COMPARAISON ENTRE L'IMMUNOFLUORESCENCE INDIRECTE ET...
COMPARAISON ENTRE L'IMMUNOFLUORESCENCE INDIRECTE
ET L'IMMUNOPEROXYDASE INDIRECTE DANS L'ETUDE
EPIZOOTIOLOGIQUE DES TRYPANOSOMIASES ANIMALES
Rxr S.M. TOURE *
RESUME
?%lg& de no~uses applications de 1'kmwnof~eudirectedans
le diagmstic des mladies parasitaires, ceyroc6d¨¦dediagnosticn'estH&isa-
blequedansleslaboratoiresdisposantdemicroscope
a &lairageul4~~~~iolet.
c
Lam¨¦tlmdedediagmsticdesTrypanosomimespsr
w e idrecte
sur antig¨¨nes figur¨¦s a l'avantage de pouvoir se faim avec un micmscope ¨¤
klairage ordinaire. Les deux techiques ont ¨¦t¨¦ essay6es dans l'¨¦tie de
s&umsdekminsNdam suspectsdeTrypanosomiaseetde
z&x udemnes.
Les p-kie suspects pr¨¦sentent souvent des &actims positives 3 des d$l.u-
tiens ¨¦lev¨¦es (102801, aussi bien en irmmnoflurrescence qu'en immo@ox@ase
indirectes;parcontre,
aucun z¨¦bu ne donne de r¨¦actim positive, avec les
deux &fuxies, entre les dilutions 1/320 et 1/1280.
Dansl'uneo~l~autrem&hode
il yadesdiff¨¦rencessignifj.catives
entre
z¨¦lxls et Ndama.
L'immm~xydase indirwte se r¨¦v¨¦le 1¨¦gkmen-t s*ieur ¨¤ l'innmo-
fluwescence.
Il semble alors tout indiqu¨¦ de poursuivre des recbx&es sur les applim-
tims pratiques de l'immno$m~ase tiirecte dans les enqu$tes sur les
7!rypamtises animsles .
l . . / . . .
.
* ISRA -Lafxrratoire natimal de 1'Elevage et de Recherches v¨¦t¨¦rinaires - Service
de Parasitologie
- B.P. 2057 IWWIWN (S¨¦n6gal)
COMPARAISON ENTRE L'IMMUNOFLUORESCENCE
INDIRECTE
ET L'IMMUNOPEROXYDASE INDIRECTE DANS L'ETUDE
EPIZOOTIOLOGIQUE DES TRYPANOSOMIASES ANIMALES
Par Saydil M. TOURE '
(avec la collalmration technique de M. M3ENGUE et T. DIEYE)
&l.e les tr$s nombreuses applications de la m%kde d'irrrmnoflw~~ence
~&c-tze dans le dia@ostic des mladies p.wasLta?res et de la Trypam%m' ?dSe
animleenpwticulier,
ce proc&¨¦ de diagnostic n'est pmtiqu¨¦ qu'assez rare-
--t dans les laboratoires africains. Il a conduit ¨¤ de b ?nS &sultats dans le
diagrmrtic et l~&tude 6pimotiologique de la Trypanosomiase bovine (TOURE et
al., 1975). Son utilisation pratique sur le terrain dans le d¨¦pistage de la
Trypanosomiase Maine a fait l'objet d'une note de G, DUVALJET et P. SALIOU
(1978) (2). Les applications en ¨¦pid¨¦miologie cit¨¦es dans la litt&atwe
scientifique sont presque toujours &alis¨¦es dans les laboratoires situ¨¦s dans
les capitales ou les tr¨¨s grandes villes. LRs raisons de cette restriction
tiennent en p;irtie ¨¤ la nkessit¨¦ d'utiliser un microscope ultraviolet qui
coWe sensiblemnt plus cher que les microscopes ¨¤ ¨¦clairage ordinaire. Il est
possible de pallier cet inconv¨¦nient en pratiquant la m&mde irsarnnoenzyrrr>logi-
que, tout en
utilisant des antig¨¨nes figurk. Cette m%mde a ¨¦-t6 r¨¦ceormerrt:
expkimnt~e, pourcequiestdelaTrypanasamiase~~,pjrCA3ldSa
&al
(1977) (1). Selon ces auteulis, elle a une aussi bonne sensibilit6 que l¡¯j.mmm-
flwresceme, tout en ne n¨¦cessitant qu'un ¨¦clairage courant.
