INSTITUT D¡¯ELEVAGE ET DE MEDECINE VETERINAIRE DES...
INSTITUT D¡¯ELEVAGE ET DE MEDECINE
VETERINAIRE DES PAYS TROPICAUX
REVUE D¡¯ ?LEVAGE
ET DE
M ?DECINE V ?T ?RINAIRE
DES PAYS TROPICAUX
Etude immuno¨¦lectrophor¨¦tique du s¨¦rum
de z¨¦bu Gobra au S¨¦n¨¦gal
Possibilit¨¦ de variations saisonni¨¨res
qualitatives
par J. ROUMEGOUX et M. P. DOUTRE
Tome XXIV (nouvelle s¨¦rie)
No 2 - 1971
tit
VIGOT FRERES, EDITEURS
23, rue de I¡¯Ecole-de-M¨¦decine, Paris-VI¡±
Rev. Elev. M¨¦d. v¨¦t. Pays trop., 3971, 24 (2): 203-13
?tude immuno¨¦lectrophor¨¦tique du s¨¦rum
de z¨¦bu Gobra au S¨¦n¨¦gal
Possibilit¨¦ de variations saisonni¨¨res qualitatives
par J. ROUMEGOUX et M. P. DOUTRE (*)
RESUME
Apr¨¨s avoir fourni une description des techniques employ¨¦es : immu-
no¨¦lectrophor¨¨se et gel-filtration sur colonne de Sephadex G 200., les
auteurs pr¨¦sentent l¡¯image immuno¨¦lectrophor¨¦tique du s¨¦rum de z¨¦bu
Gobra, en pr¨¦cisant la nature des 35 4ignes de pr¨¦cipitation obtenues.
L¡¯¨¦tude se termine par des consid¨¦rations sur la possibilit¨¦ d¡¯¨¦ventuelles
variations saisonni¨¨res des prot¨¦ines s¨¦riques. Les r¨¦sultats ne laissent
appara ?tre aucune diff¨¦rence d¡¯ordre qualitatif entre des pr¨¦l¨¨vements
recueillis en fin de saison humide et ceux r¨¦colt¨¦s en fin de saison s¨¨che.
En particulier, les trois immunoglobulines : IgG, IgM et IgA se retrouvent
sur toutes les images immuno¨¦lectrophor¨¦tiques de l¡¯ensemble des s¨¦rums
utilis¨¦s au cours du pr¨¦sent travail. Par contre, sur le plan quantitatif, on
note une diminution significative du taux des prot¨¦ines totales pour les
s¨¦rums obtenus en fin de saison s¨¨che. Cette derni¨¨re observation est
confirm¨¦e par une ¨¦tude ¨¦lectrophor¨¦tique qui doit faire l¡¯objet d¡¯une
publication prochaine.
En 1965, au Tchad, PROVOST, BORRE-
l¡¯¨¦tude qualitative ont ¨¦t¨¦ rapport¨¦s dans la
DON et QUEVAL mettent en ¨¦vidence une
pr¨¦sente publication.
hypogammaglobulin¨¦mie essentielle chez des
En 1968, I.S.WARD-COX, en Afrique du
z¨¦bus d¡¯Afrique centrale (15).
Sud, montre l¡¯apparition progressive des immu-
A la suite de ces observations, une ¨¦tude
noglobulines chez le veau nouveau-n¨¦ (19). Le
a ¨¦t¨¦ effectu¨¦e au S¨¦n¨¦gal sur le z¨¦bu Gobra.
m¨ºme auteur, en 1969, r¨¦v¨¨le par immuno¨¦lec-
trophor¨¨se une agammaglobulin¨¦mie chez quel-
Ce travail a ¨¦t¨¦ r¨¦alis¨¦ en deux temps :
ques bovins (20).
1. Qualitativement : en utilisant conjointement
En 1969, W. PENHALE et G. CHRISTIE
la chromatographie sur colonne de Sephadex
comparent au cours d¡¯une ¨¦tude quantitative
G 200 et l¡¯immuno¨¦lectrophor¨¨se.
le taux des immunoglobulines s¨¦riques chez les
2. Quantitativement : par l¡¯analyse ¨¦lectropho-
bovins d¡¯Europe (races : Ayrshire, Frisonne,
r¨¦tique sur ac¨¦tate de cellulose.
Jersey, Guernesey et Shorthorn) et chez le z¨¦bu.
Ce dernier travail fera l¡¯objet d¡¯une note
Les r¨¦sultats obtenus montrent une augmenta-
s¨¦par¨¦e. Seuls les r¨¦sultats obtenus lors de
tion appr¨¦ciable de l¡¯IgG et de l¡¯IgM chez le
b¨¦tail d¡¯origine africaine (l) (12).
A notre connaissance, il n¡¯existe pas de tra-
(*) Institut dElevage et de M¨¦decine V¨¦t¨¦rinaire
vaux donnant un diagramme complet de d¨¦ter-
des Pays Tropicaux, Maisons-Alfort. - Laboratoire
national de 1¡¯Elevage et de Recherches v¨¦t¨¦rinaires,
Dakar-Hann (S¨¦n¨¦gal).
(1) Nous utilisons la nomenclature officielle.
- 203 -
mination des diff¨¦rentes lignes de pr¨¦cipitation
Les injections sont faites au rythme de 2 par
constituant l¡¯image immuno¨¦lectrophor¨¦tique
semaine :
d¡¯un s¨¦rum de bovin. Nous avons donc tent¨¦
-- 1¡°¡¯ semaine : 0,.5 ml et 1 ml;
dans un premier temps d¡¯identifier les diff¨¦rents
arcs afin d¡¯¨¦viter par la suite toute erreur
- 2¡± semaine :
2 ml et 4 ml;
*
d¡¯interpr¨¦tation. Dans un deuxi¨¨me temps, nous
- 3¡± semaine :
8 ml et 16 ml.
avons entrepris une ¨¦tude comparative de
Le premier pr¨¦l¨¨vement de sang est effectu¨¦
s¨¦rums r¨¦colt¨¦s, dans le Ferlo, en fin de saison
,
10 jours apr¨¨s la derni¨¨re injection. Pour pal-
des pluies et en fin de saison s¨¨che, afin de
lier aux accidents anaphylactiques ¨¦ventuels,
rechercher d¡¯¨¦ventuelles variations li¨¦es ¨¤ l¡¯¨¦tat
chaque injection d¡¯antig¨¨ne est pr¨¦c¨¦d¨¦e d¡¯un
d¡¯entretien des animaux.
traitement au ph¨¦nergan (I.M.).
5
En principe, l¡¯animal continue ¨¤ produire des
1. MATERIEL ET METHODES
anticorps pendant plusieurs mois. Cette m¨¦-
thode permet d¡¯obtenir un s¨¦rum d¡¯ ?ne anti-
z¨¦bu qui r¨¦v¨¨le parfaitement les immunoglo-
A. R¨¦colte des s¨¦rums objet de l¡¯¨¦tude
bulines.
Le sang est pr¨¦lev¨¦ aseptiquement ¨¤ la jugu-
laire. Apr¨¨s coagulation, le s¨¦rum est centri-
r>) Lapins
fug¨¦ et r¨¦parti dans des ampoules ¨¤ sceller ¨¤
Premi¨¨re m¨¦thode
raison de 3 ml par ampoule.
Une technique identique d¡¯immunisation a
Les s¨¦rums ainsi conditionn¨¦s sont stock¨¦s
¨¦t¨¦ utilis¨¦e.
¨¤ -200 c.
- Premi¨¨re injection : quantit¨¦ pour deux
B. Pr¨¦paration des an&s¨¦rums
lapins :
- S¨¦rum de z¨¦bus . . . . . .
0,s ml
Plusieurs techniques ont ¨¦t¨¦ utilis¨¦es avec des
r¨¦sultats diff¨¦rents :
- P.B.S. . . . . . . . .
1,5 ml
a) Ane
- Adjuvant complet de Freud . .
2,0 ml
¡®c
Une ¨¦mulsion est pr¨¦par¨¦e avec les consti-
On injecte 0,l ml de l¡¯¨¦mulsion sous chaque
tuants suivants :
coussinet plantaire. Le reste est inocul¨¦ dans
chaque cuisse par voie intramusculaire.
0
- S¨¦rum de z¨¦bu . . . . . .
20 ml
- P.B.S. . . . . . . . . .
10 ml
- Injections ult¨¦rieures : 25 jours plus tard,
par voie intraveineuse de la pr¨¦paration anti-
- Adjuvant complet de Freud . .
20 ml
g¨¦nique suivante :
Tout d¡¯abord, 20 ml de cette ¨¦mulsion sont
- 0,3 ml de s¨¦rum;
inject¨¦s par voie intramusculaire profonde en
- 4,7 ml de P.B.S.
r¨¦partissant la dose en 4 points diff¨¦rents (enco-
lure et cuisses). Ensuite, 2.5 jours apr¨¨s, d¨¦bute
On ajoute 2,3 ml de bicarbonate de soude N.
une s¨¦rie de 6 injections intraveineuses d¡¯anti-
puis goutte ¨¤ goutte en agitant 5 ml d¡¯une solu-
g¨¨ne. Ce dernier est pr¨¦par¨¦ de la fa ?on sui-
tion ¨¤ 10 p. 100 d¡¯alun de potassium. La solu-
vante :
tion est abandonn¨¦e ¨¤ 4) C pendant une nuit,
- 3 ml de s¨¦rum;
puis centrifug¨¦e. Le pr¨¦cipit¨¦ est repris dans
- 47
8
ml de PBS.
ml de P.B.S.
On ajoute 23 ml de bicarbonate de sodium N,
Injections renouvel¨¦es 2 fois par semaine
puis goutte ¨¤ goutte, en agitant 50 ml d¡¯une
suivant le rythme :
solution ¨¤ 10 p. 300 d¡¯alun de potassium (AlK
- 1¡ãC semaine : 0,05 ml et 0,l ml;
(SO,) 2, 12 HzO). La suspension est aban-
- 2¡± semaine : 0,15 ml et 0,3 ml;
donn¨¦e ¨¤ 40 C pendant une nuit, puis centri-
- 3¡± semaine : 0,4 ml et 0,8 ml.
fug¨¦e ¨¤ froid 30 mn ¨¤ 3.000 t/mn. Le pr¨¦cipit¨¦
est enfin remis en suspension dans 80 ml de
Le sang des lapins est r¨¦colt¨¦ 15 jours apr¨¨s
PBS.
la derni¨¨re injection.
