u n e g o u t t e d ’ e a u s t é r i l e e t l a s u s p e n s i o n o b t e n u e
é t a l é e s u r u n m i l i e u c o m p o s é à b a s e d e m a n n i t o l e t d ’ e x t r a i t d e
l e v u r e (YEMA). A p r è s u n e c r o i s s a n c e a p p r o p r i é e d a n s u n e é t u v e à
30°C, u n e
c o l o n i e a
é t é p r é l e v é e e t
réétalée
s u r u n
nouveau
m i l i e u
pour
v é r i f i e r s a
p u r e t é
a v a n t
d ’ ê t r e
f i n a l e m e n t
t r a n s f é r é e d a n s u n t u b e c o n t e n a n t
l e Imême m i 1 i e u Y E M A j u s q u ’ à
l ’ u t i l i s a t i o n d e l ’ i s o l a t .
L e s s o u c h e s d e c o l l e c t i o n o n t é t é
s t o c k é e s à -8OOC d a n s 5 0 % d e g l y c é r o l m é l a n g é a u m i l i e u l i q u i d e
YEM.
L e s d i f f é r e n t s
i s o l a t s
i n o c u l é s
à p l u s i e u r s h ô t e s p o u r
d é t e r m i n e r l e u r i n f e c t i v i t é e t effectivité. L e s p l a n t s o n t é t é
c u l t i v é s s o i t e n t u b e s G I B S O N s o i t s u r s o l
s t é r i l i s é d a n s d e s
p o t s
a v e c d u m i l i e u J E N S E N c o m m e s o u r c e d ’ é l é m e n t s n u t r i t i f s .
C h a q u e p l a n t a é t é i n o c u l é a v e c 1 m l d e s u s p e n s i o n b a c t é r i e n n e à
l ’ e x c e p t i o n d e s t é m o i n s . A p r è s 3 à 4 m o i s d e c u l t u r e ,
1 es
n o d u l e s e t l e s d i f f é r e n t e s p a r t i e s d e s p l a n t s o n t é t é s é p a r é s ,
s é c h é s à 60°C e t p e s é s a v a n t l e s a n a l y s e s u l t é r i e u r e s .
2 . 3 .
C a r a c t é r i s a t i o n d e s s o u c h e s i s o l é e s
2 . 3 . 1 .
G a l e r i e s “API”
a ) - P r i n c i p e d e s g a l e r i e s
L e s s o u c h e s i s o l é e s o n t é t é
caractér i sées
par
l ’ u t i l i s a t i o n d e s g a l e r i e s “API” C e t t e m é t h o d e a é t é m i s e a u
. . /. ..,
- 3 -
p o i n t
p o u r
l ’ é t u d e d e s c a r a c t é r i s t i q u e s n u t r i t i o n n e l l e s
d e s
b a c t é r i e s
Gram
n é g a t i v e s e n
g é n é r a l .
L e s
t u b e s
o u g a l e r i e s
uti 1 isés
cent i ennent,
s o u s
f o r m e d é s h y d r a t é e ,
d e s
s u b s t r a t s
d i f f é r e n t s e n
c o n c e n t r a t i o n d é t e r m i n é e .
Pour
c e s
s u b s t r a t s ,
l ’ a p p a r i t i o n
d ’ u n e
c r o i s s a n c e
v i s i b l e à
l ’ o e i l n u ,
e s t
r e c h e r c h é e .
D a n s l e c a s , p a r e x e m p l e , d e l ’ é t u d e d u m é t a b o l i s m e
d e s h y d r a t e s d e c a r b o n e d e s m i c r o o r g a n i s m e s , l a g a l e r i e A P 1 5 0
C H e s t c o n s t i t u é e d e 5 0 m i c r o t u b e s AP1 c o m p o r t a n t c h a c u n u n e
z o n e d ’ a n a é r o b i o s e ( l e t u b e ) ,
p o u r l e s é t u d e s d e f e r m e n t a t i o n e t
u n e z o n e d ’ a é r o b i o s e ( l a c u p u l e ) ,
p o u r l e s é t u d e s d ’ o x y d a t i o n e t
d ’ a s s i m i l a t i o n .
L e p r e m i e r t u b e , s a n s p r i n c i p e a c t i f , s e r t d e
t é m o i n
n é g a t i f .