Nous avons voulu l'exp&henter dans le diagmstic des Trypzmmiases
bovines, en la comparant ¨¤ l' ?mnunoflumescence indirecte.
. . . / . . .
.
. .
tc Lakm&oke national de 1'Elevage et de Recherches v¨¦t¨¦rinaires - I.S.R.A.
Service de Parasitologie - B.P. 2057 - DAKAR-HA?3 (S¨¦n¨¦gal).
- 2
MATERIEL ET METHODES
L'antig¨¨neest constitu¨¦ par un stockdeT&ypanom brucei]rrmcei
KARANG/67/LtERV/-,passe sur souris et r¨¦colt¨¦ pur sw DEAF-ceUuse selon la
&Me de LMHAM (3). Apr¨¨s concentration, les Trypanosommsont ¨¦tal¨¦s sur
lames et fix¨¦s ¨¤ l'ac¨¦tone,puis des cercles sont d¨¦limit¨¦s sur les lams.
l- L~inmmoflumescence est pratiqu¨¦e selon la n-&Me d¨¦crite ant¨¦rieurement
par lTXlRE (4). Le conjugu¨¦ utilis¨¦ est un antis¨¦rum total d*immnoglo~-
lines Ixwines @par¨¦ sur lapin et conjugu¨¦ ¨¤ l'isothiocyanate de fluores-
c¨¦ine (pr¨¦pwations faites au labxatoire).
2 - pourl"mmmopQ?oxydase Directe la m¨¦thde suivie est celle d¨¦crite par
CAILLIEZ (11, comportant no-t les ¨¦tapes suivantes :
- dilution des s¨¦rums en tampon de Coons (*),
- r¨¦action antig¨¨ne-anticorps petiant 60 minutes ¨¤ la temp¨¦rature ambiante,
- lavage 10 minutes par le tampon de Coons,
- r¨¦action avec un s¨¦mm de lapin anti-'xmmnoglobulines bovines conjugu¨¦
¨¤ la p&oxydase h$et dilu¨¦ ¨¤ 1/50, pendant 60 minutes,
- lavage deux fois par le tampon de Coons = 1 minute et dix minutes,
- r¨¦v¨¦lation par le r¨¦actif de (%ham-~wsky pendant 15 minutes.!'**),
- lavage ¨¤ l'eau distill¨¦e,
- nmtage en milieu gly&rin¨¦ et examenaumicroscope enlumi¨¨re blanche.
3 - ZR~cmparaisons~rtentsurdes
s¨¦ierumsdehvins NId~pmmmstd'une
r¨¦gion o¨´ s¨¦vissent les Trypanosomiases animles et/serums de z¨¦bus du
nord du S¨¦n¨¦gal, pr&m&s indemnes de Trypanosomiase.
4- Les m¨¦thodes d'interpr¨¦tation des r¨¦sultats sont expos¨¦es
ailleurs (4).
Nous retenons toujours la mymne g&m&trique des titres r¨¦ciproques MTR)
cm-ne ¨¦tant l'expression de l'aIzxx-&nce d'anticmps sp¨¦cifiques.
. .
. , . ,
C*c) T-n de bons, PH y,2 = t4?mnaZ SodGpe 2~6 g ; sod%wn C~~OPUXW . 85 g ;
ac&ie ch2orhgdrique
1 N : 80,s mg ; eau bEd$stSZZ&e : qsp 5 Z..Au m-i de
l'emploi ce tampon est d2Zu¨¦ d paz+Zus L3gaZes azur Z¡¯eau d2stXZZde et-m ajoute
0,3;.p.l00 d raZbumZne bovine. (~1 Miles Ltd. (***) R¨¦actif de Graham-fGu*nuwsky
d&vridino-3,3 - bensi&ne (tkbachtorhydratel : 100 mg ; twon MS - Hc ?? d
pH ?,6 : 200 ml ; eau oqjg¨¦n¨¦e ¨¤ 10 vo2umm3 : 2 mt.