- 204 -
Cette m¨¦thode couramment utilis¨¦e pour
C. G¨¦loses-tampons
l¡¯obtention de s¨¦rums lapin ami-humains n¡¯a
a> Immuno-¨¦lectrophor¨¨se
donn¨¦ que des r¨¦sultats m¨¦diocres dans la pr¨¦-
Les gels sont pr¨¦par¨¦s soit avec le Special
paration de s¨¦rum anti-z¨¦bu. Il semble que les
Agar Noble (Difco) soit avec l¡¯agarose. Le
mauvais r¨¦sultats obtenus soient dus ¨¤ une trop
Special Agar Noble (Difco) est constitu¨¦ par
faible quantit¨¦ de s¨¦rum de z¨¦bu dans la consti-
un m¨¦lange d¡¯agarose et d¡¯agaropectine.
tution du m¨¦lange antig¨¦nique.
L¡¯agaropectine porte des groupements acides
Deuxi¨¨me m¨¦thode
sulfoniques responsables d¡¯une partie des pro-
Le meilleur s¨¦rum anti-bovin total a ¨¦t¨¦ pro-
pri¨¦t¨¦s du gel d¡¯agar. Ainsi l¡¯IgG, l¡¯IgA et
duit par injections par voie intraveineuse de
I¡¯IgM, soumis ¨¤ un fort courant d¡¯¨¦lectro-
s¨¦rum de z¨¦bu non trait¨¦ ¨¤ des lapins.
endosmose, migrent vers le p ?le n¨¦gatif. L¡¯aga-
Rythme des injections :
rose, au contraire, n¡¯ayant pas ces groupements
7 injections de 2 ml de s¨¦rum de z¨¦bus ¨¤ acides, poss¨¨de une inertie chimique relative
2 jours d¡¯intervalle dans la veine marginale de
et donne lieu ¨¤ un faible courant d¡¯¨¦lectro-
l¡¯oreille. La saign¨¦e est pratiqu¨¦e 1.5 jours apr¨¨s
endosmose au cours de l¡¯¨¦lectrophor¨¨se, ce qui
la derni¨¨re injection. Chaque lapin fournit en
peut pr¨¦senter un avantage notamment dans
moyenne 50 ml de s¨¦rum anti.
l¡¯¨¦tude des immunoglobulines (9). Si l¡¯agarose
donne des lignes de pr¨¦cipitation plus nettes,
De cette fa ?on, un excellent s¨¦rum anti don-
plus nombreuses et mieux r¨¦parties, la pr¨¦sence
nant 15 lignes de pr¨¦cipitation a ¨¦t¨¦ obtenu.
du puits de d¨¦part dans la concavit¨¦ de l¡¯arc
Remarque
de I¡¯IgM peut ¨ºtre g¨ºnante pour l¡¯¨¦tude parti-
L¡¯utilisation d¡¯un s¨¦rum de z¨¦bu normal pour
culi¨¨re de cette globuline.
l¡¯hyperimmunisation des lapins ne permet pas
De plus, la multiplication des arcs est aussi
d¡¯obtenir une bonne ligne de pr¨¦cipitation de
un facteur de complication. En fait, le choix
l¡¯IgM.
de l¡¯un ou l¡¯autre des deux gels sera fonction
C¡¯est la raison pour laquelle ont ¨¦t¨¦ utilis¨¦s
des fractions auxquelles on s¡¯int¨¦resse.
soit des s¨¦rums d¡¯animaux trypanosom¨¦s riches
Le tampon utilis¨¦, qui a donn¨¦ les meilleurs
en IgM, soit un s¨¦rum de z¨¦bu hyperimmunis¨¦
r¨¦sultats, r¨¦pond ¨¤ la composition suivante :
au pr¨¦alable au moyen d¡¯une culture de Salmo-
1
- V¨¦ronal acide
nella typhimurium formol¨¦e. L¡¯injection de
l¡¯antig¨¨ne 0 des salmonelles provoque en effet
(0,Ol M) . . . 1,842 g
une forte ¨¦l¨¦vation de 1¡¯IgM.
- V¨¦ronal sod¨¦
i
(0,05 M) . . . 10,309 g pH 8,6
Pour ce faire, le processus suivant a ¨¦t¨¦
- Ac¨¦tate de sodium,
adopt¨¦ : 2 inoculations par semaine par voie
3 Hz0 (0,05 M) .
6,804 g
intraveineuse ¨¤ doses progressivement crois-
- Eau distill¨¦e q.s.p.
1.000 ml /
santes : 5 ml, 10, 15, 20, . . . 75, 80 pendant
2 mois (r¨¦colte du s¨¦rum 15 jours apr¨¨s la der-
Le gel, support de l¡¯immuno-¨¦lectrophor¨¨se,
ni¨¨re injection).
est pr¨¦par¨¦ dans les proportions suivantes :
Le s¨¦rum ainsi obtenu, inocul¨¦ ¨¤ des lapins,
- Agar noble . . . . . . . 1 g
a permis de pr¨¦parer un s¨¦rum lapin anti-
- Tampon . . . . . . . .
25 ml
z¨¦bu total r¨¦v¨¦lant particuli¨¨rement bien 1¡¯IgM.
- Eau distill¨¦e . . . . . . .
75 ml
Troisi¨¨me m¨¦thode
Ces proportions sont les m¨ºmes si on utilise
L¡¯hyperimmunisation de lapin au moyen des
l¡¯agarose. Le gel, ainsi pr¨¦par¨¦, est r¨¦parti en
fractions 1 (IgM) et IV (IgG) obtenues par
tubes de 20 ml, conserv¨¦s ¨¤ + 4¡± C.
chromatographie sur colonne de Sephadex
b) Chromatographie
G 200 a permis de pr¨¦parer des immuns¨¦rums
Elle est r¨¦alis¨¦e sur colonne de Sephadex
qui, apr¨¨s ¨¦puisement par un s¨¦rum de f ?tus
ci 200 (¡°).
de veau, r¨¦v¨¨lent exclusivement I¡¯IgG et
l¡¯IgM (¡®).
L¡¯¨¦luant est une solution tampon dont la
composition est la suivante :
(¡®) Industrie Biologie Fran ?aise, S.A., 92-Genne-
Villiers.
(:¡®) Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala, Su¨¨de.
- 205 -
- Tris . . . . .
7% g
L¡¯¨¦luant est envoy¨¦ sur la colonne par une
- NaCI . . . . . 58,45 g
i PH 850 pompe ¨¦lectrique.
- HC1 (0,033 N) q.s.p.
1 .OOO ml !
A la sortie de la colonne, un absorptiom¨¨tre
¨¤ UV (280 m$, coupl¨¦ ¨¤ un enregistreur, per-
D. Techniques
met de d¨¦tecter les diff¨¦rentes fractions qui sont
a) Immuno¨¦lectrophor¨¨se
ensuite r¨¦parties en tubes de 5 ml par le col-
Ont ¨¦t¨¦ utilis¨¦es la microm¨¦thode sur lames
lecteur de fractions Beckman muni d¡¯un comp-
de 2,5 X 7,s cm et la macrom¨¦thode sur
teur de gouttes.
lames de 16 X 4 cm (21).
A la fin de la chromatographie, l¡¯enregistreur
L¡¯appareillage Celman pour immuno¨¦lectro-
a inscrit sur bande de papier une courbe ¨¤
phor¨¨se a ¨¦t¨¦ employ¨¦ tout au long du pr¨¦sent
3 pics (voir sch¨¦ma 1) qui mat¨¦rialise la s&pa-
travail (g¨¦n¨¦rateur de courant continu donnant
ration des diff¨¦rentes fractions s¨¦riques. Ainsi,
une tension de 0 ¨¤ 500 V).
dans l¡¯exemple choisi, la courbe montre que
la totalit¨¦ du s¨¦rum a filtr¨¦ entre les tubes 17
Les diff¨¦rents stades de la m¨¦thode corres-
et 61 du collecteur. Dans cet intervalle, les
pondent ¨¤ la description classique : d¨¦graissage
tubes ont ¨¦t¨¦ regroup¨¦s en 7 fractions :
des lames, coulage de la g¨¦lose, d¨¦coupage ¨¤
- 1¡±¡¯ fraction : tubes 17 ¨¤ 3 9;
l¡¯emporte-pi¨¨ce des puits de d¨¦part et de la
goutti¨¨re des immun-s¨¦rums (portoir de 6 la-
- 2¡± fraction : tubes 20 ¨¤ 27;
mes), d¨¦p ?t du s¨¦rum ¨¤ ¨¦tudier. L¡¯¨¦lectropho-
- 3¡± fraction : tubes 27 ¨¤ 36;
r¨¨se est men¨¦e sous 220 V pendant 60 mn pour
- 41¡¯ fraction : tubes 37 ¨¤ 44;
la microm¨¦thode et 140 mn pour la macrom¨¦-
thode. On proc¨¨de ensuite ¨¤ l¡¯application de
- Y¡¯ fraction : tubes 45 ¨¤ 48;
l¡¯immuns¨¦rum. L¡¯incubation se fait en cham-
- @ fraction : tubes 49 ¨¤ 52;
bre humide pendant 24 ¨¤ 36 h. Apr¨¨s lavage
- 7¡¯! fraction : tubes 53 ¨¤ 61.
(24 h en s¨¦rum physiologique, 1 h en eau distil-
l¨¦e) et s¨¦chage (¨¤ l¡¯¨¦tuve ¨¤ 370 C), la coloration
Chaque fraction est ensuite dialys¨¦e contre de
est r¨¦alis¨¦e au noir-amide en solution m¨¦thanol-
l¡¯eau distill¨¦e ¨¤ + 4¡¯) C, pour ¨¦liminer les sels
ac¨¦tique pendant 5 mn. L¡¯exc¨¨s de colorant est
du tampon, puis lyophilis¨¦e.
