KI3?I:BLIQUE DU SENEGAL ------__ - XlINISTERE DU...
KI3?I:BLIQUE DU SENEGAL
------__ -
XlINISTERE DU DEVELOPPEMENT
RURAL ET DE L¡¯HYDRAULIQUE
---------
INS-I¡¯ITUT SENEGALAIS DE RECHERCHES
AGRICOLES (I.S.R.A.)
----------
DIRECTION DES RECHERCHES SUR LES
PRODUCTIONS ET LA SANTE ANIMALES
------___-
LABORATOIRE NATIONAL DE L¡¯ELEVAGE
ET DE RECHERCHES VETERINAIRES
DAKAR-HANN
CONVENTION AIEMSRA N¡± 4975/NL RELATIVE A
L¡¯AMELIORATION DU DIAGNOSTIC ET DE LA
SURVEILLANCE DES TRYPANOSOMOSES ET
AUTRES MALADIES PARASfTAl.RES DU BETAIL
AFRICAIN PAR L¡¯USAGE DE METHODES
SERO-IMMUNOLOGIQUES
RAPPORT FINAL SUR LES TRAVAUX REALISES
AU SENEGAL DE 1988 A 1992
A. DIAITE, M. SEYE, G. VASSILIADES, A. MANE et Mme T. NDIAYE
Ref.: 045/PATHO. Ahlhl.
D¨¦cembre 1992
APPLICATION DE LA TECHNIQUE ELISA DE DETECTION DES
ANTIGENES A L¡¯ETUDE DE SOUCHES DE TRYPANOSOMES APPAREMMENT
CHIMIORESISTANTES AU SENEGAL
Par
A. DIAITE, M. SEYE, G. VASSILIADES, A. MANE et hlme T. NDIAYE
RESUME
La technique ELISA de d¨¦tection d¡¯antig¨¨nes s¨¦riques de ~~FJu~xx.w~~~ &KW¡¯
kwce~ X cuuso/e.s~ et 27 W¡¯KW a ¨¦t¨¦ utlilis¨¦e dans la zone centre-Sud du S¨¦n¨¦gal infest¨¦e de
glossines, dans une ¨¦tude comportant deux volets: un premier volet visant l¡¯implantation de
cette technique ¨¤ l¡¯Institut S¨¦n¨¦galais de Recherches Agricoles (ISRA) ainsi que la validation
du test: puis un second volet portant sur l¡¯utilisation de cette technique pour la d¨¦tection de
souches de trypanosomes apparemment chimior¨¦sistantes, chez des bovins nk,kw¡¯
(croisement Z¨¦bu-Ndama).
Les r¨¦sultats obtenus ici ¨¤ I¡¯ISRA sont satisfaisants et sont en g¨¦n¨¦ral concordants
avec ceux des autres membres du r¨¦seau africain de validation de la technique ELISA-
Antig¨¨ne. En cons¨¦quence, le test a ¨¦t¨¦ reconnu comme m¨¦thode fiable de diagnostic des
trypanosomoses animales en association cependant avec des m¨¦thodes d¨¦j¨¤ existantes.
Dans l¡¯¨¦tude la chimior¨¦sistance cons¨¦cutive ¨¤ la validation, plus de 1000 s¨¦rums de
bovins Diakor¨¦ et autant de tubes ¨¤ h¨¦matocrite ont ¨¦t¨¦ examin¨¦s apr¨¨s traitement des bovins
concern¨¦s au B¨¦r¨¦nil, au Samorin et/ou ¨¤ 1¡¯Ethidium. En m¨ºme temps, une centaine de s¨¦rums
t¨¦moins r¨¦colt¨¦s sur des Z¨¦bus du Nord S¨¦negal indemne de glossines ont subi les ¨¦preuves
s¨¦rologiques. Les r¨¦sultats semblent indiquer que certaines souches de trypanosomes de la
r¨¦gion centre-Sud sont chimior¨¦sistantes. Des essais en laboratoire sur des animaux inocul¨¦s
avec ces souches sont cependant n¨¦cessaires pour confirmer ces r¨¦sultats.
MOTS-C,LES
Trypanosomoses - ELISA - Chimior¨¦sistance - Bovins - S¨¦n¨¦gal
APPLICATION OF THE ANTIGEN-ELISA TECHNIQUE FOR THE DETECTION
OF APPARENT
DRUGRESISTANT TRYPANOSOME STRAINS IN SENEGAL
B y:
A. DAITE, M. SEYE, G. VASSILIADFS, A. MANE and T. NDIAYE
SUMMARY
The Antigen-ELISA technique for the detection af trypanosomal antigens in serum
was used in a two-part study in the south of the central region of Senegal (Sokone region)
which is infested by tsetse flics. The first part consisted of implementing the Antigen-ELISA
method at the Senegalese Institute for Agricultural Researc.h (ISRA) and the validation of the
test. In the second part, the technique was used to detect apparently drugresistant
trypanosome strains.
The Antigen-ELISA tehnique has been succesfully implemented at the Institute. It is
now considered, in association with other methods, as a good diagnostic technique after the
synthesis of a11 results obtained through an African network in which Senegal was one of the
contries involved.
In the drugresistance study, more than 1000 bovine sera and as many buffy coats
were examinated in the tsetse-infested area while a hundred of samples were taken from Zebu
cattle living in two tsetse-free areas in the Northen part of Senegal. The animals of the infested
zone were treated with Berenil, then with Samorin or Ethidium according to a defined
protocol. The results obtained seem to indicate the exixtence of drugresistant trypanosome
strains, but more investigations, including subinoculation of animals and laboratory triais are
needed to confirm these findings
KEY-WORDS
Trypanosomosis - ELISA - Drugresistance - Cattle - Senegal.
-l-
AI¡¯PLICA¡¯I¡¯ION DE LA TECHNIQUE ELISA DE DE¡¯l¡¯EC¡¯i¡¯ION DES AN¡¯I¡¯IGENES A
L¡¯ETUDE DE SOUCHES DE TRYPANOSOMES APPAREMENT
CHIMIORESISTANTES AU SENEGAL
Par
A. DIAITE*, M. SEYE¡±, G. VASSILIADES¡±, A. MANE¡± et ¡®1¡®. NDIAYE*
INTRODUCTION
Sur une superficie totale de 196 000 km2, 70 000, soit 36% sont occup¨¦s par les
glossines au S¨¦n¨¦gal. Les deux esp¨¨c.es pr¨¦sentes sont Gfkw$~ p&$ti~kg~~bk~sk et G.
fzxxsfhx subfrzuf3-fika, qui transmettent ici fi;r~pmusofffa brucer¡¯ bufcefi 7: cufzgdefzst et 7:
wkar chez les animaux.
La r¨¦gion de Sokone, situ¨¦e dans le c.entre-sud du pays, est totalement infest¨¦e par G.
Mor&¡°s su&ors$m: et, dans une moindre mesure, par G. p+&g~~b. Les bovins
qui y vivent sont principalement de race Dkkolp (croisement Z¨¦bu-Ndama) et poss¨¨dent un
degr¨¦ de trypanotol¨¦rance interm¨¦diaire entre la sensibilit¨¦ du Z¨¦bu et la tol¨¦rance de la
Ndama (1). Ces D!kkon sont largement utilis¨¦s dans la culture attel¨¦e ainsi que pour la
production de lait et de viande.
Les ¨¦leveurs locaux, tr¨¨s avertis en mati¨¨re trypanosomose animale, font constamment
appel aux agents v¨¦t¨¦rinaires pour des traitements trypanocides. L¡¯utilisation intensive des
deux principaux trypanocides v¨¦t¨¦rinaires, le B¨¦r¨¦nil et le Samorin, depuis plusieurs
d¨¦cennies, a rendu ces deux m¨¦dicaments apparemment moins efficaces aujourd¡¯hui dans
cette zone. Les agents v¨¦t¨¦rinaires locaux, en effet, se plaignent de plus en plus de traitements
infructueux,
Il est donc apparu n¨¦cessaire de mener des investigations pour savoir s¡¯il s¡¯agissait de
souches de trypanosomes chimior¨¦sistantes et, le cas ¨¦ch¨¦ant, ¨¦valuer le degr¨¦ de la
r¨¦sistance, son ¨¦tendue dans la zone, et enfin d¨¦finir une m¨¦thode de lutte efficace.
De telles investigations requi¨¨rent des m¨¦thodes de diagnostic performantes, qui
optimisent les chances de d¨¦tection des trypanosomes lorsqu¡¯ils sont pr¨¦sents chez l¡¯animal
examin¨¦. Or les techniques classiques de diagnostic, bien qu¡¯ayant des avantages certains, ne
sont pas toujours suffisamment sensibles et peuvent donner de faux r¨¦sultats n¨¦gatifs, surtout
dans les cas de trypanosomose chronique. Pour rem¨¦dier ¨¤ cela, il est indiqu¨¦ d¡¯associer
autant que possible deux ou plusieurs techniques reconnues compl¨¦mentaires. Dans la
pr¨¦sente situation, l¡¯emploi simultan¨¦ de la m¨¦thode de lecture de l¡¯interphase (BCT) et de la
technique ELISA de cl¨¦tection de antig¨¨nes nous a sembl¨¦ appropri¨¦.