-3
RESULTATS ET DISCUSSION
Lfinterptitation des r¨¦actions positives repose sur l'intensit¨¦ de la
coloration des Trypmosoms. kns l' ?preuve d'irmum&xydase les s&ums
positifs entra"ment une coloration kurWre qui se nG.ntient tr¨¨s nette rf&e
¨¤ des dilutions ¨¦lev¨¦es. L'intensit¨¦ des &actions dans l¡®immm fluorescence
est souvent plus difficile ¨¤ caract¨¦riser d'une dilution aux suivantes et la
lecture est entach¨¦e de subjectivit¨¦.
En r&u&, les &ultats suivants ont ¨¦t¨¦ obtenus :
.
1 : ti des Ndti suspects
.
. .
Titres r6ciproques
10
20
40
8 0
160 320
640
1280 Fg-
?YlTAL
I P I
1
1
2
1
1
2
1
8
7
2 4
IF1
2
1
4
0
1 1
0
6
4
1 9
MGI'R pour IPI = 57,68
MGTR pour IFI = 54,96
2 - s¨¦nrms des z¨¦bus non suspects
Titis r¨¦cipmges
10
20
40 80
160
320
640
1 280 Fg-
'IWlYL
I P I
3
4
3 4
1
0
0
0
5
20
IF1
4
3
0 1
1
0
0
0
11
20
MGTR pour IPI = 13,84
MGR pour IFI = 3,98.
Ces rkultats font appm&tre
a) que les Ndxm suspects pr&xntent sauvent des r¨¦actions positives ¨¤ des
dilutions ¨¦lev¨¦es (1/1280), aussi bien en innunofluorescence qp'en imwro-
.
. .
permydase xrkkrectes j par contre, aucun z&u ne donne de r&ction positiw
. . . / . . .
._
-4
avec les deux m¨¦thxles, en- les dilutions 1/320 et 1/1280 ;
.
b) avec l'une ou l'autre &thcxle il y a des diff¨¦rences significatives entre
les z¨¦xls et les Ndam ;
c)l'immo~mxydase indirecte se r&¨¦lel¨¦g¨¨rementsup&ieure
al'irmauir>-
fluoresc~e.
Dans ces conditions, il mus semble tout tiiqu6 de ~ursuivre des
rechemhes sur les applications pmtiques de la m&lwde d'imrMop&xydase
irdirecte dans les enqu¨ºtes sur les Trypanosomiases animales.
. . . / . . .
.BIBLIOGRAPH.IE
1 - CAILLIEZ (M.1, KXIPIN (F.1 et al. - Valeur compar¨¦e de 1"3.mimflu~escence
et de 1"xnmnoenzyrr ?logie sud? antig¨¨ne fi& dans le diagmstic immnolo-
gique des 'Ikypamscmiases africaines. Bulletin de la Soci¨¦ti-'de pathologie
emtique, 1977, 70 (4) : 391-398.
2 - DUVALLET CG.1 et SALIOU (P.1 - Utilisation sur le termin de la technique
dtinmx&l~scence indirecte pour le d¨¦pistage de la Trypamsomiase
humaine. M¨¦decine tmpicale, 1978, 38 (1) : 69-73.
3 - LANHAM (S.M.) - The separation of trypamsoms frcxn blti on an ?on-exchange
ColulIlIls - Trians, Royal Society tmp. Med. Hyg., 1968, 62 Cl) : 4-S.
4 - TWJRE (S.M.), SEYDI CM.1 et al. - Valeur de la &thde d"3nmmofluorescence
indirecte dans le diagnostic des Qypamsomiases bovines et leur ¨¦tude
¨¦pizootiologique. Rev. Elev. M¨¦d. V¨¦t. Pays trop., 1975, 28 (4) : 463-472.
