REPUBLIQUE DU SENEGAL MINISTERE DU DEVELOPPEMENT...
REPUBLIQUE DU SENEGAL
MINISTERE DU DEVELOPPEMENT RURAL
. DEPARTEMENT DE RECHERCHES SUR LES
PRODUCTIONS ET LA SANTE ANIMALES
INSTITUT SENEGALAIS DE RECHERCHES
AGRICOLES (I.S.R.A.)
4
LABORATOIRE NATIONAL DE L¡¯ELEVAGE
ET DE RECHERCHES VETERINAIRES
B.P. 2057
D A K A R - HANN
i)/ 0 T E
T E C H N I Q U E
TECHNIQUE DES PRELEVEME@JTS FOUR
ANALYSES YICROBIOLOGlQIUES
Par Dr M. KONTE
REF. No 061 /MICROBIO.
SEPTEMBRE 1988.

R E S U M E
Note technique ¨¤ l¡¯attention des agents de IlElevage dans l¡¯optique de
l¡¯harmonisation et de l¡¯am¨¦lioration des techniques de pr¨¦l¨¨vements destin¨¦s
au diagnostic de laboratoire.

TECHNIQUE DES PRELEVEMENTS POUR ANALYSES
BACTERIOLOGIQUE ET VIROLOCIQUE
1. S A N G
A. Sang pour pr¨¦paration de s¨¦rum
- But :
S¨¦rologie, recherche d¡±anticorps sp¨¦cifiques.
- Mat¨¦riel
¡°Vacutainer¡±
(ou assimil¨¦s) ou seringue st¨¦rile, flacons fermant
herm¨¦tiquement.
- Techniques
. Recueillir le sang de pr¨¦f¨¦rence ¨¤ l¡¯aide de vacutainer par ponction de la
veine jugulaire, ¨¤ d¨¦faut utiliser une seringue pr¨¦alablement st¨¦rilis¨¦e ;
. Laisser le sang coaguler ¨¤ la temp¨¦rature ambiante : 3 ¨¤ 4 heures ;
. La r¨¦traction compl¨¨te durant un repos suppl¨¦mentaire d¡¯environ 4 heures
est souvent facilit¨¦e par un d¨¦collage ¨¤ l¡¯aide de fil de fer par exemple ;
. Recueillir le s¨¦rum par d¨¦cantation dans un flacon bouchant herm¨¦tiquement
OU mieux apr¨¨s centrifugation ;
. Inscrire sur le flacon les ¨¦l¨¦ments d¡¯identification ;
. Conserver les flacons de s¨¦rum au r¨¦frigkrateur ou au cong¨¦lateur.
- Exn¨¦dition
Sous froid (en glaci¨¨re ou boite isotherme)
N.B. : Le s¨¦rum peut ¨ºtre congel¨¦, mais jamais le sang (risque d¡¯h¨¦molyse).
Joindre une fiche de renseignements,
. . . I . . .

- 2
B. Sang pour h¨¦moculture
- But
Isolement de germes bact¨¦riens.
- Mat¨¦riel
Vacutainer (de pr¨¦f¨¦rence) avec anticoagulant ; flacons ¨¤ bouchon ; un
anticoagulant (citrate de soude, h¨¦parine.. .), exemple : 3 ml de citrate de
soude ¨¤ 2 % pour 10 ml de sang ; bo?te isotherme.
- Technique
. Faire plusieurs pr¨¦l¨¨vements espac¨¦s de quelques heures (d¨¦charge fugace
de bact¨¦ries dans la circulation) ;
. Effectuer les prises de sang en phase d¡¯hyperthermie ;
. Pr¨¦lever 10 ¨¤ 40 ml de sang par ponction aseptiques ¨¤ la jugulaire sur
animal ¨¤ je?n.
- Exp¨¦dition
Ne pas congeler. Envoyer sous froid accompagn¨¦ d¡¯une fiche de rensei-
gnements.
. . . I . . .