¨¦limin¨¦ par une solution de rin ?age. Les lames
La dialyse et la concentration des fractions
sont enfin lav¨¦es ¨¤ l¡¯eau courante et s¨¦ch¨¦es.
obtenues par la chromatographie peuvent ¨ºtre
Solution de rin ?age :
r¨¦alis¨¦es plus rapidement en un seul temps par
la technique de dialyse sous vide (sch¨¦ma 2).
- Alcool m¨¦thylique . . . .
5 vol.
En 12 h. ¨¤ + 41¡¯ C, la concentration est environ
- Acide ac¨¦tique . . . . .
1 vol.
de 10 fois.
- Eau distill¨¦e . . . . . .
5 vol.
Solution de coloration :
II. IMAGE
- Noir amide . . . . . .
6g
IMMUNO-ELECTROPHORETIQUE
- Solution de rin ?age . . . . 1.000 ml
DU SERUM DE ZEBU GOBRA
b) Chromatographie
L¡¯immuno-¨¦lectrophor¨¨se d¡¯un s¨¦rum de
Conduite selon les indications de HOGMAN
z¨¦bu Cobra r¨¦alis¨¦e dans les conditions d¨¦crites
et KILLANDER (10).
ci-dessus a permis d¡¯obtenir 15 lignes de pr¨¦ci-
pitation.
Le fractionnement des s¨¦rums de z¨¦bu a ¨¦t¨¦
effectu¨¦ sur colonne de Sephadex Ci 200 (gel
de dextrane).
1. Identification des diff¨¦rents arcs
Le gel de Sephadex est plac¨¦ dans une a) Fractionnemrnt d¡¯un sr¡¯rum
colonne de 800 mm de hauteur et 30 mm de
La filtration sur gel de dextrane (Sephadex
diam¨¨tre. Apr¨¨s s¡¯¨ºtre assur¨¦ de la verticalit¨¦
G 200) s¨¦pare les prot¨¦ines s¨¦riques selon leur
rigoureuse de la colonne, le s¨¦rum est d¨¦pos¨¦
taille, leur vitesse de migration dans le gel
uniform¨¦ment ¨¤ la partie sup¨¦rieure du gel ¨¤
¨¦tant pour partie directement proportionnelle
raison de 3 ml.
¨¤ la grosseur de la mol¨¦cule.
- 206 -
Sch¨¦ma I - Courbe de fractionnement d¡¯un Jrum de zt%u sur Sephadex 6.200.
Chaque fraction obtenue par chromatogra-
La photographie de l¡¯image immuno¨¦lectro-
phie est compar¨¦e sur la m¨ºme pr¨¦paration
phor¨¦tique de chacune des 7 fractions est repro-
avec le s¨¦rum total. Quelques lignes parfaite-
duite dans les clich¨¦s no 1 ¨¤ 7 avec indication
ment visibles sur les lames sont difficilement des diff¨¦rents constituants dont la position a
rendues par les photographies.
pu ¨ºtre figur¨¦e.
Photo 2
1. IgM
2 . (Y 2 macroglobuline
3 . Transf¨¦rine
4 . fi-lipoprot¨¦ine
5 . C¨¦ruloplasmine
- 207 -
c
¡®.
l
b) Pr¨¦paration de l¡¯lgM
On centrifuge pendant 10 mn ¨¤ 2.000 g,
La pr¨¦paration de 1¡¯IgM pure par filtration
apr¨¨s une demi-heure de repos.
sur Sephadex implique l¡¯¨¦limination de l¡¯a 2-
Le pr¨¦cipit¨¦ est lav¨¦ 2 fois avec la solution
macroglobuline ainsi que de la lj-lipopro-
d¡¯acide borique puis il est repris dans 3 ¨¤ 4 ml
t¨¦ine (10).
du tampon Tris-H Cl-Na Cl de pH = 8,O.
- Pr¨¦cipitation de la lipoprot¨¦ine :
A 10 ml d¡¯un s¨¦rum normal, on ajoute 0,4 ml
La filtration est enfin r¨¦alis¨¦e sur la colonne
d¡¯un solution de sulfate de dextrane ¨¤ 10 p. 100,
de Sephadex G 200.
puis 1 ml d¡¯une solution de Ca Cla,M. On agite
c) Autres immunoglobulines
et apr¨¨s 15 mn de repos, on centrifuge 10 mn
¨¤ 6.000 g. On recueille le surnageant. L¡¯exc¨¨s
Les autres immunoglobulines ont ¨¦t¨¦ pr¨¦-
de Ca Cl- est ¨¦limin¨¦ par dialyse contre de
par¨¦es par ¨¦puisements successifs des s¨¦rums
l¡¯eau distill¨¦e.
de z¨¦bus par un s¨¦rum de lapin hyperimmunis¨¦
avec un s¨¦rum de f ?tus de veau d¨¦pourvu
- Pr¨¦cipitation des euglobulines :
d¡¯IgG et d¡¯IgM. La photo 8 montre l¡¯image
On ajuste le volume de ce surnageant ¨¤
immuno¨¦lectrophor¨¦tique d¡¯un s¨¦rum d¡¯em-
200 ml ¨¤ l¡¯aide d¡¯une solution d¡¯acide borique
bryon de veau ¨¤ terme manifestement d¨¦pourvu
¨¤ 7,5 g/litre.
d¡¯IgG et d¡¯IgM (19).
c
d) Colorations spr¡¯cifiques
crite par URIEL (18) pour mettre en ¨¦vidence
l¡¯action oxydative de la c¨¦ruloplasmine permet-
Pour la mise en ¨¦vidence des lipoprot¨¦ines,
tent de pr¨¦ciser certaines lignes de pr¨¦cipitation.
on peut utiliser des colorants sp¨¦cifiques : Oil
Red 0 ou Soudan B.
Seules les colorations sp¨¦cifiques des lipopro-
t¨¦ines qui n¡¯offrent pas de difficult¨¦ majeure
Des colorations sp¨¦ciales, comme celle d¨¦-
ont ¨¦t¨¦ r¨¦alis¨¦es dans le pr¨¦sent travail.
- 209 -
2. Lecture d¡¯une lame
- Un antig¨¨ne est d¡¯autant plus abondant
d¡¯immuno¨¦lectrophor¨¨se
que sa ligne de pr¨¦cipitation est moins courbe.
- La ligne de pr¨¦cipitation est floue du c ?t¨¦
Avant d¡¯envisager la lecture d¡¯une lame,
oppos¨¦ au r¨¦actif en exc¨¨s. Pour avoir des lignes
quatre crit¨¨res sont ¨¤ retenir :
nettes, il convient d¡¯ajuster les concentrations
- Un antig¨¨ne est d¡¯autant plus abondant
respectives d¡¯antis¨¦rum et de s¨¦rum ¨¤ ¨¦tudier.
que sa ligne de pr¨¦cipitation est plus proche
11 est ¨¤ noter que l¡¯albumine appara ?t rare-
de la goutti¨¨re des immuns¨¦rums.
ment sur les pr¨¦parations. En r¨¦alit¨¦, au cours
- L¡¯abondance d¡¯un antig¨¨ne peut ¨ºtre ¨¦va-
du d¨¦veloppement, elle est la premi¨¨re ¨¤ se
lu¨¦e d¡¯apr¨¨s l¡¯intensit¨¦ de son pr¨¦cipit¨¦, ¨¤ con-
former, mais elle dispara ?t ensuite, le pr¨¦cipit¨¦
dition que le rapport antig¨¨ne-anticorps ait une
¨¦tant dissout par l¡¯exc¨¨s d¡¯antig¨¨ne. Des photo-
valeur bien d¨¦termin¨¦e. Lorsque l¡¯antig¨¨ne se
graphies prises en cours d¡¯incubation, sans colo-
trouve en grande quantit¨¦, l¡¯exc¨¨s peut dissou-
ration, montrent tr¨¨s nettement la ligne de pr¨¦-
dre le pr¨¦cipit¨¦.
cipitation de l¡¯albumine (photo 9).
Photo ?
Photo r¨¦alis¨¦e en cours d¡¯incubation, sans coloration,
l¡¯arc correspondant ¨¤ l¡¯albumine est nettement visible.
En conclusion, l¡¯application des diff¨¦rentes
ralement pas sur une m¨ºme lame, les concen-
techniques d¨¦crites ci-dessus ont donc permis
trations respectives de s¨¦rum et d¡¯antis¨¦rum
d¡¯identifier 15 lignes (photo 10).
doivent ¨ºtre ajust¨¦es en fonction des globulines
A noter que les lignes n¡¯apparaissent g¨¦n¨¦-
¨¤ ¨¦tudier.
Photo 10
1 . IgG lente
4 . IgA
7 . Haptoglobine
10. n. 2-lipoprot¨¦ine
13. CI 1 s¨¦romuco ?de
2 . IgG rapide
5 . Transf¨¦rine
8 . a 2-macroglobuline
Il. 15 1 A-globuline
14. (1. 1 X-glycoprot¨¦ine (?)
3 . IgM
6 . fi-lipoprot¨¦ine
9 . C¨¦ruloplasmine
12. c1 1 -glycoprot¨¦ine
15. Albumine
- 210 -
III. ETUDE DES VARIATIONS
IgG, IgA et IgM sont parfaitement visibles,
SAISONNIERES QUALITATIVES
comme sur la photo 11 par exemple.
c
DES PROTEINES SERIQUES
Sur le plan quantitatif, autant que l¡¯on puisse
DU ZEBU GOBRA
en juger en immuno¨¦lectrophor¨¨se, il semble
qu¡¯il y ait quelques l¨¦g¨¨res variations indivi-
duelles principalement au niveau des immuno-
1. 115 s¨¦rums ont ¨¦t¨¦ pr¨¦lev¨¦s au mois de
globulines. Par exemple on voit que le s¨¦rum
novembre 1969, en fin de saison des pluies, sur
de la photo 11 est moins riche en IgM. 11 faut
des z¨¦bus du Ferlo (Dara). Les animaux, clini-
pr¨¦ciser que le m¨ºme immuns¨¦rum a ¨¦t¨¦ utilis¨¦
quement sains, ¨¦taient en parfait ¨¦tat d¡¯en-
pour toute la s¨¦rie. De plus, les quantit¨¦s de
tretien.
s¨¦rum et d¡¯immuns¨¦rum appliqu¨¦es au moyen
de micro-pipettes gradu¨¦es ¨¦taient connues et
Du point de vue qualitatif, les images immu-
identiques. Les conditions de travail ¨¦tant
no¨¦lectrophor¨¦tiques se sont r¨¦v¨¦l¨¦es ¨ºtre par-
rigoureusement d¨¦finies et reproduites, il est
faitement identiques pour tous les s¨¦rums ana-
donc parfaitement possible de faire des compa-
lys¨¦s. Dans tous les cas, les immunoglobulines
raisons d¡¯ordre quantitatif.