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ET L'IMMUNOPEROXYDASE INDIRECTE DANS L'ETUDE
EPIZOOTIOLOGIQUE DES TRYPANOSOMIASES ANIMALES
Rxr S.M. TOURE *
RESUME
?%lg& de no~uses applications de 1'kmwnof~eudirectedans
le diagmstic des mladies parasitaires, ceyroc6d¨¦dediagnosticn'estH&isa-
blequedansleslaboratoiresdisposantdemicroscope
a &lairageul4~~~~iolet.
c
Lam¨¦tlmdedediagmsticdesTrypanosomimespsr
w e idrecte
sur antig¨¨nes figur¨¦s a l'avantage de pouvoir se faim avec un micmscope ¨¤
klairage ordinaire. Les deux techiques ont ¨¦t¨¦ essay6es dans l'¨¦tie de
s&umsdekminsNdam suspectsdeTrypanosomiaseetde
z&x udemnes.
Les p-kie suspects pr¨¦sentent souvent des &actims positives 3 des d$l.u-
tiens ¨¦lev¨¦es (102801, aussi bien en irmmnoflurrescence qu'en immo@ox@ase
indirectes;parcontre,
aucun z¨¦bu ne donne de r¨¦actim positive, avec les
deux &fuxies, entre les dilutions 1/320 et 1/1280.
Dansl'uneo~l~autrem&hode
il yadesdiff¨¦rencessignifj.catives
entre
z¨¦lxls et Ndama.
L'immm~xydase indirwte se r¨¦v¨¦le 1¨¦gkmen-t s*ieur ¨¤ l'innmo-
fluwescence.
Il semble alors tout indiqu¨¦ de poursuivre des recbx&es sur les applim-
tims pratiques de l'immno$m~ase tiirecte dans les enqu$tes sur les
7!rypamtises animsles .
l . . / . . .
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* ISRA -Lafxrratoire natimal de 1'Elevage et de Recherches v¨¦t¨¦rinaires - Service
de Parasitologie
- B.P. 2057 IWWIWN (S¨¦n6gal)
COMPARAISON ENTRE L'IMMUNOFLUORESCENCE
INDIRECTE
ET L'IMMUNOPEROXYDASE INDIRECTE DANS L'ETUDE
EPIZOOTIOLOGIQUE DES TRYPANOSOMIASES ANIMALES
Par Saydil M. TOURE '
(avec la collalmration technique de M. M3ENGUE et T. DIEYE)
&l.e les tr$s nombreuses applications de la m%kde d'irrrmnoflw~~ence
~&c-tze dans le dia@ostic des mladies p.wasLta?res et de la Trypam%m' ?dSe
animleenpwticulier,
ce proc&¨¦ de diagnostic n'est pmtiqu¨¦ qu'assez rare-
--t dans les laboratoires africains. Il a conduit ¨¤ de b ?nS &sultats dans le
diagrmrtic et l~&tude 6pimotiologique de la Trypanosomiase bovine (TOURE et
al., 1975). Son utilisation pratique sur le terrain dans le d¨¦pistage de la
Trypanosomiase Maine a fait l'objet d'une note de G, DUVALJET et P. SALIOU
(1978) (2). Les applications en ¨¦pid¨¦miologie cit¨¦es dans la litt&atwe
scientifique sont presque toujours &alis¨¦es dans les laboratoires situ¨¦s dans
les capitales ou les tr¨¨s grandes villes. LRs raisons de cette restriction
tiennent en p;irtie ¨¤ la nkessit¨¦ d'utiliser un microscope ultraviolet qui
coWe sensiblemnt plus cher que les microscopes ¨¤ ¨¦clairage ordinaire. Il est
possible de pallier cet inconv¨¦nient en pratiquant la m&mde irsarnnoenzyrrr>logi-
que, tout en
utilisant des antig¨¨nes figurk. Cette m%mde a ¨¦-t6 r¨¦ceormerrt:
expkimnt~e, pourcequiestdelaTrypanasamiase~~,pjrCA3ldSa
&al
(1977) (1). Selon ces auteulis, elle a une aussi bonne sensibilit6 que l¡¯j.mmm-
flwresceme, tout en ne n¨¦cessitant qu'un ¨¦clairage courant.