L e s
t u b e s
s u i v a n t s
c o n t i e n n e n t
chacun
une
q u a n t i t é
d é f i n i e d e
s u b s t r a t
d é s h y d r a t é ,
a p p a r t e n a n t à l a
f a m i l l e
d e s
h y d r a t e s d e c a r b o n e e t
d é r i v é s .
Ces
s u b s t r a t s
p e u v e n t ê t r e m é t a b o l i s é s d a n s p l u s i e u r s v o i e s : l ’ a s s i m i l a t i o n ,
l ’ o x y d a t i o n e t l a f e r m e n t a t i o n .
b)- Mode opératoi re
.
P r é p a r a t i o n d e
1 ’ i n o c u l u m :
1 es
s o u c h e s d e
R h i z o b i u m s o n t c u l t i v é e s s u r u n m i l i e u a p p r o p r i é (YEMA). A p r è s
u n e b o n n e c r o i s s a n c e , u n e c o l o n i e i s o l é e ,
p u r e e s t p r é l e v é e e t
r e m i s e e n c u l t u r e s u r u n m i l i e u n e u f c o n t e n u d a n s u n t u b e .
.
I n o c u l a t i o n d e l a
galerie : la
s u s p e n s i o n
b a c t é r i e n n e e s t
r é p a r t i e d a n s
les 50 tubes de la galerie à
1 ‘aide
d ’ u n e
p i p e t t e
s t é r i l e . A l a
suite de la
d e r n i è r e
i n o c u l a t i o n ,
deux
g o u t t e s d e
l a s u s p e n s i o n b a c t é r i e n n e
s o n t
d é p o s é e s s u r u n e b o i t e d e P é t r i
c o n t e n a n t d u m i 1 i e u Y E M A p o u r
c o n t r ô l e r l a v i a b i l i t é d e l a s o u c h e t e s t é e .
.
L e c t u r e d e l a g a l e r i e :
a p r è s 1 , 2 ,
4 et 7 jours
d ’ i n c u b a t i o n à
3o”c,
deux
p a r a m è t r e s
s o n t
e s t i m é s
p o u r l a
l e c t u r e d e s r é a c t i o n s o b s e r v é e s :
l ’ i n t e n s i t é
( c r o i s s a n c e d e s
b a c t é r i e s ) e t l a v i t e s s e d ’ a p p a r i t i o n d e s r é a c t i o n s .
. . . / . . .
- 4 -
2 . 3 . 2 .
E l e c t r o p h o r è s e S D S - P A G E
L e s y s t è m e
é l e c t r o p h o r é t i q u e d i s c o n t i n u e n p r é s e n c e
d e S D S p e r m e t d e c o n c e n t r e r
l e s p r o t é i n e s p r é a l a b l e m e n t d i l u é e s
dans
1 es
é c h a n t i l l o n s e n
d e s z o n e s
e x t r ê m e m e n t f i x e s , a v a n t
q u ’ e l l e s s o i e n t s é p a r é e s e n f o n c t i o n d e l e u r t a i l l e d a n s l e g e l
r é s o l u t i f .
Le
tampon
d e g e l
d e c o n c e n t r a t i o n
d i l u é a u
1/4
a d d i t i o n n é d e O,l % S D S ,
e s t é l i m i n é d e s p u i t s e t r e m p l a c é p a r
une
s o l u t i o n d e
tampon
d ’ é l e c t r o d e
T r i s (0,024M) G l y c i n e
C0,19M),
PH
8,6.
Tous
1 es
p u i t s
s o n t
n u m é r o t é s e t
1 es
échant i 11 ons
s o n t
déposés
dans
1 es
p u i t s à
l ’ a i d e
d ’ u n e
s e r i n g u e c o m b i n é e à u n a p p a r e i l d e m e s u r e .
L e v o l u m e a j o u t é a v e c
ce même tampon,
c o n t e n a n t 0,OOOl
% d e b l e u d e Eromophénol e t d e
2 % d e S D S v e r s u n v o l u m e f i n a l d e 1 0 m l .
L e r é s e r v o i r d u t a m p o n
d ’ é l e c t r o d e s u p é r i e u r e e s t f i x é à l a c a s s e t t e e t
r e m p l i d e
t a m p o n d ’ é l e c t r o d e T r i s - G l y c i n e - S D S f r a i c h e m e n t p r é p a r é .