2. Au mois de mai 1970, 72 s¨¦rums ont ¨¦t¨¦
son a ¨¦t¨¦ faite avec un m¨ºme s¨¦rum de z¨¦bu
recueillis sur des z¨¦bus de la m¨ºme r¨¦gion
pr¨¦lev¨¦ en fin de saison des pluies. Les r¨¦sultats
(forage de Tatki). A cette ¨¦poque de l¡¯ann¨¦e,
montrent qu¡¯aucune des immunoglobulines n¡¯a
les animaux pr¨¦sentent un amaigrissement sai-
disparu mais que, par contre, toutes les frac-
sonnier maximal du fait des conditions d¡¯ali-
tions apparaissent moins abondantes. De fa ?on
mentation de semaine en semaine plus difficiles.
constante, la ligne de pr¨¦cipitation de 1¡¯IgG est
moins marqu¨¦e et plus courte que sur le
L¡¯analyse
immuno¨¦lectrophor¨¦tique de ces
s¨¦rum t¨¦moin (ainsi qu¡¯on peut le voir sur la
s¨¦rums a ¨¦t¨¦ effectu¨¦e avec le m¨ºme immun-
photo 12). De m¨ºme, l¡¯IgM est beaucoup moins
s¨¦rum de lapin. Pour chaque lame, la comparai-
visible. Pour toutes les autres fractions, les arcs
de pr¨¦cipitation sont plus courbes et moins nets,
tuants ¨¦tant int¨¦ress¨¦. Par contre, en aucun
ce qui indique une diminution du taux de la
cas, la disparition compl¨¨te d¡¯une quelconque
prot¨¦ine en cause.
fraction n¡¯a ¨¦t¨¦ observ¨¦e, immunoglobulines
L¡¯¨¦tude quantitative men¨¦e conjointement
comprises.
par la m¨¦thode d¡¯¨¦lectrophor¨¨se sur ac¨¦tate de
Remerciements
cellulose a permis de confirmer et de chiffrer
c
ce r¨¦sultat.
Nous tenons ¨¤ remercier le Professeur MAS-
SEYEFF et ses collaborateurs de la Facult¨¦
En conclusion, le s¨¦rum des bovins, en fin
de M¨¦decine de Dakar pour l¡¯aide technique
de saison s¨¨che, pr¨¦sente un abaissement signi-
qu¡¯ils nous ont apport¨¦e tout au long de la
ficatif des prot¨¦ines totales, chacun des consti-
pr¨¦sente ¨¦tude.
SUMMARY
Immunoelectrophoretic study of Gobra zebu serum in Senegal.
Possibility of qualitative seasonal variation
In a first step, the authors describe the technics and methods which Will
be used a11 along the present work : immunoelectrophoresis and gel fil-
tration chromatography on Sephadex G 200. An immunoelectroohoretic
pattern of Gobra ze¡¯bu serum ;s given with the nomenclature of Bach of
the 1.5 precipitation lines obtained. The studv is achieved with conside-
rations on ahy possible seasonal variation of -serum proteins. The results
show no qualitative difference between samples collected at the end of
the rainy season and those gathered at the end of the dry season. In
particular, the three immunoglobulins are present on the immunoelectro-
phoretic patterns of a11 the sera used alo8g tbe present study. On the other
hand, ors quantitative basis, a significant decrease of total proteins rate is
demonstrated for the sera collected at the end of the dry season. This
last observation is confirmed by an electrophoresis study which Will be
published separately in a further paper.
RESUMEN
Estudio inmunoelectroforetico
del suero de cebh Gobra en Senegal.
Posibilidad de variaciones cualitativas de estaci6n
Los autores describen las t¨¦cnicas utilizadas : inmunoelectroforesis
y gelosa-filtration sobre columna de Sephadex G 200. Luego, presentan
la imagen inmunoelectroforetica del suero de cebu Gobra, a1 precisar la
es&cia de las 15 Iineas de precipitacion obtenidas. Se acaba e1 estudio
por consideraciones sobre la posibilidad de eventuales variaciones de
estacion de las proteinas sericas. Segtin 10s resultados, no existe ningun
diferencia de orden cualitativo entre las muestras recogidas a1 fin de la
estacion htimeda y las recogidas a1 fin de la estacion seca. Particularmente,
las tres ?nmunoglobulinas : IgG, IgM e IgA se encuentran en todas las
imagenes inmunoelectroforeticas del conjunto de 10s sueros utilizados
durante este estudio. En cambio, desde el punto de vista cuantitativo, se
nota una disminucion significativa de la tasa de las proteinas totales en
10s sueros obtenidos a1 fin de la estacion seca. Se confirma la tiltima
observation por un estudio electroforetico que se publicara proximamente.
BIBLIOGRAPHIE
BIBERFELD (G.), ? Distribution of antibody 4. HIRSCHFELD (J.), ? The use of immunoelectro-
within 19 S and 7 S immunoglobulins following
phoresis in the analysis of normal sera and in
infection with Mycoplrwma pneumoniae ?, J. Im-
studies of the inheritance of certain serum pro-
mun~/., 1968, 100 (2) : 338-47.
teins ?, Sci. Tools, 1961, 8 (3) : 17-24.
G0TZ (H.) et HEINEBRODT (A.), ? Biochemi-
5 . HIRSCHFELD (J.), ? Immunoelectrophoresis pro-
cal and immunoelectrophoretic analysis of cattle
cedure and application to the study of group-
serum ?, Zenthl. Vet. Med., 1969, 16 A: 691-702.
specific variations in sera ?, Sci. Tools, 1960,
7 (2) : 18-25.
HERMANS (J.), ? Les globulines s¨¦riques du sys-
t¨¨me gamma. Leur nature et leur pathologie ?,
6 . JONAS (W. E.), ? Determination of sheep anti-
L
Paris, Masson, 1961.
Salmonellu typhimurium immunoglobulin class by
- 212 -
antiglobulin testing ?, Res. l¡¯et. Sci., 1969, 10 (4) :
15. PROVOST (A.), BORREDON (C.) et QUE-
311-20.
VAL (R.), ? Une hypogammaglobulin¨¦mie essen-
7. JONAS (W. E.), ? Immunoelectrophoretic analy-
tielle des bovins d¡¯Afrique Centrale, cause d¡¯er-
P
sis of sheep serum using guinea-pig antisera to
reur dans les enqu¨ºtes s¨¦rologiques ?, Rev. Elev.
particulate antigens treated with sheep anti-se-
Mhd. v¨¦t. Pays trop., 1965, 18 (4) : 385-93.
mm ?, Res. vet. Sci., 1969, 10 (5) : 397-404.
16. SCHULTZE (H. E.) et HEREMANS (J. F.),
8. Mc EWAN (A.D.), EISCHER (E. W.) et SEI-
? Molecular biology of human proteins ?, Ams-
c
MAN (1. E.), ?Observations on the immunoglo-
terdam, London, New York, Elsevier Publ. CO.,
bulin levels of neonatal calves and their relation-
1966, 1.
ship to disease ?, J. camp. Path., 1970, 80 (2) :
17. TRAININ (Z.), ? Immunoelectrophoretic analysis
259-65.
of serum from a leukemic cow ?, Am. J. vet. Res.,
9. MASSEYEFF (R.) et GOMBERT (J.), ? Compa-
1969, 30 (8): 1475-77.
raison entre I¡¯agar et I¡¯agarose comme support de
18. URIEL (J.), ? Etude de l¡¯activit¨¦ enzymatique de
l¡¯analyse immuno¨¦lectrophor¨¦tique du s¨¦rum ?,
la c¨¦ruloplasmine du s¨¦rum humain apr¨¨s ¨¦lectro-
Bull. M¨¦m. Fac. mixte M¨¦d. Phurm. D a k u r ,
phor¨¨se et immuno¨¦lectrophor¨¨se en g¨¦lose ?,
1965, 13: 100-02.
Bull. Soc. Chim. biol., 1957, 39 (suppl. 1): 105.
10. MASSEYEFF (R.), GOMBERT 0.) et JOSSE-
19. WARD-COX (1. S.), ?A note on gamma-globulin
LIN (J.), ? M¨¦thode de pr¨¦paration de la beta
content of the serum of new born calves ?, J. S.
2-macroglobuline du s¨¦rum humain ?, Immuno-
Afr. vet. med. A~S., 1968, 39 (3), 51-52.
chemistry, 1965, 2: 177-80.
11. ? Nomenclature for human immunoglobulins ?,
20. WARD-COX (1. S.), ? Two instances of bovine
Bull. Org. Mond. Sant¨¦, 1964, 30 : 447-50.
agammaglobulinaemia as revealed by immuno-
12. PENHALE (W. J.) et CHRISTIE (G.), ? Quanti-
electrophoresis ?, J. S. Afr. vet. med. A~S., 1969,
tative studies on bovine immunoglobulins. -
40 (3): 337.
1. Adult plasma and colostrum levels ?, Res. vet.
21. WARD-COX (1. S.), ? Incorporation of a macro-
ski., 1969, 10: 493-501.
slide in the micro-technique of immunoelectro-
13. PENHALE (W. J.) et Collab., ? Quantitative stu-
phoresis ?, J. S. Afr. l>ef. med. A~S., 1969, 40 (1) :
dies on bovine immunoglobulins. - II. Plasma
91-92.
immunoglobulin levels inmarket calves and their
22. WEIR (D. M.), ? Handbook of experimental im-
relationship to neonatal infection ?, Brit. vet. J.,
munology ?, Oxford, Edinburg, Blackwell Scien-
1970, 126: 30-37.
tific Publication, 1967.
14. ? Production of antibody against purified human
23. WILLIAMS (C.A.) et CHASE (M. W.), ?Me-
gamma-globulin in rabbits, goats, sheep and
thods in immunology and immunochemistry ?,
horses ?, Immunology, 1966, 10 : 271.