L¡¯¨¦tude a comport¨¦ deux phases:
- une premi¨¨re phase portant sur l¡¯implantation de la technique ELISA-Antig¨¨ne ¨¤
l¡¯Institut S¨¦n¨¦galais de Recherches Agricoles (ISRA) et la validation du test comme moyen
fiable de diagnostic de trypanosomoses bovines:
- et dans une seconde phase, l¡¯utilisation de cette technique pour la d¨¦tection
¨¦ventuelle de souches de trypanosomes chimior¨¦sistantes.
_____------------------------------
+ : Service de Parasitologie, ISRNLNERV, BP 2057, Dakar, S¨¦n¨¦gal.
-2-
l - MAKKIIIL ET METHODES
1.1 - Phase d¡¯implantation et dc validation
1.1.1 - Animaux cibles
Quarante bovins Dr;zk--(7 ?c de la zone de Sokone ont ¨¦t¨¦ retenus et identifi¨¦s par pose de
boucles num¨¦rot¨¦es ¨¤ l¡¯oreille. Ces animaux appartiennent ¨¤ deux troupeaux de deux villages
situes ¨¤ c ?t¨¦ de for¨ºts class¨¦es infest¨¦es par G: ~KYXZ&ZW subnlu~~&z~ Parall¨¨lement, 95
s¨¦rums t¨¦moins ont ¨¦t¨¦ r¨¦colt¨¦s sur des bovins Z¨¦bus vivant ¨¤ Dahra et Podor, localit¨¦s
situ¨¦es dans le Nord du S¨¦n¨¦gal indemne de glossines ,
1.1.2 - Pr¨¦l¨¨vements - Analyses - Traitements
Sur chacun de ces 40 bovins de la zone ¨¤ glossines, les pr¨¦l¨¨vements et analyses
suivants ont ¨¦t¨¦ effectu¨¦s entre d¨¦cembre 1988 et juin 1989, ¨¤ raison d¡¯une visite par mois,
sauf au mois de mai o¨´ la visite n¡¯a pas pu se faire.
- r¨¦colte de sang p¨¦riph¨¦rique ¨¤ l¡¯oreille (deux tubes capillaires par animal),
centrifugation sur place et lecture imm¨¦diate du PCV et de l¡¯interphase(BCT);
- confection de frottis de sang, coloration et lecture au laboratoire;
- collecte de sang jugulaire sur vacutainer sec, centrifugation, r¨¦colte du
s¨¦rum et adjonction de O,Ol% d¡¯azide de Sodium; conservation ¨¤ -20¡ãC jusqu¡¯¨¤ l¡¯emploi:
- ¨¦preuve ELISA de d¨¦tection d¡¯antig¨¨nes s¨¦riques de 1 brucei ?Y
cc?~~ufe~s~ et ?Y VYIGY avec les r¨¦actifs et le protocole du trousseau FAOIAIEA./ILRAD;
- pr¨¦l¨¨vement de selles fa ?ches tous les trois mois et coprologie au
laboratoire:
- traitement au B¨¦r¨¦nil, 7,0 mg/kg, I.M., des bovins positifs ¨¤ ~y~zusu~,~~;
- traitement anthelminthique des bovins positifs en coprologie;
- bain anti-tiques des animaux cibles et non cibles des troupeaux suivis, par
suite du diagnostic d¡¯ Ekk~~~ bnrk chez certains bovins: traitement de ces derniers ¨¤ la
Terramycine Longue Action (TLA).
-3
1.2 - Phase d¡¯application a l¡¯¨¦tude de la chimior¨¦sistance
En premi¨¨re partie de cette phase, 26 parmi les 40 bovins de la phase de validation ont
¨¦t¨¦ ¨¤ nouveau retenus. Ainsi que les 95 Z¨¦bus t¨¦moins de Dahra et Podor . Cette investigation
a dur¨¦ 1 an.
En deuxi¨¨me partie, 211 autres &~~UIP ont ¨¦t¨¦ s¨¦lectionn¨¦s dans 5 troupeaux de
Sokone et num¨¦rot¨¦s ¨¤ l¡¯oreille. Ces animaux comportaient toutes les tranches d¡¯¨¤ge et ¨¦taient
compos¨¦s de femelles, de m ?les entiers et de m ?les castr¨¦s. Le suivi post-th¨¦rapeutique a dur¨¦
ici 5 mois.
Les traitements trypanocides effectu¨¦s au d¨¦but de chacune de ces deux parties
figurent aux tableaux 1 et 2.
Les trois premi¨¨res visites pour chaque partie ont eu lieu ¨¤ 15 jours d¡¯intervalle; les
visites suivantes ¨¦taient espac¨¦es de 30 jours.
Les r¨¦coltes de sang et les techniques d¡¯analyse sont celles de la premi¨¨re phase, sauf
qu¡¯ici le benzoate de Sodium a ¨¦t¨¦ employ¨¦ ¨¤ la place de l¡¯azide comme pr¨¦servatif des
s¨¦rums. En outre, il n¡¯y a pas eu cette fois de pr¨¦l¨¨vements de selles ni de frottis de sang.
II - RESULTATS -DISCUSSION
2.1 - Implantation - Validation
La technique BCT et les ¨¦preuves ELISA-Ag ont donn¨¦ des r¨¦sultats diff¨¦rents: sur un
total de 72 cas de trypanosomose, 2 sont trouv¨¦es par les cieux techniques, 5 par le BCT seul
et 65 par I¡¯ELISA seule.
En outre, I¡¯ELISA a d¨¦tect¨¦ 1,5 % de cas de 7: ~KXY~ 9.7 % de 7Y VY&,~ alors
qu¡¯aucune de ces deux esp¨¨ces n¡¯a ¨¦t¨¦ visualis¨¦ au BCT (tableau 3 et 4). Cependant, parmi les
95 bovins pr¨¦lev¨¦s en zone indemne, 1 seul a ¨¦t¨¦ antig¨¦n¨¦mique ¨¤ ?Y U¡¯KU, une esp¨¨ce de
trypanosome pouvant ¨ºtre transmise par d¡¯autres insectes que les glossines.
Ces r¨¦sultats nous ont sembl¨¦ traduire une bonne sp¨¦cificit¨¦ de la technique ELISA-
Afi?
En d¨¦finitive, les deux techniques nous sont apparues compl¨¦mentaires et leur
utilisation combin¨¦e est fortement souhaitable pour obtenir des r¨¦sultats plus complets sur les
infections trypanosomiennes dans une zone donn¨¦e (2).
Des r¨¦sultats et conclusions similaires ont du resle ¨¦t¨¦ trouv¨¦s au niveau du r¨¦seau
africain de validation du test s¨¦rologique.
-4-
2.2 - Etude de la chimior¨¦sistance
2.2.1 - Premi¨¨re partie
La tendance constat¨¦e en phase de validation a ¨¦t¨¦ retrouv¨¦e ici: la sensibilit¨¦ de la
technique ELISA-Ag est au moins cinq fois sup¨¦rieure ¨¤ celle du BCT: sur 298 pr¨¦l¨¨vements,
79 cas de trypanosomose ont ¨¦t¨¦ diagnostiqu¨¦s; 14 seulement relevaient du BCT contre 72
pour I¡¯ELISA-Ag (tableau 5).
S¡¯agissant de la sp¨¦cificit¨¦ du test s¨¦rologique, nous avons not¨¦, comme dans la
premi¨¨re phase, que l¡¯ensemble des cas de ?: bruc&et de z F~ ?Y ont ¨¦t¨¦ trouv¨¦s uniquement
en ELISA. Il fallait donc ¨¦tablir que ces cas repr¨¦sentaient de r¨¦elles infections
trypanosomiennes. A cet effet, tous les s¨¦rums positifs en ELISA mais n¨¦gatifs au BCT ont
¨¦t¨¦ envoy¨¦s au Centre International de la Trypanotol¨¦rance en Gambie pour la recherche
d¡¯anticorps anti-trypanosomes. Par la technique d¡¯Immunofluorescence
indirecte, ils se sont
tous r¨¦v¨¦l¨¦s positifs, y compris le s¨¦rum de la zone indemne antig¨¦n¨¦mique ¨¤ X ~&XX
Pendant ce temps, un lot de 39 autres s¨¦rums r¨¦colt¨¦s sur des Z¨¦bus de Podor (r¨¦gion Nord
du S¨¦n¨¦gal sans glossines) ¨¦tait s¨¦ron¨¦gatif ¨¤ 100 % en ELISA-Ag. De tout cela nous avons
conclu que le test ¨¦tait effectivement sp¨¦cifique. Et que les Dkko~ pr¨¦lev¨¦s pour ce travail
poss¨¨daient sans doute un bon degr¨¦ de trypanolol¨¦rance,
qui leur permet de maintenir les
souches locales de ?Y ~*VA ¨¤ des niveaux de parasit¨¦mie inf¨¦rieurs au seuil de d¨¦tection. Et
ce d¡¯autant plus que ?Y W¡¯K ?Y a ¨¦t¨¦ visualis¨¦ chez des animaux trypanosensibles
de la zone
(chevaux et ?nes), prouvant ainsi 1¡¯existenc.e effective de 7: W¡¯V~ dans la r¨¦gion. Quant ¨¤
X bruc~, sa fr¨¦quente localisation c¨¦r¨¦brale explique certainement la difficult¨¦ ¨¤ le visualiser
dans le sang.