L ’ é l e c t r o p h o r è s e s e
f a i t l a n u i t s o u s u n e i n t e n s i t é
d e 6 mA p o u r c h a q u e g e l .
A l a f i n d e l ’ é l e c t r o p h o r è s e , l e g e l
r é s o l u t i f e s t r é c u p é r é e t i m m é d i a t e m e n t m i s d a n s u n e s o l u t i o n d e
f i x a t i o n p e n d a n t a u m o i n s 6 0 m i n u t e s .
L a f i x a t i o n e s t s u i v i e p a r
l a c o l o r a t i o n d e s p r o t é i n e s .
2 . 4 . E t u d e d e s e n d o m y c o r h i z e s
P l u s i e u r s é c h a n t i l l o n s d e r a c i n e s d e s P r o s o p i s é t u d i é s o n t
é t é c o l l e c t é s à p a r t i r
d e d i f f é r e n t s
s o l s o u a p r è s p i é g e a g e .
E l l e s o n t é t é é c l a i r c i e s e t c o l o r é e s p a r l a m é t h o d e d e P H I L L I P S
e t H A Y M A N (1970).
L ’ é t a t m y c o r h i z i e n d e s a r b r e s a é t é d é t e r m i n é
a p r è s
v i s u a l i s a t i o n
d e s
s t r u c t u r e s
r a c i n a i r e s e t
s e l o n l e
p o u r c e n t a g e d e s r a c i n e s i n f e c t é e s ( G I O V A N N E T T I e t M O S S E , 1 9 8 0 ) .
S i x
s o u c h e s
d ’ e n d o m y c o r h i z e s
r e ç u e s d e
l a b o r a t o i r e s
é t r a n g è r e s
o n t
é t é
m u l t i p l i é e s e n
u t i l i s a n t
1 es
r a c i n e s d e
p l a n t e s
m a r a î c h è r e s .
Ces
s o u c h e s
s o n t
Glomus
mosseae,
G.
f a s c i c u l a t u m , G . m a r g a r i t a , G . e t u n i c a t u m , G . m i c r o c a r p u m e t
. . . / . . .
- 5 -
Scutel la heterogama. A p r è s d e u x m o i s d e c u l t u r e ,
l e s r a c i n e s
d e s p l a n t e s h ô t e s i n f e c t é e s o n t é t é s t o c k é e s d a n s d e s s a c h e t s
p l a s t i q u e s à 4OC p o u r u n e u t i l i s a t i o n u l t é r i e u r e .
2 . 5 . T e s t d ’ i n o c u l a t i o n
C e t e s t d ’ i n o c u l a t i o n a é t é f a i t s u r p l u s i e u r s p r o v e n a n c e s
d e P r o s o p i s s p . c u l t i v é e s s u r u n s o l
d e p é p i n i è r e .
L e s o l
u t i l i s é
é t a i t u n m é l a n g e d e d e u x v o l u m e s d e s a b l e p o u r t r o i s
v o l u m e s d e s o l
h u m i f è r e
p r é l e v é s à M b a o ,
d a n s l a R é g i o n d e
D a k a r . I l
s ’ a g i s s a i t
d ’ u n
mé 1 ange
e s s e n t i e l l e m e n t
s a b l e u x ,
pauvre
e n a z o t e e t e n p h o s p h o r e e t
l é g è r e m e n t a l c a l i n ( t a b l e a u
1).
L e s l o t s d e g r a i n e s d e P r o s o p i s s p . u t i l i s é s p r o v i e n n e n t
d e d i f f é r e n t e s
l o c a l i t é s d e
l ’ E q u a t e u r e t o n t é t é n u m é r o t é s
c o m m e s u i t
: 89/2361 (Chongon),
89/2362 CGomez Rendon), 89/2363
( A g n a Blanca),
89/2364 (Zapotillo),
89/2371 ( R i o
Chico), 89/2372
(Roca Fuerte),
89/2373 ( S a n t a Ana).
U n e p r o v e n a n c e d u S é n é g a l d e
P . juliflora (86/1516 Thiès) a é t é é g a l e m e n t u t i l i s é e c o m m e b a s e
d e c o m p a r a i s o n a v e c l e s p r o v e n a n c e s é q u a t o r i e n n e s . L e s g r a i n e s
o n t
é t é
s t é r i l i s é e s
s u p e r f i c i e l l e m e n t à
l ’ a c i d e
s u l f u r i q u e
c o n c e n t r é p u i s p r é g e r m é e s s u r d u c o t o n h y d r o p h i l e à 30°C.