Nous avons voulu l'exp&henter dans le diagmstic des Trypzmmiases
bovines, en la comparant ¨¤ l' ?mnunoflumescence indirecte.
. . . / . . .
.
. .
tc Lakm&oke national de 1'Elevage et de Recherches v¨¦t¨¦rinaires - I.S.R.A.
Service de Parasitologie - B.P. 2057 - DAKAR-HA?3 (S¨¦n¨¦gal).
- 2
MATERIEL ET METHODES
L'antig¨¨neest constitu¨¦ par un stockdeT&ypanom brucei]rrmcei
KARANG/67/LtERV/-,passe sur souris et r¨¦colt¨¦ pur sw DEAF-ceUuse selon la
&Me de LMHAM (3). Apr¨¨s concentration, les Trypanosommsont ¨¦tal¨¦s sur
lames et fix¨¦s ¨¤ l'ac¨¦tone,puis des cercles sont d¨¦limit¨¦s sur les lams.
l- L~inmmoflumescence est pratiqu¨¦e selon la n-&Me d¨¦crite ant¨¦rieurement
par lTXlRE (4). Le conjugu¨¦ utilis¨¦ est un antis¨¦rum total d*immnoglo~-
lines Ixwines @par¨¦ sur lapin et conjugu¨¦ ¨¤ l'isothiocyanate de fluores-
c¨¦ine (pr¨¦pwations faites au labxatoire).
2 - pourl"mmmopQ?oxydase Directe la m¨¦thde suivie est celle d¨¦crite par
CAILLIEZ (11, comportant no-t les ¨¦tapes suivantes :
- dilution des s¨¦rums en tampon de Coons (*),
- r¨¦action antig¨¨ne-anticorps petiant 60 minutes ¨¤ la temp¨¦rature ambiante,
- lavage 10 minutes par le tampon de Coons,
- r¨¦action avec un s¨¦mm de lapin anti-'xmmnoglobulines bovines conjugu¨¦
¨¤ la p&oxydase h$et dilu¨¦ ¨¤ 1/50, pendant 60 minutes,
- lavage deux fois par le tampon de Coons = 1 minute et dix minutes,
- r¨¦v¨¦lation par le r¨¦actif de (%ham-~wsky pendant 15 minutes.!'**),
- lavage ¨¤ l'eau distill¨¦e,
- nmtage en milieu gly&rin¨¦ et examenaumicroscope enlumi¨¨re blanche.
3 - ZR~cmparaisons~rtentsurdes
s¨¦ierumsdehvins NId~pmmmstd'une
r¨¦gion o¨´ s¨¦vissent les Trypanosomiases animles et/serums de z¨¦bus du
nord du S¨¦n¨¦gal, pr&m&s indemnes de Trypanosomiase.
4- Les m¨¦thodes d'interpr¨¦tation des r¨¦sultats sont expos¨¦es
ailleurs (4).
Nous retenons toujours la mymne g&m&trique des titres r¨¦ciproques MTR)
cm-ne ¨¦tant l'expression de l'aIzxx-&nce d'anticmps sp¨¦cifiques.
. .
. , . ,
C*c) T-n de bons, PH y,2 = t4?mnaZ SodGpe 2~6 g ; sod%wn C~~OPUXW . 85 g ;
ac&ie ch2orhgdrique
1 N : 80,s mg ; eau bEd$stSZZ&e : qsp 5 Z..Au m-i de
l'emploi ce tampon est d2Zu¨¦ d paz+Zus L3gaZes azur Z¡¯eau d2stXZZde et-m ajoute
0,3;.p.l00 d raZbumZne bovine. (~1 Miles Ltd. (***) R¨¦actif de Graham-fGu*nuwsky
d&vridino-3,3 - bensi&ne (tkbachtorhydratel : 100 mg ; twon MS - Hc ?? d
pH ?,6 : 200 ml ; eau oqjg¨¦n¨¦e ¨¤ 10 vo2umm3 : 2 mt.