New York, London, Academic Press, 1967, 1 et II.
- 213 -
VETERINAIRE DES PAYS TROPICAUX
REVUE D¡¯ ?LEVAGE
ET DE
M ?DECINE V ?T ?RINAIRE
DES PAYS TROPICAUX
Etude immuno¨¦lectrophor¨¦tique du s¨¦rum
de z¨¦bu Gobra au S¨¦n¨¦gal
Possibilit¨¦ de variations saisonni¨¨res
qualitatives
par J. ROUMEGOUX et M. P. DOUTRE
Tome XXIV (nouvelle s¨¦rie)
No 2 - 1971
tit
VIGOT FRERES, EDITEURS
23, rue de I¡¯Ecole-de-M¨¦decine, Paris-VI¡±
Rev. Elev. M¨¦d. v¨¦t. Pays trop., 3971, 24 (2): 203-13
?tude immuno¨¦lectrophor¨¦tique du s¨¦rum
de z¨¦bu Gobra au S¨¦n¨¦gal
Possibilit¨¦ de variations saisonni¨¨res qualitatives
par J. ROUMEGOUX et M. P. DOUTRE (*)
RESUME
Apr¨¨s avoir fourni une description des techniques employ¨¦es : immu-
no¨¦lectrophor¨¨se et gel-filtration sur colonne de Sephadex G 200., les
auteurs pr¨¦sentent l¡¯image immuno¨¦lectrophor¨¦tique du s¨¦rum de z¨¦bu
Gobra, en pr¨¦cisant la nature des 35 4ignes de pr¨¦cipitation obtenues.
L¡¯¨¦tude se termine par des consid¨¦rations sur la possibilit¨¦ d¡¯¨¦ventuelles
variations saisonni¨¨res des prot¨¦ines s¨¦riques. Les r¨¦sultats ne laissent
appara ?tre aucune diff¨¦rence d¡¯ordre qualitatif entre des pr¨¦l¨¨vements
recueillis en fin de saison humide et ceux r¨¦colt¨¦s en fin de saison s¨¨che.
En particulier, les trois immunoglobulines : IgG, IgM et IgA se retrouvent
sur toutes les images immuno¨¦lectrophor¨¦tiques de l¡¯ensemble des s¨¦rums
utilis¨¦s au cours du pr¨¦sent travail. Par contre, sur le plan quantitatif, on
note une diminution significative du taux des prot¨¦ines totales pour les
s¨¦rums obtenus en fin de saison s¨¨che. Cette derni¨¨re observation est
confirm¨¦e par une ¨¦tude ¨¦lectrophor¨¦tique qui doit faire l¡¯objet d¡¯une
publication prochaine.
En 1965, au Tchad, PROVOST, BORRE-
l¡¯¨¦tude qualitative ont ¨¦t¨¦ rapport¨¦s dans la
DON et QUEVAL mettent en ¨¦vidence une
pr¨¦sente publication.
hypogammaglobulin¨¦mie essentielle chez des
En 1968, I.S.WARD-COX, en Afrique du
z¨¦bus d¡¯Afrique centrale (15).
Sud, montre l¡¯apparition progressive des immu-
A la suite de ces observations, une ¨¦tude
noglobulines chez le veau nouveau-n¨¦ (19). Le
a ¨¦t¨¦ effectu¨¦e au S¨¦n¨¦gal sur le z¨¦bu Gobra.
m¨ºme auteur, en 1969, r¨¦v¨¨le par immuno¨¦lec-
trophor¨¨se une agammaglobulin¨¦mie chez quel-
Ce travail a ¨¦t¨¦ r¨¦alis¨¦ en deux temps :
ques bovins (20).
1. Qualitativement : en utilisant conjointement
En 1969, W. PENHALE et G. CHRISTIE
la chromatographie sur colonne de Sephadex
comparent au cours d¡¯une ¨¦tude quantitative
G 200 et l¡¯immuno¨¦lectrophor¨¨se.
le taux des immunoglobulines s¨¦riques chez les
2. Quantitativement : par l¡¯analyse ¨¦lectropho-
bovins d¡¯Europe (races : Ayrshire, Frisonne,
r¨¦tique sur ac¨¦tate de cellulose.
Jersey, Guernesey et Shorthorn) et chez le z¨¦bu.
Ce dernier travail fera l¡¯objet d¡¯une note
Les r¨¦sultats obtenus montrent une augmenta-
s¨¦par¨¦e. Seuls les r¨¦sultats obtenus lors de
tion appr¨¦ciable de l¡¯IgG et de l¡¯IgM chez le
b¨¦tail d¡¯origine africaine (l) (12).
A notre connaissance, il n¡¯existe pas de tra-
(*) Institut dElevage et de M¨¦decine V¨¦t¨¦rinaire
vaux donnant un diagramme complet de d¨¦ter-
des Pays Tropicaux, Maisons-Alfort. - Laboratoire
national de 1¡¯Elevage et de Recherches v¨¦t¨¦rinaires,
Dakar-Hann (S¨¦n¨¦gal).
(1) Nous utilisons la nomenclature officielle.
- 203 -
mination des diff¨¦rentes lignes de pr¨¦cipitation
Les injections sont faites au rythme de 2 par
constituant l¡¯image immuno¨¦lectrophor¨¦tique
semaine :
d¡¯un s¨¦rum de bovin. Nous avons donc tent¨¦
-- 1¡°¡¯ semaine : 0,.5 ml et 1 ml;
dans un premier temps d¡¯identifier les diff¨¦rents
arcs afin d¡¯¨¦viter par la suite toute erreur
- 2¡± semaine :
2 ml et 4 ml;
*
d¡¯interpr¨¦tation. Dans un deuxi¨¨me temps, nous
- 3¡± semaine :
8 ml et 16 ml.
avons entrepris une ¨¦tude comparative de
Le premier pr¨¦l¨¨vement de sang est effectu¨¦
s¨¦rums r¨¦colt¨¦s, dans le Ferlo, en fin de saison
,
10 jours apr¨¨s la derni¨¨re injection. Pour pal-
des pluies et en fin de saison s¨¨che, afin de
lier aux accidents anaphylactiques ¨¦ventuels,
rechercher d¡¯¨¦ventuelles variations li¨¦es ¨¤ l¡¯¨¦tat
chaque injection d¡¯antig¨¨ne est pr¨¦c¨¦d¨¦e d¡¯un
d¡¯entretien des animaux.
traitement au ph¨¦nergan (I.M.).
5
En principe, l¡¯animal continue ¨¤ produire des
1. MATERIEL ET METHODES
anticorps pendant plusieurs mois. Cette m¨¦-
thode permet d¡¯obtenir un s¨¦rum d¡¯ ?ne anti-
z¨¦bu qui r¨¦v¨¨le parfaitement les immunoglo-
A. R¨¦colte des s¨¦rums objet de l¡¯¨¦tude
bulines.
Le sang est pr¨¦lev¨¦ aseptiquement ¨¤ la jugu-
laire. Apr¨¨s coagulation, le s¨¦rum est centri-
r>) Lapins
fug¨¦ et r¨¦parti dans des ampoules ¨¤ sceller ¨¤
Premi¨¨re m¨¦thode
raison de 3 ml par ampoule.
Une technique identique d¡¯immunisation a
Les s¨¦rums ainsi conditionn¨¦s sont stock¨¦s
¨¦t¨¦ utilis¨¦e.
¨¤ -200 c.
- Premi¨¨re injection : quantit¨¦ pour deux
B. Pr¨¦paration des an&s¨¦rums
lapins :
- S¨¦rum de z¨¦bus . . . . . .
0,s ml
Plusieurs techniques ont ¨¦t¨¦ utilis¨¦es avec des
r¨¦sultats diff¨¦rents :
- P.B.S. . . . . . . . .
1,5 ml
a) Ane
- Adjuvant complet de Freud . .
2,0 ml
¡®c
Une ¨¦mulsion est pr¨¦par¨¦e avec les consti-
On injecte 0,l ml de l¡¯¨¦mulsion sous chaque
tuants suivants :
coussinet plantaire. Le reste est inocul¨¦ dans
chaque cuisse par voie intramusculaire.
0
- S¨¦rum de z¨¦bu . . . . . .
20 ml
- P.B.S. . . . . . . . . .
10 ml
- Injections ult¨¦rieures : 25 jours plus tard,
par voie intraveineuse de la pr¨¦paration anti-
- Adjuvant complet de Freud . .
20 ml
g¨¦nique suivante :
Tout d¡¯abord, 20 ml de cette ¨¦mulsion sont
- 0,3 ml de s¨¦rum;
inject¨¦s par voie intramusculaire profonde en
- 4,7 ml de P.B.S.
r¨¦partissant la dose en 4 points diff¨¦rents (enco-
lure et cuisses). Ensuite, 2.5 jours apr¨¨s, d¨¦bute
On ajoute 2,3 ml de bicarbonate de soude N.
une s¨¦rie de 6 injections intraveineuses d¡¯anti-
puis goutte ¨¤ goutte en agitant 5 ml d¡¯une solu-
g¨¨ne. Ce dernier est pr¨¦par¨¦ de la fa ?on sui-
tion ¨¤ 10 p. 100 d¡¯alun de potassium. La solu-
vante :
tion est abandonn¨¦e ¨¤ 4) C pendant une nuit,
- 3 ml de s¨¦rum;
puis centrifug¨¦e. Le pr¨¦cipit¨¦ est repris dans
- 47
8
ml de PBS.
ml de P.B.S.
On ajoute 23 ml de bicarbonate de sodium N,
Injections renouvel¨¦es 2 fois par semaine
puis goutte ¨¤ goutte, en agitant 50 ml d¡¯une
suivant le rythme :
solution ¨¤ 10 p. 300 d¡¯alun de potassium (AlK
- 1¡ãC semaine : 0,05 ml et 0,l ml;
(SO,) 2, 12 HzO). La suspension est aban-
- 2¡± semaine : 0,15 ml et 0,3 ml;
donn¨¦e ¨¤ 40 C pendant une nuit, puis centri-
- 3¡± semaine : 0,4 ml et 0,8 ml.
fug¨¦e ¨¤ froid 30 mn ¨¤ 3.000 t/mn. Le pr¨¦cipit¨¦
est enfin remis en suspension dans 80 ml de
Le sang des lapins est r¨¦colt¨¦ 15 jours apr¨¨s
PBS.
la derni¨¨re injection.