A p r è s g e r m i n a t i o n ,
l e s g r a i n e s o n t é t é r e p i q u é e s d a n s d e s
s a c h e t s c o n t e n a n t l e s o l d e p é p i n i è r e . A p r è s d e u x s e m a i n e s d e
c u l t u r e ,
l e s j e u n e s p l a n t s o n t é t é
i n o c u l é s a v e c u n e s o u c h e d e
R h i z o b i u m , à r a i s o n d e 1 0 p l a n t s i n o c u l é s
e t 1 0 p l a n t s n o n
i n o c u l é s p a r p r o v e n a n c e .
l ’ a r r o s a g e é t a i t
f a i t d e u x f o i s p a r
j o u r a v e c l ’ e a u d e r o b i n e t .
L ’ e x p é r i e n c e a
duré 14
s e m a i n e s .
La
r é p o n s e a
l ’ i n o c u l a t i o n a é t é e s t i m é e e n c o m p a r a n t
l e s p l a n t s i n o c u l é s e t
l e s p l a n t s n o n
i n o c u l é s a u n i v e a u d e c h a q u e p r o v e n a n c e . A l a f i n
d e 1 ‘ e x p é r i e n c e ,
l e s p l a n t s o n t é t é d é p o t é s . L e s n o d u l e s o n t é t é
pré1 evés,
l a v é s e t s é c h é s à l ’ é t u v e à 65OC p e n d a n t 4 8 h . L e s
p a r t i e s a é r i e n n e s e t l e s r a c i n e s o n t é t é s é p a r é e s p u i s s é c h é e s à
65OC p e n d a n t 7 2 h .
l e s v a r i a b l e s s u i v a n t e s o n t é t é é v a l u é e s :
Tableau 1 : Caractéristiques physiques et chimiques du sol de pépinière
Sable grossier (%)
54,3
GIN
975
Sable fin (%)
38,9
P,O, total (%o)
0,21
Limon (%)
20
P,O, assimilable (%o)
0,ll
Argile (%)
4,3
Ca++ (Yo)
9,97
Matiére organique (Oh)
03
Mg++ (Oh)
0,53
PH (KW
78
K+ (%)
0,09
c (%o)
3,5
Na+ (%)
0,08
N (%o)
0,37
- 7 -
h a u t e u r d e s p l a n t s ,
p o i d s
s e c d e s p a r t i e s a é r i e n n e s e t d e s
r a c i n e s ,
n o m b r e e t p o i d s s e c d e s n o d u l e s .
2 . 6 . E s s a i a u c h a m p
U n
e s s a i
i n t i t u l é
C o m p o r t e m e n t d e
Prosop i s
j u l i f l o r a
i n o c u l é a v e c u n e c u l t u r e m i x t e R h i z o b i u m - M A V , a é t é i n s t a l l é à
l a s t a t i o n e x p é r i m e n t a l e I S R A d e S a n g a l k a m , s i t u é e à 3 0 k m d e
D a k a r . I l
s ’ a g i t d ’ u n e s s a i
d e 3 0 0 p l a n t s d o n t
1 5 0 p l a n t s
i n o c u l é s
a v e c d u
R h i z o b i u m e t
une
c u l t u r e d e
champignons
e n d o m y c o r h i z i e n s e t
1 5 0 n o n i n o c u l é s ( t é m o i n s ) .
Il c o m p r e n d 6
r é p é t i t i o n s e t 7 4 a r b r e s d e b o r d u r e .
Il a été mis en place ‘en
1 9 9 1 .
I I I . RESULTATS
3 . 1 . S y m b i o s e P r o s o p i s - m i c r o o r g a n i s m e s
U n e
s e u l e
e x p é r i e n c e d e p i é g e a g e d e
R h i z o b i u m e t d e
champignons
e n d o m y c o r h i z i e n s a
é t é
e f f e c t u é e p o u r l e m o m e n t .
Elle a été faite à
p a r t i r d u s o l d e H a n n a v e c l e s e s p è c e s
s u i v a n t e s :
P r o s o p i s a f r i c a n a , P . j u l i f l o r a , P . c h i l e n s i s , P .
s p i c i g e r a e t P . t a m a r u g o .