Concernant les premiers essais de d¨¦tection de souches de trypanosomes
chimior¨¦sistantes, les r¨¦sultats ont montr¨¦ que pour YY druce. et jr cofgok~.~t, le traitement au
B¨¦r¨¦nil ou au Samorin ¨¦tait g¨¦n¨¦ralement efficace: apr¨¨s l¡¯administration du B¨¦r¨¦nil, tous les
animaux suivis ¨¦taient n¨¦gatifs au BCT d¨¨s la visite suivante; apr¨¨s traitement au Samorin, ils
sont rest¨¦s n¨¦gatifs au BCT et en ELISA-Ag pendant 5 mois pour z co~gok~~~ et quasi-
d¨¦finitivement pour I: brucer¡¯(tableau 5).
Mais des cas de s¨¦roposilivil¨¦ ¨¤ z w¡¯w persistaient (tableau 5). Notamment le bovin
no 87, qui est rest¨¦ en permanence antig¨¦n¨¦mique ¨¤ ZY W¡¯W,J malgr¨¦ tous les traitements
trypanocides. Cet animal est finalement mort, avec des symptomes c¨¦r¨¦braux selon l¡¯¨¦leveur
propri¨¦taire. Il s¡¯agit l¨¤, probablement, d¡¯une souche chimior¨¦sistante. Des ¨¦tudes plus
pouss¨¦es ¨¦taient toutefois n¨¦cessaires pour se prononcer sur la r¨¦sistance et, en cas de
confirmation, en connaitre le degr¨¦ et l¡¯¨¦tendue pour pouvoir d¨¦finir des moyens de lutte.
C¡¯est l¡¯objet de la seconde partie de cette phase.
- 5.-
2.2.2 - Deuxi¨¨me partie
Les r¨¦sultats d¡¯ensemble des examens parasitologiques et des ¨¦preuves s¨¦rologiques
sont pr¨¦sent¨¦s au tableau 6. D¡¯une mani¨¨re g¨¦n¨¦rale, le nombre de cas de trypanosomose a
r¨¦guli¨¨rement baisse apr¨¨s les traitements trypanocides. Cependant, pour 7: co~gok~us~ et
T
W¡¯FGZY, des cas de s¨¦ropositivit¨¦ post-th¨¦rapeutique ont ¨¦t¨¦ relev¨¦s.
En outre, des diff¨¦rences importantes ont ¨¦t¨¦ not¨¦es selon que les animaux ont re ?u
l¡¯un ou l¡¯autre des trypanocides utilis¨¦s (tableau 7). Dans le lot trait¨¦ au B¨¦r¨¦nil seul et une
seule fois, les infections ont chut¨¦ ¨¤ la visite effectu¨¦e 15 jours apr¨¨s ce traitement. Par la suite
elles ont connu une hausse et sont rest¨¦es tr¨¨s proches de leur niveau d¡¯avant traitement. Cela
traduit sans doute l¡¯activit¨¦ essentiellement curative du B¨¦r¨¦nil. Une ¨¦volution diff¨¦rente est
not¨¦e dans le lot trait¨¦ au Samorin: le nombre d¡¯infections post-th¨¦rapeutiques a baiss¨¦
significativement et n¡¯a jamais regagn¨¦ son niveau initial. Il en est de m¨ºme dans le lot trait¨¦ ¨¤
I¡¯Ethidium. L¡¯effet prophylactique de ces deux m¨¦dicaments semble donc ¨¦vident ici.
Par ailleurs et concernant l¡¯ensemble des trois lots, on constate que les infections ont
¨¦t¨¦ cette fois d¨¦cel¨¦es aussi bien en ELISA-Ag qu¡¯au BCT, avec une sensibilit¨¦ plus ¨¦lev¨¦e de
I¡¯ELISA. Cela semble confirmer l¡¯hypoth¨¨se que nous avons ¨¦mise pour expliquer les faux
r¨¦sultats n¨¦gatifs du BCT dans la phase pr¨¦c¨¦dente. Et cela signifierait qu¡¯au sein d¡¯une race
animale r¨¦put¨¦e trypanotol¨¦rante, l¡¯aptitude ¨¤ contr ?ler la parasit¨¦mie se manifestait mieux
chez certains individus que chez d¡¯autres.
En dehors de ces tendances g¨¦n¨¦rales, on rel¨¨ve des cas particuliers, qui sont
int¨¦ressants du point de vue de la chimior¨¦sistance. Le tableau 8 montre ces cas: le bovin no
554 du lot B¨¦r¨¦nil est rest¨¦ constamment s¨¦ropositif avec X¡¯ CGYJ~O~XS~ et r bruce, le no 514
quasi-constamment avec. ?1 wiw, et le no 544 avec Z co~~oZ¡¯~s~. Et il faut signaler que le no
5 14 est du m¨ºme troupeau que le bovin ne 87 qui avait montr¨¦ une antig¨¦n¨¦mie persistante ¨¤
X tiw, et que les bovins no 544 et 554 appartiennent ¨¤ un m¨ºme troupeau d¡¯un autre village.
De l¡¯ensemble de ces r¨¦sultats et observations, se d¨¦gage une forte pr¨¦somption de
l¡¯existence effective de souches chimior¨¦sistantes de trypanosomes dans cette zone.
S¡¯agissant de l¡¯effet de la chimioth¨¦rapie et de la chimioprophylaxie sur l¡¯h¨¦matocrite
des animaux suivis, la tendance est ¨¤ la hausse du PCV apr¨¨s le traitement. Ainsi, les bovins
qui avaient les moyennes les plus faibles avant traitement ont finalement rejoint le niveau des
autres ¨¤ la derni¨¨re visite(tableau 9).
-6-
En conclusion, on peut dire du lest ELISA-Ag qu¡¯il a une sensibilit¨¦ ¨¦lev¨¦e et une
sp¨¦cificit¨¦ satisfaisante. Et que ses performances paraissent meilleures dans les infections
trypanosomiennes chroniques que dans les cas aigus. Pour ces derniers, la technique du BCT
s¡¯est montr¨¦e sup¨¦rieure. L¡¯utilisation combin¨¦e de ces deux m¨¦thodes, accompagn¨¦e d¡¯une
analyse statistique des donn¨¦es de l¡¯h¨¦matocrite, est ¨¤ notre avis une bonne option pour avoir
des r¨¦sultats plus pr¨¦cis.
Une option qui nous semble particuli¨¨rement indiqu¨¦e dans les r¨¦gions o¨´ l¡¯on
soup ?onne l¡¯existence de souches chirnior¨¦sistantes de trypanosomes. Mais les r¨¦sultats
devront ¨ºtre coinfirm¨¦s par des travaux en laboratoire sur des souches isol¨¦es ¨¤ partir des
animaux des r¨¦gions concern¨¦es. Signalons bri¨¨vement le premier essai que nous avons
r¨¦alis¨¦ ¨¤ ce sujet. Deux moutons Peulh du Sahel (race trypanosensible) achet¨¦s en zone
indemne de glossines et n¨¦gatifs tous les deux au BCT, ont ¨¦t¨¦ confi¨¦s respectivement au
berger du bovin no 5 14 et ¨¤ celui des bovins 544 et 554. Ces moutons ont s¨¦journ¨¦ pendant 8
jours dans la zone de Sokone. Ils sont alks tous les jours au p ?turage en compagnie des
troupeaux de bovins, pour ¨ºtre en contact quotidien avec les glossines.Les examens
parasitologiques restent encore n¨¦gatifs, pr¨¨s de deux mois apr¨¨s,
Ces essais d¡¯isolement de souches de trypanosomes se poursuivront ult¨¦rieurement
avec un protocole diff¨¦rent. Il s¡¯agira, en r¨¦sum¨¦, d¡¯obtenirer des isolats de jr F&ZY dans les
villages concern¨¦s et de faire des cultures au laboratoire sur petits Ruminants. Le degr¨¦ de
r¨¦sistance sera d¨¦termin¨¦ en ¨¦levant progressivement la dose de trypanocide. Un stabilat sera
cryopr¨¦serv¨¦ ¨¤ chaque ¨¦tape.
-7-
REMERCIEMENTS
- La Division conjointe FAO/AIEA de Vienne a bien voulu apporter une contribution
financi¨¨re tout en fournissant le mat¨¦riel et les r¨¦actifs utilis¨¦s dans ces investigations, Nous
tenons ¨¤ la remercier vivement.