- 204 -
Cette m¨¦thode couramment utilis¨¦e pour
C. G¨¦loses-tampons
l¡¯obtention de s¨¦rums lapin ami-humains n¡¯a
a> Immuno-¨¦lectrophor¨¨se
donn¨¦ que des r¨¦sultats m¨¦diocres dans la pr¨¦-
Les gels sont pr¨¦par¨¦s soit avec le Special
paration de s¨¦rum anti-z¨¦bu. Il semble que les
Agar Noble (Difco) soit avec l¡¯agarose. Le
mauvais r¨¦sultats obtenus soient dus ¨¤ une trop
Special Agar Noble (Difco) est constitu¨¦ par
faible quantit¨¦ de s¨¦rum de z¨¦bu dans la consti-
un m¨¦lange d¡¯agarose et d¡¯agaropectine.
tution du m¨¦lange antig¨¦nique.
L¡¯agaropectine porte des groupements acides
Deuxi¨¨me m¨¦thode
sulfoniques responsables d¡¯une partie des pro-
Le meilleur s¨¦rum anti-bovin total a ¨¦t¨¦ pro-
pri¨¦t¨¦s du gel d¡¯agar. Ainsi l¡¯IgG, l¡¯IgA et
duit par injections par voie intraveineuse de
I¡¯IgM, soumis ¨¤ un fort courant d¡¯¨¦lectro-
s¨¦rum de z¨¦bu non trait¨¦ ¨¤ des lapins.
endosmose, migrent vers le p ?le n¨¦gatif. L¡¯aga-
Rythme des injections :
rose, au contraire, n¡¯ayant pas ces groupements
7 injections de 2 ml de s¨¦rum de z¨¦bus ¨¤ acides, poss¨¨de une inertie chimique relative
2 jours d¡¯intervalle dans la veine marginale de
et donne lieu ¨¤ un faible courant d¡¯¨¦lectro-
l¡¯oreille. La saign¨¦e est pratiqu¨¦e 1.5 jours apr¨¨s
endosmose au cours de l¡¯¨¦lectrophor¨¨se, ce qui
la derni¨¨re injection. Chaque lapin fournit en
peut pr¨¦senter un avantage notamment dans
moyenne 50 ml de s¨¦rum anti.
l¡¯¨¦tude des immunoglobulines (9). Si l¡¯agarose
donne des lignes de pr¨¦cipitation plus nettes,
De cette fa ?on, un excellent s¨¦rum anti don-
plus nombreuses et mieux r¨¦parties, la pr¨¦sence
nant 15 lignes de pr¨¦cipitation a ¨¦t¨¦ obtenu.
du puits de d¨¦part dans la concavit¨¦ de l¡¯arc
Remarque
de I¡¯IgM peut ¨ºtre g¨ºnante pour l¡¯¨¦tude parti-
L¡¯utilisation d¡¯un s¨¦rum de z¨¦bu normal pour
culi¨¨re de cette globuline.
l¡¯hyperimmunisation des lapins ne permet pas
De plus, la multiplication des arcs est aussi
d¡¯obtenir une bonne ligne de pr¨¦cipitation de
un facteur de complication. En fait, le choix
l¡¯IgM.
de l¡¯un ou l¡¯autre des deux gels sera fonction
C¡¯est la raison pour laquelle ont ¨¦t¨¦ utilis¨¦s
des fractions auxquelles on s¡¯int¨¦resse.
soit des s¨¦rums d¡¯animaux trypanosom¨¦s riches
Le tampon utilis¨¦, qui a donn¨¦ les meilleurs
en IgM, soit un s¨¦rum de z¨¦bu hyperimmunis¨¦
r¨¦sultats, r¨¦pond ¨¤ la composition suivante :
au pr¨¦alable au moyen d¡¯une culture de Salmo-
1
- V¨¦ronal acide
nella typhimurium formol¨¦e. L¡¯injection de
l¡¯antig¨¨ne 0 des salmonelles provoque en effet
(0,Ol M) . . . 1,842 g
une forte ¨¦l¨¦vation de 1¡¯IgM.
- V¨¦ronal sod¨¦
i
(0,05 M) . . . 10,309 g pH 8,6
Pour ce faire, le processus suivant a ¨¦t¨¦
- Ac¨¦tate de sodium,
adopt¨¦ : 2 inoculations par semaine par voie
3 Hz0 (0,05 M) .
6,804 g
intraveineuse ¨¤ doses progressivement crois-
- Eau distill¨¦e q.s.p.
1.000 ml /
santes : 5 ml, 10, 15, 20, . . . 75, 80 pendant
2 mois (r¨¦colte du s¨¦rum 15 jours apr¨¨s la der-
Le gel, support de l¡¯immuno-¨¦lectrophor¨¨se,
ni¨¨re injection).
est pr¨¦par¨¦ dans les proportions suivantes :
Le s¨¦rum ainsi obtenu, inocul¨¦ ¨¤ des lapins,
- Agar noble . . . . . . . 1 g
a permis de pr¨¦parer un s¨¦rum lapin anti-
- Tampon . . . . . . . .
25 ml
z¨¦bu total r¨¦v¨¦lant particuli¨¨rement bien 1¡¯IgM.
- Eau distill¨¦e . . . . . . .
75 ml
Troisi¨¨me m¨¦thode
Ces proportions sont les m¨ºmes si on utilise
L¡¯hyperimmunisation de lapin au moyen des
l¡¯agarose. Le gel, ainsi pr¨¦par¨¦, est r¨¦parti en
fractions 1 (IgM) et IV (IgG) obtenues par
tubes de 20 ml, conserv¨¦s ¨¤ + 4¡± C.
chromatographie sur colonne de Sephadex
b) Chromatographie
G 200 a permis de pr¨¦parer des immuns¨¦rums
Elle est r¨¦alis¨¦e sur colonne de Sephadex
qui, apr¨¨s ¨¦puisement par un s¨¦rum de f ?tus
ci 200 (¡°).
de veau, r¨¦v¨¨lent exclusivement I¡¯IgG et
l¡¯IgM (¡®).
L¡¯¨¦luant est une solution tampon dont la
composition est la suivante :
(¡®) Industrie Biologie Fran ?aise, S.A., 92-Genne-
Villiers.
(:¡®) Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala, Su¨¨de.
- 205 -
- Tris . . . . .
7% g
L¡¯¨¦luant est envoy¨¦ sur la colonne par une
- NaCI . . . . . 58,45 g
i PH 850 pompe ¨¦lectrique.
- HC1 (0,033 N) q.s.p.
1 .OOO ml !
A la sortie de la colonne, un absorptiom¨¨tre
¨¤ UV (280 m$, coupl¨¦ ¨¤ un enregistreur, per-
D. Techniques
met de d¨¦tecter les diff¨¦rentes fractions qui sont
a) Immuno¨¦lectrophor¨¨se
ensuite r¨¦parties en tubes de 5 ml par le col-
Ont ¨¦t¨¦ utilis¨¦es la microm¨¦thode sur lames
lecteur de fractions Beckman muni d¡¯un comp-
de 2,5 X 7,s cm et la macrom¨¦thode sur
teur de gouttes.
lames de 16 X 4 cm (21).
A la fin de la chromatographie, l¡¯enregistreur
L¡¯appareillage Celman pour immuno¨¦lectro-
a inscrit sur bande de papier une courbe ¨¤
phor¨¨se a ¨¦t¨¦ employ¨¦ tout au long du pr¨¦sent
3 pics (voir sch¨¦ma 1) qui mat¨¦rialise la s&pa-
travail (g¨¦n¨¦rateur de courant continu donnant
ration des diff¨¦rentes fractions s¨¦riques. Ainsi,
une tension de 0 ¨¤ 500 V).
dans l¡¯exemple choisi, la courbe montre que
la totalit¨¦ du s¨¦rum a filtr¨¦ entre les tubes 17
Les diff¨¦rents stades de la m¨¦thode corres-
et 61 du collecteur. Dans cet intervalle, les
pondent ¨¤ la description classique : d¨¦graissage
tubes ont ¨¦t¨¦ regroup¨¦s en 7 fractions :
des lames, coulage de la g¨¦lose, d¨¦coupage ¨¤
- 1¡±¡¯ fraction : tubes 17 ¨¤ 3 9;
l¡¯emporte-pi¨¨ce des puits de d¨¦part et de la
goutti¨¨re des immun-s¨¦rums (portoir de 6 la-
- 2¡± fraction : tubes 20 ¨¤ 27;
mes), d¨¦p ?t du s¨¦rum ¨¤ ¨¦tudier. L¡¯¨¦lectropho-
- 3¡± fraction : tubes 27 ¨¤ 36;
r¨¨se est men¨¦e sous 220 V pendant 60 mn pour
- 41¡¯ fraction : tubes 37 ¨¤ 44;
la microm¨¦thode et 140 mn pour la macrom¨¦-
thode. On proc¨¨de ensuite ¨¤ l¡¯application de
- Y¡¯ fraction : tubes 45 ¨¤ 48;
l¡¯immuns¨¦rum. L¡¯incubation se fait en cham-
- @ fraction : tubes 49 ¨¤ 52;
bre humide pendant 24 ¨¤ 36 h. Apr¨¨s lavage
- 7¡¯! fraction : tubes 53 ¨¤ 61.
(24 h en s¨¦rum physiologique, 1 h en eau distil-
l¨¦e) et s¨¦chage (¨¤ l¡¯¨¦tuve ¨¤ 370 C), la coloration
Chaque fraction est ensuite dialys¨¦e contre de
est r¨¦alis¨¦e au noir-amide en solution m¨¦thanol-
l¡¯eau distill¨¦e ¨¤ + 4¡¯) C, pour ¨¦liminer les sels
ac¨¦tique pendant 5 mn. L¡¯exc¨¨s de colorant est
du tampon, puis lyophilis¨¦e.
¨¦limin¨¦ par une solution de rin ?age. Les lames
La dialyse et la concentration des fractions
sont enfin lav¨¦es ¨¤ l¡¯eau courante et s¨¦ch¨¦es.
obtenues par la chromatographie peuvent ¨ºtre
Solution de rin ?age :
r¨¦alis¨¦es plus rapidement en un seul temps par
la technique de dialyse sous vide (sch¨¦ma 2).