T o u t e s c e s e s p è c e s o n t n o d u l é e t f o r m é d e s e n d o m y c o r h i z e s
à p a r t i r d u s o l u t i l i s é . C e p e n d a n t , l e t a u x d e n o d u l a t i o n e t
d ’ e n d o m y c o r h i z a t i o n s e m b l e l i é à
l ’ e s p è c e c o n s i d é r é e c o m m e l e
m o n t r e l e t a b l e a u 2 .
3 . 2 . Testage d e s o u c h e s
U n e v i n g t a i n e d e s o u c h e s d e R h i z o b i u m e s t e n t r a i n d ’ ê t r e
t e s t é e
s u r
P r o s o p i s j u l i f l o r a e s s e n t i e l l e m e n t .
L e t a b l e a u 3
m o n t r e
1 es
r é s u l t a t s
o b t e n u s
a p r è s
testage d e 7
s o u c h e s d e
R h i z o b i u m s u r P. j u l i f l o r a .
C e s s o u c h e s o n t t o u t e s n o d u l é l e u r
p l a n t e h ô t e .
L a n o d u l a t i o n a v a r i é s e l o n
1 e s s o u c h e s .
C ’ e s t
a i n s i
q u e d e s s o u c h e s c o r n e P j 4 7 ,
Pj 46 et Pj 48 ont donné une
m a s s e d e n o d u l e s d e u x à c i n q f o i s p l u s é l e v é e q u e l e s s o u c h e s P c
. . . / . . .
TABLEAU 2 : T a u x d e n o d u l a t i o n e t d ’ e n d o m y c o r h i z a t i o n d e 5 e s p è c e s d e P r o s o p i s
E S
P E C E S
TAUX
P. a f r i c a n a
P. chi lensis
P. j u l i f l o r a
P. spec i gera
P. tamarugo
Nombre de
n o d u l e s
1 0
8
6
6
p a r p l a n t
2
I
CO
P o u r c e n t a g e
d e r a c i n e s
84
9 8
100
94
88
endomy-
corhizces
- 9 -
TABLEAU 3
: Testage d e s o u c h e s d e R h i z o b i u m
P o i d s s e c
iaut . moy.
P o i d s s e c
Nbre de
P o i d s s e c
Souches
nodules/pl
p l a n t s p a r t i e s a é
n o d u l e s / p l
d e s
r a c i n e s
(mg>
( cm>
riennescmg)
(mg)
,.o
P c 45
10
7,5
Pj
47
16
16,25
10,7
166,5
90
Pj 48
14
13,6
11,2
133
70
Pj
46
17
l
14,8
13
280
100
Pj
34
26
Pj
35
----A
8,7
121
55
-
620
8,7
133
55
s_
T
- 10 -
45,
P j 3 5 e t 6 2 0 ( s o u c h e d e c o l l e c t i o n ) .
B i e n q u e d e s c a l c u l s
s t a t i s t i q u e s
n ’ o n t
pas
encore
é t é
f a i t s ,
i 1
semble
que la
h a u t e u r d e s p l a n t s
i n o c u l é s n e
s o i e n t
pas
s i g n i f i c a t i v e m e n t
d i f f é r e n t e d e c e l l e d e s p l a n t s n o n i n o c u l é s . P a r a i l l e u r s , l a
d i f f é r e n c e d e p o i d s s e c d e s p a r t i e s a é r i e n n e s e t d e p o i d s s e c
d e s
r a c i n e s
e n t r e
1 es
p l a n t s
i n o c u l é s e t
1 es
p l a n t s
non
i n o c u l é s ,
v a r i e s e l o n l e s s o u c h e s c o n s i d é r é e s .
3.3. Caractéristiques des souches de Rhizobium
L e s d o n n é e s r e c u e i l l i e s s u r l ’ é l e c t r o p h o r è s e S D S - P A G E e t
l e s g a l e r i e s A P 1 d e s s o u c h e s d e R h i z o b i u m d e P r o s o p i s s o n t e n
t r a i n d’êre a n a l y s é e s à G a n d ( B e l g i q u e ) p a r P h i l i p p e D E L A J U D I E ,
c h e r c h e u r à
1 ‘ORSTOM.