- Des ¨¦leveurs de la zone de Sokone ont bien voulu mettre leurs animaux ¨¤ notre
disposition et ont ainsi rendu possible ce travail.Les agents v¨¦t¨¦rinaires locaux nous ont
¨¦galement apport¨¦ une pr¨¦cieuse assistance. Qu¡¯ils trouvent ici nos sinc¨¨res remerciements.
-8-
REFERENCES CONSULTEES
1. S. M. TOURE, A. GUEYE, M. SEYE, M.A. BA, et A. MANE -
Exp¨¦rience de pathologie compar¨¦e entre bovins Z¨¦bus et Ndama soumis ¨¤ l¡¯infection
naturelle par des trypanosomes pathog¨¨nes.
Re K Ele K M¨¦d V¨¦t. Rys bqu., 1.974 3f (IL?Y3-313
2. A.DIAITE, M. SEYE, A. MANE et T. NDIAYE - Convention AIEAIISRA n¡±4975/NL
portant sur l¡¯utilisation de la technique ELISA de d¨¦tection des antig¨¨nes dans l¡¯¨¦tude de
l¡¯incidence de la trypanosomiase animale en zone d¡¯¨¦levage du Dkku~z (croisement Z¨¦bu-
Ndama).
3. V.M. NANTULYA. - Immunological approaches to the control of Animal
¡®Trypanosomiasis.
4. V.M. NANTULYA, A.J. MUSOKE, F.R. RURANGIRWA, N. SAIGAR, S.H.
MINJA - Monoclonal antibodies that distinguish T@wzusuma eunguhvse, X¡¯ r&~and z
6mw~
ha.& Inmxmufog~; 158Z !J #2f -431.
5. V.M. NANTULYA, E. BANANA SONGA, R. HAMERS - Detection of circulating
trypanosomal antigens in jpmusuma erwx-infected animals using a jr brwe group-
specific monoclonal antibody.
Trqo. Aliw! Pxaszk, 4U(f 98$k263-266
6. V.M. NANTULYA, K.J. LINDQVIST - Antigen-detection enzyme immunoassays for
the detection of jqxnusuma r,fv~ I¡¯ cunguiivm and jr dwce. infections in cattle.
.7kp. Med Par-asri., 4U (f 98?,l* 267272.
7. V.M. NANTULYA - Trypanosomiasis in domestic animais: the problems of diagnosis.
Xe K Sci UfL 112L Epi~, fYYl? Y(2): 3.S7-36%
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tec.hniquc for diagnosis of African trypanosomiasis.
.hns. RC? F,: suc. lrup. ~Va f!&?, 71(1.9.7i.y: .323--.L%:
-9-
Tableau 1 : Traitements trypanocides initiaux en premi¨¨re partie de la phase 2
TRAITSMFXC
LOT
B¨¦r¨¦nil IM
Samorin 0,5 mgfkg, IM
No 81 ¨¤
90
10,5 mg/kg
15 jours apr¨¨s B¨¦r¨¦nil
No100 ¨¤ 110
10,5 mg/kg
45 jours apr¨¨s B¨¦r¨¦nil
Nol11 ¨¤ 120
7,O mdkg
15 jours apr¨¨s B¨¦r¨¦nil
No 91 ¨¤ lOO*
3,5 mgfkg
15 jours apr¨¨s B¨¦r¨¦nil
* D¨¦sistement de l'¨¦leveur propri¨¦taire de ces 10 animaux :
donn¨¦es non pris en compte ici.
Tableau 2 : Traitements initiaux en deuxi¨¨me partie de la 2¨¨me phase
TRAITEMENT
Nombre de
LOT
bovins
B¨¦r¨¦nil
Samorin
Ethidium
10,5 mg/kg IM
0,5 mg/kg IM
1,O mg/kg IM
1
107
Visite 1 avant les
pr¨¦l¨¨vements (A.P.)
2
60
V 1 A.P.
15 jours apr¨¨s
B¨¦r¨¦nil
3
44
V 1 A.P.
15 jours apr¨¨s
30 jours apr¨¨s
B¨¦r¨¦nil
Samorin
Tableau 3 : R¨¦sultats du diagnostic des trypanosomoses par le BCT et par l'ELISA-Ag
en phase d'implantation et de validation
Nombre de cas de :
I
0
Nombre
Technique
d'analyses
.r.^
I
-
- -
- -
I
mm
-m m
I
m. 3
BCT
196
7
7
ELISA-Ag
196
3
22
18
12
10
2
67
COMBINES*
196
3
27
18
12
10
2
72
I
I
I
l
I
I
Tb = T.brucei, Tv = T.viva.x, Tc = T.congolense
* : combin¨¦s = r¨¦sultats positifs du BCT et/ou de l'ELISA-Ag.
r>..
-
_.
_
.1.
-.
Tableau 4 : Evolution du nombre d'infections trypanosomiennes selon les mois de visite et
selon les esp¨¨ces (phase d'implantation - validation)
Nombre
Nombre de cas de :
Mois
d'analyses
Tb
TC
TV
Tb Tc
TbTv
Tc TV
lb Tc TV
BCT EL
BCT EL
BCT EL
BCT EL
BCT EL
BCT EL
BCT EL
Janvier
40
-
-
1
4
2
3
2
1
F¨¦vrier
40
-
-
- 10
2
1
4
Mars
39
-
-
3
3
1
2
1
Avril
40
3
1
1
7
6
1
Juin
37
-
-
5 4
5
1
1
Total
196
3
7 22
-
19
-
12
-
10
2
Tableau 5 : Chimior¨¦sistance,premi¨¨re partie : Diagnostic par BCT et par ELISA-Ag des trypanosomoses
chez des bovins trait¨¦s au B¨¦r¨¦nil puis au Samorin et suivis pendant 1 an
% positifs avec l'antig¨¨ne de :
Nombre
%BCT
Visite
d'analyses
positif
Tb
TC
TV
Tb Tc
TbTv
Tc Tv
Tb Tc TV
15 d¨¦cembre*
26
4
19
12
8
8
30 d¨¦cembre **
26
4
8
12
4
Janvier
25
12
16
F¨¦vrier
25
12
Mars
15
I
Avril
23
4
NI
Mai
21
19
Juin
21
5
5
5
Juillet
21
5
5
5
Ao ?t
22
9
9
9
Septembre
20
25
20
10
Octobre
19
11
16
26
11
5
Novembre
17
29
18
16
D¨¦cembre
17
12
12
6
6
* = Animaux trait¨¦s au B¨¦r¨¦nil
** = Traitement au Samorin.
Tableau 6 : R¨¦sultats d'ensemble des examens parasitologiques et des ¨¦preuves ELISA-Ag pour le diagnostic
des trypanosomoses (chimior¨¦sistance, deuxi¨¨me partie)
Nombre de cas selon le BCT et/ou l'ELISA-Ag
Visite
Nombre
d'analyses
Tb
TC
TV
Tb/TC
I%/n
TCITV
l%/TC/TV
Total
1
211
3
11
13
4
1
2
34
2
177
2
8
3
2
2
17
3
164
1
6
3
1
1
12
4
175
5
6
2
13
5
156
1
3
6
1
11
Total n
883
5
27
36
11
3
5
87
(%>
(0,6)
(3,O)
(4,l)
(1,2)
CO,31
(0,6)
(9,8)
.¡±
.,.
-
.-
-
.
..>
Tableau 7 : R¨¦sultats compar¨¦s et combin¨¦s du BCT et de l'ELISA-Ag dans les diff¨¦rents lots trait¨¦s
(chimior¨¦sistance, deuxi¨¨me partie)
Nombre de cas dans chaque lot selon BCT et l'ELISA-Ag
Visite
T
l-
Lot B¨¦r¨¦nil
Lot Samorin
Lot Ethidium
"Anal.
BCT
ELISA
coMB*
nAnal.
BCI
ELISA
coMB*
"Anal.
BCI
ELISA
cola*
107
60
11
14
44
5
13
73
60
6
6
44
9
87
33
2
3
44
2
4
90
50
2
2
35
1
2
65
56
2
3
35
-*
3
: COMB. = positif au BCT et/ou en ELISA-Ag.
.¡±
.,.
- .,.m.%-. -
. . . ,
-15-
Tableau 8 : Exemples d'kolution post-th¨¦rapeutique de l'antig¨¦n¨¦mie
(chimior¨¦sistance, deuxi¨¨me
partie)
Bovin No
554*
514*
544**
Visite
S¨¦ropositif avec l'antig¨¨ne de
1
Tb Tc
T V
TV Tc
2
Tb Tc
3% Tc TV
3
Tb Tc
0
Tb Tc TV
4
Tb Tc
TV
TC
5
Tb Tc
TV
0
c
* = Bovin du lot trait¨¦ au B¨¦r¨¦nil
* = Bovin du lot Samorin
k-k*
= Bovin du lot Ethidium
0 = Non examin¨¦.