- Alcool m¨¦thylique . . . .
5 vol.
En 12 h. ¨¤ + 41¡¯ C, la concentration est environ
- Acide ac¨¦tique . . . . .
1 vol.
de 10 fois.
- Eau distill¨¦e . . . . . .
5 vol.
Solution de coloration :
II. IMAGE
- Noir amide . . . . . .
6g
IMMUNO-ELECTROPHORETIQUE
- Solution de rin ?age . . . . 1.000 ml
DU SERUM DE ZEBU GOBRA
b) Chromatographie
L¡¯immuno-¨¦lectrophor¨¨se d¡¯un s¨¦rum de
Conduite selon les indications de HOGMAN
z¨¦bu Cobra r¨¦alis¨¦e dans les conditions d¨¦crites
et KILLANDER (10).
ci-dessus a permis d¡¯obtenir 15 lignes de pr¨¦ci-
pitation.
Le fractionnement des s¨¦rums de z¨¦bu a ¨¦t¨¦
effectu¨¦ sur colonne de Sephadex Ci 200 (gel
de dextrane).
1. Identification des diff¨¦rents arcs
Le gel de Sephadex est plac¨¦ dans une a) Fractionnemrnt d¡¯un sr¡¯rum
colonne de 800 mm de hauteur et 30 mm de
La filtration sur gel de dextrane (Sephadex
diam¨¨tre. Apr¨¨s s¡¯¨ºtre assur¨¦ de la verticalit¨¦
G 200) s¨¦pare les prot¨¦ines s¨¦riques selon leur
rigoureuse de la colonne, le s¨¦rum est d¨¦pos¨¦
taille, leur vitesse de migration dans le gel
uniform¨¦ment ¨¤ la partie sup¨¦rieure du gel ¨¤
¨¦tant pour partie directement proportionnelle
raison de 3 ml.
¨¤ la grosseur de la mol¨¦cule.
- 206 -
Sch¨¦ma I - Courbe de fractionnement d¡¯un Jrum de zt%u sur Sephadex 6.200.
Chaque fraction obtenue par chromatogra-
La photographie de l¡¯image immuno¨¦lectro-
phie est compar¨¦e sur la m¨ºme pr¨¦paration
phor¨¦tique de chacune des 7 fractions est repro-
avec le s¨¦rum total. Quelques lignes parfaite-
duite dans les clich¨¦s no 1 ¨¤ 7 avec indication
ment visibles sur les lames sont difficilement des diff¨¦rents constituants dont la position a
rendues par les photographies.
pu ¨ºtre figur¨¦e.
Photo 2
1. IgM
2 . (Y 2 macroglobuline
3 . Transf¨¦rine
4 . fi-lipoprot¨¦ine
5 . C¨¦ruloplasmine
- 207 -
c
¡®.
l
b) Pr¨¦paration de l¡¯lgM
On centrifuge pendant 10 mn ¨¤ 2.000 g,
La pr¨¦paration de 1¡¯IgM pure par filtration
apr¨¨s une demi-heure de repos.
sur Sephadex implique l¡¯¨¦limination de l¡¯a 2-
Le pr¨¦cipit¨¦ est lav¨¦ 2 fois avec la solution
macroglobuline ainsi que de la lj-lipopro-
d¡¯acide borique puis il est repris dans 3 ¨¤ 4 ml
t¨¦ine (10).
du tampon Tris-H Cl-Na Cl de pH = 8,O.
- Pr¨¦cipitation de la lipoprot¨¦ine :
A 10 ml d¡¯un s¨¦rum normal, on ajoute 0,4 ml
La filtration est enfin r¨¦alis¨¦e sur la colonne
d¡¯un solution de sulfate de dextrane ¨¤ 10 p. 100,
de Sephadex G 200.
puis 1 ml d¡¯une solution de Ca Cla,M. On agite
c) Autres immunoglobulines
et apr¨¨s 15 mn de repos, on centrifuge 10 mn
¨¤ 6.000 g. On recueille le surnageant. L¡¯exc¨¨s
Les autres immunoglobulines ont ¨¦t¨¦ pr¨¦-
de Ca Cl- est ¨¦limin¨¦ par dialyse contre de
par¨¦es par ¨¦puisements successifs des s¨¦rums
l¡¯eau distill¨¦e.
de z¨¦bus par un s¨¦rum de lapin hyperimmunis¨¦
avec un s¨¦rum de f ?tus de veau d¨¦pourvu
- Pr¨¦cipitation des euglobulines :
d¡¯IgG et d¡¯IgM. La photo 8 montre l¡¯image
On ajuste le volume de ce surnageant ¨¤
immuno¨¦lectrophor¨¦tique d¡¯un s¨¦rum d¡¯em-
200 ml ¨¤ l¡¯aide d¡¯une solution d¡¯acide borique
bryon de veau ¨¤ terme manifestement d¨¦pourvu
¨¤ 7,5 g/litre.
d¡¯IgG et d¡¯IgM (19).
c
d) Colorations spr¡¯cifiques
crite par URIEL (18) pour mettre en ¨¦vidence
l¡¯action oxydative de la c¨¦ruloplasmine permet-
Pour la mise en ¨¦vidence des lipoprot¨¦ines,
tent de pr¨¦ciser certaines lignes de pr¨¦cipitation.
on peut utiliser des colorants sp¨¦cifiques : Oil
Red 0 ou Soudan B.
Seules les colorations sp¨¦cifiques des lipopro-
t¨¦ines qui n¡¯offrent pas de difficult¨¦ majeure
Des colorations sp¨¦ciales, comme celle d¨¦-
ont ¨¦t¨¦ r¨¦alis¨¦es dans le pr¨¦sent travail.
- 209 -
2. Lecture d¡¯une lame
- Un antig¨¨ne est d¡¯autant plus abondant
d¡¯immuno¨¦lectrophor¨¨se
que sa ligne de pr¨¦cipitation est moins courbe.
- La ligne de pr¨¦cipitation est floue du c ?t¨¦
Avant d¡¯envisager la lecture d¡¯une lame,
oppos¨¦ au r¨¦actif en exc¨¨s. Pour avoir des lignes
quatre crit¨¨res sont ¨¤ retenir :
nettes, il convient d¡¯ajuster les concentrations
- Un antig¨¨ne est d¡¯autant plus abondant
respectives d¡¯antis¨¦rum et de s¨¦rum ¨¤ ¨¦tudier.
que sa ligne de pr¨¦cipitation est plus proche
11 est ¨¤ noter que l¡¯albumine appara ?t rare-
de la goutti¨¨re des immuns¨¦rums.
ment sur les pr¨¦parations. En r¨¦alit¨¦, au cours
- L¡¯abondance d¡¯un antig¨¨ne peut ¨ºtre ¨¦va-
du d¨¦veloppement, elle est la premi¨¨re ¨¤ se
lu¨¦e d¡¯apr¨¨s l¡¯intensit¨¦ de son pr¨¦cipit¨¦, ¨¤ con-
former, mais elle dispara ?t ensuite, le pr¨¦cipit¨¦
dition que le rapport antig¨¨ne-anticorps ait une
¨¦tant dissout par l¡¯exc¨¨s d¡¯antig¨¨ne. Des photo-
valeur bien d¨¦termin¨¦e. Lorsque l¡¯antig¨¨ne se
graphies prises en cours d¡¯incubation, sans colo-
trouve en grande quantit¨¦, l¡¯exc¨¨s peut dissou-
ration, montrent tr¨¨s nettement la ligne de pr¨¦-
dre le pr¨¦cipit¨¦.
cipitation de l¡¯albumine (photo 9).
Photo ?
Photo r¨¦alis¨¦e en cours d¡¯incubation, sans coloration,
l¡¯arc correspondant ¨¤ l¡¯albumine est nettement visible.
En conclusion, l¡¯application des diff¨¦rentes
ralement pas sur une m¨ºme lame, les concen-
techniques d¨¦crites ci-dessus ont donc permis
trations respectives de s¨¦rum et d¡¯antis¨¦rum
d¡¯identifier 15 lignes (photo 10).
doivent ¨ºtre ajust¨¦es en fonction des globulines
A noter que les lignes n¡¯apparaissent g¨¦n¨¦-
¨¤ ¨¦tudier.
Photo 10
1 . IgG lente
4 . IgA
7 . Haptoglobine
10. n. 2-lipoprot¨¦ine
13. CI 1 s¨¦romuco ?de
2 . IgG rapide
5 . Transf¨¦rine
8 . a 2-macroglobuline
Il. 15 1 A-globuline
14. (1. 1 X-glycoprot¨¦ine (?)
3 . IgM
6 . fi-lipoprot¨¦ine
9 . C¨¦ruloplasmine
12. c1 1 -glycoprot¨¦ine
15. Albumine
- 210 -
III. ETUDE DES VARIATIONS
IgG, IgA et IgM sont parfaitement visibles,
SAISONNIERES QUALITATIVES
comme sur la photo 11 par exemple.
c
DES PROTEINES SERIQUES
Sur le plan quantitatif, autant que l¡¯on puisse
DU ZEBU GOBRA
en juger en immuno¨¦lectrophor¨¨se, il semble
qu¡¯il y ait quelques l¨¦g¨¨res variations indivi-
duelles principalement au niveau des immuno-
1. 115 s¨¦rums ont ¨¦t¨¦ pr¨¦lev¨¦s au mois de
globulines. Par exemple on voit que le s¨¦rum
novembre 1969, en fin de saison des pluies, sur
de la photo 11 est moins riche en IgM. 11 faut
des z¨¦bus du Ferlo (Dara). Les animaux, clini-
pr¨¦ciser que le m¨ºme immuns¨¦rum a ¨¦t¨¦ utilis¨¦
quement sains, ¨¦taient en parfait ¨¦tat d¡¯en-
pour toute la s¨¦rie. De plus, les quantit¨¦s de
tretien.
s¨¦rum et d¡¯immuns¨¦rum appliqu¨¦es au moyen
de micro-pipettes gradu¨¦es ¨¦taient connues et
Du point de vue qualitatif, les images immu-
identiques. Les conditions de travail ¨¦tant
no¨¦lectrophor¨¦tiques se sont r¨¦v¨¦l¨¦es ¨ºtre par-
rigoureusement d¨¦finies et reproduites, il est
faitement identiques pour tous les s¨¦rums ana-
donc parfaitement possible de faire des compa-
lys¨¦s. Dans tous les cas, les immunoglobulines
raisons d¡¯ordre quantitatif.