P o u r l e m o m e n t ,
l e s p r e m i e r s r é s u l t a t s
o b t e n u s
m o n t r e n t q u e
1 es
s o u c h e s
t e s t é e s
s o n t
c l a s s é e s d a n s
p l u s i e u r s
groupes
d i f f é r e n t s p a r r a p p o r t a u x R h i z o b i u m d é j à
c o n n u s .
3.4. Testaqe d’inoculation de 8 provenances de Prosopis sp. et
P . j u l i f l o r a
L e s
r é s u l t a t s d e
c e t t e
e x p é r i e n c e
o n t
m o n t r é
que
l ’ i n o c u l a t i o n a v e c u n e s o u c h e d e R h i z o b i u m a p e r m i s d ’ a u g m e n t e r
1 a h a u t e u r ,
l a b i o m a s s e a é r i e n n e ,
l a b i o m a s s e r a c i n a i r e s ; l e
n o m b r e d e n o d u l e s e t
l e p o i d s
s e c d e s n o d u l e s d e p l u s i e u r s
p r o v e n a n c e s d e P r o s o p i s SP. e t d e P . j u l i f l o r a c u l t i v é e s e n
c o n d i t i o n s n o r m a l e s
s u r u n
s o l
non
s t é r i 1 i s é .
C e p e n d a n t ,
l e s
p r o v e n a n c e s o n t r é p o n d u d i f f é r e m m e n t à l ’ i n o c u l a t i o n .
A p r è s t r o i s m o i s d e c r o i s s a n c e ,
l a h a u t e u r d e s p l a n t s
i n o c u l é s a
augmenté de 31 %
( p r o v e n a n c e 2 3 6 1 ) à 1 4 7 %
( p r o v e n a n c e
2371),
l e p o i d s s e c d e s t i g e s d e 1 5 % ( p r o v e n a n c e
2363), à 2 1 3
% ( p r o v e n a n c e 2 3 7 1 ) e t l e p o i d s s e c d e s r a c i n e s d e
12 % ( p r o v e n a n c e 1 5 1 6 ) à 2 3 1 % ( p r o v e n a n c e 2 3 7 1 ) ( f i g . 1 à 3 ) .
L e s r é s u l t a t s o b t e n u s s u r l a n o d u l a t i o n s u g g è r e n t q u e l a s o u c h e
de
Rhizobium
i n t r o d u i t e
d a n s l e
s o l
d e p é p i n i è r e e s t p l u s
e f f i c a c e
que la
(ou
1 es>
s o u c h e ( s )
a u t o c h t o n e ( s ) .
E l l e a
a u g m e n t é l e n o m b r e e t l e p o i d s s e c d e s n o d u l e s d e p l u s d e h u i t
f o i s d a n s l e c a s d e s m e i l l e u r e s p r o v e n a n c e s ( f i g u r e 4 e t 5 ) .
..* / . . .
35
30
25
20
15
10
5
0 L
P. sp
P. sp
P. sp.
p SP
P. sp.
p SP
P sp
uliflora 2364
2373
2371 2372 2363
2361
2362
Figure 1 : Hauteur des plants (cm)
0 . . Plants inoculés
cl Plants non i nocu It’s
1 Intervalle de confiance
1200
:.
1000
;:
800
600
1’ sp
1’. sp
1’ sp
1’ sp
1’ c..:..:jj,:::..’/.::
sp
1) .”
400
200
n L
sp
P. sp
1’
2373
2364
2372
2361
23?1
2363
2362
~~1111’10l-a
Figure 2 :Poids sec des parties aériennes(mg)
q Plants inoculés
0
Plants non inoculés
I Intervalle de confiance
P. sp.
P. sp
P. sp.
P. sp
P. sp
P. sp
Psp
P
2364
2361
2371
2373
2372
2363
2362 juliflora
Figure 3 : Poids sec des racines (mg)
q Plants inoculés
Cl Plants non inoculés
I Intervalle de confiance
P. sp. P
P. sp.
P sp
1’ sp
P. sp
1’ SJI P SP
2372 juliflora 2371
2364
2 3 6 1
236.3
2.i’i
2362
Figure 4 : Nom.bre de nodules
g-j
Plants inoculés
c l Plants non inocules
140
1 2 0
1 0 0
80
60
40
20
Y
p SP
P. sp.
p SP
P. sp.
P. sp
1’ sp
P .
p SP
2361
2363
2372
2371
2362
2364
juliflora
2373
Figure 5 :Poids sec des nodules (mg)
cl. . Plants in0 culks
cl Plants non inocules
- 14 -
3 . 5 . E s s a i a u c h a m p
L e s p r e m i è r e s d o n n é e s d e l ’ e s s a i a u c h a m p s o n t e n t r a i n
d ’ ê t r e e x p l o i t é e s .