-3
RESULTATS ET DISCUSSION
Lfinterptitation des r¨¦actions positives repose sur l'intensit¨¦ de la
coloration des Trypmosoms. kns l' ?preuve d'irmum&xydase les s&ums
positifs entra"ment une coloration kurWre qui se nG.ntient tr¨¨s nette rf&e
¨¤ des dilutions ¨¦lev¨¦es. L'intensit¨¦ des &actions dans l¡®immm fluorescence
est souvent plus difficile ¨¤ caract¨¦riser d'une dilution aux suivantes et la
lecture est entach¨¦e de subjectivit¨¦.
En r&u&, les &ultats suivants ont ¨¦t¨¦ obtenus :
.
1 : ti des Ndti suspects
.
. .
Titres r6ciproques
10
20
40
8 0
160 320
640
1280 Fg-
?YlTAL
I P I
1
1
2
1
1
2
1
8
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IF1
2
1
4
0
1 1
0
6
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1 9
MGI'R pour IPI = 57,68
MGTR pour IFI = 54,96
2 - s¨¦nrms des z¨¦bus non suspects
Titis r¨¦cipmges
10
20
40 80
160
320
640
1 280 Fg-
'IWlYL
I P I
3
4
3 4
1
0
0
0
5
20
IF1
4
3
0 1
1
0
0
0
11
20
MGTR pour IPI = 13,84
MGR pour IFI = 3,98.
Ces rkultats font appm&tre
a) que les Ndxm suspects pr&xntent sauvent des r¨¦actions positives ¨¤ des
dilutions ¨¦lev¨¦es (1/1280), aussi bien en innunofluorescence qp'en imwro-
.
. .
permydase xrkkrectes j par contre, aucun z&u ne donne de r&ction positiw
. . . / . . .
._
-4
avec les deux m¨¦thxles, en- les dilutions 1/320 et 1/1280 ;
.
b) avec l'une ou l'autre &thcxle il y a des diff¨¦rences significatives entre
les z¨¦xls et les Ndam ;
c)l'immo~mxydase indirecte se r&¨¦lel¨¦g¨¨rementsup&ieure
al'irmauir>-
fluoresc~e.
Dans ces conditions, il mus semble tout tiiqu6 de ~ursuivre des
rechemhes sur les applications pmtiques de la m&lwde d'imrMop&xydase
irdirecte dans les enqu¨ºtes sur les Trypanosomiases animales.
. . . / . . .
.BIBLIOGRAPH.IE
1 - CAILLIEZ (M.1, KXIPIN (F.1 et al. - Valeur compar¨¦e de 1"3.mimflu~escence
et de 1"xnmnoenzyrr ?logie sud? antig¨¨ne fi& dans le diagmstic immnolo-
gique des 'Ikypamscmiases africaines. Bulletin de la Soci¨¦ti-'de pathologie
emtique, 1977, 70 (4) : 391-398.
2 - DUVALLET CG.1 et SALIOU (P.1 - Utilisation sur le termin de la technique
dtinmx&l~scence indirecte pour le d¨¦pistage de la Trypamsomiase
humaine. M¨¦decine tmpicale, 1978, 38 (1) : 69-73.
3 - LANHAM (S.M.) - The separation of trypamsoms frcxn blti on an ?on-exchange
ColulIlIls - Trians, Royal Society tmp. Med. Hyg., 1968, 62 Cl) : 4-S.
4 - TWJRE (S.M.), SEYDI CM.1 et al. - Valeur de la &thde d"3nmmofluorescence
indirecte dans le diagnostic des Qypamsomiases bovines et leur ¨¦tude
¨¦pizootiologique. Rev. Elev. M¨¦d. V¨¦t. Pays trop., 1975, 28 (4) : 463-472.
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