-16-
------__ -
XlINISTERE DU DEVELOPPEMENT
RURAL ET DE L¡¯HYDRAULIQUE
---------
INS-I¡¯ITUT SENEGALAIS DE RECHERCHES
AGRICOLES (I.S.R.A.)
----------
DIRECTION DES RECHERCHES SUR LES
PRODUCTIONS ET LA SANTE ANIMALES
------___-
LABORATOIRE NATIONAL DE L¡¯ELEVAGE
ET DE RECHERCHES VETERINAIRES
DAKAR-HANN
CONVENTION AIEMSRA N¡± 4975/NL RELATIVE A
L¡¯AMELIORATION DU DIAGNOSTIC ET DE LA
SURVEILLANCE DES TRYPANOSOMOSES ET
AUTRES MALADIES PARASfTAl.RES DU BETAIL
AFRICAIN PAR L¡¯USAGE DE METHODES
SERO-IMMUNOLOGIQUES
RAPPORT FINAL SUR LES TRAVAUX REALISES
AU SENEGAL DE 1988 A 1992
A. DIAITE, M. SEYE, G. VASSILIADES, A. MANE et Mme T. NDIAYE
Ref.: 045/PATHO. Ahlhl.
D¨¦cembre 1992
APPLICATION DE LA TECHNIQUE ELISA DE DETECTION DES
ANTIGENES A L¡¯ETUDE DE SOUCHES DE TRYPANOSOMES APPAREMMENT
CHIMIORESISTANTES AU SENEGAL
Par
A. DIAITE, M. SEYE, G. VASSILIADES, A. MANE et hlme T. NDIAYE
RESUME
La technique ELISA de d¨¦tection d¡¯antig¨¨nes s¨¦riques de ~~FJu~xx.w~~~ &KW¡¯
kwce~ X cuuso/e.s~ et 27 W¡¯KW a ¨¦t¨¦ utlilis¨¦e dans la zone centre-Sud du S¨¦n¨¦gal infest¨¦e de
glossines, dans une ¨¦tude comportant deux volets: un premier volet visant l¡¯implantation de
cette technique ¨¤ l¡¯Institut S¨¦n¨¦galais de Recherches Agricoles (ISRA) ainsi que la validation
du test: puis un second volet portant sur l¡¯utilisation de cette technique pour la d¨¦tection de
souches de trypanosomes apparemment chimior¨¦sistantes, chez des bovins nk,kw¡¯
(croisement Z¨¦bu-Ndama).
Les r¨¦sultats obtenus ici ¨¤ I¡¯ISRA sont satisfaisants et sont en g¨¦n¨¦ral concordants
avec ceux des autres membres du r¨¦seau africain de validation de la technique ELISA-
Antig¨¨ne. En cons¨¦quence, le test a ¨¦t¨¦ reconnu comme m¨¦thode fiable de diagnostic des
trypanosomoses animales en association cependant avec des m¨¦thodes d¨¦j¨¤ existantes.
Dans l¡¯¨¦tude la chimior¨¦sistance cons¨¦cutive ¨¤ la validation, plus de 1000 s¨¦rums de
bovins Diakor¨¦ et autant de tubes ¨¤ h¨¦matocrite ont ¨¦t¨¦ examin¨¦s apr¨¨s traitement des bovins
concern¨¦s au B¨¦r¨¦nil, au Samorin et/ou ¨¤ 1¡¯Ethidium. En m¨ºme temps, une centaine de s¨¦rums
t¨¦moins r¨¦colt¨¦s sur des Z¨¦bus du Nord S¨¦negal indemne de glossines ont subi les ¨¦preuves
s¨¦rologiques. Les r¨¦sultats semblent indiquer que certaines souches de trypanosomes de la
r¨¦gion centre-Sud sont chimior¨¦sistantes. Des essais en laboratoire sur des animaux inocul¨¦s
avec ces souches sont cependant n¨¦cessaires pour confirmer ces r¨¦sultats.
MOTS-C,LES
Trypanosomoses - ELISA - Chimior¨¦sistance - Bovins - S¨¦n¨¦gal
APPLICATION OF THE ANTIGEN-ELISA TECHNIQUE FOR THE DETECTION
OF APPARENT
DRUGRESISTANT TRYPANOSOME STRAINS IN SENEGAL
B y:
A. DAITE, M. SEYE, G. VASSILIADFS, A. MANE and T. NDIAYE
SUMMARY
The Antigen-ELISA technique for the detection af trypanosomal antigens in serum
was used in a two-part study in the south of the central region of Senegal (Sokone region)
which is infested by tsetse flics. The first part consisted of implementing the Antigen-ELISA
method at the Senegalese Institute for Agricultural Researc.h (ISRA) and the validation of the
test. In the second part, the technique was used to detect apparently drugresistant
trypanosome strains.
The Antigen-ELISA tehnique has been succesfully implemented at the Institute. It is
now considered, in association with other methods, as a good diagnostic technique after the
synthesis of a11 results obtained through an African network in which Senegal was one of the
contries involved.
In the drugresistance study, more than 1000 bovine sera and as many buffy coats
were examinated in the tsetse-infested area while a hundred of samples were taken from Zebu
cattle living in two tsetse-free areas in the Northen part of Senegal. The animals of the infested
zone were treated with Berenil, then with Samorin or Ethidium according to a defined
protocol. The results obtained seem to indicate the exixtence of drugresistant trypanosome
strains, but more investigations, including subinoculation of animals and laboratory triais are
needed to confirm these findings
KEY-WORDS
Trypanosomosis - ELISA - Drugresistance - Cattle - Senegal.
-l-
AI¡¯PLICA¡¯I¡¯ION DE LA TECHNIQUE ELISA DE DE¡¯l¡¯EC¡¯i¡¯ION DES AN¡¯I¡¯IGENES A
L¡¯ETUDE DE SOUCHES DE TRYPANOSOMES APPAREMENT
CHIMIORESISTANTES AU SENEGAL
Par
A. DIAITE*, M. SEYE¡±, G. VASSILIADES¡±, A. MANE¡± et ¡®1¡®. NDIAYE*
INTRODUCTION
Sur une superficie totale de 196 000 km2, 70 000, soit 36% sont occup¨¦s par les
glossines au S¨¦n¨¦gal. Les deux esp¨¨c.es pr¨¦sentes sont Gfkw$~ p&$ti~kg~~bk~sk et G.
fzxxsfhx subfrzuf3-fika, qui transmettent ici fi;r~pmusofffa brucer¡¯ bufcefi 7: cufzgdefzst et 7:
wkar chez les animaux.
La r¨¦gion de Sokone, situ¨¦e dans le c.entre-sud du pays, est totalement infest¨¦e par G.
Mor&¡°s su&ors$m: et, dans une moindre mesure, par G. p+&g~~b. Les bovins
qui y vivent sont principalement de race Dkkolp (croisement Z¨¦bu-Ndama) et poss¨¨dent un
degr¨¦ de trypanotol¨¦rance interm¨¦diaire entre la sensibilit¨¦ du Z¨¦bu et la tol¨¦rance de la
Ndama (1). Ces D!kkon sont largement utilis¨¦s dans la culture attel¨¦e ainsi que pour la
production de lait et de viande.
Les ¨¦leveurs locaux, tr¨¨s avertis en mati¨¨re trypanosomose animale, font constamment
appel aux agents v¨¦t¨¦rinaires pour des traitements trypanocides. L¡¯utilisation intensive des
deux principaux trypanocides v¨¦t¨¦rinaires, le B¨¦r¨¦nil et le Samorin, depuis plusieurs
d¨¦cennies, a rendu ces deux m¨¦dicaments apparemment moins efficaces aujourd¡¯hui dans
cette zone. Les agents v¨¦t¨¦rinaires locaux, en effet, se plaignent de plus en plus de traitements
infructueux,
Il est donc apparu n¨¦cessaire de mener des investigations pour savoir s¡¯il s¡¯agissait de
souches de trypanosomes chimior¨¦sistantes et, le cas ¨¦ch¨¦ant, ¨¦valuer le degr¨¦ de la
r¨¦sistance, son ¨¦tendue dans la zone, et enfin d¨¦finir une m¨¦thode de lutte efficace.
De telles investigations requi¨¨rent des m¨¦thodes de diagnostic performantes, qui
optimisent les chances de d¨¦tection des trypanosomes lorsqu¡¯ils sont pr¨¦sents chez l¡¯animal
examin¨¦. Or les techniques classiques de diagnostic, bien qu¡¯ayant des avantages certains, ne
sont pas toujours suffisamment sensibles et peuvent donner de faux r¨¦sultats n¨¦gatifs, surtout
dans les cas de trypanosomose chronique. Pour rem¨¦dier ¨¤ cela, il est indiqu¨¦ d¡¯associer
autant que possible deux ou plusieurs techniques reconnues compl¨¦mentaires. Dans la
pr¨¦sente situation, l¡¯emploi simultan¨¦ de la m¨¦thode de lecture de l¡¯interphase (BCT) et de la
technique ELISA de cl¨¦tection de antig¨¨nes nous a sembl¨¦ appropri¨¦.