I l s ’ a g i t d e m e n s u r a t i o n s d e l a h a u t e u r d e s
p l a n t s â g é s d e 3 ,
8 et 12 mois ainsi
q u e d e s t a u x d e s u r v i e
a p r è s 1 a n d e p l a n t a t i o n .
IV. CONCLUSIONS
L ’ é t u d e e n t r e p r i s e d a n s
l e c a d r e d e c e p r o j e t a p e r m i s d e
connaÎtre l ’ é t a t
s y m b i o t i q u e d e p l u s i e u r s e s p è c e s d e P r o s o p i s
c u l t i v é e s d a n s c e r t a i n s s o l s d u S é n é g a l . C e s d e r n i e r s r e n f e r m e n t
d e s R h i z o b i u m ( s e n s l a r g e ) e t d e s c h a m p i g n o n s e n d o m y c o r h i z i e n s
c a p a b l e s d ’ i n f e c t e r l e s r a c i n e s d e P r o s o p i s a f r i c a n a , l a s e u l e
espèce 1 ocal e ,
e t d ’ a u t r e s e s p è c e s i n t r o d u i t e s t e l l e s q u e P .
jul iflot-a,
P
.
c h i l e n s i s , P .
s p i c i g e r a e t P .
t a m a r u g o .
L e s
i n o c u l a t i o n s d e R h i z o b i u m o n t m o n t r é q u ’ i l
e s t p o s s i b l e ,
dans
d e s c o n d i t i o n s n o r m a l e s d e p é p i n i è r e , d e t r o u v e r d e s s o u c h e s
c a p a b l e s
d ’ a u g m e n t e r l a
h a u t e u r , 1 a
biomasse
a é r i e n n e e t
r a c i n a i r e e t d e l a n o d u l a t i o n d e j e u n e s p l a n t s d e P r o s o p i s . U n e
c o l l e c t i o n d e c e s s o u c h e s e s t a c t u e l l e m e n t d i s p o n i b l e .
L e s
r é s u l t a t s r e l a t i f s à l a c a r a c t é r i s a t i o n d e s s o u c h e s d e R h i z o b i u m
s o n t e n c o r e f r a g m e n t a i r e s .
L e s p r e m i è r e s d o n n é e s o b t e n u e s a p r è s
l ’ é l e c t r o p h o r è s e S D S - P A G E s e m b l e n t m o n t r e r q u e l e s R h i z o b i u m d e
P r o s o p i s n ’ o n t p a s u n e p l a c e b i e n d é f i n i e p a r r a p p o r t a u x a u t r e s
g r o u p e s d e R h i z o b i u m c o n n u s .
C e r t a i n e s
a c t i v i t é s
p r é v u e s
l e s d e u x
p r e m i è r e s
a n n é e s
n ’ o n t p u
ê t r e m e n é e s
à t e m p s à c a u s e d e q u e l q u e s d i f f i c u l t é s
t e c h n i q u e s e t f i n a n c i è r e s : a r r i v é e t a r d i v e d e m a t é r i e l c o m m a n d é
( p i è c e s p o u r l y o p h i l i s a t e u r , g a l e r i e s API),
v e r s e m e n t t a r d i f d e s
c r é d i t s . . . C ’ e s t l a r a i s o n p o u r l a q u e l l e j e s o u h a i t e c o n t i n u e r
c e r t a i n e s o p é r a t i o n s ,
s u r t o u t l a c a r a c t é r i s a t i o n d e s s o u c h e s d e
R h i z o b i u m e n c o l l a b o r a t i o n
avec MM.
M a r c N E Y R A e t P h i 1 i p p e D E
L A J U D I E d u l a b o r a t o i r e d e M icrobiologie d e
1’ORSTOM.