- 3
I 1. ORGANES
A. Orqanes thoracique et abdominale
- But
Diagnostic des maladies microbiennes par isolement ¨¤ partir d¡¯organes
l¨¦s¨¦s : poumon, foie, rate, reins, ganglions, coeur.
- Mat¨¦riel
Couteau d¨¦sinfect¨¦, flacons st¨¦riles ¨¤ large ouverture fermant herm¨¦tique-
ment, sacs en plastique,
r¨¦frig¨¦rateur,
bolte isotherme.
- Technique
. Effectuer les pr¨¦l¨¨vements imm¨¦diatement apr¨¨s la mort de l¡¯animal, ne jamais
attendre au del¨¤ de 6 heures apr¨¨s la mort si ce n¡¯est le cadavre d¡¯un petit
animal conserv¨¦ au froid ;
. Pr¨¦lever ganglions, fragment de foie ou de poumon ; coeur et reins restent
entiers ;
. Les placer dans les flacons ou les sacs en plastique, et conserver au
r¨¦frig¨¦rateur.
N . B . : Toutes les fois que cela est possible, utiliser le cadavre frais d¡¯animaux
sacrifi¨¦s en p¨¦riode agonique ; pr¨¦lever dans des conditions aseptiques
et utiliser du mat¨¦riel st¨¦rilis¨¦.
- Exp¨¦dition
Sous froid. Joindre une fiche de renseignements.
B. Cerveau
- But
Diagnostic de la rage.
. . . / . . .

- 4
- Mat¨¦riel
Couperet, marteau, bistouri ou couteau, gants de caoutchouc, 2 flacons
¨¤ large ouverture fermant herm¨¦tiquement, formol ¨¤ 12 %, glyc¨¦rine ¨¤ 50 %,
sparadrap.
- Technique
. Travailler avec soins pour ¨¦viter blessures et contaminations ;
. Enlever peau et muscle du haut du cr?ne, faire 3 incisions pour enlever
la calotte cr?nienne (la premi¨¨re en travers du cr?ne en arri¨¨re des yeux,
les deux autres de chaque c?t¨¦ du cr?ne) ;
. Pr¨¦lever le cerveau et s¨¦parer les deux moiti¨¦s ;
. Mettre une moiti¨¦ dans un flacon contenant le formol ¨¤ 12 % et l¡¯autre moiti¨¦
dans un flacon contenant de l¡¯eau glyc¨¦rin¨¦e ¨¤ 50 % ;
. D¨¦sinfecter soigneusement tout le mat¨¦riel ayant servi ¨¤ faire l¡¯autopsie ;
. Ne jamais congeler les pr¨¦l¨¨vements.
- Exb¨¦dition
. Fermer herm¨¦tiquement les flacons avec du sparadrap.
. Placer les flacons dans une boite rigide contenante de la sciure de bois,
du coton, du papier ou du sable.
. Joindre une fiche de renseignements.
. Envoyer au laboratoire en indiquant sur l¡¯¨¦tiquette ¡°Pr¨¦l¨¨vement pour diagnos-
tic de la rage¡±.
. . . / . . .

- 5
C. Os long
- But
Diagnostic des charbons et des pasteurelloses.
- Mat¨¦riel
Couteau, r¨¦frig¨¦rateur,
bo?te isotherme.
- Technique
. Pr¨¦lever l¡¯os long d¡¯un des membres, de pr¨¦f¨¦rence m¨¦tacarpe ou m¨¦tatarse ;
. Enlever tous les fragments de chair ;
. L¡¯envelopper ¨¤ sec dans un linge propre ou dans un sac en plastique ;
. Conserver au r¨¦frig¨¦rateur.
- Exp¨¦dition
Si l¡¯os doit voyager longtemps, l¡¯emballer dans du sel ou sous protection
du froid ; joindre une fiche de renseignements.
. . . I . . .