L¡¯¨¦tude a comport¨¦ deux phases:
- une premi¨¨re phase portant sur l¡¯implantation de la technique ELISA-Antig¨¨ne ¨¤
l¡¯Institut S¨¦n¨¦galais de Recherches Agricoles (ISRA) et la validation du test comme moyen
fiable de diagnostic de trypanosomoses bovines:
- et dans une seconde phase, l¡¯utilisation de cette technique pour la d¨¦tection
¨¦ventuelle de souches de trypanosomes chimior¨¦sistantes.
_____------------------------------
+ : Service de Parasitologie, ISRNLNERV, BP 2057, Dakar, S¨¦n¨¦gal.
-2-
l - MAKKIIIL ET METHODES
1.1 - Phase d¡¯implantation et dc validation
1.1.1 - Animaux cibles
Quarante bovins Dr;zk--(7 ?c de la zone de Sokone ont ¨¦t¨¦ retenus et identifi¨¦s par pose de
boucles num¨¦rot¨¦es ¨¤ l¡¯oreille. Ces animaux appartiennent ¨¤ deux troupeaux de deux villages
situes ¨¤ c ?t¨¦ de for¨ºts class¨¦es infest¨¦es par G: ~KYXZ&ZW subnlu~~&z~ Parall¨¨lement, 95
s¨¦rums t¨¦moins ont ¨¦t¨¦ r¨¦colt¨¦s sur des bovins Z¨¦bus vivant ¨¤ Dahra et Podor, localit¨¦s
situ¨¦es dans le Nord du S¨¦n¨¦gal indemne de glossines ,
1.1.2 - Pr¨¦l¨¨vements - Analyses - Traitements
Sur chacun de ces 40 bovins de la zone ¨¤ glossines, les pr¨¦l¨¨vements et analyses
suivants ont ¨¦t¨¦ effectu¨¦s entre d¨¦cembre 1988 et juin 1989, ¨¤ raison d¡¯une visite par mois,
sauf au mois de mai o¨´ la visite n¡¯a pas pu se faire.
- r¨¦colte de sang p¨¦riph¨¦rique ¨¤ l¡¯oreille (deux tubes capillaires par animal),
centrifugation sur place et lecture imm¨¦diate du PCV et de l¡¯interphase(BCT);
- confection de frottis de sang, coloration et lecture au laboratoire;
- collecte de sang jugulaire sur vacutainer sec, centrifugation, r¨¦colte du
s¨¦rum et adjonction de O,Ol% d¡¯azide de Sodium; conservation ¨¤ -20¡ãC jusqu¡¯¨¤ l¡¯emploi:
- ¨¦preuve ELISA de d¨¦tection d¡¯antig¨¨nes s¨¦riques de 1 brucei ?Y
cc?~~ufe~s~ et ?Y VYIGY avec les r¨¦actifs et le protocole du trousseau FAOIAIEA./ILRAD;
- pr¨¦l¨¨vement de selles fa ?ches tous les trois mois et coprologie au
laboratoire:
- traitement au B¨¦r¨¦nil, 7,0 mg/kg, I.M., des bovins positifs ¨¤ ~y~zusu~,~~;
- traitement anthelminthique des bovins positifs en coprologie;
- bain anti-tiques des animaux cibles et non cibles des troupeaux suivis, par
suite du diagnostic d¡¯ Ekk~~~ bnrk chez certains bovins: traitement de ces derniers ¨¤ la
Terramycine Longue Action (TLA).
-3
1.2 - Phase d¡¯application a l¡¯¨¦tude de la chimior¨¦sistance
En premi¨¨re partie de cette phase, 26 parmi les 40 bovins de la phase de validation ont
¨¦t¨¦ ¨¤ nouveau retenus. Ainsi que les 95 Z¨¦bus t¨¦moins de Dahra et Podor . Cette investigation
a dur¨¦ 1 an.
En deuxi¨¨me partie, 211 autres &~~UIP ont ¨¦t¨¦ s¨¦lectionn¨¦s dans 5 troupeaux de
Sokone et num¨¦rot¨¦s ¨¤ l¡¯oreille. Ces animaux comportaient toutes les tranches d¡¯¨¤ge et ¨¦taient
compos¨¦s de femelles, de m ?les entiers et de m ?les castr¨¦s. Le suivi post-th¨¦rapeutique a dur¨¦
ici 5 mois.
Les traitements trypanocides effectu¨¦s au d¨¦but de chacune de ces deux parties
figurent aux tableaux 1 et 2.
Les trois premi¨¨res visites pour chaque partie ont eu lieu ¨¤ 15 jours d¡¯intervalle; les
visites suivantes ¨¦taient espac¨¦es de 30 jours.
Les r¨¦coltes de sang et les techniques d¡¯analyse sont celles de la premi¨¨re phase, sauf
qu¡¯ici le benzoate de Sodium a ¨¦t¨¦ employ¨¦ ¨¤ la place de l¡¯azide comme pr¨¦servatif des
s¨¦rums. En outre, il n¡¯y a pas eu cette fois de pr¨¦l¨¨vements de selles ni de frottis de sang.
II - RESULTATS -DISCUSSION
2.1 - Implantation - Validation
La technique BCT et les ¨¦preuves ELISA-Ag ont donn¨¦ des r¨¦sultats diff¨¦rents: sur un
total de 72 cas de trypanosomose, 2 sont trouv¨¦es par les cieux techniques, 5 par le BCT seul
et 65 par I¡¯ELISA seule.
En outre, I¡¯ELISA a d¨¦tect¨¦ 1,5 % de cas de 7: ~KXY~ 9.7 % de 7Y VY&,~ alors
qu¡¯aucune de ces deux esp¨¨ces n¡¯a ¨¦t¨¦ visualis¨¦ au BCT (tableau 3 et 4). Cependant, parmi les
95 bovins pr¨¦lev¨¦s en zone indemne, 1 seul a ¨¦t¨¦ antig¨¦n¨¦mique ¨¤ ?Y U¡¯KU, une esp¨¨ce de
trypanosome pouvant ¨ºtre transmise par d¡¯autres insectes que les glossines.
Ces r¨¦sultats nous ont sembl¨¦ traduire une bonne sp¨¦cificit¨¦ de la technique ELISA-
Afi?
En d¨¦finitive, les deux techniques nous sont apparues compl¨¦mentaires et leur
utilisation combin¨¦e est fortement souhaitable pour obtenir des r¨¦sultats plus complets sur les
infections trypanosomiennes dans une zone donn¨¦e (2).
Des r¨¦sultats et conclusions similaires ont du resle ¨¦t¨¦ trouv¨¦s au niveau du r¨¦seau
africain de validation du test s¨¦rologique.
-4-
2.2 - Etude de la chimior¨¦sistance
2.2.1 - Premi¨¨re partie
La tendance constat¨¦e en phase de validation a ¨¦t¨¦ retrouv¨¦e ici: la sensibilit¨¦ de la
technique ELISA-Ag est au moins cinq fois sup¨¦rieure ¨¤ celle du BCT: sur 298 pr¨¦l¨¨vements,
79 cas de trypanosomose ont ¨¦t¨¦ diagnostiqu¨¦s; 14 seulement relevaient du BCT contre 72
pour I¡¯ELISA-Ag (tableau 5).
S¡¯agissant de la sp¨¦cificit¨¦ du test s¨¦rologique, nous avons not¨¦, comme dans la
premi¨¨re phase, que l¡¯ensemble des cas de ?: bruc&et de z F~ ?Y ont ¨¦t¨¦ trouv¨¦s uniquement
en ELISA. Il fallait donc ¨¦tablir que ces cas repr¨¦sentaient de r¨¦elles infections
trypanosomiennes. A cet effet, tous les s¨¦rums positifs en ELISA mais n¨¦gatifs au BCT ont
¨¦t¨¦ envoy¨¦s au Centre International de la Trypanotol¨¦rance en Gambie pour la recherche
d¡¯anticorps anti-trypanosomes. Par la technique d¡¯Immunofluorescence
indirecte, ils se sont
tous r¨¦v¨¦l¨¦s positifs, y compris le s¨¦rum de la zone indemne antig¨¦n¨¦mique ¨¤ X ~&XX
Pendant ce temps, un lot de 39 autres s¨¦rums r¨¦colt¨¦s sur des Z¨¦bus de Podor (r¨¦gion Nord
du S¨¦n¨¦gal sans glossines) ¨¦tait s¨¦ron¨¦gatif ¨¤ 100 % en ELISA-Ag. De tout cela nous avons
conclu que le test ¨¦tait effectivement sp¨¦cifique. Et que les Dkko~ pr¨¦lev¨¦s pour ce travail
poss¨¨daient sans doute un bon degr¨¦ de trypanolol¨¦rance,
qui leur permet de maintenir les
souches locales de ?Y ~*VA ¨¤ des niveaux de parasit¨¦mie inf¨¦rieurs au seuil de d¨¦tection. Et
ce d¡¯autant plus que ?Y W¡¯K ?Y a ¨¦t¨¦ visualis¨¦ chez des animaux trypanosensibles
de la zone
(chevaux et ?nes), prouvant ainsi 1¡¯existenc.e effective de 7: W¡¯V~ dans la r¨¦gion. Quant ¨¤
X bruc~, sa fr¨¦quente localisation c¨¦r¨¦brale explique certainement la difficult¨¦ ¨¤ le visualiser
dans le sang.