2. Au mois de mai 1970, 72 s¨¦rums ont ¨¦t¨¦
son a ¨¦t¨¦ faite avec un m¨ºme s¨¦rum de z¨¦bu
recueillis sur des z¨¦bus de la m¨ºme r¨¦gion
pr¨¦lev¨¦ en fin de saison des pluies. Les r¨¦sultats
(forage de Tatki). A cette ¨¦poque de l¡¯ann¨¦e,
montrent qu¡¯aucune des immunoglobulines n¡¯a
les animaux pr¨¦sentent un amaigrissement sai-
disparu mais que, par contre, toutes les frac-
sonnier maximal du fait des conditions d¡¯ali-
tions apparaissent moins abondantes. De fa ?on
mentation de semaine en semaine plus difficiles.
constante, la ligne de pr¨¦cipitation de 1¡¯IgG est
moins marqu¨¦e et plus courte que sur le
L¡¯analyse
immuno¨¦lectrophor¨¦tique de ces
s¨¦rum t¨¦moin (ainsi qu¡¯on peut le voir sur la
s¨¦rums a ¨¦t¨¦ effectu¨¦e avec le m¨ºme immun-
photo 12). De m¨ºme, l¡¯IgM est beaucoup moins
s¨¦rum de lapin. Pour chaque lame, la comparai-
visible. Pour toutes les autres fractions, les arcs
de pr¨¦cipitation sont plus courbes et moins nets,
tuants ¨¦tant int¨¦ress¨¦. Par contre, en aucun
ce qui indique une diminution du taux de la
cas, la disparition compl¨¨te d¡¯une quelconque
prot¨¦ine en cause.
fraction n¡¯a ¨¦t¨¦ observ¨¦e, immunoglobulines
L¡¯¨¦tude quantitative men¨¦e conjointement
comprises.
par la m¨¦thode d¡¯¨¦lectrophor¨¨se sur ac¨¦tate de
Remerciements
cellulose a permis de confirmer et de chiffrer
c
ce r¨¦sultat.
Nous tenons ¨¤ remercier le Professeur MAS-
SEYEFF et ses collaborateurs de la Facult¨¦
En conclusion, le s¨¦rum des bovins, en fin
de M¨¦decine de Dakar pour l¡¯aide technique
de saison s¨¨che, pr¨¦sente un abaissement signi-
qu¡¯ils nous ont apport¨¦e tout au long de la
ficatif des prot¨¦ines totales, chacun des consti-
pr¨¦sente ¨¦tude.
SUMMARY
Immunoelectrophoretic study of Gobra zebu serum in Senegal.
Possibility of qualitative seasonal variation
In a first step, the authors describe the technics and methods which Will
be used a11 along the present work : immunoelectrophoresis and gel fil-
tration chromatography on Sephadex G 200. An immunoelectroohoretic
pattern of Gobra ze¡¯bu serum ;s given with the nomenclature of Bach of
the 1.5 precipitation lines obtained. The studv is achieved with conside-
rations on ahy possible seasonal variation of -serum proteins. The results
show no qualitative difference between samples collected at the end of
the rainy season and those gathered at the end of the dry season. In
particular, the three immunoglobulins are present on the immunoelectro-
phoretic patterns of a11 the sera used alo8g tbe present study. On the other
hand, ors quantitative basis, a significant decrease of total proteins rate is
demonstrated for the sera collected at the end of the dry season. This
last observation is confirmed by an electrophoresis study which Will be
published separately in a further paper.
RESUMEN
Estudio inmunoelectroforetico
del suero de cebh Gobra en Senegal.
Posibilidad de variaciones cualitativas de estaci6n
Los autores describen las t¨¦cnicas utilizadas : inmunoelectroforesis
y gelosa-filtration sobre columna de Sephadex G 200. Luego, presentan
la imagen inmunoelectroforetica del suero de cebu Gobra, a1 precisar la
es&cia de las 15 Iineas de precipitacion obtenidas. Se acaba e1 estudio
por consideraciones sobre la posibilidad de eventuales variaciones de
estacion de las proteinas sericas. Segtin 10s resultados, no existe ningun
diferencia de orden cualitativo entre las muestras recogidas a1 fin de la
estacion htimeda y las recogidas a1 fin de la estacion seca. Particularmente,
las tres ?nmunoglobulinas : IgG, IgM e IgA se encuentran en todas las
imagenes inmunoelectroforeticas del conjunto de 10s sueros utilizados
durante este estudio. En cambio, desde el punto de vista cuantitativo, se
nota una disminucion significativa de la tasa de las proteinas totales en
10s sueros obtenidos a1 fin de la estacion seca. Se confirma la tiltima
observation por un estudio electroforetico que se publicara proximamente.
BIBLIOGRAPHIE
BIBERFELD (G.), ? Distribution of antibody 4. HIRSCHFELD (J.), ? The use of immunoelectro-
within 19 S and 7 S immunoglobulins following
phoresis in the analysis of normal sera and in
infection with Mycoplrwma pneumoniae ?, J. Im-
studies of the inheritance of certain serum pro-
mun~/., 1968, 100 (2) : 338-47.
teins ?, Sci. Tools, 1961, 8 (3) : 17-24.
G0TZ (H.) et HEINEBRODT (A.), ? Biochemi-
5 . HIRSCHFELD (J.), ? Immunoelectrophoresis pro-
cal and immunoelectrophoretic analysis of cattle
cedure and application to the study of group-
serum ?, Zenthl. Vet. Med., 1969, 16 A: 691-702.
specific variations in sera ?, Sci. Tools, 1960,
7 (2) : 18-25.
HERMANS (J.), ? Les globulines s¨¦riques du sys-
t¨¨me gamma. Leur nature et leur pathologie ?,
6 . JONAS (W. E.), ? Determination of sheep anti-
L
Paris, Masson, 1961.
Salmonellu typhimurium immunoglobulin class by
- 212 -
antiglobulin testing ?, Res. l¡¯et. Sci., 1969, 10 (4) :
15. PROVOST (A.), BORREDON (C.) et QUE-
311-20.
VAL (R.), ? Une hypogammaglobulin¨¦mie essen-
7. JONAS (W. E.), ? Immunoelectrophoretic analy-
tielle des bovins d¡¯Afrique Centrale, cause d¡¯er-
P
sis of sheep serum using guinea-pig antisera to
reur dans les enqu¨ºtes s¨¦rologiques ?, Rev. Elev.
particulate antigens treated with sheep anti-se-
Mhd. v¨¦t. Pays trop., 1965, 18 (4) : 385-93.
mm ?, Res. vet. Sci., 1969, 10 (5) : 397-404.
16. SCHULTZE (H. E.) et HEREMANS (J. F.),
8. Mc EWAN (A.D.), EISCHER (E. W.) et SEI-
? Molecular biology of human proteins ?, Ams-
c
MAN (1. E.), ?Observations on the immunoglo-
terdam, London, New York, Elsevier Publ. CO.,
bulin levels of neonatal calves and their relation-
1966, 1.
ship to disease ?, J. camp. Path., 1970, 80 (2) :
17. TRAININ (Z.), ? Immunoelectrophoretic analysis
259-65.
of serum from a leukemic cow ?, Am. J. vet. Res.,
9. MASSEYEFF (R.) et GOMBERT (J.), ? Compa-
1969, 30 (8): 1475-77.
raison entre I¡¯agar et I¡¯agarose comme support de
18. URIEL (J.), ? Etude de l¡¯activit¨¦ enzymatique de
l¡¯analyse immuno¨¦lectrophor¨¦tique du s¨¦rum ?,
la c¨¦ruloplasmine du s¨¦rum humain apr¨¨s ¨¦lectro-
Bull. M¨¦m. Fac. mixte M¨¦d. Phurm. D a k u r ,
phor¨¨se et immuno¨¦lectrophor¨¨se en g¨¦lose ?,
1965, 13: 100-02.
Bull. Soc. Chim. biol., 1957, 39 (suppl. 1): 105.
10. MASSEYEFF (R.), GOMBERT 0.) et JOSSE-
19. WARD-COX (1. S.), ?A note on gamma-globulin
LIN (J.), ? M¨¦thode de pr¨¦paration de la beta
content of the serum of new born calves ?, J. S.
2-macroglobuline du s¨¦rum humain ?, Immuno-
Afr. vet. med. A~S., 1968, 39 (3), 51-52.
chemistry, 1965, 2: 177-80.
11. ? Nomenclature for human immunoglobulins ?,
20. WARD-COX (1. S.), ? Two instances of bovine
Bull. Org. Mond. Sant¨¦, 1964, 30 : 447-50.
agammaglobulinaemia as revealed by immuno-
12. PENHALE (W. J.) et CHRISTIE (G.), ? Quanti-
electrophoresis ?, J. S. Afr. vet. med. A~S., 1969,
tative studies on bovine immunoglobulins. -
40 (3): 337.
1. Adult plasma and colostrum levels ?, Res. vet.
21. WARD-COX (1. S.), ? Incorporation of a macro-
ski., 1969, 10: 493-501.
slide in the micro-technique of immunoelectro-
13. PENHALE (W. J.) et Collab., ? Quantitative stu-
phoresis ?, J. S. Afr. l>ef. med. A~S., 1969, 40 (1) :
dies on bovine immunoglobulins. - II. Plasma
91-92.
immunoglobulin levels inmarket calves and their
22. WEIR (D. M.), ? Handbook of experimental im-
relationship to neonatal infection ?, Brit. vet. J.,
munology ?, Oxford, Edinburg, Blackwell Scien-
1970, 126: 30-37.
tific Publication, 1967.
14. ? Production of antibody against purified human
23. WILLIAMS (C.A.) et CHASE (M. W.), ?Me-
gamma-globulin in rabbits, goats, sheep and
thods in immunology and immunochemistry ?,
horses ?, Immunology, 1966, 10 : 271.
New York, London, Academic Press, 1967, 1 et II.
- 213 -