- 6
III. P U S
- But
Isolement de bact¨¦ries ou de virus.
- Mat¨¦riel
Seringue st¨¦rile, tubes ou flacons st¨¦riles bouchant herm¨¦tiquement,
spatule st¨¦rile.
- Technique
. Abc¨¦s ouvert : proc¨¦der par nettoyage de la plaie puis grattage ; r¨¦aliser
les pr¨¦l¨¨vements le plus st¨¦rilement possible
. Abc¨¦s ferm¨¦ : antisepsie cutan¨¦e, ponction avec une aiguille de diam¨¨tre
sup¨¦rieur ¨¤ 1 mm.
- Exn¨¦dition
Envoyer le pus dans la s¨¦ringue de pr¨¦l¨¨vement apr¨¨s courbure de l¡¯aiguille,
sous froid, ou le d¨¦poser dans un tube ou flacon bouchant herm¨¦tiquement.
Joindre une fiche de renseignements.
. . . / . . .

- 7
I V . L A I T
- B u t
isolement de bact¨¦ries ou de virus.
- Mat¨¦riel
Tubes ¨¤ vis, flacons bouchant herm¨¦tiquement, st¨¦riles, alcool.
- Technique
. Laver et s¨¦cher compl¨¨tement la mamelle ; aucun liquide ne doit s¡¯¨¦couler
sur le trayon ;
. Pr¨¦lever s¨¦par¨¦ment les 4 quartiers ;
. D¨¦sinfecter l¡¯extr¨¦mit¨¦ du trayon ¨¤ l¡¯alcool ¨¤ 70¡¯ ; il est important d¡¯insister
sur l¡¯orifice du canal du trayon ;
. Le flacon st¨¦rile est ouvert au dernier moment, le bouchon ¨¦tant tenu pour
prot¨¦ger le flacon qui restera le plus possible ¨¤ l¡¯horizontal ;
. Les premiers jets de lait sont ¨¦limin¨¦s et 10 ml de lait sont pr¨¦lev¨¦s en
¨¦vitant de bouger le flacon qui sera imm¨¦diatement ferm¨¦ sans ¨ºtre d¨¦plac¨¦.
- Exp¨¦dition
Sous froid mais non congel¨¦.
Joindre une fiche de renseignements.
. . . / . . .

- 8
V. AVORTEMENTS
- B u t
Isolement de bact¨¦ries ou de virus ; s¨¦rologie.
- Mat¨¦riel
Vacutainer,
¨¦couvillons st¨¦riles, flacons st¨¦riles ¨¤ large ouverture ou
sacs en plastique st¨¦riles.
- Techniaue
. Pr¨¦lever du sang pour pr¨¦paration de s¨¦rum (selon la m¨¦thode classique)
sur la femelle ayant avort¨¦ ;
. Pr¨¦lever les s¨¦cr¨¦tions ut¨¦rines (par ¨¦couvillonnage du col ut¨¦rin), les
enveloppes ou fragments d¡¯enveloppes, les avortons ou leurs organes
(estomac, rate, os long d¨¦sarticul¨¦). ;
N-B : Op¨¦rer avec soins pour ¨¦viter contamination ou propagation du contage.
- Exp¨¦dition
Sous froid, congel¨¦s. (¨¤ l¡¯exclusion du sang) ou non ; joindre une fiche
de renseignements,
..a /.
. .