Concernant les premiers essais de d¨¦tection de souches de trypanosomes
chimior¨¦sistantes, les r¨¦sultats ont montr¨¦ que pour YY druce. et jr cofgok~.~t, le traitement au
B¨¦r¨¦nil ou au Samorin ¨¦tait g¨¦n¨¦ralement efficace: apr¨¨s l¡¯administration du B¨¦r¨¦nil, tous les
animaux suivis ¨¦taient n¨¦gatifs au BCT d¨¨s la visite suivante; apr¨¨s traitement au Samorin, ils
sont rest¨¦s n¨¦gatifs au BCT et en ELISA-Ag pendant 5 mois pour z co~gok~~~ et quasi-
d¨¦finitivement pour I: brucer¡¯(tableau 5).
Mais des cas de s¨¦roposilivil¨¦ ¨¤ z w¡¯w persistaient (tableau 5). Notamment le bovin
no 87, qui est rest¨¦ en permanence antig¨¦n¨¦mique ¨¤ ZY W¡¯W,J malgr¨¦ tous les traitements
trypanocides. Cet animal est finalement mort, avec des symptomes c¨¦r¨¦braux selon l¡¯¨¦leveur
propri¨¦taire. Il s¡¯agit l¨¤, probablement, d¡¯une souche chimior¨¦sistante. Des ¨¦tudes plus
pouss¨¦es ¨¦taient toutefois n¨¦cessaires pour se prononcer sur la r¨¦sistance et, en cas de
confirmation, en connaitre le degr¨¦ et l¡¯¨¦tendue pour pouvoir d¨¦finir des moyens de lutte.
C¡¯est l¡¯objet de la seconde partie de cette phase.
- 5.-
2.2.2 - Deuxi¨¨me partie
Les r¨¦sultats d¡¯ensemble des examens parasitologiques et des ¨¦preuves s¨¦rologiques
sont pr¨¦sent¨¦s au tableau 6. D¡¯une mani¨¨re g¨¦n¨¦rale, le nombre de cas de trypanosomose a
r¨¦guli¨¨rement baisse apr¨¨s les traitements trypanocides. Cependant, pour 7: co~gok~us~ et
T
W¡¯FGZY, des cas de s¨¦ropositivit¨¦ post-th¨¦rapeutique ont ¨¦t¨¦ relev¨¦s.
En outre, des diff¨¦rences importantes ont ¨¦t¨¦ not¨¦es selon que les animaux ont re ?u
l¡¯un ou l¡¯autre des trypanocides utilis¨¦s (tableau 7). Dans le lot trait¨¦ au B¨¦r¨¦nil seul et une
seule fois, les infections ont chut¨¦ ¨¤ la visite effectu¨¦e 15 jours apr¨¨s ce traitement. Par la suite
elles ont connu une hausse et sont rest¨¦es tr¨¨s proches de leur niveau d¡¯avant traitement. Cela
traduit sans doute l¡¯activit¨¦ essentiellement curative du B¨¦r¨¦nil. Une ¨¦volution diff¨¦rente est
not¨¦e dans le lot trait¨¦ au Samorin: le nombre d¡¯infections post-th¨¦rapeutiques a baiss¨¦
significativement et n¡¯a jamais regagn¨¦ son niveau initial. Il en est de m¨ºme dans le lot trait¨¦ ¨¤
I¡¯Ethidium. L¡¯effet prophylactique de ces deux m¨¦dicaments semble donc ¨¦vident ici.
Par ailleurs et concernant l¡¯ensemble des trois lots, on constate que les infections ont
¨¦t¨¦ cette fois d¨¦cel¨¦es aussi bien en ELISA-Ag qu¡¯au BCT, avec une sensibilit¨¦ plus ¨¦lev¨¦e de
I¡¯ELISA. Cela semble confirmer l¡¯hypoth¨¨se que nous avons ¨¦mise pour expliquer les faux
r¨¦sultats n¨¦gatifs du BCT dans la phase pr¨¦c¨¦dente. Et cela signifierait qu¡¯au sein d¡¯une race
animale r¨¦put¨¦e trypanotol¨¦rante, l¡¯aptitude ¨¤ contr ?ler la parasit¨¦mie se manifestait mieux
chez certains individus que chez d¡¯autres.
En dehors de ces tendances g¨¦n¨¦rales, on rel¨¨ve des cas particuliers, qui sont
int¨¦ressants du point de vue de la chimior¨¦sistance. Le tableau 8 montre ces cas: le bovin no
554 du lot B¨¦r¨¦nil est rest¨¦ constamment s¨¦ropositif avec X¡¯ CGYJ~O~XS~ et r bruce, le no 514
quasi-constamment avec. ?1 wiw, et le no 544 avec Z co~~oZ¡¯~s~. Et il faut signaler que le no
5 14 est du m¨ºme troupeau que le bovin ne 87 qui avait montr¨¦ une antig¨¦n¨¦mie persistante ¨¤
X tiw, et que les bovins no 544 et 554 appartiennent ¨¤ un m¨ºme troupeau d¡¯un autre village.
De l¡¯ensemble de ces r¨¦sultats et observations, se d¨¦gage une forte pr¨¦somption de
l¡¯existence effective de souches chimior¨¦sistantes de trypanosomes dans cette zone.
S¡¯agissant de l¡¯effet de la chimioth¨¦rapie et de la chimioprophylaxie sur l¡¯h¨¦matocrite
des animaux suivis, la tendance est ¨¤ la hausse du PCV apr¨¨s le traitement. Ainsi, les bovins
qui avaient les moyennes les plus faibles avant traitement ont finalement rejoint le niveau des
autres ¨¤ la derni¨¨re visite(tableau 9).
-6-
En conclusion, on peut dire du lest ELISA-Ag qu¡¯il a une sensibilit¨¦ ¨¦lev¨¦e et une
sp¨¦cificit¨¦ satisfaisante. Et que ses performances paraissent meilleures dans les infections
trypanosomiennes chroniques que dans les cas aigus. Pour ces derniers, la technique du BCT
s¡¯est montr¨¦e sup¨¦rieure. L¡¯utilisation combin¨¦e de ces deux m¨¦thodes, accompagn¨¦e d¡¯une
analyse statistique des donn¨¦es de l¡¯h¨¦matocrite, est ¨¤ notre avis une bonne option pour avoir
des r¨¦sultats plus pr¨¦cis.
Une option qui nous semble particuli¨¨rement indiqu¨¦e dans les r¨¦gions o¨´ l¡¯on
soup ?onne l¡¯existence de souches chirnior¨¦sistantes de trypanosomes. Mais les r¨¦sultats
devront ¨ºtre coinfirm¨¦s par des travaux en laboratoire sur des souches isol¨¦es ¨¤ partir des
animaux des r¨¦gions concern¨¦es. Signalons bri¨¨vement le premier essai que nous avons
r¨¦alis¨¦ ¨¤ ce sujet. Deux moutons Peulh du Sahel (race trypanosensible) achet¨¦s en zone
indemne de glossines et n¨¦gatifs tous les deux au BCT, ont ¨¦t¨¦ confi¨¦s respectivement au
berger du bovin no 5 14 et ¨¤ celui des bovins 544 et 554. Ces moutons ont s¨¦journ¨¦ pendant 8
jours dans la zone de Sokone. Ils sont alks tous les jours au p ?turage en compagnie des
troupeaux de bovins, pour ¨ºtre en contact quotidien avec les glossines.Les examens
parasitologiques restent encore n¨¦gatifs, pr¨¨s de deux mois apr¨¨s,
Ces essais d¡¯isolement de souches de trypanosomes se poursuivront ult¨¦rieurement
avec un protocole diff¨¦rent. Il s¡¯agira, en r¨¦sum¨¦, d¡¯obtenirer des isolats de jr F&ZY dans les
villages concern¨¦s et de faire des cultures au laboratoire sur petits Ruminants. Le degr¨¦ de
r¨¦sistance sera d¨¦termin¨¦ en ¨¦levant progressivement la dose de trypanocide. Un stabilat sera
cryopr¨¦serv¨¦ ¨¤ chaque ¨¦tape.
-7-
REMERCIEMENTS
- La Division conjointe FAO/AIEA de Vienne a bien voulu apporter une contribution
financi¨¨re tout en fournissant le mat¨¦riel et les r¨¦actifs utilis¨¦s dans ces investigations, Nous
tenons ¨¤ la remercier vivement.