:: :: ::
RAPPORT FINANCIER
Septembre
1990 - septembre 1992
1 Relevé des dépenses
M a t é r i e l e t f o u r n i t u r e s
1 5 0 9 3 4 9
M a i n - d ’ o e u v r e t e m p o r a i r e
542 909
Déplacements
1 2 2 4 0 0
E n t r e t i e n v é h i c u l e
9 1 5 0 0
C a r b u r a n t - l u b r i f i a n t
364 000
A n a l y s e s
149 454
T 0 T A L
2 779 612
2 . B a l a n c e
Une somme
d e 3 4 5 7 5 8 6 F é t a i t d é l é g u é e a u p r o j e t . L e s
dépenses
s ’ é l è v e n t à
2 . 7 7 9 . 6 1 2 .
E n c e m o m e n t l e d i s p o n i b l e e s t
d e 6 7 7 . 9 7 4 F .
N o t e
I l e s t p r é v u , a v e c l e d i s p o n i b l e , d e f a i r e d e s v i s i t e s s u r
l e l i e u o ù l ’ e s s a i a u c h a m p a é t é i n s t a l l é ,
d ’ e n t r e t e n i r l a
parce1 1 e
e x p é r i m e n t a l e e t d e
r e c r u t e r d e l a
m a i n - d ’ o e u v r e
t e m p o r a i r e p o u r l e s p r e m i è r e s m e s u r e s à f a i r e .
- 16 -
PLAN POUR LA PROCHAINE
PERIODE DE RECHERCHE
1 . E t u d e d e s R h i z o b i u m d e P r o s o p i s
L e s
s é l e c t i o n s d e
s o u c h e s d e
R h i z o b i u m
n o d u l a n t
P r o s o p i s
v o n t ê t r e p o u r s u i v i e s
e n m e t t a n t c e t t e f o i s 1 ‘ a c c e n t
s u r l e s r e l a t i o n s R h i z o b i u m - e s p è c e s d e
P r o s o p i s .d’une p a r t e t
R h i z o b i u m - p r o v e n a n c e s
de
P rosop i s
d ’ a u t r e
p a r t .
L a
c a r a c t é r i s a t i o n e t
l ’ i d e n t i f i c a t i o n
d e s
nouve 11 es
s o u c h e s
i s o l é e s v a ê t r e c o n d u i t e e n m ê m e t e m p s q u e 1 ’ i n t e r p r é t a t i o n d e s
r é c e n t e s d o n n é e s d e c a r a c t é r i s a t i o n .
2 . E t u d e s u r l e s e n d o m y c o r h i z e s
L e s s o u c h e s d ’ e n d o m y c o r h i z e s e n c o l l e c t i o n s e r o n t t e s t é e s
s u r l e s d i f f é r e n t e s e s p è c e s d e P r o s o p i s p o u r v o i r l e u r s e f f e t s
s u r l a c r o i s s a n c e e t l a p r o d u c t i o n d e b i o m a s s e
d e c e s d e r n i è r e s .
E l l e s
s e r o n t
comparées
a v e c
u n
échant i 1 lon de
s o u c h e s
a u t o c h t o n e s .
L ’ i n o c u l a t i o n
d ’ e n d o m y c o r h i z e s
s e r a
c o u p l é e à
l ’ i n o c u l a t i o n a v e c u n e o u p l u s i e u r s s o u c h e s cie R h i z o b i u m p o u r
t e s t e r s o n e f f i c a c i t é s u r l a f i x a t i o n d ’ a z o t e d e P r o s o p i s .
3 . E s s a i a u c h a m p
L e s p r e m i è r e s d o n n é e s d e l ’ e s s a i a u c h a m p d é j à i n s t a l l é
s e r o n t e x p l o i t é e s p o u r e s t i m e r
l ’ e f f e t d e s s o u c h e s i n t r o d u i t e s
d a n s l e s o l s u r l a c r o i s s a n c e d e s p l a n t s e t l e u r t a u x d e s u r v i e .
- 17 -
BUDGET PREVISIONNEL
POUR LA TROISIEME ANNEE DU PROJET
R u b r i q u e s
M o n t a n t (F C F A )
F o u r n i t u r e s e t p e t i t m a t é r i e l
600
000
D o c u m e n t a t i o n
50 000
F r a i s d ’ a n a l y s e
100
000
F r a i s d e d é p l a c e m e n t
200
000
M a i n t e n a n c e v é h i c u l e
1 0 0
000
C a r b u r a n t ,
l u b r i f i a n t
210 000
Personne 1 tempora i re
240
000
T 0
1; A L
1 5 0 0 000