- 9
VI. ECOUVILLONNAGES NASAL ET OCULAIRE
- B u t
Isolement de bact¨¦ries ou virus ¨¤ tropisme respiratoire (agents de pneumo-
pathies) ou oculaire.
- Mat¨¦riel
Ecouvillons sur tige en plastique ou en m¨¦tal, de pr¨¦f¨¦rence ¨¤ tige en
bois, mat¨¦riel de froid.
- Technique
. Ecouvi I lonnage
: ne pas r¨¦aliser le pr¨¦l¨¨vement au stade jetage muco-purulent
ou purulent (le virus ¨¦ventuel n¡¯est plus retrouv¨¦ dans le jetage, et seule-
ment la flore banale bact¨¦rienne subsistera en plus de bact¨¦ries de sunrinfec-
tion ;

. Enfoncer l¡¯¨¦couvillon le plus profond¨¦ment possible dans les cavit¨¦s nasales.
. Ecouvillonnage oculaire : introduire l¡¯¨¦couvillon dans le cul-de-sac conjontival
inf¨¦rieur,
sans toucher la face ext¨¦rieure de la paupi¨¨re.
- Exp¨¦dition
Sous froid en ¨¦vitant tout dess¨¨chement des pr¨¦l¨¨vements si usage non
fait des milieux de transport du genre ¡°portagerm ND¡± de BioM¨¦rieux ¡°T.G.V.
ND¡± de l¡¯Institut Pasteur Production, ¡°culturet Pak ND¡± de Polylabo.
Joindre une fiche de renseignements.
. . . l . . .

- 10
VII. FECES
- But
Isolement de bact¨¦rie (Salmonelles, autres ent¨¦robact¨¦ries bacille de
Johne.. . ) et de virus (Coronavirus, Rotavirus).
- Mat¨¦riel
Ecouvillons st¨¦riles,
tubes ou flacons st¨¦riles bouchant herm¨¦tiquement,
gants en caoutchouc st¨¦riles.
- Technique
Pour analyses bact¨¦riologique : pr¨¦l¨¨vement dans ampoule rectale ou rectum
ou d¨¨s leur ¨¦mission (60 ¨¤ 80 ml de pr¨¦l¨¨vement ;
Lors de diarrh¨¦e aigu?, pr¨¦lever dans les heures qui suivent l¡¯apparition
des sympt?mes ;
Ne pas congeler, utilisation parfois de milieu de transport sp¨¦cial ;
Envoie possible d¡¯anses intestinales ligatur¨¦es pr¨¦lev¨¦es en r¨¦gions les plus
liquides ;

Pour analyse virologique, proc¨¦der par ¨¦couvillonnage rectal ; la cong¨¦la-
tion est possible ; utiliser un milieu de transport (Hanks).
- Exp¨¦dition
Sous froid. Joindre une fiche de renseignements.

- 11
VIII. URINES
- But
I solement de bact¨¦ries.
- Mat¨¦riel
Flacons st¨¦riles bouchant herm¨¦tiquement.
- Technique
. Op¨¦rer par sondage ou pr¨¦lever lors de miction apr¨¨s asepties 10 ¨¤ 20 ml
d¡¯urine.
- Exp¨¦dition
Envoie rapide, sous froid (4OC).
Joindre unefiche de renseignements.
IX. LIQUIDES D¡¯EPANCHEMENT
- B u t
Pr¨¦l¨¨vement de liquide pleural, p¨¦riton¨¦al, p¨¦ricardique, pour isolement
microbien.
- Mat¨¦riel
Seringues et flacons st¨¦riles.
- Technique
. Lymphe thoracique : ponction aseptique de la cavit¨¦ thoracique entre la 7¨¨me
et la 8¨¨me c?te ; d¨¦poser le liquide dans le flacon st¨¦rile ;
. Liquide p¨¦riton¨¦al : pr¨¦lever par ponction aseptique dans la cavit¨¦ abdomi-
nale et d¨¦poser dans le flacon st¨¦rile.
- Exp¨¦dition : Sous froid. Joindre une fiche de renseignements.