- Des ¨¦leveurs de la zone de Sokone ont bien voulu mettre leurs animaux ¨¤ notre
disposition et ont ainsi rendu possible ce travail.Les agents v¨¦t¨¦rinaires locaux nous ont
¨¦galement apport¨¦ une pr¨¦cieuse assistance. Qu¡¯ils trouvent ici nos sinc¨¨res remerciements.
-8-
REFERENCES CONSULTEES
1. S. M. TOURE, A. GUEYE, M. SEYE, M.A. BA, et A. MANE -
Exp¨¦rience de pathologie compar¨¦e entre bovins Z¨¦bus et Ndama soumis ¨¤ l¡¯infection
naturelle par des trypanosomes pathog¨¨nes.
Re K Ele K M¨¦d V¨¦t. Rys bqu., 1.974 3f (IL?Y3-313
2. A.DIAITE, M. SEYE, A. MANE et T. NDIAYE - Convention AIEAIISRA n¡±4975/NL
portant sur l¡¯utilisation de la technique ELISA de d¨¦tection des antig¨¨nes dans l¡¯¨¦tude de
l¡¯incidence de la trypanosomiase animale en zone d¡¯¨¦levage du Dkku~z (croisement Z¨¦bu-
Ndama).
3. V.M. NANTULYA. - Immunological approaches to the control of Animal
¡®Trypanosomiasis.
4. V.M. NANTULYA, A.J. MUSOKE, F.R. RURANGIRWA, N. SAIGAR, S.H.
MINJA - Monoclonal antibodies that distinguish T@wzusuma eunguhvse, X¡¯ r&~and z
6mw~
ha.& Inmxmufog~; 158Z !J #2f -431.
5. V.M. NANTULYA, E. BANANA SONGA, R. HAMERS - Detection of circulating
trypanosomal antigens in jpmusuma erwx-infected animals using a jr brwe group-
specific monoclonal antibody.
Trqo. Aliw! Pxaszk, 4U(f 98$k263-266
6. V.M. NANTULYA, K.J. LINDQVIST - Antigen-detection enzyme immunoassays for
the detection of jqxnusuma r,fv~ I¡¯ cunguiivm and jr dwce. infections in cattle.
.7kp. Med Par-asri., 4U (f 98?,l* 267272.
7. V.M. NANTULYA - Trypanosomiasis in domestic animais: the problems of diagnosis.
Xe K Sci UfL 112L Epi~, fYYl? Y(2): 3.S7-36%
8. MURRAY M., P.K. MIJRRAY and W.I.M. McINTYRE - An improved parasitological
tec.hniquc for diagnosis of African trypanosomiasis.
.hns. RC? F,: suc. lrup. ~Va f!&?, 71(1.9.7i.y: .323--.L%:
-9-
Tableau 1 : Traitements trypanocides initiaux en premi¨¨re partie de la phase 2
TRAITSMFXC
LOT
B¨¦r¨¦nil IM
Samorin 0,5 mgfkg, IM
No 81 ¨¤
90
10,5 mg/kg
15 jours apr¨¨s B¨¦r¨¦nil
No100 ¨¤ 110
10,5 mg/kg
45 jours apr¨¨s B¨¦r¨¦nil
Nol11 ¨¤ 120
7,O mdkg
15 jours apr¨¨s B¨¦r¨¦nil
No 91 ¨¤ lOO*
3,5 mgfkg
15 jours apr¨¨s B¨¦r¨¦nil
* D¨¦sistement de l'¨¦leveur propri¨¦taire de ces 10 animaux :
donn¨¦es non pris en compte ici.
Tableau 2 : Traitements initiaux en deuxi¨¨me partie de la 2¨¨me phase
TRAITEMENT
Nombre de
LOT
bovins
B¨¦r¨¦nil
Samorin
Ethidium
10,5 mg/kg IM
0,5 mg/kg IM
1,O mg/kg IM
1
107
Visite 1 avant les
pr¨¦l¨¨vements (A.P.)
2
60
V 1 A.P.
15 jours apr¨¨s
B¨¦r¨¦nil
3
44
V 1 A.P.
15 jours apr¨¨s
30 jours apr¨¨s
B¨¦r¨¦nil
Samorin
Tableau 3 : R¨¦sultats du diagnostic des trypanosomoses par le BCT et par l'ELISA-Ag
en phase d'implantation et de validation
Nombre de cas de :
I
0
Nombre
Technique
d'analyses
.r.^
I
-
- -
- -
I
mm
-m m
I
m. 3
BCT
196
7
7
ELISA-Ag
196
3
22
18
12
10
2
67
COMBINES*
196
3
27
18
12
10
2
72
I
I
I
l
I
I
Tb = T.brucei, Tv = T.viva.x, Tc = T.congolense
* : combin¨¦s = r¨¦sultats positifs du BCT et/ou de l'ELISA-Ag.
r>..
-
_.
_
.1.
-.
Tableau 4 : Evolution du nombre d'infections trypanosomiennes selon les mois de visite et
selon les esp¨¨ces (phase d'implantation - validation)
Nombre
Nombre de cas de :
Mois
d'analyses
Tb
TC
TV
Tb Tc
TbTv
Tc TV
lb Tc TV
BCT EL
BCT EL
BCT EL
BCT EL
BCT EL
BCT EL
BCT EL
Janvier
40
-
-
1
4
2
3
2
1
F¨¦vrier
40
-
-
- 10
2
1
4
Mars
39
-
-
3
3
1
2
1
Avril
40
3
1
1
7
6
1
Juin
37
-
-
5 4
5
1
1
Total
196
3
7 22
-
19
-
12
-
10
2
Tableau 5 : Chimior¨¦sistance,premi¨¨re partie : Diagnostic par BCT et par ELISA-Ag des trypanosomoses
chez des bovins trait¨¦s au B¨¦r¨¦nil puis au Samorin et suivis pendant 1 an
% positifs avec l'antig¨¨ne de :
Nombre
%BCT
Visite
d'analyses
positif
Tb
TC
TV
Tb Tc
TbTv
Tc Tv
Tb Tc TV
15 d¨¦cembre*
26
4
19
12
8
8
30 d¨¦cembre **
26
4
8
12
4
Janvier
25
12
16
F¨¦vrier
25
12
Mars
15
I
Avril
23
4
NI
Mai
21
19
Juin
21
5
5
5
Juillet
21
5
5
5
Ao ?t
22
9
9
9
Septembre
20
25
20
10
Octobre
19
11
16
26
11
5
Novembre
17
29
18
16
D¨¦cembre
17
12
12
6
6
* = Animaux trait¨¦s au B¨¦r¨¦nil
** = Traitement au Samorin.
Tableau 6 : R¨¦sultats d'ensemble des examens parasitologiques et des ¨¦preuves ELISA-Ag pour le diagnostic
des trypanosomoses (chimior¨¦sistance, deuxi¨¨me partie)
Nombre de cas selon le BCT et/ou l'ELISA-Ag
Visite
Nombre
d'analyses
Tb
TC
TV
Tb/TC
I%/n
TCITV
l%/TC/TV
Total
1
211
3
11
13
4
1
2
34
2
177
2
8
3
2
2
17
3
164
1
6
3
1
1
12
4
175
5
6
2
13
5
156
1
3
6
1
11
Total n
883
5
27
36
11
3
5
87
(%>
(0,6)
(3,O)
(4,l)
(1,2)
CO,31
(0,6)
(9,8)
.¡±
.,.
-
.-
-
.
..>
Tableau 7 : R¨¦sultats compar¨¦s et combin¨¦s du BCT et de l'ELISA-Ag dans les diff¨¦rents lots trait¨¦s
(chimior¨¦sistance, deuxi¨¨me partie)
Nombre de cas dans chaque lot selon BCT et l'ELISA-Ag
Visite
T
l-
Lot B¨¦r¨¦nil
Lot Samorin
Lot Ethidium
"Anal.
BCT
ELISA
coMB*
nAnal.
BCI
ELISA
coMB*
"Anal.
BCI
ELISA
cola*
107
60
11
14
44
5
13
73
60
6
6
44
9
87
33
2
3
44
2
4
90
50
2
2
35
1
2
65
56
2
3
35
-*
3
: COMB. = positif au BCT et/ou en ELISA-Ag.
.¡±
.,.
- .,.m.%-. -
. . . ,
-15-
Tableau 8 : Exemples d'kolution post-th¨¦rapeutique de l'antig¨¦n¨¦mie
(chimior¨¦sistance, deuxi¨¨me
partie)
Bovin No
554*
514*
544**
Visite
S¨¦ropositif avec l'antig¨¨ne de
1
Tb Tc
T V
TV Tc
2
Tb Tc
3% Tc TV
3
Tb Tc
0
Tb Tc TV
4
Tb Tc
TV
TC
5
Tb Tc
TV
0
c
* = Bovin du lot trait¨¦ au B¨¦r¨¦nil
* = Bovin du lot Samorin
k-k*
= Bovin du lot Ethidium
0 = Non examin¨¦.
-16-