- 12
FICHE DE RENSEIGNEMENTS
Le pr¨¦l¨¨vement doit ¨ºtre imp¨¦rativement accompagn¨¦ d¡¯une fiche de rensei-
gnements d¨¦taill¨¦e, ¨¦tablie en 3 exemplaires : un exemplaire est conserv¨¦ par
I¡¯exp¨¦di teur, le second est adress¨¦ directement au laboratoire par les voies
les plus rapides, le troisi¨¨me est plac¨¦ dans le colis contenant le pr¨¦l¨¨vement,
YODELE DE FICHES
No de r¨¦f¨¦rence :
Nom, fonction et adresse de l¡¯exp¨¦diteur :
Date et lieu de pr¨¦l¨¨vement :
Intervalle de temps entre le moment de la mort et celui du pr¨¦l¨¨vement :
Esp¨¨ce, sexe, ?ge de l¡¯animal sur lequel a ¨¦t¨¦ effectu¨¦ le pr¨¦l¨¨vement :
Nature du pr¨¦l¨¨vement :
Nature de la recherche demand¨¦e :
R¨¦sultat de l¡¯examen :
- de l¡¯animal sur lequel a ¨¦t¨¦ effectu¨¦ le pr¨¦l¨¨vement :
- des autres animaux du troupeau pr¨¦sentant apparemment la m¨ºme maladie :
R¨¦sultat de l¡¯autopsie :
Maladie suspect¨¦e :
Effectif du troupeau o¨´ a ¨¦t¨¦ effectu¨¦ le pr¨¦l¨¨vement :
Nombre de malades dans le troupeau ¨¤ la date du pr¨¦l¨¨vement (malades actuels)
en pr¨¦cisant si.. la morbidit¨¦ est en relation avec certains facteurs (?ge, sexe,
e t c . . . )
Nombre de morts dans le troupeau ¨¤ la date du pr¨¦l¨¨vement :
Date d¡¯exp¨¦dition :
Observations (constatations ou renseignements pouvant pr¨¦senter un int¨¦r¨ºt
pour l¡¯orientation du diagnostic).

- 13
Nature du pr¨¦l¨¨vement en fonction de la maladie suspect¨¦e
P R E L E V E M E N T S
Maladies suspect¨¦es
Sang
S¨¦rum
Ganglions Os long
Divers
1Maladies bact¨¦riennes
P¨¦ripneumonie
+
Lymphe thora-
cique
Tuberculose
-t
Farcin du boeuf
+
Paratuberculose
Produit raclage
muqueuse rec-
tale ; f¨¦c¨¨s, in-
testin gr¨ºle, gan

glion m¨¦sent¨¦rique
Charbon bact¨¦ridien
+
Rate
Charbon symptomatique
+
1 Muscle ¨¤ tumeur
Pasteurelloses
+
Fragment tissu
pulmonaire

Botulisme
Foie, contenu
stomacal

Streptothricose
Cro?tes
Brucet lose
+
Cotyl¨¦dons
List¨¦riose
Cerveau, avorte
ton, cotyl¨¦don

Leptospi rose
+
Avorton
Campylobact¨¦riose =
Mucus vaginal e¡¯
Vibriose
pr¨¦putial, avorton
Chlamydiose
+
Cotyl¨¦dons
Fi¨¨vre Q
+
Cotyl¨¦dons
Syndromes divers : mammites
Lait
m¨¦trite
Ecoulement,
vaginal

diarrh¨¦e
f¨¦c¨¨s
abc¨¨s
Pus
arthrite
liquide synovl.
Maladies virales
Peste bovine et maladies
+
+
apparentes
Peste porcine
+
+
Peste ¨¦quine
+
l--
. . . /. . .

- 14
Peste des petits ruminants
Rate
Ecthyma contagieux
Cro?tes labiales,
muqueuse gingi-

vale
Clavel¨¦e
Cro?tes, v¨¦sico-
pustules

Fi¨¨vres aphteuse
Liquide v¨¦sicu- :
laire ¨¦pith¨¦lium
lingual et labial

Blue tongue
Rate
Virus ¨¤ tropisme respira-
Ecouvillonnage
toi re
nasal pour ense-
mencement imm¨¦-
diat

Maladies aviaires
Sujets agonisants
cadavres frais

entiers